制首烏對(duì)去卵巢大鼠子宮指數(shù)和性激素水平的影響研究

朱 璨 李堯鋒 彭 芳 楊長(zhǎng)福 譚登友

貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025

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實(shí)驗(yàn)研究

制首烏對(duì)去卵巢大鼠子宮指數(shù)和性激素水平的影響研究

朱 璨 李堯鋒 彭 芳 楊長(zhǎng)福*譚登友

貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025

目的：研究制首烏對(duì)去卵巢大鼠子宮指數(shù)和血清性激素水平的影響。方法：將60只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、制首烏高、中、低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組。采用手術(shù)建立去卵巢大鼠模型，假手術(shù)組摘除雙側(cè)卵巢周圍等體積脂肪，造模后7d，制首烏高、中、低劑量組分別灌服濃度為0.3 g/mL、0.15 g/mL 、0.075 g/mL的制首烏水煎液，陽(yáng)性對(duì)照組灌服濃度為0.018mg/mL的補(bǔ)佳樂(lè)，連續(xù)給藥28d。計(jì)算各組大鼠子宮指數(shù)，ELISA法測(cè)定大鼠血清雌二醇( E2)、卵泡刺激素( FSH)、黃體生成素( LH)水平。結(jié)果：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠子宮指數(shù)下降，血清中E2含量降低、LH和FSH 濃度升高(P<0.05)。與模型組比，制首烏各處理組可不同程度的升高子宮指數(shù)和血清E2含量，降低LH、FSH濃度(P<0.05)。結(jié)論：制首烏可通過(guò)調(diào)節(jié)子宮指數(shù)和性激素來(lái)調(diào)節(jié)生殖軸，說(shuō)明其具有植物雌激素樣作用。

制首烏；去卵巢；植物雌激素

“腎藏精，主生殖”、“女子以肝為先天”、“肝腎同源”，中醫(yī)學(xué)認(rèn)肝腎主宰“腎-天癸-沖任-胞宮”生殖軸，肝腎虧虛，是女性諸病的根本原因?，F(xiàn)代女性在各種社會(huì)環(huán)境因素誘導(dǎo)下，更容易發(fā)生性腺衰老和性激素失衡，導(dǎo)致提前出現(xiàn)卵巢功能衰竭、不孕、更年期等病癥。中藥補(bǔ)益肝腎法具有獨(dú)特的療效，制首烏作為重要的補(bǔ)益藥之一，其味苦、甘，微溫，歸腎、肝經(jīng)，功能補(bǔ)肝腎、益精血[1]。《本草綱目》記載其“能養(yǎng)血益肝，固精益腎，健筋骨，烏須發(fā)，為滋補(bǔ)良藥”。有研究表明何首烏飲可預(yù)防和延緩卵巢顆粒細(xì)胞凋亡，延緩睪丸衰老[2，3]。但制首烏對(duì)去勢(shì)大鼠生殖內(nèi)分泌研究尚未見(jiàn)報(bào)到，本實(shí)驗(yàn)采用手術(shù)建立去卵巢大鼠模型，并給予制首烏補(bǔ)肝腎、益精血，探索其對(duì)去卵巢大鼠子宮指數(shù)和性激素的影響。

1 儀器與材料

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)SD雌性大鼠，未孕，體重250～270 g，60只，購(gòu)自長(zhǎng)沙天勤生物技術(shù)有限公司[動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(湘)2014-0010]。

1.2 主要儀器 KG-SX-700高壓滅菌鍋(上海茸研儀器有限公司);TG20-WS高速離心機(jī)(湖南湘立科學(xué)儀器有限公司);Varioskan Flash多功能酶標(biāo)儀(賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司)。

1.3 主要試劑和藥品 雌二醇( E2)、卵泡刺激素( FSH)、黃體生成素( LH) 酶聯(lián)免疫試劑盒(北京科盈美科技有限公司，各批號(hào)20151020)；戊酸雌二醇(補(bǔ)佳樂(lè))(拜爾醫(yī)藥保健有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字J20130009)；制首烏(北京同仁堂藥材有限公司)。制首烏水煎液濃縮至含生藥0.3g/mL藥液，0.45mm微孔濾膜過(guò)濾，置于 4℃ 冰箱保存。

2 方法

2.1 模型制備[4]將SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、制首烏高、中、低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組，每組10只。25%烏拉坦腹腔注射麻醉，固定，無(wú)菌條件下，肋弓與脊椎夾角處沿后正中線作一1.0～1.5cm的皮膚切口，皮膚切口向右牽拉,鈍性分離骶脊肌長(zhǎng)約1.0cm，可見(jiàn)一乳白色脂肪團(tuán),脂肪團(tuán)中找到一黃豆大小粉紅色桑椹樣的卵巢，結(jié)扎后切除右側(cè)卵巢，脂紡團(tuán)回納腹腔，注入1×105 U青霉素，縫合肌肉。將皮膚切口向左拉，同理切除左側(cè)卵巢。縫合皮膚。術(shù)后注意保暖。假手術(shù)組大鼠同樣手術(shù)操作，但僅切除等體積脂肪。

2.2 藥物處理 造模后7d，制首烏高、中、低劑量組分別灌服濃度為0.3g/mL、0.15g/mL、0.075g/mL的制首烏水煎液，陽(yáng)性對(duì)照組灌服0.018mg/mL補(bǔ)佳樂(lè)，假手術(shù)組、模型組灌服蒸餾水，灌胃量1mL/100g。連續(xù)給藥28d。

2.3 子宮指數(shù) 處死動(dòng)物，取子宮，剔除粘附脂肪等組織，稱重，計(jì)算子宮指數(shù)(子宮濕重/體重×100%)。

2.4 血清性激素檢測(cè) 末次給藥次日，麻醉大鼠后，股動(dòng)脈取血，靜置20min后，室溫下離心20min ，轉(zhuǎn)速2500r/min，取上清液，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，酶聯(lián)免疫法測(cè)定血清E2、FSH、LH水平。

3 結(jié)果

3.1 制首烏水煎液對(duì)去卵巢大鼠子宮指數(shù)的影響 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠子宮指數(shù)明顯降低(P<0.05)；與模型組比較，制首烏各處理組和陽(yáng)性對(duì)照組均能提高去卵巢大鼠的子宮指數(shù)(P<0.05)，其中制首烏高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。詳見(jiàn)表1。

表1 制首烏水煎液對(duì)去卵巢大鼠子宮指數(shù)的影響 ±s)

注：與假手術(shù)組比較，△P<0.05，△△P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3.2 制首烏水煎液對(duì)去卵巢大鼠性激素水平的影響 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清E2含量明顯降低、FSH和LH濃度顯著升高(P<0.05)。與模型組相比，制首烏高、中劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組均能顯著升高去卵巢大鼠的血清E2含量，降低模型大鼠血清FSH濃度(P<0.05，P<0.01)；制首烏中、低劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組能明顯降低血清LH濃度(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 制首烏對(duì)去卵巢大鼠性激素水平的影響 ±s)

續(xù)表2 表2 制首烏對(duì)去卵巢大鼠性激素水平的影響 ±s)

注：與假手術(shù)組比較，△P<0.05；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

4 討論

國(guó)內(nèi)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)制首烏具有廣泛的藥理作用，如延緩衰老，增強(qiáng)免疫力，抗菌抗炎，抗癌及抗誘變，保肝，降血脂及抗動(dòng)脈粥樣硬化等作用[2-8]。制首烏既能補(bǔ)肝腎、延緩衰老，其對(duì)于“下丘腦-垂體-卵巢-子宮”生殖軸應(yīng)有一定的調(diào)節(jié)作用。E2、FSH和LH是女性生殖軸的重要激素，E2不僅對(duì)女性生殖系統(tǒng)的生長(zhǎng)、發(fā)育、分化有重要的調(diào)控作用，而且對(duì)骨骼系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能也有重要影響； FSH 、LH 共同作用，調(diào)控卵巢各種性激素的合成與分泌，促進(jìn)卵泡的正常生長(zhǎng)發(fā)育。當(dāng)卵巢功能減退時(shí)，由卵巢合成并分泌的E2含量降低，在生殖軸負(fù)反饋調(diào)節(jié)下，腺垂體分泌的FSH和LH濃度升高[9]。

本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，去卵巢大鼠子宮指數(shù)和血清中E2含量明顯下降，F(xiàn)SH和LH濃度明顯升高。而制首烏各處理組和陽(yáng)性對(duì)照組可不同程度的升高模型大鼠子宮指數(shù)和血清E2含量，并降低FSH、LH濃度。其中制首烏高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組效果最為明顯。結(jié)果可知，制首烏能改善內(nèi)源性雌激素缺乏導(dǎo)致低雌激素和高促性腺激素狀態(tài)。本研究提示，該藥具有植物雌激素樣作用。

植物雌激素(Phytoestrogen，PE)是天然存在于一些植物中、具有雌激素效能的化合物。當(dāng)女性進(jìn)入絕經(jīng)期，或者由于多種因素誘發(fā)性腺衰老、體內(nèi)雌激素水平下降，即會(huì)出現(xiàn)更年期綜合征、骨質(zhì)疏松、心血管疾病及老年性癡呆等疾病。應(yīng)用雌激素替代療法則易產(chǎn)生高血凝狀態(tài)、高血壓、水腫及癡呆等副作用，并增加乳腺癌及子宮內(nèi)膜癌等雌激素依賴性腫瘤的發(fā)病危險(xiǎn)。所以，近幾年來(lái)己經(jīng)更多地被PE代替[10]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明制首烏可通過(guò)調(diào)節(jié)性激素和子宮指數(shù)來(lái)調(diào)節(jié)生殖軸，并提示該藥具有植物雌激素作用，為指導(dǎo)臨床用藥，為更年期婦女保健、雌激素依賴性腫瘤的用藥提供了理論依據(jù)，但制首烏植物雌激素作用的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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Effect of Polygoni Multiflori Radix Preparata on Uterine Coefficient and Sex Hormones in Ovariectomized Rats

ZHU Can LI Yaofeng PENG Fang YANG Changfu*TAN Dengyou

Gui Yang College of Traditional Chinese Medicine,Guiyang 550025,China

Objective To study the effect of Polygoni Multiflori Radix Preparata on uterine coefficient and sex hormones in ovariectomized rats.Methods Rats(n=60) were randomly divided into sham-operation, model, Polygoni Multiflori Radix Preparata high dose、middle dose、low dose and positive control groups.Taken operation to set up the model of ovariectomized rats, and removed isopyknic fat in sham-operation group.After 7 days, the Polygoni Multiflori Radix Preparata high dose、middle dose and low dose groups were respectively given drugs as 0.3 g/mL、0.15 g/mL 、0.075 g/mL, the positive control group was given drug as 0.018 mg/mL, and sustainted 28 days.Figured up the uterine coefficient, and maked use of ELISA to measure the level of serous E2、FSH、LH of all rats.Results Compared with sham-operation rats, the uterine coefficient of the model group declined, and the content of serous E2 decreased, and the concentration of FSH and LH increased(P<0.05).Compared with model group, the Polygoni Multiflori Radix Preparata and positive control groups could inordinately increase the uterine coefficient and the serous E2, reduce the serous FSH and LH.Conclusion Polygoni Multiflori Radix Preparata can improve the reproduction by adjust uterine coefficient and sex hormones.It hints that Polygoni Multiflori Preparata has the function likes Phytoestrogen.

Polygoni Multiflori Radix Preparata；Ovariectomized；Phytoestrogen

貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)學(xué)科資助項(xiàng)目(黔學(xué)位合字ZDXK[2016]25號(hào));貴州省科技廳科技計(jì)劃課題(黔科合SY字[2013]3021號(hào))；貴州省科教青年英才培養(yǎng)工程項(xiàng)目(黔省專合字[2012]165號(hào))；貴州省2015年度省級(jí)本科教學(xué)工程建設(shè)項(xiàng)目。

朱璨，女，碩士，助教，研究方向?yàn)橹嗅t(yī)藥防治生殖系統(tǒng)疾病。E-mail:992204746@qq.com

楊長(zhǎng)福，男，博士，副教授，研究方向?yàn)橹兴幖疤烊凰幬锓乐渭膊〉纳瘷C(jī)制。E-mail:zfy435140961@qq.com

R285.5

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1007-8517(2017)10-0025-03

2017-03-27 編輯：陶希睿)