核苷酸結(jié)合寡聚域在宮頸癌發(fā)病機(jī)制中的作用

趙巧云 范廣民 阮正英 應(yīng)香嵐

核苷酸結(jié)合寡聚域在宮頸癌發(fā)病機(jī)制中的作用

趙巧云1范廣民2阮正英1應(yīng)香嵐3

目的探討核苷酸結(jié)合寡聚域1（NOD1）在宮頸癌發(fā)病機(jī)制中的作用。方法免疫組化法檢測(cè)107例宮頸癌、50例宮頸上皮內(nèi)瘤變、50例慢性宮頸炎組織NOD1的表達(dá)。結(jié)果與慢性宮頸炎組比較，宮頸癌組NOD1的陽(yáng)性率和陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度均顯著增高[91.59%比62.00%，P<0.01；（0.18±0.05）比（0.16±0.04），P<0.05]；宮頸癌組NOD1陽(yáng)性率顯著高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組（91.59%比76.00%，P<0.05），但兩組間NOD1的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[（0.18±0.05）比（0.18±0.04），P>0.05]。宮頸癌組中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者NOD1陽(yáng)性率和陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[94.44%比84.21%，P>0.05；（0.18±0.05）比（0.19±0.05），P>0.05]。結(jié)論NOD1在宮頸癌組織中表達(dá)增強(qiáng)，可能與宮頸癌的發(fā)病機(jī)制相關(guān)，但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)密切關(guān)系。

宮頸癌；核苷酸結(jié)合寡聚域；免疫組化

宮頸癌是一種常見(jiàn)的婦科腫瘤疾病，為發(fā)展中國(guó)家引起女性死亡最常見(jiàn)的一個(gè)病因。目前發(fā)現(xiàn)，宮頸癌與固有免疫的免疫逃避機(jī)制有關(guān)[1]。核苷酸結(jié)合寡聚域（nucleotide-binding oligomerization domain，NOD）1是NOD樣受體家族成員之一，為人固有免疫的一種，屬于細(xì)胞內(nèi)模式識(shí)別受體，參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)，與機(jī)體的抗感染、腫瘤、關(guān)節(jié)炎和炎癥性腸病等多種疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)[2-3]，有望成為腫瘤治療的靶點(diǎn)。然而NOD1是否參與宮頸癌的發(fā)病機(jī)制至今尚不清楚。本研究通過(guò)檢測(cè)宮頸癌組織中NOD1的表達(dá)，探討NOD1與宮頸癌臨床病理特癥的關(guān)系，為臨床的靶向治療提供新的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料2008年6月—2015年8月臺(tái)州市三家醫(yī)院收治宮頸癌患者107例，其中浙江省臺(tái)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院28例，臺(tái)州市腫瘤醫(yī)院31例，臺(tái)州市中心醫(yī)院48例；手術(shù)55例，活檢52例；年齡22～76歲，平均（46.2±14.3）歲。術(shù)畢取腫瘤組織、癌旁組織及腹腔淋巴結(jié)，常規(guī)HE染色，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例。并選取同時(shí)期慢性宮頸炎患者50例，年齡20～67歲，平均（43.1±10.2）歲；宮頸上皮內(nèi)瘤樣變患者50例，年齡20～61歲，平均（41.2±9.4）歲。三組年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。所有病例均經(jīng)病理確診，且術(shù)前均未接受放療或化療，無(wú)其他惡性腫瘤史。

1.2 主要試劑多克隆兔抗人NOD1 IgG抗體購(gòu)自英國(guó)biorbyt公司（批號(hào)P10336），即用型SP試劑盒（PV-6000）和防脫玻片購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組化SP法測(cè)定NOD1的表達(dá)，抗體稀釋濃度均為1∶100。

1.3 方法免疫組化法檢測(cè)107例宮頸癌、50例宮頸上皮內(nèi)瘤變、50例慢性宮頸炎組織NOD1的表達(dá)。光鏡下觀察細(xì)胞著色情況，陽(yáng)性細(xì)胞的胞漿呈棕黃色表達(dá)。每張切片觀察5個(gè)視野（×200），取其平均值即為每張切片的觀察結(jié)果。按陽(yáng)性細(xì)胞所占比例及分布情況判定[4]：陰性（-）：?jiǎn)蝹€(gè)細(xì)胞染色，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%；弱陽(yáng)性（+）：散在或小的細(xì)胞團(tuán)染色，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)5%～24%；陽(yáng)性（++）：片狀或簇狀細(xì)胞染色，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為25%～50%；強(qiáng)陽(yáng)性（+++）彌散的細(xì)胞染色，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>50%。每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，采用Image-pro Plus 5.1免疫組化圖像分析系統(tǒng)對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行灰度掃描，取其平均值代表該片的光密度（optical density，OD）值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（） 表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用成組資料的t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)；P<0.05（雙側(cè)）為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

免疫組化結(jié)果顯示，陽(yáng)性細(xì)胞的胞漿呈棕黃色表達(dá)，三組患者的宮頸組織均有NOD1呈陽(yáng)性表達(dá)。三組間NOD1陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=20.06，P<0.01），宮頸癌組NOD1陽(yáng)性率顯著高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組和慢性宮頸炎組（χ2=7.15、20.36，P<0.05或 0.01），宮頸上皮內(nèi)瘤變組和慢性宮頸炎組NOD1陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.29，P>0.05）。方差齊性檢驗(yàn)結(jié)果，三組間NOD1的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度方差齊（F= 2.96，P>0.05）。宮頸癌組患者NOD1的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度顯著高于慢性宮頸炎組患者（P<0.05），宮頸上皮內(nèi)瘤變組患者NOD1陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度與慢性宮頸炎組患者及宮頸癌組患者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P> 0.05）。見(jiàn)表1，圖1（封二）。

表1 三組患者宮頸組織NOD1表達(dá)水平比較（

表1 三組患者宮頸組織NOD1表達(dá)水平比較（

注：與慢性宮頸炎組比較，*P<0.05，**P<0.01；與宮頸上皮內(nèi)瘤變組比較，△P<0.05；NOD1：核苷酸結(jié)合寡聚域

組別慢性宮頸炎組宮頸上皮內(nèi)瘤變組宮頸癌組例數(shù)50 50 107陰性19 12 9陽(yáng)性31 38 98陽(yáng)性率（%）62.00 76.00 91.59**△陽(yáng)性強(qiáng)度（OD值）0.16±0.04 0.18±0.04 0.18±0.05*

55例宮頸癌手術(shù)患者中，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例，但兩者的NOD1陽(yáng)性率和陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.58，t= 0.52，P>0.05）。見(jiàn)表2。

表2 55例宮頸癌手術(shù)患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及NOD1表達(dá)（）

表2 55例宮頸癌手術(shù)患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及NOD1表達(dá)（）

注：NOD1：核苷酸結(jié)合寡聚域

陽(yáng)性強(qiáng)度（OD值）0.19±0.05 0.18±0.05淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性無(wú)有例數(shù)19 36 3 2陽(yáng)性16 34陽(yáng)性率（%）84.21 94.44

3 討論

人類(lèi)的模式識(shí)別受體主要有兩類(lèi)：一類(lèi)是膜結(jié)合受體，如Toll樣受體；另一類(lèi)是細(xì)胞內(nèi)的模式識(shí)別受體，包括NOD樣受體和具有螺旋酶結(jié)構(gòu)域的抗病毒蛋白受體。目前研究最多的是Toll樣受體與腫瘤的關(guān)系，已證實(shí)Toll樣受體與腫瘤的生物學(xué)行為有關(guān)[5-6]，其基因多態(tài)性與宮頸癌的發(fā)病機(jī)制相關(guān)[7]。

NOD樣受體是一類(lèi)類(lèi)似于Toll樣受體的模式識(shí)別受體，通過(guò)識(shí)別病原體相關(guān)分子模式和損傷相關(guān)分子模式，在天然免疫反應(yīng)中起著決定性的作用。根據(jù)氨基末端不同NOD樣受體可分為四個(gè)亞家族：NLRA、NLRB、NLRC和NLRP；如果根據(jù)不同功能還也可分為四種類(lèi)型：炎癥、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄激活和自噬。在凋亡和發(fā)育早期中扮演關(guān)鍵的調(diào)節(jié)器[8]。NOD1是NOD樣受體的家族成員之一，廣泛表達(dá)于多種細(xì)胞，例如上皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等，激活炎癥因子的產(chǎn)生，參與凋亡和炎癥反應(yīng)等[3]。目前認(rèn)為NOD1與癌癥的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)，可能成為癌癥的標(biāo)志物[9]。在舌鱗狀細(xì)胞癌組織中，NOD1蛋白表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，舌鱗狀細(xì)胞癌組織NOD1 mRNA和蛋白表達(dá)低于正常舌黏膜組織，認(rèn)為NOD1可能通過(guò)機(jī)體的天然免疫功能，影響舌鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生及發(fā)展[10]。但NOD1在宮頸癌中的作用如何，目前知之甚少。

本研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組織中NOD1的表達(dá)水平高于慢性宮頸炎和宮頸上皮內(nèi)瘤變的病變組織。提示隨著宮頸組織的分化程度降低，NOD1的表達(dá)水平也隨之增強(qiáng)，推測(cè)NOD1的過(guò)度表達(dá)可能與宮頸組織的惡性分化程度相關(guān)。本研究同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，宮頸癌患者伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中，NOD1的陽(yáng)性率和陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度均無(wú)差異，提示NOD1的表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)密切相關(guān)。

本研究結(jié)果表明，NOD1在宮頸癌組織中表達(dá)增強(qiáng)，可能與宮頸癌的發(fā)病機(jī)制相關(guān)，但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)密切關(guān)系。

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（收稿：2016-07-27修回：2016-12-09）

Roles of Nucleotide-binding Oligomerization Domainin the Pathogenesis of Cervical Cancer

ZHAO Qiaoyun1, FANGuangmin2,RUANZhengying1,YINGXianglan3.
1DepartmentofGynaecologyandObstetrics(ZHAO Qiaoyun),Department of Pathology(RUAN Zhengying),Taizhou Integrated Western and Traditional Chinese Medicine Hospital,Wenling(317523),China;2 Department of Pathology,Taizhou Central Hospital,Taizhou(317000),China；3 Department of Pathology,Taizhou Tumor Hospital,Wenling(317500),China

ObjectiveTo investigate the potential roles of nucleotide-binding oligomerization domain 1（NOD1）in the pathogenesis of the cervical cancer.MethodsTissues from 107 patients with cervical cancer,50 cases of cervical intraepithelial neoplasia and 50 cases of chronic cervicitis were obtained,then were examined with immunohistochemistryto determine the expression of NOD1 protein in them.ResultsThe positiverate and expression levels of NOD1 in cervical cancer group were significantly higher than that in chronic cervicitis group（91.59%vs 62.00%, P<0.01;0.18±0.05 vs 0.16±0.04 optical density,P<0.05）.The positiverate of NOD1 in cervical cancer group were significantly higher than that in cervical intraepithelial neoplasia group（91.59%vs 76.00%,P<0.05）,while there was no significant difference in NOD1 levels between the two groups（0.18±0.05 vs 0.18±0.04 optical density,P> 0.05）.In cervical cancer group,no significant difference in the positiverate and expression levels of NOD1 was found between the tissuewith lymph node metastasis and those without lymph node metastasis（94.44%vs 84.21%；0.18±0.05 vs 0.19±0.05 optical density,both P>0.05）.ConclusionExpression of NOD1 in cervical cancer were increased.This may be correlated with the pathogenesis of cervical cancer,but not related closely with lymph nodesmetastasis.

cervical cancer；nucleotide-binding oligomerization domain；Immunohistochemistry

浙江省溫嶺市科技計(jì)劃項(xiàng)目（No：2012-1-84）

1浙江省臺(tái)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院婦產(chǎn)科（趙巧云）、病理科（阮正英）（臺(tái)州317523）；2浙江省臺(tái)州市中心醫(yī)院病理科（臺(tái)州317523）；3浙江省臺(tái)州市腫瘤醫(yī)院病理科（臺(tái)州317 523）

趙巧云，Tel：13750666948；E-mail：zqyzgyy@sohu.com