• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    A2/O工藝處理污水中雌激素活性和典型雌激素水平變化

    2017-06-07 08:22:30張秋亞王曉昌馬曉妍
    關(guān)鍵詞:固醇砂池酵母菌

    游 猛,張秋亞,王曉昌,馬曉妍

    (西安建筑科技大學(xué)環(huán)境與市政工程學(xué)院/ 國家城市非傳統(tǒng)水資源開發(fā)利用國際科技合作基地/ 西北水資源與環(huán)境生態(tài)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/ 陜西省污水處理與資源化工程技術(shù)研究中心/ 陜西省環(huán)境工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,陜西 西安 710055)

    A2/O工藝處理污水中雌激素活性和典型雌激素水平變化

    游 猛,張秋亞,王曉昌,馬曉妍①

    (西安建筑科技大學(xué)環(huán)境與市政工程學(xué)院/ 國家城市非傳統(tǒng)水資源開發(fā)利用國際科技合作基地/ 西北水資源與環(huán)境生態(tài)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/ 陜西省污水處理與資源化工程技術(shù)研究中心/ 陜西省環(huán)境工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,陜西 西安 710055)

    針對水環(huán)境中內(nèi)分泌干擾物低濃度、難去除和高危害的特點(diǎn),為全面了解污水處理過程中雌激素水平和效應(yīng)的變化情況,采用HPLC-UV-FLD分析了污水中4種固醇類雌激素的濃度水平,采用重組酵母菌雌激素篩檢法(YES)評價(jià)了城市污水處理流程(A2/O)中污水的雌激素活性,同時(shí)采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測污水處理過程中雌二醇(E2)的濃度水平。結(jié)果表明,出水中雌酮(E1)質(zhì)量濃度最高,為87.97 ng·L-1,雌二醇(E2)質(zhì)量濃度最低,為5.50 ng·L-1,固醇類雌激素水平去除率為88.83%~95.69%。A2/O系統(tǒng)對雌激素活性的去除率為73.33%,但出水仍具有一定的雌激素活性,雌激素當(dāng)量EEQ為1.92 ng·L-1。ELSIA檢測得雌二醇(E2)質(zhì)量濃度為10.01~82.82 ng·L-1,去除率為88.23%,與YES法檢測結(jié)果具有一致性。ELISA檢測可以成為體外檢測的一個重要補(bǔ)充。

    A2/O工藝;雌激素;雌激素活性;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA);去除率

    環(huán)境雌激素(environmental estrogens,EEs)指具有雌激素活性或者抗雄激素效應(yīng),能夠模擬或者干擾天然雌激素正常生理和生化作用的一類化合物。近年來,激素類藥物被廣泛用于人類日常生活和養(yǎng)殖業(yè)中,造成排放到環(huán)境中的雌激素種類日益增多[1]。固醇類是環(huán)境中常見的雌激素物質(zhì),如雌酮(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3) 和17α-乙炔基雌二醇(EE2)。AERNI等[2]研究指出污水廠出水中E1、E2和EE2質(zhì)量濃度分別為51、6和2 ng·L-1。WANG等[3]在一些地表水中檢測到E1和E2質(zhì)量濃度分別高達(dá)7.4和55.8 ng·L-1。由于雌激素物質(zhì)的難降解性和穩(wěn)定性,污水處理廠出水成為水環(huán)境中雌激素的重要來源之一[4]。

    化學(xué)方法檢測到的單一雌激素濃度不能揭示其對水環(huán)境的實(shí)際生態(tài)風(fēng)險(xiǎn),而生物效應(yīng)評價(jià)彌補(bǔ)了這方面的不足。檢測雌激素活性的體外方法包括重組酵母菌法(YES)、細(xì)胞增殖法和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等。其中重組酵母菌法是傳統(tǒng)的評價(jià)水環(huán)境雌激素效應(yīng)的方法[5],酶聯(lián)免疫吸附法則是基于抗原-抗體的特異性反應(yīng)原理,主要用來檢測細(xì)胞和血液中雌激素含量。A2/O工藝因其工藝成熟、便于管理、對有機(jī)物去除效果好以及出水水質(zhì)穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于污水處理。筆者分別采用化學(xué)分析、重組酵母菌法和酶聯(lián)免疫法對A2/O工藝處理前后水樣的典型固醇類雌激素水平和雌激素活性進(jìn)行全面研究,并對3者進(jìn)行比較,以期為水環(huán)境的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 化學(xué)試劑

    E1、E2、E3、EE2以及鄰硝基酚β-D-半乳糖苷(o-Nitrophenylβ-D-galactopyranoside,ONPG)為超級純,購自Sigma-Aldrich公司;無氨基酵母氮堿、DO和SD溶液所用的氨基酸均為超級純,購于Difco公司;HPLC級二甲基亞砜(DMSO)、甲醇和乙酸乙酯購自天津科密歐公司;試驗(yàn)用水均為超純水。

    1.2 水樣的采集與預(yù)處理

    污水來源于以A2/O為主要處理工藝的西安市某污水廠各處理單元的進(jìn)出水。選取細(xì)格柵出水(S1)、曝氣沉砂池出水(S2)、初沉池出水(S3)、好氧池出水(S4)、二沉池出水(S5)和加氯消毒出水(S6)6個取樣點(diǎn),污水處理工藝流程及取樣點(diǎn)如圖 1 所示。水樣取回后,立即進(jìn)行如下預(yù)處理:各水樣用玻璃纖維膜(0.45 μm,Millipore,GF/B)進(jìn)行過濾,1 L濾液用固相萃取小柱(Oasis HLB 6 mL/ 200 mg Cartridge,Waters)進(jìn)行濃縮富集。具體操作如下:依次經(jīng)10 mL乙酸乙酯、10 mL甲醇和10 mL超純水通過固相萃取小柱進(jìn)行潤濕活化,中間不允許填料抽干。使水樣連續(xù)通過固相小柱,調(diào)節(jié)真空泵的真空度,使流速保持在5~10 mL·min-1。水樣全部過濾完后再用10 mL純水洗滌,繼續(xù)真空抽氣干燥15 min,將固相小柱放在離心機(jī)中離心15 min,轉(zhuǎn)速為3 500 r·min-1,離心半徑為81 mm。最后用10 mL乙酸乙酯洗脫柱子,收集洗脫液,用高純氮?dú)獯蹈?得到萃取物。對于化學(xué)檢測,萃取物用1 mL甲醇進(jìn)行溶解;雌激素活性檢測時(shí),萃取物用500 μL DMSO溶解并進(jìn)行梯度稀釋;酶聯(lián)免疫法分析時(shí),萃取物用φ=1%的DMSO溶解,最終濃縮倍數(shù)為100倍。

    圖1 污水廠處理工藝流程圖及取樣點(diǎn)Fig.1 Technological flowchart of the sewage treatment plant and sampling sites

    1.3 分析方法

    1.3.1 化學(xué)分析法

    雌激素E1、E2、E3和EE2采用高效液相色譜儀(日本分光LC-2000)測定。HPLC色譜柱為Agilent 5 TC-C18 (250 mm×4.6 mm);流動相為乙腈和水,兩者體積比例為60∶40,流動相流速設(shè)為1 mL·min-1,柱溫為30 ℃。檢測器為紫外(MD-2010)和熒光檢測器(FP-2020)聯(lián)用;紫外檢測器波長為280 nm,熒光檢測器吸收波長和發(fā)射波長分別為227和315 nm;進(jìn)樣體積為100 μL,每個物質(zhì)的出峰時(shí)間如圖2所示。

    圖2 高效液相檢測方法的出峰時(shí)間Fig.2 Times of peaking in HPLC

    1.3.2 重組酵母菌法

    雌激素活性采用中國科學(xué)院生態(tài)環(huán)境中心建立的酵母雙雜交雌激素活性評價(jià)方法[6]。將酵母菌置于SD培養(yǎng)基中,在30 ℃、130 r·min-1條件下培養(yǎng)36 h。用SD培養(yǎng)液稀釋至600 nm處吸光度為0.75左右,吸取菌液995 μL于1.5 mL滅菌離心管中,加入5 μL樣品,混勻。每個樣品設(shè)6個梯度。將200 μL混合菌液轉(zhuǎn)移到96孔板中,每個濃度設(shè)置3個平行,在30 ℃、800 r·min-1條件下暴露2 h。測定菌懸液在600 nm處的吸光度值,隨后每孔棄去150 μL,加入120 μL測試緩沖液和20 μL氯仿,以1 200 r·min-1振蕩破壁15 min,加入40 μL ONPG,于30 ℃、800 r·min-1條件下培養(yǎng)顯色60 min。顯色結(jié)束后,每孔加入100 μL 1 mol·L-1碳酸鈉溶液,終止反應(yīng)。吸取200 μL上清液至新96孔板中,測定420 nm處吸光度。同時(shí),以DMSO作為陰性對照,以E2作為陽性對照。

    β-半乳糖苷酶活性(U)和雌激素當(dāng)量(EEQ,QEE)計(jì)算公式為

    (1)

    (2)

    式(1)~(2)中,t為從加入ONPG到溶液顯色時(shí)的反應(yīng)時(shí)間,取值60 min;V為菌液體積,取值0.2 mL;A600和A420分別為菌液在600和420 nm處的光密度值;A420′為空白對照在420 nm處的光密度值;D為稀釋因子,取值6.6。ρ(EC50,E2)為雌二醇的半數(shù)有效濃度(EC50),取值18.33 ng·L-1;ρ(EC50,樣品)為實(shí)際樣品的EC50值,ng·L-1。

    1.3.3 酶聯(lián)免疫吸附法

    E2測定根據(jù)試劑盒說明書(Estradiol,DRG)進(jìn)行操作,簡述如下:將標(biāo)準(zhǔn)品和濃縮樣品分別用新的取樣吸頭取25 μL加入到相應(yīng)的微孔中。在每個微孔中加入200 μL酶聯(lián)物,充分混勻10 s,室溫孵育2 h,快速棄去微孔內(nèi)反應(yīng)物,每孔用400 μL洗滌液洗板3次,在吸水紙上拍干。在每個微孔中加入100 μL底物液,室溫孵育15 min,隨后加50 μL終止液到每個檢測孔中終止酶反應(yīng)。10 min后,測450 nm處吸光度。

    1.4 數(shù)據(jù)分析

    重組酵母菌的雌激素活性采用Origin 軟件由最小二乘法計(jì)算得出。應(yīng)用GraphPad?Prism 5軟件中的單因素方差分析對當(dāng)量進(jìn)行差異顯著性分析。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 雌激素濃度水平分析

    由表1可知,E1、E2、E3和EE2的回收率分別為62%~65%、70%~85%、67%~81%以及69%~94%。GUEDES-ALONSO等[7]曾報(bào)道固醇類雌激素的回收率為31%~119%,筆者的研究結(jié)果與其具有一致性,說明該化學(xué)檢測方法具有可行性。

    表1 不同濃度目標(biāo)雌激素的回收率Table 1 Recovery rate of target EDCs relative to concentration %

    污水經(jīng)以A2/O處理工藝為主的常規(guī)活性污泥處理之后,COD去除率為94%,總氮去除率為77%,總磷去除率為80%,出水達(dá)到我國GB 18918—2002《城鎮(zhèn)污水處理廠污染物排放標(biāo)準(zhǔn)》中的一級B類標(biāo)準(zhǔn),污水處理廠運(yùn)行良好。由圖3可知,污水處理前后都存在一定濃度的雌激素。進(jìn)水中雌激素質(zhì)量濃度達(dá)上百ng·L-1甚至μg·L-1級別。進(jìn)水中E3質(zhì)量濃度為1 531.33 ng·L-1,是濃度最高的雌激素,其次是E1、EE2和E2,質(zhì)量濃度分別為962.24、698.81和447.64 ng·L-1。經(jīng)過二級生物處理之后,雌激素得到明顯去除,出水E1、E2、E3和EE2質(zhì)量濃度分別為87.96、5.50、75.32和30.63 ng·L-1。英國污水處理廠出水E1、E2和EE2質(zhì)量濃度分別為1~80、1~50和0.2~7.0 ng·L-1[8],筆者的檢測結(jié)果與其相當(dāng)。

    采樣次數(shù)n=6。圖3 各取樣點(diǎn)E1、E2、E3和EE2濃度Fig.3 Concentrations of E1, E2, E3 and EE2 in wastewater sampled at each sampling point

    雌激素的物理化學(xué)特性對其在污水處理過程中的去除和歸趨有重要作用。例如,典型固醇類雌激素具有較低的亨利常數(shù)(Hc),并且與正辛醇/水分配系數(shù)(Kow)的比值Hc/Kow低于10-9,因此揮發(fā)作用對雌激素在整個污水處理工藝的去除效果甚為微弱[9],筆者試驗(yàn)中曝氣沉砂池對雌激素的去除率低于10%。在初沉池中,E1、EE2和E3的去除率分別為29.72%、16.37%和18.21%,而E2幾乎沒有變化。這些微弱的削減作用可能是由于雌激素被吸附到固體顆粒上,隨著顆粒的沉降而被去除。在厭氧/缺氧/好氧階段,好氧池出水中E1、E2、E3和EE2的去除率分別高達(dá)88.83%、95.69%、95.21%和93.09%。一些研究表明嚴(yán)格的厭氧/缺氧/好氧環(huán)境構(gòu)建了良好的脫氮除磷菌群結(jié)構(gòu),這種特性的污泥更有利于雌激素的吸附,且硝化過程可促進(jìn)雌激素的降解[10]。二沉池工藝未能明顯去除4種雌激素,加氯消毒過程使60.30%的E2得到去除,而其他雌激素的去除效果并不明顯。因此,在污水處理廠中,生物降解和污泥吸附對雌激素的去除起著至關(guān)重要的作用,而物理處理作用的效果并不顯著。

    在生物處理過程中,E1的去除率低于其他類固醇雌激素。這可能是由于E2在微生物的降解過程中產(chǎn)生了E1,影響了E1的去除效果[11]。另一方面,物質(zhì)的去除效果和其物化特性有一定的關(guān)系。例如,物質(zhì)的lgKow值決定了其與污泥的吸附能力,在2.5~4.0之間時(shí)表現(xiàn)出中度吸附能力;>4.0時(shí),表現(xiàn)出高吸附能力[13]。E1、E2、E3和EE2的lgKow范圍為2.81~4.15[12]。由此可知,固醇類雌激素易被好氧污泥吸附,因而在好氧池中的去除率較高。另一方面,E2在厭氧、缺氧和好氧條件下均可以被微生物降解,而EE2只有在好氧條件下才能得到有效去除[13],且由EE2的lgKow值(4.15)可知其去除機(jī)制主要為污泥吸附[11],故EE2的去除率要低于E2。盡管典型固醇類雌激素能夠得到一定的去除,但由于水環(huán)境中存在一些類雌激素物質(zhì)(如雙酚A),影響上述4種固醇類物質(zhì)的綜合生物效應(yīng),因此,有必要進(jìn)行生物毒性檢測以進(jìn)一步明確污水的毒性效應(yīng)。

    2.2 雌激素活性分析

    圖4顯示了重組酵母菌法檢測中各取樣點(diǎn)污水β-半乳糖苷酶活性變化,以及以E2為當(dāng)量表示的雌激素活性。

    圖4 各采樣點(diǎn)β-半乳糖苷酶活性和雌激素活性Fig.4 Activity of β-galactosidase and its estrogenic effects in wastewater sampled at each sampling point

    由圖4可知,當(dāng)水樣濃縮倍數(shù)為1 000時(shí),曝氣沉砂池出水β-半乳糖苷酶活性高于格柵出水,這是由于在曝氣沉砂池污水中顆粒物表面附著的雌激素物質(zhì)被剝離而溶于水所致。進(jìn)水的雌激素活性EEQ為7.09 ng·L-1,經(jīng)曝氣沉砂池和初沉池預(yù)處理后污水的EEQ分別為6.14和5.72 ng·L-1,以上樣品的雌激素活性并沒有顯著性差異(F=0.843,P=0.511 2)。經(jīng)A2/O生物處理之后,污水的EEQ為1.89 ng·L-1,經(jīng)二沉池和加氯消毒之后最終出水的EEQ分別為1.97和1.92 ng·L-1。這與前人研究結(jié)果(0.031.6 ng·L-1)[14-15]具有一致性。二級處理之后的水樣EEQ與進(jìn)水相比具有顯著性差異(F=35.06,P=0.002 5)。

    由圖4可知,曝氣沉砂池和初沉池對雌激素活性的去除率分別為13.41%和33.44%,雌激素活性未見顯著降低,好氧池中EEQ去除率為73.33%。由于氨氧化菌控制著雌激素的硝化過程[16],例如E1和E2硝化產(chǎn)物的雌激素活性相對較低[17]。好氧池中氨氮去除率達(dá)94%,這有可能導(dǎo)致雌激素活性的去除。此外,對好氧池污泥EEQ的測定結(jié)果顯示,其EEQ為1.9 ng·g-1,這說明污泥吸附對雌激素活性具有一定的去除作用??傮w而言,隨著雌激素的降解或者吸附,雌激素活性明顯降低。然而經(jīng)過二沉池之后,出水EEQ有微弱上升,這可能是由于沉降過程中污泥上含有的雌激素活性物質(zhì)重新溶解所致[11]。與之類似,經(jīng)過加氯消毒之后,污水廠出水EEQ并沒有降低。該結(jié)論和ZENG等[18]的研究結(jié)果具有一致性,即加氯消毒對二級出水雌激素活性沒有持續(xù)的去除作用。在消毒過程中產(chǎn)生的中間產(chǎn)物含有雌激素活性,從而導(dǎo)致出水EEQ較穩(wěn)定。例如E1、E2和EE2的消毒副產(chǎn)物具有相當(dāng)?shù)拇萍に鼗钚訹19]。當(dāng)水環(huán)境的EEQ大于1 ng·L-1時(shí),會對水生生物產(chǎn)生一定的危害[20]。因此,盡管雌激素去除率較高(>90%),但是污水廠出水仍會對受納水體的水生生物產(chǎn)生潛在危害。

    2.3 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)

    以E2濃度對數(shù)lgC和吸光率對數(shù)lg (B/B0)作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,所得結(jié)果如圖5所示,該方法對E2的檢測限為10.6 pg·mL-1。由圖6可見,用酶聯(lián)免疫法檢測到進(jìn)水E2質(zhì)量濃度為82.82 ng·L-1,與MANICKUM等[21]報(bào)道的E2質(zhì)量濃度(119 ng·L-1)相近。經(jīng)過曝氣沉砂池和初沉池之后,E2質(zhì)量濃度分別降低為76.80和69.65 ng·L-1。經(jīng)過厭氧/缺氧/好氧處理之后,E2質(zhì)量濃度降低為9.26 ng·L-1。經(jīng)三級處理二沉池和加氯消毒之后,最終出水E2質(zhì)量濃度為10.14 ng·L-1,與好氧池出水相比,雌激素活性的降低并不顯著 (F=4.61,P=0.121 7),這與用重組酵母菌法檢測雌激素活性的結(jié)果具有一致性。E2經(jīng)過曝氣沉砂池和初沉池后沒有得到明顯去除(去除率低于14%),而經(jīng)過厭氧/缺氧/好氧階段之后,E2的去除率約為88.83%,該值與用重組酵母菌法檢測雌激素活性的去除率相當(dāng)。此外,酶聯(lián)免疫法檢測到污泥中E2質(zhì)量濃度為12.2 ng·g-1,這進(jìn)一步說明污泥對雌激素具有一定的吸附作用。經(jīng)過二沉池和加氯消毒之后,污水廠出水E2濃度并沒有降低。

    C—E2質(zhì)量濃度;B/B0—吸光率。圖5 ELISA檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.5 Standard curve of ELISA test

    試驗(yàn)初期利用酶聯(lián)免疫法得出的E2濃度比用化學(xué)分析得到的E2濃度低,但是兩者之間差距隨著處理工藝流程的進(jìn)行而減小,利用酶聯(lián)免疫法檢測得到最終出水中E2質(zhì)量濃度為10.01 ng·L-1,高于化學(xué)分析出水中E2濃度。CAMILLE等[22]研究也得出利用酶聯(lián)免疫法檢測的水體目標(biāo)物濃度水平比化學(xué)檢測值高。環(huán)境水樣品中存在著和E2結(jié)構(gòu)非常相似的其他雌激素(如E1和EE2)。這些物質(zhì)可以與微孔板上包被的E2抗體發(fā)生交叉反應(yīng),使得酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果偏高[23]。另外,酶聯(lián)免疫法檢測所得E2值與重組酵母菌法所得EEQ相比,其值偏高1個數(shù)量級,但兩者的趨勢具有一致性。環(huán)境水樣中的各種化學(xué)物質(zhì)可能存在拮抗作用[19],一些具有抗雌激素作用的物質(zhì)會使重組酵母菌法檢測值降低。酶聯(lián)免疫法與傳統(tǒng)的化學(xué)分析及重組酵母菌法相比具有一定的優(yōu)勢,例如操作簡單、節(jié)約時(shí)間和成本以及樣品量少等。總之,酶聯(lián)免疫法可成為化學(xué)檢測和重組酵母菌檢測的一個重要補(bǔ)充,為及時(shí)采取污染控制措施提供技術(shù)保證。

    圖6 水樣中E2濃度和去除率Fig.6 Concentration of E2 in the wastewater and its removal rate

    3 結(jié)論

    (1)曝氣沉砂池和初沉池對4種固醇類雌激素具有微弱的去除作用,而A2/O生物處理對雌激素的去除具有明顯效果,去除率高達(dá)90%,對目標(biāo)雌激素的去除效果由高到低依次為E2、E3、EE2和E1。

    (2)采用重組酵母菌法研究污水處理廠中雌激素的活性水平發(fā)現(xiàn),二級生物處理能很好地降低污水廠雌激素活性,去除率高達(dá)73.33%。盡管雌激素濃度得到了一定程度的去除,但出水仍具有一定的雌激素生物效應(yīng)。

    (3)酶聯(lián)免疫法分析發(fā)現(xiàn),A2/O對E2的去除率為88.23%,與化學(xué)分析和重組酵母菌法檢測結(jié)果一致。

    (4)酶聯(lián)免疫法具有操作簡單、節(jié)約時(shí)間和成本等優(yōu)點(diǎn),可應(yīng)用于城市污水雌激素快速篩選和診斷。

    [1] 譚麗超,葛峰,單正軍,等.超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定污水處理廠水樣中的雌激素[J].生態(tài)與農(nóng)村環(huán)境學(xué)報(bào),2011,27(5):86-92.[TAN Li-chao,GE Feng,SHAN Zheng-jun,etal.Determination of Estrogens in Water Samples From Wastewater Treatment Plant Using Ultra-Performance Liquid Chromatography-Electrospray Tandem Mass Spectrometry Method[J].Journal of Ecology and Rural Environment,2011,27(5):86-92.]

    [2] AERNI H R,KOBLER B,RUTISHAUSER B V,etal.Combined Biological and Chemical Assessment of Estrogenic Activities in Wastewater Treatment Plant Effluents[J].Analytical and Bioanalytical Chemistry,2004,378 (3):688-696.

    [3] WANG L,YING G G,ZHAO J L,etal.Assessing Estrogenic Activity in Surface Water and Sediment of the Liao River System in Northeast China Using Combined Chemical and Biological Tools[J].Environmental Pollution,2010,159 (1):148-156.

    [4] BOLONG N,ISMAIL A F,SALIM M R.A Review of the Effects of Emerging Contaminants in Wastewater and Options for Their Removal[J].Desalination,2009,239 (1/2/3):229-246.

    [6] MA M,LI J,WANG Z.Assessing the Detoxication Efficiencies of Wastewater Treatment Processes Using a Battery of Bioassays/ Biomarkers[J].Archives of Environment Contamination and Toxicology,2005,49(4):480-487.

    [7] GUEDES-ALONSO R,SANTANA-VIERA S,SOSA-FERRERA Z,etal.Molecularly Imprinted Solid-Phase Extraction Coupled With Ultra High Performance Liquid Chromatography and Fluorescence Detection for the Determination of Estrogens and Their Metabolites in Wastewater[J].Journal of Separation Science,2015,38(22):3961-3968.

    [8] DESBROW C,RUTLEDGE E J,BRIGHTY G C,etal.Identification of Estrogenic Chemicals in STW Effluent:1. Chemical Fractionation and in Vitro Biological Screening[J].Environmental Science Technology,1998,32 (11):1549-1558.

    [9] ROGERS H R.Sources,Behaviour and Fate of Organic Contaminants During Sewage Treatment and Sewage Sludges[J].Science of the Total Environment,1996,185(1/2/3):3-26.

    [10]FORREZ I,CARBALLA M,NOPPE H,etal.Influence of Manganese and Ammonium Oxidation on the Removal of 17α-Ethinylestradiol (EE2)[J].Water Research,2009,43(1):77-86.

    [11]張照韓,馮玉杰,蘇惠,等.AO與AAO工藝去除雌激素效能對比及分析[J].環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào) 2011,31(1):26-32.[ZHANG Zhao-han,FENG Yu-jie,SU Hui,etal.Comparison and Analysis of Estrogen Removal Efficiency in AO and AAO Processes[J].Acta Scientiae Circumstantiae,2011,31(1):26-32.]

    [12]LAI K M,JOHNSON K L,SCRIMSHAW M D,etal.Binding of Waterborne Steroid Estrogens to Solid Phases in River and Estuarine Systems[J].Environment Science & Technology,2000,34(18):3890-3894.

    [13]VADER J S,VAN GINKEL C G,SPERLING F M G M,etal.Degradation of Ethinyl Estradiol by Nitrifying Activated Sludge[J].Chemosphere,2000,41(8):1239-1243.

    [14]MA M,RAO K F,WANG Z J.Occurrence of Estrogenic Effects in Sewage and Industrial Wastewaters in Beijing,China[J].Environmental Pollution,2007,147(2):331-336.

    [15]GAULKE L S,STRAND S E,KALHORN T F,etal.17α-Ethinylestradiol Transformation via Abiotic Nitration in the Presence of Ammonia Oxidizing Bacteria[J].Environmental Science & Technology,2008,42(20):7622-7627.

    [16]ZHU B T,HAN G Z,SHIM J Y,etal.Quantitative Structure-Activity Relationship of Various Endogenous Estrogen Metabolites for Human Estrogen Receptor Alpha and Beta Subtypes:Insights Into the Structural Determinants Favoring a Differential Subtype Binding[J].Endocrinology,2006,147(9):4132-4150.

    [17]MORIYAMA K,MATSUFUJI H,CHINO M,etal.Identification and Behavior of Reaction Products Formed by Chlorination of Ethynylestradiol[J].Chemosphere,2004,55(6):839-847.

    [18]ZENG S Y,HUANG Y Q,SUN F,etal.Probabilistic Ecological Risk Assessment of Effluent Toxicity of a Wastewater Reclamation Plant Based on Process Modeling[J].Water Research,2016,100:367-376.

    [19]VETHAAK A D,LAHR J,SCHRAP S M,etal.An Integrated Assessment of Estrogenic Contamination and Biological Effects in the Aquatic Environment of the Netherlands[J].Chemosphere,2005,59(4):511-524.

    [21]MANICKUM T,JOHN W.Occurrence,Fate and Environmental Risk Assessment of Endocrine Disrupting Compounds at the Wastewater Treatment Works in Pietermaritzburg (South Africa)[J].Science of the Total Environment,2014,468/469:584-597.

    [22]CAMILLE P,EMMANUELLE V.Utilisation of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for Determination of Alkylphenols in Various Environmental Matrices:Comparison With LC-MS/MS Method[J].Talanta,2011,85(5):2492-2497.

    [23]張明輝,吳曼莉,楊瑞,等.利用酶聯(lián)免疫測定水中雌二醇[J].分析試驗(yàn)室,2014,34(1):27-30.[ZHANG Ming-hui,WU Man-li,YANG Rui,etal.Study on Determination of Estradiol in Water Using Enzyme-Linked Immunoassay[J].Chinese Journal of Analysis Laboratory,2014,34(1):27-30.]

    (責(zé)任編輯:許 素)

    Activity of Estrogen and Contents of Typical Estrogenic Compounds in A2/O Treated Wastewater.

    YOUMeng,ZHANGQiu-ya,WANGXiao-chang,MAXiao-yan

    (School of Environmental and Municipal Engineering, Xi′an University of Architecture and Technology/ International Science & Technology Cooperation Center for Urban Alternative Water Resources Development/ Key Laboratory of Northwest Water Resource, Environment and Ecology, Ministry of Education/ Engineering Technology Research Center for Wastewater Treatment and Reuse, Shaanxi Province/ Key Laboratory of Environmental Engineering, Shaanxi Province, Xi′an 710055, China)

    As endocrine disrupting chemicals in the water environment is low in concentration, difficult to remove and highly hazardous, it is essential to get a full grasp of how estrogen in wastewater varies with the process of treatment in activity and concentration. To that end, samples of wastewater were collected from an urban wastewater treatment installation for analysis of concentrations and activities of 4 kinds of steroid estrogens, using the high performance liquid chromatography-UV detector-fluorescence detector (HPLC-UV-FLD) and the yeast estrogen screen (YES) method, separately. Moreover, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was performed to determine concentrations of E2 in the wastewater under treatment. Results show that among the four kinds of estrogens detected in the effluent, E1 was the highest in concentration, reaching 87.97 ng·L-1and E2, the lowest being 5.50 ng·L-1, which indicates that the steroid estrogen removal rate varied in the range of 88.83%-95.69%. The A2/O system was found to be able to lower activity of the estrogens by 73.33%. However, the estrogens in the effluent were still quite active with EEQ being 1.92 ng·L-1. ELISA reveals that the concentration of E2 in the effluent varied in the range of 10.01-82.82 ng·L-1, which indicates that the removal rate of E2 was 88.23%. Obviously ELISA and YES are quite consistent in determination. Therefore, it could be concluded that ELISA could be a workable supplement to in vitro assays of estrogens.

    A2/O process; estrogens; estrogenicity; ELISA; removal rate

    2016-07-28

    城區(qū)水污染控制和水環(huán)境功能提升技術(shù)研究項(xiàng)目(2014ZX07305-002-01);國家自然科學(xué)基金(51508449);中國博士后科學(xué)基金面上項(xiàng)目(2015M572531)

    ① 通信作者E-mail:maxiaoyan@xauat.edu.cn

    X592

    A

    1673-4831(2017)06-0571-06

    10.11934/j.issn.1673-4831.2017.06.012

    游猛(1991—),男,湖北黃石人,碩士生,主要研究方向?yàn)槲鬯霸偕锒拘缘念A(yù)測與評價(jià)。E-mail: 1150755126@qq.com

    猜你喜歡
    固醇砂池酵母菌
    為什么酵母菌既能做面包也能釀酒?
    基于沉砂隔板的可循環(huán)使用鐵質(zhì)沉砂池制作方法
    散裝水泥(2020年6期)2020-12-19 07:34:10
    折回式平流沉砂池技術(shù)探討
    發(fā)展(2020年5期)2020-07-13 03:54:51
    基于色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)定量分析氧固醇的研究進(jìn)展
    植物固醇的合成運(yùn)輸及應(yīng)用研究
    植物固醇血癥與早發(fā)冠心病關(guān)系的研究進(jìn)展
    植物固醇的研究現(xiàn)狀
    讓面包變“胖”的酵母菌
    沉砂池設(shè)計(jì)中常見問題分析
    陜西水利(2015年5期)2015-04-06 03:08:32
    蜂蜜中耐高滲透壓酵母菌的分離與鑒定
    国产高清不卡午夜福利| 一夜夜www| 简卡轻食公司| 真人做人爱边吃奶动态| 国产精品一区二区性色av| 美女大奶头视频| АⅤ资源中文在线天堂| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲天堂国产精品一区在线| 在线天堂最新版资源| 国产一区二区在线观看日韩| 99国产精品一区二区蜜桃av| 直男gayav资源| 成人国产综合亚洲| 国产主播在线观看一区二区| 97热精品久久久久久| 国产单亲对白刺激| 国产精品国产高清国产av| 精品久久久久久,| 中文字幕熟女人妻在线| 免费看av在线观看网站| 老司机深夜福利视频在线观看| 日韩精品青青久久久久久| 床上黄色一级片| 亚洲av免费高清在线观看| 观看免费一级毛片| 欧美区成人在线视频| 麻豆成人av在线观看| 日日啪夜夜撸| 色吧在线观看| 99久久无色码亚洲精品果冻| 黄色丝袜av网址大全| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| videossex国产| 九九爱精品视频在线观看| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲自拍偷在线| 国产精品女同一区二区软件 | 日本五十路高清| 亚洲国产欧美人成| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 亚洲乱码一区二区免费版| a级毛片a级免费在线| 麻豆成人午夜福利视频| 国产在线男女| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲无线在线观看| 国产亚洲欧美98| 免费av观看视频| 97碰自拍视频| 久久久精品欧美日韩精品| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 少妇的逼水好多| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产精品综合久久久久久久免费| 久久久精品欧美日韩精品| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 日韩在线高清观看一区二区三区 | 国产精品嫩草影院av在线观看 | 他把我摸到了高潮在线观看| 麻豆成人午夜福利视频| 久久久久免费精品人妻一区二区| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 成人毛片a级毛片在线播放| 国产欧美日韩精品亚洲av| 在线免费十八禁| 日韩一区二区视频免费看| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲无线在线观看| 精品日产1卡2卡| 欧美激情久久久久久爽电影| avwww免费| 欧美成人a在线观看| 国产久久久一区二区三区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 久久人人爽人人爽人人片va| 在线免费观看不下载黄p国产 | 欧美日韩乱码在线| 精品日产1卡2卡| 国语自产精品视频在线第100页| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 午夜福利在线观看吧| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 在线a可以看的网站| 久久久久久伊人网av| 男人的好看免费观看在线视频| 久久久久久久亚洲中文字幕| 男人舔奶头视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 三级毛片av免费| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 色播亚洲综合网| 亚洲图色成人| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产精品精品国产色婷婷| 欧美中文日本在线观看视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久久久久久午夜电影| xxxwww97欧美| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 一本精品99久久精品77| 中文字幕av成人在线电影| 我要看日韩黄色一级片| 内地一区二区视频在线| 一区二区三区高清视频在线| 国产精品精品国产色婷婷| 国产精品久久久久久久久免| 亚洲中文字幕日韩| 少妇的逼好多水| 国产中年淑女户外野战色| 91狼人影院| 午夜福利欧美成人| 精品一区二区三区视频在线| 国产免费男女视频| 在线免费观看的www视频| 国产真实乱freesex| 日韩在线高清观看一区二区三区 | 无人区码免费观看不卡| 少妇高潮的动态图| 色哟哟·www| 干丝袜人妻中文字幕| 黄色一级大片看看| 哪里可以看免费的av片| 99久国产av精品| 在线观看免费视频日本深夜| 丰满人妻一区二区三区视频av| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 欧美高清成人免费视频www| 欧美日本亚洲视频在线播放| 春色校园在线视频观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 一进一出好大好爽视频| 99在线视频只有这里精品首页| 人人妻人人看人人澡| 美女免费视频网站| 乱系列少妇在线播放| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲av美国av| 又爽又黄无遮挡网站| h日本视频在线播放| 美女大奶头视频| 国国产精品蜜臀av免费| 岛国在线免费视频观看| 在线观看午夜福利视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 联通29元200g的流量卡| 九九在线视频观看精品| 国产真实伦视频高清在线观看 | 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产精品99久久久久久久久| 22中文网久久字幕| 美女黄网站色视频| 男女视频在线观看网站免费| 国产亚洲欧美98| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产一级毛片七仙女欲春2| 精品一区二区免费观看| 中亚洲国语对白在线视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | 久久九九热精品免费| 成人一区二区视频在线观看| 国产 一区精品| videossex国产| 看片在线看免费视频| 成人三级黄色视频| 午夜老司机福利剧场| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲欧美日韩无卡精品| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲专区国产一区二区| 欧美性感艳星| 精品一区二区三区av网在线观看| 午夜福利欧美成人| x7x7x7水蜜桃| 成年女人看的毛片在线观看| а√天堂www在线а√下载| 国产精品一区二区免费欧美| 精华霜和精华液先用哪个| a在线观看视频网站| 国产伦精品一区二区三区四那| 美女大奶头视频| 禁无遮挡网站| 亚洲色图av天堂| 天堂√8在线中文| 国产精品伦人一区二区| 日本免费一区二区三区高清不卡| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 麻豆一二三区av精品| 一区福利在线观看| 免费在线观看成人毛片| 日韩中文字幕欧美一区二区| 男女之事视频高清在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 午夜福利欧美成人| 两人在一起打扑克的视频| 国产视频一区二区在线看| 久久久精品欧美日韩精品| 黄色丝袜av网址大全| 午夜福利在线在线| 禁无遮挡网站| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 精品久久国产蜜桃| 男女那种视频在线观看| 国产精品无大码| 免费观看的影片在线观看| 欧美日韩国产亚洲二区| 精品久久国产蜜桃| 99热这里只有是精品50| 草草在线视频免费看| 少妇人妻精品综合一区二区 | 天堂影院成人在线观看| 美女大奶头视频| 久9热在线精品视频| 国产毛片a区久久久久| 色哟哟·www| 国产久久久一区二区三区| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久午夜亚洲精品久久| 免费av不卡在线播放| 日韩强制内射视频| 国产高清三级在线| 最新中文字幕久久久久| 亚洲成人久久爱视频| 看十八女毛片水多多多| 精品免费久久久久久久清纯| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 极品教师在线免费播放| 联通29元200g的流量卡| 丰满人妻一区二区三区视频av| 干丝袜人妻中文字幕| 免费在线观看影片大全网站| 午夜老司机福利剧场| 国产精品亚洲美女久久久| 深夜精品福利| 国产av一区在线观看免费| av天堂在线播放| 国产亚洲av嫩草精品影院| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲av成人精品一区久久| 精华霜和精华液先用哪个| 精品人妻熟女av久视频| 小说图片视频综合网站| 男女视频在线观看网站免费| 欧美精品啪啪一区二区三区| 免费看美女性在线毛片视频| 18+在线观看网站| 免费电影在线观看免费观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲av熟女| 赤兔流量卡办理| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲不卡免费看| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产亚洲精品久久久com| 天天一区二区日本电影三级| 听说在线观看完整版免费高清| 九色国产91popny在线| 黄片wwwwww| aaaaa片日本免费| 欧美三级亚洲精品| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲av二区三区四区| 极品教师在线免费播放| 18+在线观看网站| 国产精品人妻久久久影院| 校园春色视频在线观看| 欧美日韩精品成人综合77777| 在线免费观看不下载黄p国产 | 国产亚洲欧美98| 日韩欧美 国产精品| 亚洲五月天丁香| 国产探花极品一区二区| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产欧美日韩精品一区二区| 我的女老师完整版在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 美女免费视频网站| 成人二区视频| 色在线成人网| 在线看三级毛片| 日本黄大片高清| 精品久久久久久久末码| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 丰满乱子伦码专区| 国产av麻豆久久久久久久| 高清日韩中文字幕在线| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 欧美精品国产亚洲| 久久久精品大字幕| 88av欧美| 亚洲av成人精品一区久久| 黄色女人牲交| 高清在线国产一区| 热99在线观看视频| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 韩国av在线不卡| ponron亚洲| 国产精华一区二区三区| 全区人妻精品视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| av福利片在线观看| 最近最新免费中文字幕在线| 波野结衣二区三区在线| 欧美成人a在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 久久久久久久午夜电影| 国产探花在线观看一区二区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲avbb在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 99热这里只有精品一区| 婷婷六月久久综合丁香| 黄色丝袜av网址大全| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 成人鲁丝片一二三区免费| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 成人性生交大片免费视频hd| 国产乱人视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 大型黄色视频在线免费观看| 国产麻豆成人av免费视频| 悠悠久久av| 日本欧美国产在线视频| 悠悠久久av| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲中文字幕日韩| 一本一本综合久久| 一区二区三区高清视频在线| 一进一出抽搐动态| 此物有八面人人有两片| 国产日本99.免费观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲 国产 在线| 能在线免费观看的黄片| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久6这里有精品| 麻豆一二三区av精品| 成年女人看的毛片在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产精品1区2区在线观看.| 91麻豆精品激情在线观看国产| 精品人妻熟女av久视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 免费观看人在逋| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| ponron亚洲| 日本 欧美在线| 在线播放无遮挡| 我的女老师完整版在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 色综合色国产| 1000部很黄的大片| 日韩一本色道免费dvd| av在线观看视频网站免费| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 日日啪夜夜撸| 黄色视频,在线免费观看| 久99久视频精品免费| 亚洲av一区综合| 偷拍熟女少妇极品色| 久久6这里有精品| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产精品一区二区免费欧美| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产伦一二天堂av在线观看| 波野结衣二区三区在线| 香蕉av资源在线| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲图色成人| 色5月婷婷丁香| 大型黄色视频在线免费观看| 国产精品av视频在线免费观看| 在线观看一区二区三区| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 99久久九九国产精品国产免费| 精品人妻1区二区| www.色视频.com| 亚洲性夜色夜夜综合| 九色成人免费人妻av| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 真人一进一出gif抽搐免费| 国产单亲对白刺激| a级一级毛片免费在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 久久国产精品人妻蜜桃| 五月玫瑰六月丁香| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 赤兔流量卡办理| 亚洲无线在线观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 乱人视频在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 99久久九九国产精品国产免费| 啪啪无遮挡十八禁网站| 变态另类成人亚洲欧美熟女| a在线观看视频网站| 在线天堂最新版资源| 高清毛片免费观看视频网站| 中文字幕久久专区| 天天一区二区日本电影三级| 亚洲成人免费电影在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产精华一区二区三区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲国产高清在线一区二区三| av中文乱码字幕在线| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 欧美性感艳星| 欧美丝袜亚洲另类 | 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 日本在线视频免费播放| 国产精品,欧美在线| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 天堂动漫精品| 波多野结衣巨乳人妻| av在线天堂中文字幕| 特级一级黄色大片| 欧美在线一区亚洲| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 日韩亚洲欧美综合| 久久久久久九九精品二区国产| 变态另类丝袜制服| 久久久久九九精品影院| 最新在线观看一区二区三区| 欧美激情在线99| 亚洲va在线va天堂va国产| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 亚洲七黄色美女视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 欧美zozozo另类| 黄色一级大片看看| 久久久久国内视频| 1000部很黄的大片| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产精品98久久久久久宅男小说| 久久亚洲精品不卡| 亚洲欧美清纯卡通| 中文字幕高清在线视频| 国产伦精品一区二区三区视频9| 在线观看午夜福利视频| 可以在线观看毛片的网站| av在线观看视频网站免费| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 夜夜爽天天搞| 色哟哟·www| 亚洲精华国产精华精| 内地一区二区视频在线| 亚洲成人中文字幕在线播放| 直男gayav资源| 久久久久久久久久黄片| 国产精品人妻久久久久久| 日本免费a在线| 欧美不卡视频在线免费观看| 男人的好看免费观看在线视频| 国产免费一级a男人的天堂| aaaaa片日本免费| 一级a爱片免费观看的视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 88av欧美| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 69人妻影院| 麻豆成人av在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲成人久久性| 亚洲欧美激情综合另类| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 女人被狂操c到高潮| 欧美激情国产日韩精品一区| 久久精品91蜜桃| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 成人无遮挡网站| 欧美+日韩+精品| 久久精品影院6| 99久久精品国产国产毛片| 99久久成人亚洲精品观看| 精品一区二区三区人妻视频| 欧美zozozo另类| 人人妻人人看人人澡| 欧美bdsm另类| 最近最新免费中文字幕在线| 校园春色视频在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 欧美zozozo另类| 成人精品一区二区免费| 久久99热这里只有精品18| 麻豆av噜噜一区二区三区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 欧美日韩乱码在线| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 悠悠久久av| 亚洲无线在线观看| 99热这里只有精品一区| 久久精品人妻少妇| 露出奶头的视频| 又爽又黄无遮挡网站| 俺也久久电影网| 又爽又黄a免费视频| 欧美区成人在线视频| 18禁在线播放成人免费| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 又爽又黄无遮挡网站| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 神马国产精品三级电影在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看 | 亚洲专区中文字幕在线| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲图色成人| 一进一出抽搐gif免费好疼| 超碰av人人做人人爽久久| 91精品国产九色| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 亚洲三级黄色毛片| 国产高清有码在线观看视频| 999久久久精品免费观看国产| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲美女视频黄频| 国产激情偷乱视频一区二区| 男女视频在线观看网站免费| 日韩欧美 国产精品| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 又黄又爽又免费观看的视频| 麻豆国产av国片精品| 美女免费视频网站| 午夜精品一区二区三区免费看| 欧美日韩乱码在线| 12—13女人毛片做爰片一| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 成人国产一区最新在线观看| 免费在线观看成人毛片| 久久欧美精品欧美久久欧美| 一本一本综合久久| 欧美不卡视频在线免费观看| 日本 欧美在线| 全区人妻精品视频| 国产亚洲精品久久久com| 日本-黄色视频高清免费观看| 日韩亚洲欧美综合| 男女啪啪激烈高潮av片| 热99re8久久精品国产| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲国产精品成人综合色| 网址你懂的国产日韩在线| 一边摸一边抽搐一进一小说| 日本黄色视频三级网站网址| 国内精品宾馆在线| 日本黄色视频三级网站网址| 一本久久中文字幕| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 欧美zozozo另类| 99视频精品全部免费 在线| 久久久国产成人免费| 亚洲成人久久性| 精品无人区乱码1区二区| 国产三级在线视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 久久久成人免费电影| 成人综合一区亚洲| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲性久久影院| av视频在线观看入口| 日本-黄色视频高清免费观看| 人妻久久中文字幕网| 国产一区二区激情短视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| x7x7x7水蜜桃| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 国产精品久久久久久精品电影| 中文资源天堂在线| 精品一区二区三区视频在线| 久久久成人免费电影| 特级一级黄色大片| 一进一出抽搐动态| 他把我摸到了高潮在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 亚洲精华国产精华精| 无遮挡黄片免费观看| 免费在线观看日本一区| 嫩草影院入口| 精品人妻视频免费看| 欧美高清性xxxxhd video| 少妇的逼好多水| 亚洲性久久影院| 天天躁日日操中文字幕| 欧美区成人在线视频| 日本欧美国产在线视频| 成人av一区二区三区在线看|