溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹主要免疫指標(biāo)的影響

洪宇航

（西昌學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，四川 西昌 615000）

溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹主要免疫指標(biāo)的影響

洪宇航

（西昌學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，四川 西昌 615000）

為揭示溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹免疫功能的影響，測(cè)定了在不同濃度溴氰菊酯（0、0.19、0.30、0.41、0.52 μg/L）條件下中華絨螯蟹總血細(xì)胞數(shù)量（THC）、吞噬活性、酚氧化酶（PO）活性、酸性磷酸酶（ACP）活性和堿性磷酸酶（AKP）活性5項(xiàng)主要免疫指標(biāo)的變化情況。結(jié)果表明，溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹免疫有顯著影響，低濃度處理（0.19、0.30 μg/L）引起THC 藥后6 h和12 h出現(xiàn)極顯著上升，隨后逐漸恢復(fù)；而高濃度處理（0.41、0.52 μg/L）則在藥后24 h后持續(xù)下降，藥后96 h極顯著低于對(duì)照。各濃度處理均對(duì)血細(xì)胞吞噬活性有抑制效應(yīng)，且隨著濃度升高抑制效果越強(qiáng)。0.52 μg/L處理PO活性藥后6 h出現(xiàn)極顯著上升，隨后逐漸下降，藥后96 h處理間無(wú)顯著差異；而ACP活性、AKP活性藥后6 h出現(xiàn)明顯下降，各時(shí)間段均極顯著低于對(duì)照。

溴氰菊酯；中華絨螯蟹；免疫功能；毒性作用

溴氰菊酯屬擬除蟲(chóng)菊酯類殺蟲(chóng)劑，是農(nóng)藥敵殺死的有效成分，由于其廣譜、高效、低毒和低殘留等特點(diǎn)，在世界范圍內(nèi)被廣泛使用［1］。隨著工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展，溴氰菊酯的使用量不斷增加，其主要通過(guò)農(nóng)田排水、地表徑流等途徑進(jìn)入水體，對(duì)水生生物產(chǎn)生危害。溴氰菊酯對(duì)哺乳動(dòng)物屬于中等毒性，但對(duì)魚(yú)類和甲殼動(dòng)物毒性很強(qiáng)［2］。目前，關(guān)于溴氰菊酯對(duì)水生生物的毒性研究已有很多，但主要集中對(duì)魚(yú)類、貝類和小型甲殼動(dòng)物［3-8］的毒性研究，而對(duì)于蝦蟹類則少見(jiàn)報(bào)道。

中華絨螯蟹（Erochier sinensis）又稱河蟹、大閘蟹，是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)水產(chǎn)品種。隨著市場(chǎng)需求量的增加及養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，其質(zhì)量安全問(wèn)題越來(lái)越受到人們的關(guān)注。由于溴氰菊酯的廣泛使用，存在對(duì)中華絨螯蟹養(yǎng)殖水體污染的潛在危害。關(guān)于溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹的毒性研究，目前僅見(jiàn)國(guó)內(nèi)有一例報(bào)道［9］。但其主要研究了溴氰菊酯對(duì)不同生長(zhǎng)階段中華絨螯蟹的急性毒性作用，而對(duì)其生理及免疫機(jī)能的影響并未關(guān)注。

因此，本試驗(yàn)通過(guò)設(shè)置不同濃度梯度溴氰菊酯水體，研究其對(duì)中華絨螯蟹主要免疫指標(biāo)，包括總血細(xì)胞數(shù)量（THC），血細(xì)胞吞噬活性，酚氧化酶（PO）、酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）活性的影響，初步探究了溴氰菊酯脅迫下中華絨螯蟹的免疫應(yīng)答情況，為后續(xù)免疫機(jī)理的研究以及生產(chǎn)中溴氰菊酯的規(guī)范使用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)于2016年10月在西昌學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院循環(huán)水養(yǎng)殖間進(jìn)行，中華絨螯蟹成蟹采自江蘇省常州市金壇區(qū)水產(chǎn)技術(shù)推廣站養(yǎng)殖場(chǎng)。試驗(yàn)前循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中暫養(yǎng)1周以上。挑選健康無(wú)病、大小均一的中華絨螯蟹雌雄各半用于試驗(yàn)，平均體重113（±12.8）g。將中華絨螯蟹放入125 cm×60 cm×60 cm水族箱中，每個(gè)水族箱加入經(jīng)充分曝氣的自來(lái)水50 L，并在箱底放置經(jīng)消毒處理的PVC管作為遮蔽物。

溴氰菊酯乳劑購(gòu)自德國(guó)拜耳作物科學(xué)有限公司，溴氰菊酯有效含量為25 g/L，溶劑丙酮（分析純）購(gòu)自成都科龍化工試劑廠。將溴氰菊酯乳劑加入丙酮配制成25 μg/L儲(chǔ)備液待用。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

參考溴氰菊酯在中華絨螯蟹成蟹毒性試驗(yàn)中的安全濃度和96 h半致死濃度，以及生產(chǎn)中溴氰菊酯在養(yǎng)殖水體中的殘留濃度。試驗(yàn)設(shè)溴氰菊酯0.19、0.30、0.41、0.52 μg/L 4個(gè)濃度處理，另設(shè)空白對(duì)照及只添加丙酮的溶劑對(duì)照。每個(gè)處理3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只中華絨螯蟹，置于水族箱中。試驗(yàn)采用96 h半靜水法，每24 h換水1次，提前配制相同濃度溴氰菊酯溶液以保證試驗(yàn)濃度不變。光暗周期比12∶12，試驗(yàn)期間每天上午8：00和下午19：00投喂人工配合飼料，并于投餌后3 h清除殘餌和糞便。試驗(yàn)期間每24 h測(cè)定水溫和水質(zhì)指標(biāo)，保證水溫為20（±2）℃，pH為 7.2～7.8，溶氧＞5 mg/L，氨氮＜0.5 mg/L，亞硝酸鹽＜0.15 mg/L。分別于藥后6、12、24、48、96 h觀察河蟹存活情況，每個(gè)水族箱任意選取3只取血淋巴用于免疫指標(biāo)的檢測(cè)。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1 THC檢測(cè) 于中華絨螯蟹第五步足基膜處抽取血淋巴100 μL，1∶1加入抗凝劑（0.1 mol/L葡萄糖，0.14 mol/L氯化鈉，30 mmol/L檸檬酸，10 mmol/L EDTA，pH4.6）混勻，立即用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)，每個(gè)樣品計(jì)數(shù)重復(fù)3次取平均值。

1.3.2 吞噬活性 吞噬活性檢測(cè)參照Xian 等［10］的方法進(jìn)行改良?？鼓?000 r/min 離心5 min，去上清，加入生理鹽水（NaCl 496 mmol/L，KCl 10 mmol/L，CaCl216 mmol/L，NaHCO36 mmol/L，MgSO4·6H2O 12 mmol/L，MgCl2·6H2O 8 mmol/L，HEPES 20 mmol/L）后緩慢吹打使細(xì)胞重懸浮，血細(xì)胞計(jì)數(shù)調(diào)整細(xì)胞密度至1×106個(gè)/mL。細(xì)胞懸液每1mL加入稀釋后的熒光乳膠微球（粒徑1 μm，激發(fā)波長(zhǎng)470 nm，Sigma，美國(guó)）10 μL，混勻后接種至24孔細(xì)胞培養(yǎng)板（Corning，美國(guó)），黑暗條件下在恒溫培養(yǎng)箱中28℃孵育1 h。熒光倒置顯微鏡（Leica DM i8，德國(guó)）下鏡檢拍照，吞噬活性用吞噬熒光乳膠微球的血細(xì)胞占血細(xì)胞總數(shù)的比例來(lái)表示。

1.3.3 PO活性 抽取中華絨螯蟹血淋巴至2 mL 離心管，立即放入4℃冰箱4 h以上。11000 r/min 4℃高速冷凍離心30 min，小心收集上清液即為血清，4℃保存待用。PO活性測(cè)定參考Ashida［11］的方法，將50 μL 3 g/L L-dopa、50 μL血清以及50 μL PBS緩沖液（0.1 mol/L，pH 7.0）加入96孔板中，在室溫下混勻孵育20 min，Bio-Rad iMark 酶標(biāo)儀490 nm波長(zhǎng)下讀取起始和10 min時(shí)的光密度值（OD490），以10 min內(nèi)每分鐘光密度值增加0.001為1個(gè)酶活力單位計(jì)算。

1.3.4 ACP活性 制備血清，ACP活性測(cè)定方法遵照ACP活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)（南京建成生物科技有限公司），Bio-Rad iMark 酶標(biāo)儀520 nm波長(zhǎng)下測(cè)定96孔板各孔吸光度，以每100 mL血清在37℃與基質(zhì)作用30 min產(chǎn)生1 mg酚為1個(gè)金氏單位。

1.3.5 AKP 活性 制備血清，AKP活性測(cè)定方法遵照AKP活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)（南京建成生物科技有限公司），Bio-Rad iMark 酶標(biāo)儀520 nm波長(zhǎng)下測(cè)定96孔板各孔吸光度，以每100 mL血清在37℃與基質(zhì)作用15 min產(chǎn)生1 mg酚為1個(gè)金氏單位。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS V20.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用Levene法進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，不滿足齊性方差時(shí)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行反正弦或者平方根處理，采用ANOVA對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，LSD和Duncan 法進(jìn)行多重比較，在GraphPad Prism 5軟件上繪制相關(guān)圖表。

2 結(jié)果與分析

2.1 溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹THC的影響

中華絨螯蟹正常THC約為7.14（±0.32× 106）個(gè)/mL，各時(shí)間點(diǎn)空白對(duì)照與溶劑處理無(wú)顯著差異，表明溴氰菊酯溶劑對(duì)中華絨螯蟹血細(xì)胞數(shù)量并無(wú)影響。而0.19 μg/L和0.13 μg/L溴氰菊酯處理藥后6 h出現(xiàn)極顯著升高，藥后12 h達(dá)到頂峰，隨后逐漸下降，至藥后48 h與對(duì)照無(wú)顯著差異。0.41 μg/L和0.52 μg/L溴氰菊酯處理THC藥后6 h也略有上升，但隨后持續(xù)下降，藥后24 h極顯著低于對(duì)照，且隨著濃度增加，下降趨勢(shì)愈加明顯（圖1）。

2.2 溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹吞噬活性的影響

中華絨螯蟹血細(xì)胞分為大顆粒細(xì)胞、小顆粒細(xì)胞和透明細(xì)胞3類。本試驗(yàn)結(jié)果表明，3類細(xì)胞均具有吞噬功能，其中透明細(xì)胞吞噬能力最強(qiáng)，其次是大顆粒細(xì)胞，小顆粒細(xì)胞僅見(jiàn)少量吞噬。由圖2可見(jiàn)，空白對(duì)照和溶劑處理各時(shí)間點(diǎn)血細(xì)胞吞噬活性均無(wú)顯著差異，表明溶劑對(duì)其吞噬能力并無(wú)影響。各濃度處理較對(duì)照均呈下降趨勢(shì)，并隨著濃度升高降低越明顯。其中高濃度處理（0.41 μg/L和0.52 μg/L）藥后6 h即顯著低于對(duì)照。至藥后96 h，0.19 μg/L處理較藥后48 h有所回復(fù)，吞噬比例為11.34（± 1.33）%，但仍顯著低于對(duì)照。0.52 μg/L處理僅為6.36（±0.69）%，與對(duì)照差異極顯著。

圖1 不同濃度溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹THC的影響

圖2 不同濃度溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹吞噬活性的影響

2.3 溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹PO活性的影響

藥后對(duì)照與溶劑處理PO活性無(wú)顯著差異，表明溶劑對(duì)中華絨螯蟹血清PO活性并無(wú)影響。除最高濃度0.52 μg/L處理外，其余各濃度處理藥后與對(duì)照無(wú)顯著差異，但0.30、0.41 μg/L處理藥后6 h出現(xiàn)略微升高，隨后逐漸下降的現(xiàn)象。最高濃度0.52 μg/L處理藥后6 h極顯著高于其他濃度處理，藥后12 h升至最高，隨后逐漸下降，直至藥后96 h與對(duì)照無(wú)顯著差異（圖3）。

圖3 不同濃度溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹PO活性的影響

2.4 溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹ACP活性的影響

從圖4可以看出，對(duì)照與溶劑處理ACP活性藥后并無(wú)顯著差異。0.19 μg/L和0.30 μg/L處理藥后與對(duì)照也無(wú)顯著差異。0.41 μg/L處理出現(xiàn)略微持續(xù)下降，藥后96 h顯著低于對(duì)照。而0.52 μg/L處理藥后6 h就出現(xiàn)明顯下降，隨后均顯著低于對(duì)照。

圖4 不同濃度溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹ACP活性的影響

2.5 溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹AKP活性的影響

試驗(yàn)結(jié)果（圖5）表明，對(duì)照與溶劑處理ACP活性無(wú)顯著差異。除0.19 μg/L處理外，各濃度處理較對(duì)照明顯下降。但0.30 μg/L和0.41 μg/L處理藥后12 h逐漸恢復(fù)，至藥后96 h與對(duì)照無(wú)顯著差異。而0.52 μg/L處理則持續(xù)處于較低水平，藥后均極顯著低于對(duì)照。

圖5 不同濃度溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹AKP活性的影響

3 討論

溴氰菊酯作為高效低毒低殘留的農(nóng)藥，被廣泛應(yīng)用于防治各種農(nóng)作物的害蟲(chóng)。關(guān)于溴氰菊酯對(duì)水生生物的研究，目前國(guó)內(nèi)外有很多報(bào)道，但主要集中在魚(yú)類，而關(guān)于甲殼動(dòng)物的報(bào)道較少。魏華等［12］研究了溴氰菊酯對(duì)克氏原螯蝦的毒性效應(yīng)，藥后96 h LC50為0.0993 μg/L，安全濃度為5.62 ng/L，證實(shí)其對(duì)克氏原螯蝦毒性極強(qiáng)；龔瑞忠等［13］通過(guò)在野外稻田進(jìn)行溴氰菊酯對(duì)鯉魚(yú)和日本沼蝦的毒性試驗(yàn)表明，溴氰菊酯對(duì)日本沼蝦藥后3 h LC50為0.41 μg/L，大于對(duì)鯉魚(yú)的危害。姜輝等［14］通過(guò)對(duì)菊酯類農(nóng)藥對(duì)水田生物影響的總結(jié)，認(rèn)為大多數(shù)菊酯類農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類藥后96 h LC50要比蝦類高1～2個(gè)數(shù)量級(jí)。因此，生產(chǎn)中存在利用低濃度溴氰菊酯作為治療魚(yú)類寄生蟲(chóng)病，并用于殺滅魚(yú)塘中甲殼類的情況［15］。大量使用溴氰菊酯隨著農(nóng)田排水或雨水沖淋，對(duì)中華絨螯蟹以及其他經(jīng)濟(jì)甲殼類養(yǎng)殖水體產(chǎn)生較大安全影響。蔡道基等［16］通過(guò)稻田施用溴氰菊酯，并模擬下雨將農(nóng)田水排入魚(yú)塘，測(cè)定了池塘水體及底泥中溴氰菊酯的殘留，結(jié)果表明，溴氰菊酯排入池塘中4 h后濃度可達(dá)0.41 μg/L，隨后迅速降解，14 h后不再檢出。耿雪冰［9］研究表明，溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹成蟹和幼蟹藥后48 h LC50分別為0.65、0.42 μg/L，安全濃度分別為0.46、0.19 μg/L，屬于高毒農(nóng)藥。但是他并沒(méi)有研究溴氰菊酯對(duì)于中華絨螯蟹免疫功能的影響。因此，本研究參照溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹的急性毒性結(jié)果以及在水體中的殘留情況，設(shè)置5個(gè)濃度梯度，測(cè)定包括安全濃度以下不同濃度溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹主要免疫指標(biāo)的影響，為后續(xù)研究及溴氰菊酯的安全使用提供理論依據(jù)。

中華絨螯蟹作為甲殼類動(dòng)物，其先天性免疫主要依靠血淋巴完成。其中，血細(xì)胞在免疫應(yīng)答中發(fā)揮主要作用，常被用于衡量甲殼類動(dòng)物免疫水平指標(biāo)之一［17］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在溴氰菊酯暴露初期，各濃度處理THC均呈現(xiàn)一定上升，低濃度處理（0.19、0.30 μg/L）尤為明顯。而高濃度處理（0.41、0.52 μg/L）藥后12 h出現(xiàn)下降，至藥后96 h顯著低于對(duì)照。說(shuō)明在低濃度條件下，溴氰菊酯會(huì)激發(fā)中華絨螯蟹免疫應(yīng)答，增加血細(xì)胞數(shù)量。而較高濃度條件下則會(huì)對(duì)免疫機(jī)能產(chǎn)生抑制，表現(xiàn)為T(mén)HC降低并保持在較低水平。在Cu2+對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦毒性研究中［10］，低濃度Cu2+（0.05、0.5 mg/L）下斑節(jié)對(duì)蝦THC出現(xiàn)上升，而高濃度（1.5、3.5 mg/L）下則造成THC顯著下降，與本試驗(yàn)的結(jié)果相符。此外，Pimp?o等［18］研究顯示，在溴氰菊酯0.1 mg/kg 濃度下藥后4 h便可使多棘鈎鯰白細(xì)胞水平顯著上升，證實(shí)低濃度溴氰菊酯可以引起多棘鈎鯰的免疫應(yīng)答。此外，鄭惠東［19］通過(guò)溴氰菊酯對(duì)真鯛肝胰臟組織及細(xì)胞DNA損傷的研究指出，溴氰菊酯對(duì)真鯛肝胰臟組織和細(xì)胞DNA均可產(chǎn)生不同程度的損傷，且損傷程度與毒物濃度具有高度線性關(guān)系。因此，血細(xì)胞數(shù)量的大量下降可能跟其DNA嚴(yán)重?fù)p傷有關(guān)。這也間接證實(shí)本研究關(guān)于高濃度溴氰菊酯顯著降低中華絨螯蟹THC的結(jié)論。

血細(xì)胞被認(rèn)為是甲殼動(dòng)物的主要吞噬細(xì)胞，在異物入侵過(guò)程中起到至關(guān)重要的防御作用［20］。一般來(lái)說(shuō)，甲殼動(dòng)物細(xì)胞可以分為大顆粒細(xì)胞、小顆粒細(xì)胞和透明細(xì)胞3類。目前，多數(shù)研究表明透明細(xì)胞是甲殼動(dòng)物血細(xì)胞中的主要吞噬細(xì)胞［21］。例如在艾氏濱蟹血細(xì)胞功能的研究中，發(fā)現(xiàn)只有透明細(xì)胞對(duì)酵母菌有吞噬能力［22］。Johansson等［23］研究也表明，小龍蝦的透明細(xì)胞起到主要的吞噬功能。但在有關(guān)圣保羅對(duì)蝦和螳螂蝦的研究中表明，大顆粒細(xì)胞和小顆粒細(xì)胞分別是其主要的吞噬細(xì)胞［24-25］。本研究通過(guò)對(duì)血細(xì)胞接種熒光乳膠微粒證實(shí)中華絨螯蟹3類細(xì)胞均有一定吞噬能力，其中透明細(xì)胞是主要吞噬細(xì)胞。這同Lv 等［26］對(duì)中華絨螯蟹血細(xì)胞吞噬功能研究的結(jié)果相同。此外，溴氰菊酯各濃度處理均能引起中華絨螯蟹血細(xì)胞吞噬活性的降低，并呈現(xiàn)濃度-效應(yīng)關(guān)系，隨著濃度升高吞噬活性降低越明顯。至藥后48 h各濃度處理均顯著低于對(duì)照。Xian 等［10］研究指出，較高濃度Cu2+處理下斑節(jié)對(duì)蝦血細(xì)胞吞噬活性被嚴(yán)重抑制，這與本試驗(yàn)結(jié)果相似，表明即使低濃度溴氰菊酯（低于安全濃度）也可以顯著影響中華絨螯蟹血細(xì)胞吞噬活性，直至藥后96 h仍處于較低水平。吳楠等［27］研究發(fā)現(xiàn)即使在溴氰菊酯0.005 μg/L濃度下也會(huì)對(duì)克氏原螯蝦產(chǎn)生細(xì)胞毒性，細(xì)胞色素氧化酶活性被顯著抑制。因此，我們推測(cè)溴氰菊酯對(duì)甲殼類動(dòng)物較強(qiáng)的細(xì)胞毒性是造成血細(xì)胞數(shù)量下降從而引起其吞噬活性顯著降低的主要原因。

中華絨螯蟹體液中不具有免疫球蛋白，酚氧化酶（PO）作為其體液免疫主體之一是抵御外界不利環(huán)境的第一道防線，與機(jī)體的免疫有直接的關(guān)系［28］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，高濃度溴氰菊酯會(huì)引起中華絨螯蟹血淋巴PO活性藥后6 h即明顯上升，至藥后12 h達(dá)到最高隨后下降，藥后96 h基本恢復(fù)至正常水平。這與陸宏達(dá)等［29］報(bào)道的不同刺激造成中華絨螯蟹機(jī)體PO活性增強(qiáng)的結(jié)果相似。此外，Xian等［10］研究表明，0.5 mg/L Cu2+作用下斑節(jié)對(duì)蝦血淋巴PO活性會(huì)有所上升，藥后6 h明顯升高隨后降低。因此，我們推測(cè)溴氰菊酯藥后6 h即可激活中華絨螯蟹酚氧化酶系統(tǒng)，引起PO活性顯著上升。具體的激活時(shí)間點(diǎn)以及激活方式有待進(jìn)一步研究。

ACP、AKP是甲殼動(dòng)物體內(nèi)一組重要的水解酶，在甲殼動(dòng)物免疫應(yīng)答中起到重要作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明高濃度溴氰菊酯可以明顯降低中華絨螯蟹血淋巴ACP、AKP活性持續(xù)至藥后96 h。其中，AKP活性受影響更大，最低濃度0.19 μg/L處理也會(huì)引起顯著降低。這與Zhao 等［30］在組織胺對(duì)中華絨螯蟹免疫影響研究中，不同濃度組織胺注射后6 h均引起中華絨螯蟹血清中ACP和AKP活性顯著下降的結(jié)論相同。

綜上所述，溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹THC、吞噬活性、PO活性、ACP活性、AKP活性等主要免疫指標(biāo)有明顯影響，呈現(xiàn)出濃度-效應(yīng)關(guān)系。即使是在安全濃度以下的各濃度（0.19、0.30、0.41 μg/L）均對(duì)其免疫功能有明顯抑制作用。因此，雖然溴氰菊酯在生產(chǎn)中由于施藥濃度較低、降解較快等特點(diǎn)不易達(dá)到中華絨螯蟹的致死濃度，但仍會(huì)對(duì)其免疫功能造成影響。水體中殘留溴氰菊酯可長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)影響中華絨螯蟹免疫功能，尤其在高溫季節(jié)水質(zhì)惡化，會(huì)增大病害發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。因此，我們建議在中華絨螯蟹養(yǎng)殖水體周邊應(yīng)避免使用溴氰菊酯農(nóng)藥。

［1］胡志強(qiáng)，任雪景，郭玉晶. 擬除蟲(chóng)菊酯類殺蟲(chóng)劑的研究進(jìn)展［J］. 青島科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2002，23（1）：48-51.

［2］夏世鈞. 農(nóng)藥毒理學(xué)［M］. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008：317-329.

［3］K?prücü K，Aydyn R. The toxic effects of pyrethroid deltamethrin on the common carp（Cyprinus carpio L.） embryos and larvae［J］. Pesticide Biochemistry & Physiology，2004，80（1）：47-53.

［4］Viran R，Unlü E F，Polat H，et al. Investigation of acute toxicity of deltamethrin on guppies（Poecilia reticulata）［J］. Ecotoxicology & Environmental Safety，2003，55（1）：82-85.

［5］王媛，熊麗，劉喜平，等. 氯氰菊酯對(duì)鯉魚(yú)亞急性毒性研究［J］. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)，2006，25（1）：200-203.

［6］張新鋮，朱新平，劉毅輝，等. 甲苯咪唑、溴氰菊酯和硫酸銅對(duì)美洲鰣的急性毒性研究［J］.南方水產(chǎn)科學(xué)，2015（2）：66-71.

［7］胡偉華，何輝，袁勇超，等. 敵百蟲(chóng)、溴氰菊酯對(duì)大鱗副泥鰍仔魚(yú)及多刺裸腹溞的急性毒性實(shí)驗(yàn)［J］. 淡水漁業(yè)，2017，47（1）：66-70.

［8］許貽斌，鄭惠東，陳宇鋒，等. 溴氰菊酯對(duì)菲律賓蛤仔體內(nèi)酶活性和組織損傷的初步探索［J］. 生態(tài)毒理學(xué)報(bào)，2015，10（6）：206-212.

［9］耿雪冰. 溴氰菊酯殘留的檢測(cè)方法及對(duì)河蟹的毒性研究［D］. 南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

［10］Xian J A，Wang A L，Ye C X，et al. Phagocytic activity，respiratory burst，cytoplasmic free-Ca2+concentration and apoptotic cell ratio of haemocytes from the black tiger shrimp，Penaeus monodon under acute copper stress［J］. Comparative Biochemistry & Physiology（Part C）：Toxicology & Pharmacology，2010，152（2）：182-188.

［11］Ashida M. Purification and characterization of pre-phenoloxidase from hemolymph of the silkworm Bombyx mori［J］. Archives of Biochemistry & Biophysics，1971，144（2）：749.

［12］魏華，吳楠，沈竑，等. 溴氰菊酯對(duì)克氏原螯蝦的氧化脅迫效應(yīng)［J］. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2010 （5）：733-739.

［13］龔瑞忠，鐘巧云. 溴氰菊酯對(duì)魚(yú)蝦的毒性與安全評(píng)價(jià)研究［J］. 農(nóng)村生態(tài)環(huán)境，1996，12（1）：29-32.

［14］姜輝，林榮華，陶傳江，等. 菊酯類農(nóng)藥對(duì)水田生物影響研究進(jìn)展［J］.農(nóng)藥科學(xué)與管理，2005，26（10）：14-19.

［15］楊先樂(lè)，陸承平，戰(zhàn)文斌. 新編漁藥手冊(cè)［J］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2005.

［16］蔡道基，龔瑞忠，湯國(guó)才，等. 稻田使用溴氰菊酯農(nóng)藥對(duì)水生生物的安全評(píng)價(jià)［J］. 環(huán)境科學(xué)研究，1997，10（3）：30-35.

［17］姚翠鸞，王志勇，相建海. 甲殼動(dòng)物血細(xì)胞及其在免疫防御中的功能［J］.動(dòng)物學(xué)研究，2006，27（5）：549-557.

［18］Pimp?o C T，Zampronio A R，de Assis H C S. Exposure of Ancistrus multispinis（Regan，1912，Pisces，Teleostei） to deltamethrin：Effects on cellular immunity［J］. Fish & Shellfish Immunology，2008，25（5）：528-532.

［19］鄭惠東. 溴氰菊酯對(duì)真鯛肝胰臟組織及細(xì)胞DNA 的損傷［J］. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)，2017，28（6）.

［20］Borges A R，Santos P N，F(xiàn)urtado A F，et al. Phagocytosis of latex beads and bacteria by hemocytes of the triatomine bug Rhodnius prolixus（Hemiptera：Reduvidae）［J］. Micron，2008，39（4）：486-494.

［21］S?derh?ll K，Smith V J. Separation of the hemocyte populations of Carcinus maenas and other marine decapods［J］. Developmental & Comparative Immunology，1983，7（2）：229-239.

［22］Matozzo V，Marin M G. The role of haemocytes from the crab Carcinus aestuarii（Crustacea，Decapoda） in immune responses：A first survey［J］. Fish & Shellfish Immunology，2010，28（4）：534-541.

［23］Johansson M W，Keyser P，Sritunyalucksana K，et al. Crustacean haemocytes and haematopoiesis［J］. Aquaculture，2000，191（1–3）：45-52.

［24］Gargioni R，Barracco M A. Hemocytes of the palaemonids Macrobrachium rosenbergii and M. acanthurus，and of the penaeid Penaeus paulensis［J］. Journal of Morphology，1998，236（3）：209-221.

［25］Gallo C，Schiavon F，Ballarin L. Insight on cellular and humoral components of innate immunity in Squilla mantis（Crustacea，Stomatopoda）［J］. Fish & Shellfish Immunology，2011，31（3）：423-431.

［26］Lv S，Xu J，Zhao J，et al. Classification and phagocytosis of circulating haemocytes in Chinese mitten crab （Eriocheir sinensis） and the effect of extrinsic stimulation on circulating haemocytes in vivo［J］. Fish & Shellfish Immunology，2014，39（2）：415-422.

［27］吳楠，魏華，沈竑，等. 溴氰菊酯對(duì)克氏原螯蝦肌肉組織的毒性研究［J］. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2015，39（9）：1412-1421.

［28］徐海圣，徐步進(jìn). 甲殼動(dòng)物細(xì)胞及體液免疫機(jī)理的研究進(jìn)展［J］. 大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，16（1）：49-56.

［29］陸宏達(dá)，劉凱，張明輝.中華絨螯蟹血淋巴中酚氧化酶的部分生化特性［J］.上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，16（3）：236-241.

［30］Zhao L，Yang X，Cheng Y，et al. Effects of Histamine on survival and immune parameters of the Chinese Mitten Crab，Eriocheir sinensis［J］. Journal of Shellfish Research，2012，31（3）：827-834.

（責(zé)任編輯 崔建勛）

Effects of deltamethrin on main immune parameters of Chinese mitten crab，Eriochier sinensis

HONG Yu-hang
（Animal Science Faculty，Xichang College，Xichang 615000，China）

In this research，the effects of deltamethrin on immune parameters were revealed by dectecting the changes of total hemocytes count （THC），phagocytic activity，phenoloxidase（PO） activity，acid phosphatase（ACP） activity and alkaline phosphatase（AKP） activity in hemolymph of Chinese mitten crab under different concentrations of deltamethrin（0，0.19，0.30，0.41，0.52 μg/L） exposure. The results showed that deltamethrin had evident effects on immune parameters of Chinese mitten crab，THC increased after 6 h and 12 h exposure to low concentrations of deltamethrin including 0.19 μg/L and 0.30 μg/L，and then decreased to normal level at 96 h. On the contrary，high concentration （0.41μg/L and 0.52μg/L） exposure declined the THC after 24 h，which was significantly lower than that of control group at 96 h. The phagocytic activity decreased under each concentration and the higher concentration made a higher inhibition of phagocytic activity. After exposure to 0.52μg/L deltamethrin，PO activity increased significantly at 6 h and then decreased gradually till 96 h，which had no significant difference among each group. However，both ACP and AKP activity decreased at 6 h exposure to 0.52μg/L deltamethrin and was significantly lower than those of control at each time point.

deltamethrin；Eriochier sinensis；immunity function；toxicity

S948

A

1004-874X（2017）03-0151-07

2017-01-04

四川省教育廳科研一般項(xiàng)目（17ZB0405）

洪宇航（1987-），男，碩士，助教，E-mail：hongyuhang1987@126.com

洪宇航.溴氰菊酯對(duì)中華絨螯蟹主要免疫指標(biāo)的影響［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，44（3）：151-157.