丹參川芎嗪注射液對(duì)糖尿病腎病大鼠微循環(huán)障礙及腎功能的影響

宋春宇 王中京 毛 紅 趙 湜

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，湖北 武漢 430014)

丹參川芎嗪注射液對(duì)糖尿病腎病大鼠微循環(huán)障礙及腎功能的影響

宋春宇 王中京 毛 紅 趙 湜

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，湖北 武漢 430014)

目的 探討丹參川芎嗪注射液對(duì)糖尿病腎病(DN)大鼠腎臟微循環(huán)障礙及腎功能的影響。方法 雄性Wistar大鼠48只，隨機(jī)分為正常組、模型組、丹參川芎嗪注射液低劑量組(1 ml·kg-1·d-1)和高劑量組(2 ml·kg-1·d-1)，每組12只。采用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)50 mg/kg建立DN大鼠模型，同時(shí)各組給予相應(yīng)藥物，連續(xù)給藥14 d，末次給藥后檢測(cè)空腹血糖(FBG)、腎小球?yàn)V過(guò)率(GFR)和24 h尿微量白蛋白(24 h mAlb)水平；測(cè)定血中血栓素(TX)B2的含量。結(jié)果 丹參川芎嗪注射液在劑量1～2 ml/kg范圍內(nèi)均可明顯抑制DN大鼠的FBG水平；還可降低GFR水平、24 h mAlb及血液TXB2的含量，改善腎血流動(dòng)力學(xué)異常，改善腎臟微循環(huán)。結(jié)論 丹參川芎嗪注射液可有效改善DN大鼠微循環(huán)障礙，減輕DN腎小球高濾過(guò)、高灌注狀態(tài)，保護(hù)腎功能。

丹參川芎嗪注射液；糖尿病腎?。晃⒀h(huán)；腎功能

糖尿病腎病(DN)是糖尿病(DM)微血管并發(fā)癥之一，亦是腎病終末期的首要原因〔1〕。該病的發(fā)病機(jī)制為DM致腎小球高濾過(guò)，引起腎臟持續(xù)的血流動(dòng)力學(xué)異常及微血管結(jié)構(gòu)損傷，進(jìn)而誘發(fā)蛋白尿及腎小球硬化。因此，微循環(huán)障礙對(duì)DN早期發(fā)病起關(guān)鍵作用〔2〕。臨床研究表明，丹參川芎嗪注射液對(duì)DN具有顯著的臨床療效，既可降低空腹血糖(FBG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)和尿蛋白的排除率，也可顯著改善機(jī)體抗炎指標(biāo)，促進(jìn)腎功能恢復(fù)〔3〕。此外，現(xiàn)代藥理研究表明，丹參川芎嗪注射液具有抗血小板聚集、降低血液黏度、改善微循環(huán)的作用〔4〕，提示其可能對(duì)DN的早期微循環(huán)障礙有一定的改善作用。然而，目前關(guān)于丹參川芎嗪注射液對(duì)DN早期發(fā)病中微循環(huán)障礙和腎功能的改善作用還未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)從血糖、腎血流動(dòng)力學(xué)、腎功能等方面對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)研究。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 無(wú)特定病原體(SPF)級(jí)雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量180～220 g，平均(200±20)g，購(gòu)自華中科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(鄂)2010-0009。自由攝食，動(dòng)物房室溫20℃～25℃，相對(duì)濕度50%～70%，12 h光照維持，晝夜循環(huán)。

1.2 試劑 鏈脲佐菌素(STZ，美國(guó)sigma，批號(hào)：20151042)，臨用前溶于無(wú)菌枸櫞酸緩沖液(0.1 mol/L，pH4.2)配成1%的溶液。生理鹽水(購(gòu)于江西科倫藥業(yè)有限公司，批號(hào)：D120825G)，水合氯醛(購(gòu)于上海恒遠(yuǎn)生化試劑有限公司，批號(hào)：2015-041)。丹參川芎嗪注射液，貴州拜特藥業(yè)公司，規(guī)格：5 ml，批號(hào)：20140625。

1.3 儀器 電熱恒溫水浴箱(上海一恒科技有限公司，型號(hào)：CU600)；代謝籠(蘇州市艾可林實(shí)驗(yàn)動(dòng)物器材廠)；電子天平(常熟市雙杰測(cè)試儀器廠，型號(hào)：T1000)；電子分析天平〔梅特勒-托利多儀器(上海) 有限公司，型號(hào)：EL204〕；全自動(dòng)生化分析儀(日立，型號(hào)：7180)；全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(美國(guó)賽默飛，型號(hào)：Multiskan GO 1510)；低溫高速離心機(jī)(德國(guó)HERMLE公司，型號(hào)：MEGAFUGE2.0R)；全景激光灌注成像儀(英國(guó)Moor儀器有限公司，型號(hào)：Moor FLPI-2)；血糖儀及血糖試紙(德國(guó)拜耳拜安康系列)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 Wistar大鼠48只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后隨機(jī)分為正常組、模型組、丹參川芎嗪注射液低、高劑量組，每組12只。除正常組外，其余各組均一次性腹腔注射STZ 50 mg/kg誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性DN大鼠模型〔5〕。由于實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)、大鼠長(zhǎng)期高血糖狀態(tài)會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡。本研究中，模型組和丹參川芎嗪注射液低劑量組大鼠各死亡2只，丹參川芎嗪注射液高劑量組死亡1只。各組動(dòng)物數(shù)仍然具有足夠的樣本重復(fù)數(shù)，不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析。72 h后大鼠眼眶采血測(cè)定FBG，F(xiàn)BG>16.7 mmol/L為造模成功。造模開(kāi)始即給藥，丹參川芎嗪注射液給藥組按臨床人體-大鼠體表面積比值換算出大鼠的等效劑量。低劑量組每日給予1 ml/kg，高劑量組給予2 ml/kg，給藥時(shí)均利用5%葡萄糖注射液稀釋至0.5 ml后尾靜脈注射給藥。正常組及模型組給予等體積生理鹽水。1次/d，連續(xù)3 w，每日記錄24 h飲水量和體重。末次給藥后，用代謝籠收集24 h尿液。隨后腹腔注射水合氯醛(10%，3 ml/kg)麻醉大鼠，完全暴露左右腎臟。Moor FLPI-2散斑血流實(shí)時(shí)成像系統(tǒng)分析各組大鼠腎臟皮層表面血流值。腹主動(dòng)脈取血，全自動(dòng)生化測(cè)定儀測(cè)定FBG、血清肌酐、尿素氮、腎小球率過(guò)濾(GFR)和24 h尿微量白蛋白(24 h mAlb)水平，評(píng)價(jià)大鼠血糖和腎功能情況。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血栓素(TX)B2的含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 丹參川芎嗪注射液對(duì)大鼠體重及飲水量的影響 與正常組相比，模型組大鼠3 d后飲水量有增加的趨勢(shì)，第8天開(kāi)始飲水量增加明顯；6 d后體重開(kāi)始不斷出現(xiàn)減輕；與模型組比較，丹參川芎嗪注射液給藥組大鼠飲水量和體重的減少均有所緩解。見(jiàn)圖1。

圖1 各組不同時(shí)間飲水量、體重

2.2 丹參川芎嗪注射液對(duì)大鼠FBG和24 h mAlb的影響 與正常組比較，模型組FBG和24 h mAlb水平均顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，丹參川芎嗪注射液高、低劑量組FBG和高劑量組24 h mAlb水平均有明顯降低(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.3 丹參川芎嗪注射液對(duì)大鼠腎臟皮層血流值的影響 正常組大鼠腎臟皮層的散斑血流圖淺綠色和黃色區(qū)域分布較多，紅色區(qū)域較少，表明散斑血流灌注量較低，皮層血流值也較低。與正常組比較，模型組紅色分布區(qū)域明顯增多，腎臟皮層紅色分布均勻，腎臟皮層血流值(399.76±34.65)明顯升高(P<0.05)，與模型組比較，丹參川芎嗪注射液高劑量給藥組紅色區(qū)域分布減少，說(shuō)明腎臟皮層血流量(334.22±21.44)較模型組少(P<0.05)。低劑量組的腎臟皮層血流值為(356.84±29.31)。

2.4 丹參川芎嗪注射液對(duì)大鼠腎功能的影響 相比于正常組，模型組大鼠GFR顯著升高(P<0.01)；血清肌酐和尿素氮含量也有一定程度地升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與模型組相比，經(jīng)丹參川芎嗪注射液高劑量治療后，大鼠GFR明顯降低(P<0.05)；低劑量丹參川芎嗪注射液也能一定程度的降低GFR，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；血清血肌酐、尿素氮含量有一定程度的降低，但變化不明顯(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表1 各組大鼠FBG、24 h mAlb水平比較

與正常組比較：1)P<0.01；與模型組比較：2)P<0.05，3)P<0.01；下表同

表2 各組大鼠血清肌酐、尿素氮和GFR的比較±s)

2.5 丹參川芎嗪注射液對(duì)大鼠TXB2的影響 給予STZ誘導(dǎo)后，模型組大鼠的TXB2含量〔(287.39±12.98)pg/ml〕明顯高于正常組〔(98.11±5.32)pg/ml〕(P<0.01)。與模型組相比，丹參川芎嗪注射液低、高劑量干預(yù)后大鼠TXB2含量有所降低〔(203.88±11.23)、(167.65±12.90)pg/ml，P<0.05〕。

3 討 論

中醫(yī)學(xué)將DN歸屬于屬于 “尿濁”“腎勞”“關(guān)格”等范疇，亦有學(xué)者將DN命名為“消渴病腎病”。中醫(yī)認(rèn)為，DN病位以腎臟為中心，兼及肝、脾、肺、心等諸多臟腑。以虛、瘀、濁為核心病機(jī)，本虛標(biāo)實(shí)，虛實(shí)互見(jiàn)，因此，需以虛實(shí)同治，標(biāo)本兼顧為治則，以補(bǔ)虛、活血通絡(luò)、溫陽(yáng)瀉濁為基本治法〔6〕。丹參川芎嗪注射液的主要成分為丹參素、鹽酸川芎嗪，具有活血化瘀功效，契合DN淤阻之病機(jī)。臨床研究表明，丹參川芎嗪注射液治療早期DN有很好的療效，總有效率可達(dá)73.3%，可降低24 h mAlb含量，促進(jìn)腎功能恢復(fù)；降低DN患者血清的C反應(yīng)蛋白(CRP)、腫瘤壞死因子(TNF)-α水平，改善抗炎指標(biāo)活性〔3〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，丹參川芎嗪注射液可顯著降低STZ誘導(dǎo)的血糖水平，對(duì)改善微循環(huán)障礙及腎功能具有積極的意義。

在DM過(guò)程中，高血糖?？梢鹉I內(nèi)血管阻力下降，腎血漿流量增加，出現(xiàn)腎臟GFR、高內(nèi)壓和血流動(dòng)力學(xué)的改變〔7〕。這種高灌注、高濾過(guò)的狀態(tài)可使腎小球內(nèi)毛細(xì)血管切流壓增加，引起血管內(nèi)皮和上皮細(xì)胞損害，破壞正常濾過(guò)屏障，是導(dǎo)致DN發(fā)生及形態(tài)學(xué)改變的基礎(chǔ)。因此，有效減輕DN早期的高灌注、高濾過(guò)狀態(tài)，可減少尿微量白蛋白排出，是減輕DM腎損傷的有效方法。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，丹參川芎嗪注射液可以明顯降低SZT誘導(dǎo)的DN模型大鼠腎小球高濾過(guò)狀態(tài)，減緩高血流灌注對(duì)腎臟的損傷，對(duì)腎功能有一定的保護(hù)作用，且療效具有劑量依賴性。DM患者體內(nèi)普遍存在高凝狀態(tài)。高凝導(dǎo)致血小板黏附聚集活性增強(qiáng)并形成微血栓，進(jìn)一步促使血小板大量活化，從而出現(xiàn)亞臨床癥狀，即微血管病變〔8〕。DN的發(fā)病過(guò)程中，由血流動(dòng)力學(xué)改變等因素引起的微循環(huán)障礙，?？稍斐赡I小球硬化性改變，出現(xiàn)腎臟不可逆的損害、血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)和功能改變，最終出現(xiàn)尿蛋白，導(dǎo)致腎功能損害〔9〕。本實(shí)驗(yàn)研究表明，給予STZ誘導(dǎo)DN后，模型組大鼠腎臟損害早期會(huì)表現(xiàn)腎臟皮層微循環(huán)血流動(dòng)力學(xué)異常；丹參川芎嗪注射液可改變腎臟皮層微循環(huán)血流，劑量在1～2 ml/kg之間療效具有劑量依賴性。血中TXA2含量增加會(huì)導(dǎo)致血小板聚集和血管收縮增強(qiáng)，TXB2是TXA2的無(wú)活性代謝物，可間接反映TXA2含量。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，DN模型大鼠血小板功能增強(qiáng)，TXA2釋放增多，易引起血管并發(fā)癥；而丹參川芎嗪注射液具有明顯的降低血小板活性作用，符合活血化瘀的藥理作用。

綜上所述，丹參川芎嗪注射液可明顯降低DN大鼠的血糖水平，減少24 h mAlb的排出；有效降低DN大鼠的高濾過(guò)狀態(tài)，還可以減少大鼠腎臟皮層血流值和血液中TXB2含量，改善DN大鼠的腎臟微循環(huán)障礙，保護(hù)腎功能，且療效具有劑量依賴性。

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〔2016-09-15修回〕

(編輯 袁左鳴)

宋春宇(1978-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事內(nèi)分泌疾病中西醫(yī)結(jié)合防治技術(shù)研究。

R587

A

1005-9202(2017)10-2396-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.10.020