乳腺浸潤性導(dǎo)管癌Ephrin-A1、VEGF、VEGFR2表達對血管生成的影響

林哲洙 張 磊 張 睿 張 紅

(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院普外科，遼寧 錦州 121000)

乳腺浸潤性導(dǎo)管癌Ephrin-A1、VEGF、VEGFR2表達對血管生成的影響

林哲洙 張 磊 張 睿 張 紅

(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院普外科，遼寧 錦州 121000)

目的 檢測乳腺浸潤性導(dǎo)管癌Ephrin-A1配體(Ephrin-A1)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和VEGF受體(VEGFR)2的表達，分析其臨床意義及相關(guān)性。方法 68例確診為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者術(shù)后的蠟塊組織作為觀察組，21例乳腺腺病患者術(shù)后的蠟塊組織作為對照組，采用免疫組化方法檢測兩組中Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2的表達。結(jié)果 兩組中Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2的陽性率差異顯著(P<0.05)，觀察組中Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2的表達與腫瘤的最大徑密切相關(guān)，觀察組中Ephrin-A1的表達與腫瘤的增殖指數(shù)密切相關(guān)，VEGF和VEGFR2的表達與腫瘤的脈管累犯密切相關(guān)。線性相關(guān)分析顯示觀察組中Ephrin-A1和VEGF、VEGF和VEGFR2的表達均具有正相關(guān)性(均P<0.05)。結(jié)論 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2高表達是病變的促進因素，三者具有協(xié)同作用，對間質(zhì)血管生成有一定影響。

乳腺；浸潤性導(dǎo)管癌；Ephrin-A1；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)；VEGF受體(VEGFR)2

浸潤性乳腺癌是一組惡性上皮性腫瘤，導(dǎo)管癌是最常見的一型，是富于血管的腫瘤，血管生成的相關(guān)因子對腫瘤間質(zhì)的血管形成和腫瘤進展均有一定作用〔1〕。Ephrin-A1配體是已知的酪氨酸激酶受體家族中的最大成員，其所介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)通路對細胞發(fā)生、腫瘤形成及血管新生可能有重要調(diào)節(jié)作用〔2，3〕。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是機體中可由腫瘤細胞分泌的血管生成促進因子，可以通過其受體(VEGFR)2介導(dǎo)血管生成〔4，5〕。本研究關(guān)注乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者術(shù)后組織中Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2蛋白的表達特征，探討三者的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 觀察組均為2014年1月至2015年12月遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院診斷為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌并行手術(shù)治療的患者68例，年齡40～79歲，平均56.3歲。均經(jīng)病理醫(yī)師再次確診，并符合世界衛(wèi)生組織(WHO)中的病理診斷標準。排除標準：①合并其他器官惡性腫瘤；②伴有嚴重風(fēng)濕免疫性疾??；③合并血液系統(tǒng)疾病。21例乳腺腺病患者術(shù)后的蠟塊組織作為對照組，年齡35～67歲，平均50.9歲。兩組常規(guī)資料無明顯差異。

1.2 Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2的檢測方法 兩組術(shù)后組織立即應(yīng)用甲醛溶液固定12 h后，切取2～3 mm厚的組織塊，脫水，石蠟包埋，切取4 μm切片，置于膠片上。應(yīng)用免疫組化SP法檢測Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2的表達，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色。操作嚴格按說明書進行，努力減少誤差。

1.3 Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2的判斷方法 切片均由病理醫(yī)師按盲法閱片判讀，均應(yīng)用Olympus顯微鏡進行觀察。Ephrin-A1的陽性部位是在細胞質(zhì)和(或)細胞膜上，VEGF和VEGFR2的陽性部位是細胞質(zhì)，以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應(yīng)細胞。先用100倍視野進行觀察，選擇染色較為密集的區(qū)域進行觀察，選擇3個400倍視野進行計數(shù)，陽性率以<5%定為陰性，以≥5%定為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SAS6.12統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗和線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 兩組Ephrin-A1、VEGF和 VEGFR2表達陽性率比較 兩組Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2表達陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.01)。見表1。

2.2 觀察組Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2陽性率在不同臨床特征中的比較 觀察組Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2表達與腫瘤最大徑密切相關(guān)，Ephrin-A1表達與腫瘤增殖指數(shù)密切相關(guān)，VEGF和VEGFR2表達與腫瘤脈管累犯密切相關(guān)(均P<0.05)。見表2。

表1 兩組Ephrin-A1、VEGF和 VEGFR2表達陽性率比較〔n(%)〕

表2 觀察組Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2表達陽性率在不同臨床特征中的比較〔n(%)〕

2.3 觀察組中Ephrin-A1、 VEGF和VEGFR2陽性率的相關(guān)性 Ephrin-A1和VEGF(r=0.49，P=0.036)、VEGF和VEGFR2(r=0.54，P=0.019)的表達呈正相關(guān)。

3 討 論

乳腺癌生長過程中可以見到明顯的血管新生，CD31、CD34等可以成功標記新生的血管。VEGF是血管生成的促進因子，其在作用過程中常通過VEGFR2發(fā)揮生物學(xué)作用〔6，7〕。Ephrin-A1是Eph家族中的重要成員，血管內(nèi)皮細胞中一氧化氮對調(diào)控血管張力和通透性有重要作用，研究認為Ephrin-A1在腫瘤血管生成的信號激活中充當(dāng)了關(guān)鍵效應(yīng)因子〔8，9〕。低氧是腫瘤微環(huán)境中重要特征，低氧狀態(tài)可以引起VEGF的生成，Ephrin-A1是低氧的誘導(dǎo)基因〔10〕。研究顯示Ephrin-A1對組織器官分化成熟、軸突導(dǎo)管分化、肢芽形成、細胞間黏附、血管生成有重要生物學(xué)作用〔11〕。本研究提示Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2高表達是乳腺浸潤性導(dǎo)管癌發(fā)生的重要促進因素。Ephrin-A1作為單次跨膜蛋白，其胞外的末端為糖基化免疫球蛋白樣的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，向下與一個富半胱氨酸區(qū)及兩個纖連蛋白重復(fù)相連，這對腫瘤性病變有一定作用〔12，13〕。研究認為酪氨酸殘基磷酸化后可以形成SH2/SH3結(jié)構(gòu)域信號分子的結(jié)合位點，對介導(dǎo)其受體的信號傳導(dǎo)有重要作用〔14，15〕。本文提示Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2三者高表達可以促進腫瘤的生長，此時腫瘤生長加速，細胞增生明顯，細胞分化過程明顯受到抑制，細胞異型性增大，腫瘤體積增大。本文提示Ephrin-A1高表達是促進腫瘤細胞增殖的重要蛋白，此時腫瘤的分裂旺盛，腫瘤細胞增生活躍。本文提示VEGF和VEGFR2的表達與腫瘤的脈管累犯密切相關(guān)，腫瘤細胞侵犯脈管，對腫瘤細胞形成遠處播散提供必要的基礎(chǔ)〔16〕。本文提示Ephrin-A1和VEGF、VEGF和VEGFR2的表達均具有正相關(guān)性，提示三者間具有正向協(xié)同作用，此種作用是Ephrin-A1促進腫瘤間質(zhì)血管生成的重要機制之一。Ephrin-A1在高表達時可以引起VEGF和VEGFR2的分泌或富集，使其作用點增加，作用強度增大〔17〕。在腫瘤性血管發(fā)育過程中，相鄰細胞之間的絲狀偽足彼此彌合形成連接，是血管管腔形成的初始步驟，這種過程Ephrin-A1可以起到一定的作用〔18〕，也有研究認為Ephrin-A1可能是通過二級和三級結(jié)構(gòu)域調(diào)節(jié)細胞骨架，從而改變絲狀偽足形成的能力，完成Ephrin-A1的去磷酸化〔19〕。因此Ephrin-A1對血管生成的作用機制可能更趨于復(fù)雜。

1 Sun C.Prognostic value of the VEGF signaling pathway in breast cancer：VEGF，VEGFR-1，VEGFR-2，neuropilin-1〔J〕.Cancer Res，2007；67(20)：112-5.

2 Fujii H，F(xiàn)ujiwara H，Horie A，etal.EphrinA1 stimulates cell attachment and inhibits cell aggregation through the EphA receptor pathway in human endometrial carcinoma-derived，Ishikawa cells〔J〕.Hum Reprod，2011；26(5)：1163-70.

3 Iida H，Honda M，Kawai H F，etal.Ephrin-A1 expression contributes to the malignant characteristics of alpha-fetoprotein producing hepatocellular carcinoma〔J〕.Gut，2005；54(6)：843-51.

4 Hamerlik P，Lathia JD，Rasmussen R，etal.Autocrine VEGF-VEGFR2-Neuropilin-1 signaling promotes glioma stem-like cell viability and tumor growth〔J〕.J Exp Med，2012；209(3)：507-20.

5 Chatterjee S，Heukamp LC，Siobal M，etal.Tumor VEGF：VEGFR2 autocrine feed-forward loop triggers angiogenesis in lung cancer〔J〕.J Clin Investig，2013；123(4)：1732-40.

6 Lu H，Shu XO，Cui Y，etal.Association of genetic polymorphisms in the VEGF gene with breast cancer survival〔J〕.Cancer Res，2005；65(12)：5015-9.

7 Dales JP，Garcia S，Carpentier S，etal.Prediction of metastasis risk using VEGF-R1，VEGF-R2，Tie-2/Tek and CD105 expression in breast cancer〔J〕.Brit J Cancer，2004；90(6)：1216-21.

8 Ishikawa M，Miyahara R，Sonobe M，etal.Higher expression of EphA2 and ephrin-A1 is related to favorable clinicopathological features in pathological stage Ⅰ non-small cell lung carcinoma〔J〕.Lung Cancer，2012；76(3)：431-8.

9 Yamamoto H，Tei M，Uemura M，etal.Ephrin-A1 mRNA is associated with poor prognosis of colorectal cancer〔J〕.Int J Oncol，2013；42(2)：549-55.

10 Parri M，Buricchi F，Giannoni E，etal.EphrinA1 activates a Src/focal adhesion kinase-mediated motility response leading to rho-dependent actino/myosin contractility〔J〕.J Biol Chem，2007；282(27)：19619-28.

11 Potla L，Boghaert ER，Armellino D，etal.Reduced expression of EphrinA1 (EFNA1) inhibits three-dimensional growth of HT29 colon carcinoma cells〔J〕.Cancer Lett，2002；175(2)：187-95.

12 Han L，Dong Z，Qiao Y，etal.The clinical significance of EphA2 and Ephrin A-1 in epithelial ovarian carcinomas〔J〕.Gynecol Oncol，2005；99(2)：278-86.

13 Wu D，Suo Z，Kristensen GB，etal.Prognostic value of EphA2 and EphrinA-1 in squamous cell cervical carcinoma〔J〕.Gynecol Oncol，2004；94(2)：312-9.

14 錢 光，梅 炯，蔡宣松.Eph-ephrin系統(tǒng)與腫瘤的血管生成〔J〕.同濟大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2004；25(5)：431-3.

15 鄭慶豐，柳碩巖，王海燕，等.EphB4及其配體EphrinB2在食管鱗癌中表達及其與血管生成的關(guān)系〔J〕.中國腫瘤臨床，2013；40(10)：579-82.

16 Ojima T，Takagi H，Suzuma K，etal.EphrinA1 inhibits vascular endothelial growth factor-induced intracellular signaling and suppresses retinal neovascularization and blood-retinal barrier breakdown〔J〕.Am J Pathol，2006；168(1)：331-9.

17 張潤濤，趙玉斌，張少華，等.鼻咽癌中EphrinB2與VEGF的表達及臨床意義〔J〕.臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2013；27(4)：178-80.

18 陳 鋼，王 怡，易繼林，等.肝細胞癌中Ephrin-A1及其受體的表達與血管生成的關(guān)系〔J〕.中國普通外科雜志，2007；16(8)：778-82.

19 郭心磊，孫芳玲，安 宜，等.Eph/Ephrin信號通路在血管新生中作用的研究進展〔J〕.中國腦血管病雜志，2013；10(10)：111-4.

〔2016-12-19修回〕

(編輯 苑云杰)

錦州醫(yī)科大學(xué)博士啟動項目(No.Y201109)

張 紅(1969-)，男，博士，主任醫(yī)師，主要從事普外科研究。

林哲洙(1973-)，男，博士，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤學(xué)及普通外科研究。

R73

A

1005-9202(2017)10-2466-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.10.053