腹瀉型腸易激綜合征肝郁脾虛病證結(jié)合動(dòng)物模型研究進(jìn)展

舒圓月+肖小芹+鄧桂明+陳鎮(zhèn)+楊立平+歐陽林旗+賀艷萍+向彪+何海

摘要：目前中醫(yī)臨床治療腹瀉型腸易激綜合征（IBS-D）以辨病辨證相結(jié)合為主，因此，建立IBS-D肝郁脾虛病證結(jié)合動(dòng)物模型作為中西醫(yī)結(jié)合的中醫(yī)藥創(chuàng)新理論日益受到關(guān)注，并逐漸成為中醫(yī)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型發(fā)展的新方向。本文對IBS-D肝郁脾虛病證結(jié)合動(dòng)物模型的近年研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述，探討建立IBS-D肝郁脾虛動(dòng)物模型的方法與研究思路，為中醫(yī)藥治療IBS-D的作用機(jī)理研究和新藥開發(fā)提供參考。

關(guān)鍵詞：腹瀉型腸易激綜合征；肝郁脾虛型；病證結(jié)合；動(dòng)物模型；綜述

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.06.037

中圖分類號(hào)：R259.74；R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2017）06-0134-03

Abstract： At present， TCM treatment of diarrhea-predominant irritable bowel syndrome （IBS-D） is based on the combination of disease differentiation and syndrome differentiation. Therefore， the establishment of IBS-D of liver stagnation and spleen deficiency syndrome combined with animal model as a combination of traditional Chinese and Western medicine innovation theory has become increasingly concerned about， and gradually become a new direction for the development of TCM experimental animal model. This article reviewed the research progress in IBS-D liver and spleen deficiency syndrome in recent years， discussed the establishment of IBS-D liver stagnation and spleen deficiency animal model and research ideas for the treatment of IBS-D， and provided references for mechanism research of TCM treatment for IBS-D and research and development of new medicine.

Key words： IBS-D； liver stagnation and spleen deficiency； combination of disease and syndrome； animal model； review

腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）是以腹痛或腹部不適，大便習(xí)慣改變，并伴有一系列胃腸道癥狀及精神癥狀而腸道缺乏明顯病理性改變?yōu)樘卣鞯墓δ芪蓙y性疾病，主要分為腹瀉型（IBS-D）、便秘型（IBS-C）、混合型或不確定型（IBS-M/IBS-A），其中以IBS-D最為常見[1]。IBS-D屬中醫(yī)學(xué)“腹痛”“泄瀉”等范疇，肝郁脾虛型、脾胃虛弱型、脾腎陽虛型、寒熱互結(jié)型、陰虛腸燥型為本病主要證候，其

基金項(xiàng)目：中國博士后科學(xué)基金面上項(xiàng)目（2014M550420）；湖南省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目（14A107）；湖南省中醫(yī)藥科研計(jì)劃項(xiàng)目（201429、2013135）；湖南省研究生科研創(chuàng)新項(xiàng)目（2014CX02）；湖南省教育廳項(xiàng)目（15C1041）

通訊作者：鄧桂明，E-mail：705500732@qq.com

中以肝郁脾虛型最為常見[2]。本病主要病理原因有胃腸動(dòng)力異常、精神因素、內(nèi)臟痛覺高敏、腸道感染及菌群失調(diào)等，其中胃腸動(dòng)力異常和內(nèi)臟痛覺高敏性被認(rèn)為是IBS主要的病理生理學(xué)基礎(chǔ)[3]。

病證結(jié)合不僅是中醫(yī)臨床的重要診療模式，也是中西醫(yī)結(jié)合的中醫(yī)藥理論創(chuàng)新[4]。目前，IBS-D肝郁脾虛病證結(jié)合動(dòng)物模型的構(gòu)建思路大致為根據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論復(fù)制疾病模型，在疾病模型的基礎(chǔ)上根據(jù)中醫(yī)理論復(fù)制證候模型。茲就近年IBS-D肝郁脾虛病證結(jié)合模型相關(guān)文獻(xiàn)綜述如下。

1 造模方法及特點(diǎn)

趙迎盼等[5]采用新生母子分離2周+慢性束縛3周+番瀉葉灌胃1周法成功復(fù)制IBS-D肝郁脾虛型病證癥結(jié)合大鼠模型，該作者查閱并統(tǒng)計(jì)了涉及IBS-D的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，采用番瀉葉灌胃造成腹瀉的文獻(xiàn)約占50%，而其余研究多采用慢性束縛及其他應(yīng)激方法，并且得出結(jié)論：病證結(jié)合模型更能模擬IBS-D患者臨床癥狀及發(fā)病機(jī)制。

張北華[6]通過對幾種造模方法進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對比研究表明：采用母子分離8周+慢性束縛應(yīng)激3周+番瀉葉灌胃1周可成功建立肝郁脾虛型病證結(jié)合大鼠模型；采用慢性束縛聯(lián)合母子分離法造模優(yōu)于單一因素法；該研究所建立的肝郁脾虛型大鼠模型具有內(nèi)臟高敏感性、腸道通透性增加、抑郁和免疫功能異常等多種特征。筆者認(rèn)為，該研究母子分離時(shí)間較長（8周）可能導(dǎo)致影響因素增加，子鼠3周齡斷奶情況下可脫離母鼠獨(dú)立攝食水，無需同與母鼠同籠，故可綜合其他造模方法進(jìn)行改善。

王微等[7]采用母子分離2周+慢性束縛應(yīng)激3周造模，研究表明，病證結(jié)合動(dòng)物模型用于中藥藥效評(píng)價(jià)優(yōu)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病模型和單純中醫(yī)證候模型；新生母子分離法疊加慢性束縛刺激法，可建立較為穩(wěn)定的肝郁脾虛型病證結(jié)合大鼠模型。筆者認(rèn)為，在此基礎(chǔ)上疊加番瀉葉灌胃能產(chǎn)生腹瀉癥狀，可更好地建立IBS-D肝郁脾虛病證結(jié)合模型。endprint

李燕舞等[8]研究發(fā)現(xiàn)，采用母子分離2周和乙酸灌腸刺激2周均可建立IBS-D內(nèi)臟高敏大鼠模型，并將二者進(jìn)行對比得出結(jié)論：母子分離模型能更好地模擬IBS-D腹痛及排便異常癥狀。王輝等[9]采用乙醚麻醉后乙酸灌腸合并束縛1周造模成功。筆者認(rèn)為，該方法雖可以使大鼠產(chǎn)生腹瀉癥狀，但造模時(shí)間短，因素單一，易損傷腸道黏膜，不符合IBS-D的病程長、多因素致病以及無器質(zhì)性病變等特點(diǎn)。

房財(cái)富等[10]采用母子分離2周+慢性束縛3周+番瀉葉灌胃1周方法造模，成功建立了IBS-D肝郁脾虛病證結(jié)合模型，結(jié)果表明，該模型具有內(nèi)臟高敏、腸道功能障礙、腹瀉、抑郁等多種特征，且該模型腸道組織形態(tài)無異常病變，能較好地模擬慢性功能性腸病的主要特點(diǎn)。

鄧桂球等[11]采用番瀉葉水煎液灌胃同時(shí)結(jié)合束縛2周的方法造模。筆者認(rèn)為，該方法缺少早期生活應(yīng)激事件，在IBS-D模型內(nèi)臟高敏這一基本特點(diǎn)上有所欠缺，應(yīng)該適當(dāng)改進(jìn)。

Coutinho S V等[12]通過母子分離合并其他應(yīng)激方法來模擬IBS-D的癥狀或中醫(yī)肝郁脾虛的癥狀，取得穩(wěn)定的造模結(jié)果，且多因素大鼠模型總體模擬效果優(yōu)于單因素大鼠模型。母子分離持續(xù)時(shí)間對比研究表明，每日15 min簡短分離會(huì)降低仔鼠成年HPA軸對應(yīng)激的反應(yīng)能力，而每日>3 h分離時(shí)間則出現(xiàn)相反結(jié)果，并且出現(xiàn)內(nèi)臟高敏感反應(yīng)；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別對造模影響的研究表明，盡管大多數(shù)實(shí)驗(yàn)為避免性激素影響大多采用雄性鼠仔進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但母子分離雄鼠的腸道敏感性增高不及雌鼠明顯，這與臨床上IBS-D多發(fā)于女性患者的情況相一致。

綜上，采用母子分離+束縛+番瀉葉灌胃方法能較好的建立IBS-D肝郁脾虛動(dòng)物模型，具體方法為對新生2 d雌性子鼠與母鼠進(jìn)行分離，每日3 h，持續(xù)2周，3周齡斷奶并從母鼠中分離，棄母鼠不用，給予常規(guī)喂養(yǎng)至8周齡后，篩選體質(zhì)量>200 g的大鼠采用束縛瓶對大鼠肩部和腹部進(jìn)行束縛，使其固定不動(dòng)，3 h/d，連續(xù)3周。束縛應(yīng)激期從第3周開始給予番瀉葉煎劑灌胃，連續(xù)1周。IBS-D動(dòng)物模型評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)在內(nèi)臟高敏的基礎(chǔ)上，具備行為學(xué)表現(xiàn)（少動(dòng)易怒、抑郁、毛色晦黯、體質(zhì)量下降或增長過緩、食量減少等）、腸道功能障礙、腹瀉以及結(jié)腸病理組織形態(tài)無器質(zhì)性病變等特點(diǎn)。

2 造模研究思路

IBS-D的發(fā)病絕非單一因素所致，為多因素相互交織、相互作用引起，更非某一單方面機(jī)制所能詮釋，并且其臨床癥狀也相對復(fù)雜和多樣，因此采用多因素復(fù)合造模方法更能貼近IBS-D病理生理過程。研究表明，病證結(jié)合動(dòng)物模型用于中藥藥效評(píng)價(jià)要優(yōu)于西醫(yī)疾病模型和單純中醫(yī)證候模型，它體現(xiàn)了中西醫(yī)兩種醫(yī)學(xué)的互補(bǔ)融合，更有說服力[13]。IBS-D無器質(zhì)性病變，診斷主要依據(jù)臨床癥狀和體征，而動(dòng)物沒有語言表達(dá)，因此實(shí)驗(yàn)研究中的動(dòng)物模型的建立方法應(yīng)該從病因、癥狀、病程上兼具本病的特點(diǎn)。

80%IBS-D患者中，應(yīng)激可造成IBS-D癥狀發(fā)作或加重，生理心理應(yīng)激刺激對IBS-D產(chǎn)生直接致病作用，在IBS-D的病理生理學(xué)和臨床表現(xiàn)中具有重要作用[14]。IBS-D是在腦-腸軸參與下，涉及感覺、動(dòng)力、情感、認(rèn)知和行為等多因素的疾病，腸易激綜合征動(dòng)物模型依據(jù)刺激靶點(diǎn)的不同，主要分為中樞和外周兩種[15]，而母子分離法是一種典型的腦腸軸動(dòng)物模型，涵蓋了上述多種因素的IBS-D較為理想的動(dòng)物模型，早期的生活應(yīng)激事件，如童年忽視、失去父母和受虐待等能夠影響結(jié)腸動(dòng)力和引起內(nèi)臟痛覺過敏，使成年后發(fā)生IBS的危險(xiǎn)性增加[16-17]。大鼠母子分離法符合人類生命早期母子分離的特征，通過IBS-D患者早期生活應(yīng)激事件，可模擬IBS-D的某些病因，產(chǎn)生內(nèi)臟高敏狀態(tài)，甚至出現(xiàn)腸道屏障功能改變、腸道菌群失調(diào)以及應(yīng)激反應(yīng)過度等異常表現(xiàn)，這種生理及心理的影響成年后可持續(xù)存在[18-19]。母子分離聯(lián)合番瀉葉灌胃法和慢性束縛法造模，從“證”的角度而言，采用番瀉葉灌胃通常被作為復(fù)制脾虛泄瀉動(dòng)物模型的首選方法[20]，故不會(huì)引入新的中醫(yī)“證”的因素，大鼠胃腸道組織在番瀉葉提取物灌胃后無光鏡可見的變化，且不會(huì)產(chǎn)生藥物依賴性。而從“病”的角度而言，番瀉葉灌胃可以導(dǎo)致大鼠產(chǎn)生稀便、大便次數(shù)增多的疾病臨床特點(diǎn)。有研究表明，慢性束縛應(yīng)激也可提高大鼠的內(nèi)臟敏感性，而且可以影響胃腸道運(yùn)動(dòng)功能[5]。慢性束縛應(yīng)激和番瀉葉灌胃都可使大鼠產(chǎn)生抑郁及腹瀉等癥狀，同時(shí)該模型具有肝郁脾虛的中醫(yī)證候，而長達(dá)2個(gè)月的造模時(shí)間也符合IBS-D患者病程特點(diǎn)。

3 展望

IBS-D易遷延不愈，反復(fù)發(fā)作，嚴(yán)重影響患者生活品質(zhì)，給患者帶來巨大的精神折磨與經(jīng)濟(jì)損失。目前對IBS-D動(dòng)物模型的造模方法尚未成熟，單純中醫(yī)或現(xiàn)代醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型不能很好模擬IBS-D的發(fā)病機(jī)理和癥狀特征。IBS-D肝郁脾虛病證結(jié)合動(dòng)物模型既運(yùn)用了IBS-D的中醫(yī)病因病機(jī)，又綜合了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)致病理論，因此，體現(xiàn)了中醫(yī)辨證論治特色的同時(shí)又符合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對疾病明確的病理組織器官變化和診斷評(píng)價(jià)。該方法符合臨床診治實(shí)際情況，對于探討IBS-D病理生理變化與中醫(yī)證候特征之間的關(guān)系，以及中醫(yī)藥治療IBS-D的作用機(jī)理，具有重大意義。

但目前IBS-D肝郁脾虛病證結(jié)合動(dòng)物模型研究尚存在一些問題：采用西醫(yī)疾病模型與證候模型（母子分離+束縛+番瀉葉灌胃）的單純疊加，是否能夠較好模擬IBS-D的病理生理機(jī)制和發(fā)病特點(diǎn)；模型建立后，如何對模型進(jìn)行公認(rèn)合理的疾病和證候特征評(píng)價(jià)。上述問題需要通過大量研究驗(yàn)證并加以改進(jìn)，使IBS-D肝郁脾虛病證結(jié)合動(dòng)物模型更加成熟，從而更好地發(fā)揮中醫(yī)藥治療優(yōu)勢。

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（收稿日期：2016-05-01）

（修回日期：2016-05-20；編輯：向宇雁）endprint