粗齒冷水花中Epihernandulcin的含量測(cè)定

黃艷++文建文++陳明生++何開家++劉布鳴

【摘要】目的：建立測(cè)定粗齒冷水花中Epihernandulcin含量的方法。方法：采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定粗齒冷水花中Epihernandulcin含量，采用ECOSIL ODS-3反相色譜柱（250×46mm， 5μm），以乙腈-02%磷酸溶液（65：35）為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為240nm，流速為1mL/min，柱溫為室溫。結(jié)果：Epihernandulcin在0114-0683μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r=09991），平均回收率為9950%，RSD=218%（n=9）。結(jié)論：該法簡(jiǎn)單，可行，重現(xiàn)性好，適用于粗齒冷水花中Epihernandulcin的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】 粗齒冷水花；Epihernandulcin；高效液相色譜法；含量測(cè)定

【中圖分類號(hào)】R2841【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2017）10-0022-03

The Determination of Epihernandulcin in Pilea sinofasciata C J Chen

HUANG YanWEN JianwenCHEN MingshengHE KaijiaLIU Buming*

Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences&Guangxi Key Laboratory of Tradtitonal Chinese Medicine Quality Stardands， Nanning 530022， China

Abstract：Objective To develop a determination method of epihernandulcin in Pilea sinofasciata C J Chen Methods The determination was performed on ECOSIL ODS-3（250×46mm， 5μm） column with acetonitrile-02% phosphoric acid（65：35） as mobile phase with flow rate 10 mL/min at detection wavelength of 240 nm And the column temperature was set at room temperature Results The average recovery rate（n=9） of epihernandulcin was 9950% and RSD was 218%（n=9）， respectively Conclusion The method is simple， rapid， accurate and reliable. And it is suitable for the quality control of epihernandulcin in Pilea sinofasciata C J Chen

Keywords： Pilea sinofasciata C J Chen；Epihernandulcin；HPLC；Determination

粗齒冷水花為蕁麻科（Urticaceae）冷水花屬（Pilea Lindl）植物粗齒冷水花Pilea sinofasciata C J Chen的全草，又名紫綠草、青藥、水麻葉、水甘草、大茴香、宮麻，分布于我國(guó)廣西、貴州、四川和云南等省，具有清熱解毒，活血祛風(fēng)，理氣止痛，主治高熱，鵝口瘡，喉蛾腫痛，跌打損傷，骨折，風(fēng)濕痹痛[1]。目前對(duì)粗齒冷水花的成分報(bào)道較少，牛延慧等[2]對(duì)冷水花屬植物進(jìn)行化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)研究。而本課題組對(duì)粗齒冷水花全草的乙醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，其主要含有機(jī)酸類、生物堿類、黃酮類、倍半萜類、三萜類等化合物[3]；另外采用GC-MS法對(duì)粗齒冷水花的脂溶性成分進(jìn)行了成分分析[4]，并對(duì)藥材進(jìn)行了薄層鑒定研究[5]。前期從粗齒冷水花分離得到epihernandulcin，而且含量較高，本文采用高效液相色譜（HPLC）對(duì)粗齒冷水花中epihernandulcin進(jìn)行含量測(cè)定研究，為粗齒冷水花的質(zhì)量控制提供科學(xué)的依據(jù)和理論基礎(chǔ)。

1儀器與材料

11儀器HH-S恒溫水浴鍋，1525型液相色譜儀（美國(guó)Waters公司），2489型紫外檢測(cè)儀（美國(guó)Waters公司），2707型自動(dòng)進(jìn)樣儀（美國(guó)Waters公司），Breeze系統(tǒng)色譜工作站（美國(guó)Waters公司），XS205分析天平（梅特勒-托利多）。

12材料epihernandulcin對(duì)照品（自制）純度>98%；甲醇（賽默飛世爾科技有限公司；色譜純）、乙腈（賽默飛世爾科技有限公司有限公司；色譜純）、磷酸（廣州新建精細(xì)化工廠，分析純），其他試劑均為分析純。粗齒冷水花（Pilea sinofasciata C J Chen）采集于廣西百色市，經(jīng)廣西中醫(yī)藥研究院何開家主任藥師鑒定為粗齒冷水花Pilea sinofasciata CJChen。

2方法與結(jié)果

21色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性考察色譜柱：ECOSIL ODS-3（250×46mm， 5μm）；流動(dòng)相：乙腈-02%磷酸溶液等度洗脫（65：35）；流速：10mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：10μL。供試品溶液中Epihernandulcin的理論塔板數(shù)是12635，分離度大于15，完全分離。如圖1、圖2所示。

22溶液的制備

221對(duì)照品貯備液的制備精密稱取epihernandulcin 對(duì)照品1138mg，置于10mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得對(duì)照品貯備液。

222供試品溶液的制備取粗齒冷水花粉末1g，精密稱定，置于錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，稱定重量，加熱提取25h，放冷至室溫，補(bǔ)足重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，再用045μm微孔濾膜濾過，即得。

23標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液10、20、30、40、50、60mL，分別置于10mL容量瓶中，加入流動(dòng)相稀釋定容至刻度，搖勻，配成系列濃度的對(duì)照品溶液，按“21項(xiàng)下的色譜條件”下進(jìn)行測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。回歸方程為：Y =12114828477X -3885010（n=6），r=09997，表明對(duì)照品進(jìn)樣量在0114～0683μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3。

24精密度試驗(yàn)取同一供試品溶液，精密吸取10μL，按“21色譜條件”連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果顯示RSD%小于2，表明儀器精密度良好。

25穩(wěn)定性考察取供試品溶液按“21色譜條件”分別在0、1、2、4、6、8、10、12小時(shí)進(jìn)行結(jié)果RSD值為075%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

26重復(fù)性考察取同一批次藥材適量，按照“22溶液的制備”方法制備6份供試品溶液，按“21色譜條件”進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果RSD值為218%，表明重復(fù)性良好。

27加樣回收率考察取已知Epihernandulcin含量的粗齒冷水花粉末05g，共9份，精密稱定，置于1～9號(hào)錐形瓶中，1至3號(hào)精密加入01mg/mL的Epihernandulcin對(duì)照品溶液07 mL，4～6號(hào)精密加入01mg/mL的Epihernandulcin對(duì)照品溶液09mL，7至9號(hào)精密加入01mg/mL的Epihernandulcin對(duì)照品溶液11mL，按照“22溶液的制備”方法制備，按“21色譜條件”實(shí)驗(yàn)。結(jié)果Epihennandulcim的平均回收率9950%，RSD值為196%。見表1。

28樣品測(cè)定精密稱取不同批次粗齒冷水花末各10g，按“22溶液的制備”方法制備，按“21色譜條件”測(cè)定，測(cè)定Epihernandulcin含量，結(jié)果見表2。

3討論

31提取方法考察試驗(yàn)過程中考察了加熱回流和超聲處理兩種方式，結(jié)果顯示加熱回流樣品中Epihernandulcin所測(cè)定的含量要高，故采用加熱回流提取方式。

32提取溶劑的考察試驗(yàn)過程中分別考察了甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇為提取溶劑，結(jié)果顯示甲醇提取含量較多，故采用甲醇作為提取溶劑。

33提取時(shí)間的考察試驗(yàn)過程中分別考察了加熱回流提取時(shí)間為30、60、90、120、150、180min，結(jié)果顯示150min基本可以將供試品中的Epihernandulcin提取完全，故選擇150min作為提取時(shí)間。

實(shí)驗(yàn)還比較了采集百色不同產(chǎn)地的3批次粗齒冷水花中Epihernandulcin含量，其中Epihernandulcin（01792mg/g）的含量以百色凌云縣產(chǎn)地采集得到的藥材為最高。

參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì). 中華本草[M]. 上海：上?？茖W(xué)出版社， 1999：577.

[2]牛延慧， 梁志遠(yuǎn)， 甘秀海. 貴州三種冷水花化學(xué)成分預(yù)試研究[J]. 貴州師范學(xué)院學(xué)報(bào)， 2010， 26（3）：26-28.

[3] 黃艷， 武旭， 文建文， 等. 粗齒冷水花的化學(xué)成分研究[J]. 中草藥， 2016， 47（18）：3159-3163.

[4] 文建文， 黃艷， 何開家， 等. GC-MS 法分析粗齒冷水花石油醚部位的脂溶性成分[J].安徽農(nóng)業(yè)科技， 2010， 41（36）：14156， 14168.

[5]武旭， 柴玲， 黃艷， 等. 粗齒冷水花藥材的薄層鑒別研究[J]. 現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐， 2016， 30（1）：17-20.

（收稿日期：2017-03-24編輯：陶希睿）