骨碎補(bǔ)的研究概況

馬洪娜++魏升華++檀龍顏

【摘 要】 骨碎補(bǔ)為臨床常用中藥，具有療傷止痛，補(bǔ)腎強(qiáng)骨等功效。骨碎補(bǔ)資源分布是影響其開(kāi)發(fā)利用的關(guān)鍵因素。生藥學(xué)特性是藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)及其與混偽品的鑒別的依據(jù)。骨碎補(bǔ)炮制工藝的優(yōu)化能夠提高飲片的質(zhì)量。提取工藝的優(yōu)化能為藥材有效成分的工業(yè)化生產(chǎn)提供可靠的技術(shù)支持。此外，藥物代謝動(dòng)力學(xué)和代謝組學(xué)的研究能為藥材的臨床應(yīng)用提供良好的參考依據(jù)。文章從骨碎補(bǔ)在資源調(diào)查、生藥學(xué)鑒定、炮制工藝、提取工藝、藥物代謝動(dòng)力學(xué)和代謝組學(xué)等方面的研究進(jìn)展情況進(jìn)行概述。

【關(guān)鍵詞】 骨碎補(bǔ)；資源；質(zhì)量；臨床應(yīng)用；研究概況

【中圖分類號(hào)】R282 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2017）09-0059-08

Research Progress of Rhizoma Drynariae

MA Hongna WEI Shenghua TAN Longyan*

School of Pharmaceutical Sciences， Guiyang University of Chinese Medicine， Guiyang 550025，China

Abstract：Rhizoma drynariae， a commonly used traditional Chinese medicine in clinic， which can promote the healing fracture and relieve pain， replenish the kidney and strengthen the bones. The distribution of resources is the key factor that influences its development and utilization. And the characteristics of pharmacognosy are gist for the quality evaluation of medicinal materials and that for the identification with mixed falsify. Moreover， the optimization of Rhizoma drynariae processing process can improve the quality of slices. Also， the optimization of extraction process could provide reliable technical support for the industrialization of medicinal active ingredients. In addition， pharmacokinetic and metabonomics studies can provide a good reference for the clinical application of medicinal materials. This article summarizes the latest research progress of the rhizoma drynariae in resource investigation， pharmacognosy identification， processing technology， extraction technology， pharmacokinetic and metabonomics.

Keywords：Rhizoma Drynariae；Resource；Quality；Clinical Application；Research Progress

骨碎補(bǔ)為蕨類植物槲蕨Drynaria fortunei （Kunze） J. sm.（槲蕨科Drynariaceae槲蕨屬Drynaria植物）的干燥根莖[1]。其味苦溫，歸肝、腎經(jīng)，具有療傷止痛，補(bǔ)腎強(qiáng)骨，消風(fēng)祛斑的功效[1]。臨床用于跌撲閃挫、筋骨折傷、腎虛腰痛、筋骨痿軟、耳鳴耳聾、牙齒松動(dòng)等癥，外治斑禿和白癜風(fēng)[1]。近年來(lái)，由于骨碎補(bǔ)良好的藥用價(jià)值，在資源調(diào)查、生藥學(xué)鑒定、炮制工藝、提取工藝、藥代動(dòng)力學(xué)和代謝組學(xué)等方面的研究取得了明顯的成效。筆者在系統(tǒng)查閱和整理相關(guān)文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上，對(duì)骨碎補(bǔ)涉及以上領(lǐng)域的最新研究結(jié)果進(jìn)行系統(tǒng)的總結(jié)，并對(duì)該領(lǐng)域存在的問(wèn)題和前景進(jìn)行探討，旨在為骨碎補(bǔ)資源的保護(hù)、合理開(kāi)發(fā)和可持續(xù)利用提供參考。

1 資源調(diào)查

骨碎補(bǔ)原植物喜溫暖濕潤(rùn)氣候，多附生于樹(shù)干或林中巖石上。雖然分布較廣，但生長(zhǎng)環(huán)境特殊，且生長(zhǎng)緩慢。黃寶優(yōu)等[2]采用走訪和實(shí)地調(diào)查相結(jié)合的方法，對(duì)廣西骨碎補(bǔ)種質(zhì)資源分布和生物生態(tài)學(xué)特性進(jìn)行了調(diào)查研究。發(fā)現(xiàn)槲蕨在人為破壞較少的環(huán)境下，植株較大，根莖較粗；反之則反，且?guī)ф咦拥某升g植株也較難采到[2]。近年來(lái)，廣西骨碎補(bǔ)生境遭到一定程度的破壞，而破壞的生境較難恢復(fù)[2]。鄒珊珊等[3]查閱了大量文獻(xiàn)資料，整理了1400份以上槲蕨及其混淆品標(biāo)本資料，并到野外實(shí)地調(diào)查，分析了槲蕨的本草考證、生態(tài)環(huán)境以及在中國(guó)的野生資源分布。結(jié)果表明，盡管歷代本草對(duì)于骨碎補(bǔ)均有記載，但并非為同一種[3]。通過(guò)中藥材產(chǎn)地適宜性分析地理信息系統(tǒng)（TCMGIS）系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫(kù)分析顯示，槲蕨在中國(guó)主要分布于長(zhǎng)江流域以南的亞熱帶季風(fēng)地區(qū)中低海拔的山區(qū)[3]。根據(jù)文獻(xiàn)和標(biāo)本的結(jié)果顯示野生槲蕨主要分布于安徽、福建、廣東、廣西、貴州、湖北、湖南、江西、四川、重慶、云南、浙江等省[3] ，詳見(jiàn)表1。由于對(duì)野生資源的盲目采挖，造成野生資源破壞嚴(yán)重，所以亟待建立相應(yīng)的保護(hù)措施。

鄒珊珊等[3]到大中型中藥材市場(chǎng)實(shí)地調(diào)查走訪多家鋪面、零售攤位及藥材加工站點(diǎn)，分析了骨碎補(bǔ)的商品產(chǎn)地來(lái)源、混淆品種類、產(chǎn)量、銷售等情。調(diào)查結(jié)果顯示，骨碎補(bǔ)藥材主要來(lái)源于安徽、廣西、貴州、湖北、湖南、四川、重慶、云南和甘肅，詳見(jiàn)表1?；靷纹非闆r調(diào)查表明，文獻(xiàn)記載混偽品包括槲蕨屬8種（中華槲蕨D.sinaca Diels、團(tuán)葉槲蕨D.bonii Christ、川滇槲蕨D.delavyi Christ、櫟葉槲蕨D.quercifolia （L.） J.Sm、石蓮姜槲蕨D.propinqua （Wall. ex Mett.） J. Sm. ex Bedd.、小槲蕨D.parishii （Bedd.） Bedd.、毛槲蕨D.mollis Bedd.、硬葉槲蕨D.rigidula （Sw.） Bedd.）、骨碎補(bǔ)科4種（圓蓋陰石蕨Humata tyermannii T. Moore、大葉骨碎補(bǔ)Davallia formosana Hayata、海州骨碎補(bǔ)H. tyermannii T. Moore、鱗軸小葉膜蓋蕨Araiostegia perdurans（H.Christ） Copel）、水龍骨科3種（崖姜蕨Phymatosorus cuspidatus （D. Don） Pic. Serm.、光亮瘤蕨Phymatosorus cuspidatus （D. Don） Pic. Serm.、光亮密網(wǎng)蕨Phymatodes lucida （Roxb.） Ching），而市場(chǎng)走訪調(diào)查發(fā)現(xiàn)市售混淆品主要有中華槲蕨、石蓮姜槲蕨、團(tuán)葉槲蕨、大葉骨碎補(bǔ)、川滇槲蕨、光葉槲蕨（D.propinqua（Wall. ex Mett.） Bedd.）等6種，詳見(jiàn)表1。產(chǎn)量情況調(diào)查表明，廣西、貴州、云南和湖北4省的產(chǎn)量占據(jù)安國(guó)、亳州中藥材市場(chǎng)上骨碎補(bǔ)貨源約90%，但數(shù)據(jù)包含混偽品的產(chǎn)量，詳見(jiàn)表1。從銷售情況來(lái)看，多數(shù)商家認(rèn)為產(chǎn)于湖北、貴州的為正品，故價(jià)格較高[3]。因此，盡管歷代本草記載種不同，但應(yīng)按中國(guó)藥典規(guī)定使用槲蕨。市場(chǎng)銷售的骨碎補(bǔ)藥材的混偽品較多，應(yīng)加強(qiáng)區(qū)分和市場(chǎng)監(jiān)管以保證群眾利益。從市場(chǎng)供求關(guān)系分析表明開(kāi)展人工育苗和栽培技術(shù)研究、建立種植基地方能保障市場(chǎng)供應(yīng)[3]。

2 生藥學(xué)研究

張炎兵等[4]對(duì)骨碎補(bǔ)原植物的植株高度、葉型以及營(yíng)養(yǎng)葉、能育葉和孢子囊群的形態(tài)特征做了詳細(xì)描述，從分類學(xué)角度為鑒定其原植物提供了明確的依據(jù)。在骨碎補(bǔ)藥材性狀方面，從形狀、長(zhǎng)、寬、高、表面顏色及附屬物、藥材質(zhì)地和氣味等特征方面做了詳細(xì)的觀察和研究。對(duì)根莖橫切面的鱗片、表皮、維管束和薄壁組織等的結(jié)構(gòu)特性進(jìn)行了顯微觀察[4]。利用薄層色譜法對(duì)骨碎補(bǔ)粉末特征檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，骨碎補(bǔ)供試品色譜中，在與柚皮苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示出相同顏色的熒光斑點(diǎn)[4]。此外，Sun等[5]利用分子生物學(xué)手段對(duì)骨碎補(bǔ)葉綠體全基因組進(jìn)行了測(cè)序，為骨碎補(bǔ)的分子生藥學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。以上研究結(jié)果從植物基源、藥材性狀、粉末特征和薄層色譜鑒別等幾個(gè)方面為骨碎補(bǔ)藥材的鑒定提供了基本的分析依據(jù)。

高厚明等[6]測(cè)定了10批不同產(chǎn)地骨碎補(bǔ)中柚皮苷、新北美圣草苷和E-4-O-β-D 葡萄糖?？Х人岬?種成分含量，建立了骨碎補(bǔ)藥材的高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜，標(biāo)定8個(gè)共有峰，其中5個(gè)共有峰的化學(xué)成分尚待確定（圖 1）。同時(shí)，白俊鵬等[7]也利用HPLC方法測(cè)定了16批不同產(chǎn)地骨碎補(bǔ)中E-4-O-β-D-吡喃葡萄糖基香豆酸、咖啡酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，5，7，3，5-四羥基二氫黃酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和柚皮苷等4種成分的含量，建立了相應(yīng)的指紋圖譜，標(biāo)定了12個(gè)共有峰，確定了6個(gè)峰，詳見(jiàn)圖2。骨碎補(bǔ)HPLC指紋圖譜方法特征性及專屬性強(qiáng)，可從定性和定量?jī)煞矫娣治龊驮u(píng)價(jià)骨碎補(bǔ)藥材的內(nèi)在質(zhì)量，優(yōu)于常規(guī)的單一指標(biāo)評(píng)價(jià)方法。

李曉紅等[8]利用索式提取法對(duì)19批（10批正品、9批偽品）骨碎補(bǔ)藥材中的脂溶性成分進(jìn)行提取，并建立了骨碎補(bǔ)脂溶性成分的氣相色譜（GC）指紋圖譜。確定了10批骨碎補(bǔ)正品藥材的GC指紋圖譜中共有峰44個(gè)，詳見(jiàn)圖3，利用主成分分析法（PCA）對(duì)指紋圖譜進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析表明10批正品結(jié)果聚集在一起，而另外供試的9批偽品結(jié)果分散在圖中不同區(qū)域，表明正偽品區(qū)分結(jié)果良好，且不同基源的藥材化學(xué)成分差異明顯[8]。因此，利用GC指紋圖譜鑒定骨碎補(bǔ)中脂溶性成分有助于準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)藥材的質(zhì)量。

中藥材的微量元素一方面能夠補(bǔ)充和調(diào)節(jié)人體所缺乏的各種微量元素，另一方面能夠通過(guò)吸收、絡(luò)合等方式達(dá)到治病的效果，因此微量元素的含量也是評(píng)價(jià)骨碎補(bǔ)質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)。采用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜（ICP-AES）法對(duì)寧夏、四川、福建等不同產(chǎn)地骨碎補(bǔ)粉劑中微量元素進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示產(chǎn)于寧夏的骨碎補(bǔ)藥材中Na、Ca、Zn、Fe的含量高于其他產(chǎn)地，而產(chǎn)于四川的骨碎補(bǔ)藥材中K、Mg含量高于其他產(chǎn)地[9]。表明骨碎補(bǔ)的產(chǎn)地可能對(duì)其微量元素含量有影響。

國(guó)家規(guī)定鉛（Pb）、鎘（Cd）、砷（As）、汞（Hg）、銅（Cu）等元素為中藥材重金屬殘留檢測(cè)方面的主要指標(biāo)。王永來(lái)等[10]利用原子吸收分光光度法和原子熒光光譜法對(duì)10批不同產(chǎn)地的骨碎補(bǔ)藥材進(jìn)行了上述5種重金屬元素的殘留量分析。結(jié)果顯示，銅為2.6875～8.5217mg/kg，鎘為0.2006～0.2708mg/kg，鉛為0.2504～1.0000mg/kg，汞為0.0034～0.0294mg/kg，砷為0.0066～0.0533 mg/kg，均符合藥典對(duì)重金屬標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定[10]。該方法的建立有助于中藥材中重金屬殘留量檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)化，同時(shí)為中藥材的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

中藥材與其混偽品的鑒定有多種方法，顯微鑒定是廣泛應(yīng)用的方法之一。骨碎補(bǔ)入藥部位為根莖，而根莖上的鱗片在蕨類植物的分類學(xué)上具有重要的意義，所以骨碎補(bǔ)根莖上的鱗片能夠?yàn)樗幉牡蔫b定提供重要的依據(jù)。朱迎夏等[11]利用光學(xué)顯微鏡、掃描電子顯微鏡及石蠟切片方法觀察了骨碎補(bǔ)、川滇槲蕨、櫟葉槲蕨和崖姜的根狀莖鱗片的形態(tài)特征。結(jié)果顯示，骨碎補(bǔ)、櫟葉槲蕨和崖姜根狀莖的鱗片基在表皮凹陷處著生且分布較均勻，而川滇槲蕨根狀莖的鱗片基在表皮凸起處著生且分布較為稀疏[11]。程茂高等[12]利用石蠟切片法觀察了骨碎補(bǔ)和普通鳳丫蕨根狀莖的橫切面，同時(shí)采用粉末鑒定法對(duì)二種藥材根狀莖上的鱗片進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)骨碎補(bǔ)根狀莖橫切面維管束10～20個(gè)，鱗片長(zhǎng)7～12mm，寬0.8～1.5mm，邊緣著生睫毛狀鋸齒，普通鳳丫蕨根狀莖橫切面維管束2～3個(gè)，鱗片，長(zhǎng)1～6mm，寬0.3～1.0mm，全緣。性狀觀察發(fā)現(xiàn)，骨碎補(bǔ)藥材斷面纖維性，紅棕色，維管束黃色點(diǎn)狀，而普通鳳丫蕨藥材斷面較平坦，灰白色，維管束白色弧形[12]。后含物觀察發(fā)現(xiàn)骨碎補(bǔ)藥材粉末中淀粉粒含量極少，而普通鳳丫蕨藥材粉末中含有大量淀粉粒[12]。這些結(jié)果表明鱗片的著生位置、稀疏程度及形態(tài)特性，橫切面及維管束特性等均可作為骨碎補(bǔ)及其混偽品顯微鑒別的重要參考依據(jù)。

以上分析表明，對(duì)于骨碎補(bǔ)藥材及其與混偽品的鑒定可通過(guò)基源鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定、薄層色譜、液相色譜、氣相色譜、微量元素含量測(cè)定和重金屬含量測(cè)定等多種方法相結(jié)合的方式進(jìn)行，此外，分子生物學(xué)手段能為骨碎補(bǔ)的基源鑒定提供更精確的數(shù)據(jù)。為骨碎補(bǔ)的質(zhì)量控制提供充分的依據(jù)，并確保廣大患者用藥安全、穩(wěn)定和有效。

3 炮制工藝

砂燙法為骨碎補(bǔ)炮制的主要方法，藥材經(jīng)過(guò)砂炒后可以提高活性成分柚皮苷等的溶出率[13]。李靜等[13]研究了骨碎補(bǔ)的砂燙炮制工藝，首先對(duì)加熱溫度、加熱時(shí)間、油砂用量等單因素進(jìn)行優(yōu)選，再用柚皮苷、黃酮、煎出物含量和膨脹率等指標(biāo)進(jìn)行正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)優(yōu)選。結(jié)果表明210℃、加熱燙3min、用6倍油砂為砂燙骨碎補(bǔ)的最佳炮制工藝。該工藝炮制出的骨碎補(bǔ)柚皮苷、黃酮、煎出物含量和膨脹率等指標(biāo)最佳，參數(shù)量化，可操作性強(qiáng)，為骨碎補(bǔ)砂燙炮制工藝規(guī)范化提供了可靠數(shù)據(jù)。然而，趙清等[14]在研究骨碎補(bǔ)砂燙制品中柚皮苷含量下降的原因時(shí)，發(fā)現(xiàn)投藥量與柚皮苷含量成負(fù)相關(guān)，單鍋燙制藥材投藥量過(guò)大會(huì)造成炮制過(guò)火以致成品質(zhì)量下降，因此在骨碎補(bǔ)燙制過(guò)程中投藥量不宜過(guò)大。

目前臨床上骨碎補(bǔ)以砂燙品入藥居多，砂燙后質(zhì)地松脆、鱗片易去除、便于調(diào)劑和制劑等[15]，但砂燙法也存在諸多缺陷，如不易控制質(zhì)量、操作費(fèi)時(shí)費(fèi)工費(fèi)力、不宜大量炒制。膨化炮制法是將食品膨化技術(shù)應(yīng)用于中藥炮制，通過(guò)該技術(shù)使硬質(zhì)藥材在一定的溫度和壓力下均勻受熱，之后突然減壓以破壞藥材內(nèi)部分子間的引力，從而使藥材質(zhì)地疏松[15]。采用正交實(shí)驗(yàn)法，以壓強(qiáng)和保溫時(shí)間為因素，并以柚皮苷的含量為指標(biāo)優(yōu)選炮制工藝，發(fā)現(xiàn)最佳膨化條件為膨化壓力2.0kg/cm2，膨化保溫時(shí)間4min[15]。以水浸出物量和柚皮苷含量為指標(biāo)考察骨碎補(bǔ)膨化品和砂燙品發(fā)現(xiàn)，膨化品中水溶性物浸出量和柚皮苷含量均較高，表明膨化炮制法優(yōu)于砂燙法[16]。

古人認(rèn)為骨碎補(bǔ)鹽炙走腎，益增補(bǔ)腎之功[17]。耿妍等[18]比較了傳統(tǒng)砂燙工藝和改良砂燙工藝（先潤(rùn)鹽水后燙品和先燙后潤(rùn)鹽水品），發(fā)現(xiàn)先潤(rùn)后燙品中柚皮苷含量最高。隨后，確定先用鹽水悶潤(rùn)再砂燙至鼓起的炮制方法，并對(duì)其具體工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)選[18]。單因素實(shí)驗(yàn)分別考察了鹽溶液用量、鹽用量、浸泡時(shí)間和砂燙溫度等因素對(duì)評(píng)價(jià)指標(biāo)柚皮苷的含量影響，之后選擇鹽用量、浸泡時(shí)間和砂燙溫度為考察因素，并以柚皮苷的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，每20g藥材用30mL鹽水（含4g鹽），浸泡8h，在190℃下砂燙4min為最佳工藝[18]。蔣曉煌等[19]用食鹽代替油砂對(duì)骨碎補(bǔ)進(jìn)行燙制，以柚皮苷、總黃酮、煎出物量、去毛、膨脹率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選擇加熱溫度、加熱時(shí)間、食鹽用量為因素水平，采用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選鹽燙骨碎補(bǔ)的炮制工藝。結(jié)果顯示，210℃、加熱燙制3min、食鹽用量為骨碎補(bǔ)量10倍為鹽燙骨碎補(bǔ)的最佳炮制工藝[19]。盡管砂燙品和先潤(rùn)鹽水后燙品在水分、灰分和醇溶性浸出物等指標(biāo)方面均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，但化學(xué)成分上存在明顯差異[20]。與砂燙品相比，先潤(rùn)鹽水后燙品中1-咖啡酰葡萄糖苷和4-乙?；?3，5-二甲氧基苯甲酸的含量略微降低，而新北美圣草苷和圣草次苷的含量明顯降低，但表沒(méi)食子兒茶素、北美圣草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、北美圣草素-7-O-[6″-（3-羥基-4-甲氧基肉桂酰）]-β-D-吡喃葡萄糖苷和柚皮苷的含量則明顯升高[20]。因此，骨碎補(bǔ)砂燙品和先潤(rùn)鹽水后燙品在臨床功效上存在差異可能是由于炮制后化學(xué)成分的差異造成的[20]，臨床上可以根據(jù)不同疾病情況選擇相應(yīng)的中藥飲片。

微波炮制方法是將骨碎補(bǔ)段置于輸出功率為750W的微波爐中，鋪疊成1cm厚，中火烘烤2min，取出，冷卻后去毛[21]。楊梓懿等[21]研究了微波法和砂燙法對(duì)骨碎補(bǔ)中總黃酮和水溶性浸出物含量的影響，與砂燙法相比，微波法炮制的骨碎補(bǔ)中總黃酮和水溶性浸出物的含量均較高，表明微波法優(yōu)于砂燙法。微波法炮制有利于成分的溶出可能與微波的強(qiáng)穿透力有關(guān)[19]。

4 提取工藝

4.1 柚皮苷提取工藝 大孔吸附樹(shù)脂分離技術(shù)是利用大孔吸附樹(shù)脂的多孔結(jié)構(gòu)和選擇性吸附功能從中藥提取液中分離精制有效成分的技術(shù)。楊蕾等[22]通過(guò)靜態(tài)、動(dòng)態(tài)吸附和解吸相結(jié)合的方法，以柚皮苷的吸附率、解吸率為評(píng)價(jià)指標(biāo)綜合評(píng)定樹(shù)脂型號(hào)，并通過(guò)考察上柱藥材量、上樣流速、洗脫乙醇濃度和洗脫溶劑用量等確定純化工藝條件。結(jié)果表明，HPD-100型大孔吸附樹(shù)脂為最佳型號(hào)樹(shù)脂，藥材-大孔吸附樹(shù)脂為1：1的質(zhì)量比上樣，上樣流速為3BV/h，以8倍柱體積水洗，之后以14倍柱體積50%乙醇洗脫為最佳提取工藝條件。方婧等[23]研究了柚皮苷微波協(xié)助提取法，并與藥典提取方法進(jìn)行比較。微波提取條件為時(shí)間5min，提取溫度120℃，提取溶劑50%甲醇，與藥典法提取柚皮苷方法相比具有提取率高、簡(jiǎn)便快速、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。以上結(jié)果表明大孔吸附樹(shù)脂法和微波提取法均為柚皮苷提取的有效方法。

4.2 總黃酮提取工藝 黃艷萍等[24]利用正交實(shí)驗(yàn)法，研究了浸泡時(shí)間、溶劑量、提取次數(shù)和超聲時(shí)間對(duì)骨碎補(bǔ)總黃酮提取率的影響，確定了骨碎補(bǔ)總黃酮超聲提取法的最佳條件為加60倍量的水，浸泡4h，超聲提取4次，每次20min。超聲提取法提取骨碎補(bǔ)總黃酮的量明顯高于傳統(tǒng)的乙醇回流法，且超聲提取法具有操作簡(jiǎn)單、省時(shí)、提取效率高等優(yōu)點(diǎn)，表明其在中藥提取方面有著良好的前景。

張全香等[25]利用靜態(tài)吸附方法對(duì)5種不同樹(shù)脂純化骨碎補(bǔ)總黃酮的富集效果進(jìn)行比較，并對(duì)分離純化總黃酮的工藝進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明，在室溫及pH值4.0條件下，骨碎補(bǔ)總黃酮分離純化的最佳樹(shù)脂為HPD-BJQH，50%乙醇溶液為最佳解吸液，10mL/min為最佳流量。岳春華等[26]利用頂空氣相色譜法測(cè)定了3批骨碎補(bǔ)總黃酮中大孔樹(shù)脂殘留物苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯及正庚烷的含量，結(jié)果表明，3批樣品中均未檢出以上6種大孔樹(shù)脂殘留物。因此，采用頂空進(jìn)樣氣相色譜法測(cè)定大孔樹(shù)脂殘留物能夠取得良好的效果，而且方法易于操作，分離度高，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確[26]。

近年來(lái)，中藥提取工藝采用多種方法進(jìn)行研究分析，試驗(yàn)結(jié)果在一定程度上能反映固定因素水平下的最佳工藝，但某一因素水平發(fā)生變化后將無(wú)法快速確定對(duì)提取結(jié)果的影響，提取動(dòng)力學(xué)模型能夠很好地解決該問(wèn)題。張晉等[27]以骨碎補(bǔ)中的總黃酮為測(cè)定指標(biāo)，研究了水煎煮過(guò)程中的提取動(dòng)力學(xué)機(jī)制，并擬合出提取動(dòng)力學(xué)方程。利用該動(dòng)力學(xué)模型能較好地驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果，且標(biāo)準(zhǔn)偏差均控制在工業(yè)可接受范圍內(nèi)。因此，該模型的建立對(duì)于水煎煮法提取骨碎補(bǔ)中總黃酮的生產(chǎn)工藝及骨碎補(bǔ)配方顆粒的生產(chǎn)工藝研究具有一定指導(dǎo)意義，隨著模型的不斷完善將最終達(dá)到指導(dǎo)科研與實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)的作用。

5 藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究

近年來(lái)，傳統(tǒng)中藥的臨床應(yīng)用功效和安全越來(lái)越受到關(guān)注，藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究能夠?yàn)樗幉牡呐R床應(yīng)用提供良好的參考。Li等[28]利用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）技術(shù)對(duì)大鼠口服骨碎補(bǔ)提取物后血液中柚皮苷及其代謝物柚苷元的藥物代謝動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，小鼠口服骨碎補(bǔ)提取物后，血液中柚皮苷和柚苷元的藥峰濃度分別是（2.56±0.77）×103ng/mL和（222±45）ng/mL，藥峰時(shí)間分別為（0.67±0.20）h和（8.0±1.3）h，血藥濃度-時(shí)間曲線下面積從0h到最后一個(gè)可檢測(cè)濃度分別計(jì)算為（3.23±0.54）×103ng/mL·h-1和（1.57±0.37）×103ng/mL·h-1，血藥濃度-時(shí)間曲線下面積從0 h到∞可計(jì)算為 （3.29±0.54）×103ng/mL·h-1和（1.79±0.43）×103ng/mL·h-1，柚皮苷消除半衰期為（4.1±0.8）h，且在8h時(shí)還可以看到1個(gè)小峰。該方法具有快速、靈敏、專一性強(qiáng)等特性，所獲得的柚皮苷及柚苷元的藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)可為骨碎補(bǔ)的臨床應(yīng)用提供參考。謝雁鳴等[29]通過(guò)反相高效液相色譜法測(cè)定了大鼠血清和組織中柚皮苷的含量。將18只大鼠分成3個(gè)劑量組，按骨碎補(bǔ)總黃酮0.3、0.6、1.2g/kg的劑量灌胃，在用藥后30～480min內(nèi)每隔30分鐘取眼底動(dòng)脈或股動(dòng)脈血清測(cè)定柚皮苷含量。柚皮苷于30min開(kāi)始吸收，90min達(dá)到高峰，灌胃后4h血藥濃度明顯下降，灌胃后8h仍有一定血藥濃度，表明骨碎補(bǔ)柚皮苷吸收較緩，在血中保持時(shí)間較長(zhǎng)，消失較慢。組織中柚皮苷含量的測(cè)定結(jié)果顯示以胃、腸為最高，但下降迅速；其次肝、肺、腎較高，肌肉、脂肪也有一定分布，腦組織含量甚低。這些結(jié)果表明，反相高效液相色譜法具有簡(jiǎn)便、靈敏、快速，不受樣品基質(zhì)中雜質(zhì)干擾等特性，適用于大鼠血清和組織中柚皮苷的測(cè)定。

群體藥代動(dòng)力學(xué)可根據(jù)患者個(gè)體差異制定個(gè)體化給藥劑量，將經(jīng)典的藥代動(dòng)力學(xué)基本原理與統(tǒng)計(jì)學(xué)模型相結(jié)合，定量描述患者生理、病理、合并用藥等多種個(gè)體差異對(duì)藥物代謝的影響，分析藥物代謝動(dòng)力學(xué)特性中存在的變異性，考察患者群體中藥物濃度的決定因素[30]。Wang等[31-32]觀察了強(qiáng)骨膠囊（骨碎補(bǔ)總黃酮）中柚皮苷在中國(guó)女性原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥患者中群體藥代動(dòng)力學(xué)特征。觀察的女性患者年齡40～80歲，共98名，居住于北京東直門(mén)等5個(gè)社區(qū)。血液樣本在患者口服強(qiáng)骨膠囊（250mg含75mg柚皮苷）后0.5、1、2、3、4、6、8、10、 12和24h收集。利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）測(cè)定血液樣本中的柚皮苷含量，采用非線性混合效應(yīng)模型軟件對(duì)群體藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。選取藥物清除率（C1 ）、中央分布容積（v）、吸收速率常數(shù)（ka1）、外周分布容積（vii）和室間清除率（clii）作為參數(shù)，并通過(guò)基礎(chǔ)模型、協(xié)變量模型和最終模型進(jìn)行評(píng)估。腎陽(yáng)虛、肝腎陰虛、年齡、身高、血尿素氮、血清肌酐、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、高脂血癥等作為協(xié)變量。通過(guò)正向和逆向模型化建立模型。最終模型通過(guò)內(nèi)部驗(yàn)證、外部驗(yàn)證和可視化預(yù)測(cè)等進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果顯示最終模型C1、腎陽(yáng)虛對(duì)C1的影響、v、ka1、clii和vii的群體參數(shù)分別為37.6μg/L、0.427L、123 L/h、0.12/h、0.3056和1.446，高脂血癥和腎陽(yáng)虛是重要的協(xié)變量。結(jié)果表明群體藥代動(dòng)力學(xué)模型可以有效地表征一劑口服強(qiáng)骨膠囊在中國(guó)原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥患者中的藥代動(dòng)力學(xué)特征。

6 代謝組學(xué)研究

代謝組學(xué)是對(duì)生物體內(nèi)所有代謝物進(jìn)行定量分析，并尋找代謝物與生理病理變化的相對(duì)關(guān)系的研究技術(shù)，這符合傳統(tǒng)中藥的完整性和系統(tǒng)性的特征[33]。該技術(shù)能為解決中藥療效、中藥治療疾病的分子機(jī)制、中藥質(zhì)量控制及新藥開(kāi)發(fā)等提供良好的支持。Lu等[33]利用代謝組學(xué)技術(shù)研究了氫化可的松誘導(dǎo)的大鼠腎陽(yáng)虛證及骨碎補(bǔ)提取物對(duì)該疾病的療效。采用UPLC/MS技術(shù)對(duì)大鼠尿液的代謝譜進(jìn)行檢測(cè)，并用PCA法對(duì)代謝譜差異進(jìn)行分析。與對(duì)照組相比，模型組大鼠的苯丙氨酸和苯乙酰甘氨酸（腸道細(xì)菌消化苯丙氨酸的代謝物）表達(dá)量上調(diào)，苯丙氨酸的上調(diào)能夠抑制飲食的消化，且在模型組中也發(fā)現(xiàn)大鼠食欲下降的情況。模型組大鼠的N2-琥珀酰-L-鳥(niǎo)氨酸（腸道細(xì)菌對(duì)精氨酸消化的代謝產(chǎn)物）和L-脯氨酸表達(dá)量也上調(diào)，N2-琥珀酰-L-鳥(niǎo)氨酸和L-脯氨酸均參與精氨酸代謝途徑，表明腎陽(yáng)虛證影響了氨基酸代謝。與對(duì)照組相比，模型組大鼠的肌氨酸酐和檸檬酸表達(dá)量下調(diào)，二者主要參與能量代謝，表明腎陽(yáng)虛證與能量代謝的機(jī)能障礙有關(guān)，且在模型組中也發(fā)現(xiàn)大鼠肢體溫度下降的現(xiàn)象。苯酰胺基醋酸鹽是腸道細(xì)菌對(duì)苯丙氨酸的代謝產(chǎn)物，能夠通過(guò)干擾羥基化作用來(lái)保護(hù)腎組織，該化合物的表達(dá)量下降可能是腎陽(yáng)虛證中腎損傷的表現(xiàn)[27]。苯乙酰甘氨酸、N2-琥珀酰-L-鳥(niǎo)氨酸和苯酰胺基醋酸鹽均為腸道細(xì)菌的代謝產(chǎn)物，所以腎陽(yáng)虛證能夠干擾腸菌群。與模型組相比，骨碎補(bǔ)提取物治療組中肌氨酸酐和檸檬酸表達(dá)量上調(diào)，所以骨碎補(bǔ)能夠增強(qiáng)能量代謝及線粒體的功能[33]。與模型組相比，治療組中苯丙氨酸、苯乙酰甘氨酸、N2-琥珀酰-L-鳥(niǎo)氨酸和L-脯氨酸表達(dá)量下調(diào)，而苯酰胺基醋酸鹽表達(dá)量上調(diào)[33]。以上結(jié)果表明腎陽(yáng)虛證能夠干擾氨基酸代謝、能量代謝和腸道菌群的穩(wěn)態(tài)，而骨碎補(bǔ)提取物對(duì)由氫化可的松誘導(dǎo)的腎陽(yáng)虛證有顯著的療效。同時(shí)表明代謝組學(xué)是研究中藥療效機(jī)制的有力工具[33]。Liu等[34]也利用代謝組學(xué)技術(shù)研究了骨碎補(bǔ)提取物的抗骨質(zhì)疏松癥效應(yīng)及作用機(jī)制，利用UPLC-MS/MS技術(shù)獲得對(duì)照組、模型組和治療組血漿的代謝譜，并利用PCA法和偏最小二乘判別分析（PLS-DA）法對(duì)數(shù)據(jù)分析。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，模型組中溶血磷脂膽堿、色氨酸和苯丙氨酸的表達(dá)量明顯上調(diào)，而治療組中這3類化合物的表達(dá)量與對(duì)照中相近。因此，骨碎補(bǔ)提取物對(duì)骨質(zhì)疏松癥具有明顯的療效，且對(duì)骨質(zhì)疏松癥的治療可能是通過(guò)干預(yù)抗氧化劑-氧化平衡、色氨酸和苯丙氨酸代謝途徑進(jìn)行。

7 小結(jié)

骨碎補(bǔ)作為常用中藥，在民間有著廣泛的藥用經(jīng)驗(yàn)和歷史。對(duì)其化學(xué)成分和藥理作用機(jī)制已經(jīng)有廣泛的研究，但在其他方面的研究仍存在諸多不足。如：生藥學(xué)鑒定方面還缺乏完善的標(biāo)準(zhǔn)；單一炮制和提取工藝不能滿足多方面的需要等。筆者認(rèn)為今后應(yīng)從以下幾方面開(kāi)展工作：對(duì)種質(zhì)資源進(jìn)行深入調(diào)查，同時(shí)探索骨碎補(bǔ)仿野生栽培技術(shù)和其他人工繁殖技術(shù)，為藥材的保護(hù)和可持續(xù)利用提供保障；完善藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為藥材的鑒別、分級(jí)和商品化規(guī)格等提供依據(jù)；優(yōu)化炮制和提取加工技術(shù)，指導(dǎo)科研和工業(yè)化生產(chǎn)；利用代謝組學(xué)和藥物代謝動(dòng)力學(xué)等現(xiàn)代技術(shù)研究藥材的藥效和治療的分子機(jī)制，為臨床用藥安全提供有效的參考。相信隨著研究的不斷深入，作為常用中藥的骨碎補(bǔ)在未來(lái)的疾病治療中將會(huì)有更好的應(yīng)用前景。

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（收稿日期：2017-03-08 編輯：梁志慶）