YS03球孢白僵菌防治稻水象甲最佳時期試驗

狄雪塬，楊茂發(fā)，2，嚴(yán) 斌，鄒 曉

（1.貴州大學(xué)昆蟲研究所/貴州省山地農(nóng)業(yè)病蟲害重點實驗室，貴州 貴陽 550025；2.貴州大學(xué)煙草學(xué)院，貴州 貴陽 550025；3.貴州大學(xué)真菌資源研究所，貴州 貴陽 550025）

YS03球孢白僵菌防治稻水象甲最佳時期試驗

狄雪塬1，楊茂發(fā)1，2，嚴(yán) 斌1，鄒 曉3

（1.貴州大學(xué)昆蟲研究所/貴州省山地農(nóng)業(yè)病蟲害重點實驗室，貴州 貴陽 550025；2.貴州大學(xué)煙草學(xué)院，貴州 貴陽 550025；3.貴州大學(xué)真菌資源研究所，貴州 貴陽 550025）

通過測定YS03球孢白僵菌對田間不同時期稻水象甲成蟲的取食、產(chǎn)卵和致病力，以及調(diào)查稻水象甲成蟲遷入秧田及產(chǎn)卵高峰期，研究YS03球孢白僵菌防治稻水象甲的最佳防治時期。結(jié)果表明，YS03球孢白僵菌對田間不同時期稻水象甲成蟲的取食、產(chǎn)卵沒有顯著影響，藥后10 d對成蟲均有較好殺蟲效果。田間調(diào)查顯示，稻水象甲越冬成蟲在插秧后3 d開始陸續(xù)遷入秧田，7 d蟲量達高峰期，10 d產(chǎn)卵達高峰期，插秧后7 d稻水象甲成蟲數(shù)與產(chǎn)卵量均顯著高于其他時間。綜合分析試驗結(jié)果得出，插秧后3 ～7 d是施用YS03球孢白僵菌防治稻水象甲的最佳時期。

稻水象甲；球孢白僵菌；入侵害蟲；致病力；防治

稻水象甲（Lissorbqptrus oryzqphilus Kuschel）隸屬鞘翅目，象甲科，稻水象屬，是我國重要的外來入侵植物害蟲之一［1］。稻水象甲原產(chǎn)北美，20世紀(jì)初，孤雌生殖型稻水象甲傳入亞洲，1988年傳至中國，首次發(fā)現(xiàn)于我國河北省唐?？h［2］，此后在我國不斷蔓延擴張。貴州省于2010年首次發(fā)現(xiàn)稻水象甲［3］，已擴散到貴州省7市26縣［4］。

稻水象甲屬半水生性昆蟲，幼蟲和蛹在水稻根部營水生生活，成蟲具有半水生性［5］。其成蟲啃食水稻葉片，幼蟲蛀食植物根部，影響水稻光合作用和分蘗，一般危害可減產(chǎn)20%～30%，嚴(yán)重時減產(chǎn)50%～70%，甚至絕產(chǎn)［6］。該蟲屬半水生種類，幼蟲和蛹均在水稻根部及附近營外寄生生活，對氧氣的需求很大程度上依靠水稻根部輸氣組織，在形態(tài)和生理上都具有適應(yīng)此種生活的特殊性［7-8］。這種生活方式使稻水象甲的防治存在一定限制，目前對稻水象甲的防治主要以化學(xué)防治為主，其造成嚴(yán)重的生態(tài)問題，大量農(nóng)藥的使用，也使該蟲抗藥性逐漸加強［9］。

白僵菌是迄今為止大規(guī)模防治稻水象甲成蟲效果最顯著的寄生性天敵之一，白僵菌防治稻水象甲有一定的致死作用，篩選出高毒力?；缘陌捉┚鷮Φ舅蠹椎陌l(fā)生發(fā)展起到抑制作用［10］。YS03球孢白僵菌是本項目組篩選出防治稻水象甲的優(yōu)效菌株，通過室內(nèi)致病力測定［11］以及田間試驗［12］，該菌株均表現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。為了更好的在生產(chǎn)實際中利用YS03球孢白僵菌防治稻水象甲，本試驗通過測定該菌株對田間不同時期稻水象甲成蟲的取食、產(chǎn)卵和致病力，以及調(diào)查稻水象甲越冬成蟲遷入秧田及產(chǎn)卵高峰期，研究了施用該菌防治稻水象甲的最佳防治時期。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

田間試驗于2015年5月在貴州省貴陽市息烽縣永靖鎮(zhèn)喜雅村進行。該地位于云貴高原東斜坡面，地處26°58.966′N、106°40.426′E，平均海拔1 331 m，屬亞熱帶季風(fēng)性濕潤氣候。年平均氣溫16℃，年平均降水量1 380 mm，年平均相對濕度85%，無霜期250～300 d，年平均日照時數(shù)1 200～1 600 h［4，13］。

室內(nèi)試驗供試蟲源：田間采集的越冬代成蟲。供試菌株：白僵菌YS03菌株由貴州大學(xué)真菌資源研究室提供。花生、玉米粉、麥麩、蛋白胨、磷酸氫二鉀、瓊脂、葡萄糖、75%乙醇、Tween-80、無菌水、1%HCl、1%NaOH等均為市售。

1.2 試驗方法

1.2.1 YS03球孢白僵菌對不同時期稻水象甲成蟲取食、產(chǎn)卵和致病力的測定 插秧后3、7、10、15、20 d分別從田間采集稻水象甲供試成蟲帶回實驗室，挑選健康、活潑的試蟲30頭。左手拿計時器，右手用鑷子將試蟲浸漬在配制好的孢子懸浮液中5 s浸染YS03球孢白僵菌。將處理過的試蟲單頭分別放到裝有新鮮水稻秧苗的透明玻璃試管（18 mm×180 mm）中，用橡皮筋扎紗布（孔徑0.212 mm）封口透氣。在溫度26（±1）℃、相對濕度60%～80%、光周期16 L∶8 D的人工氣候箱中飼養(yǎng)。

每天用1株新鮮水稻秧苗作食料，每管更換1次，試管中加入約5 cm高的水。連續(xù)觀察24 d。記錄稻水象甲取食斑長度、取食斑個數(shù)、產(chǎn)卵量及成蟲的死亡數(shù)（將死亡的試蟲移到無菌平板培養(yǎng)皿中保濕培養(yǎng)，1周內(nèi)長出球孢白僵菌菌絲及分生孢子的蟲體，判定為有效致死），計算矯正死亡率。

1.2.2 田間稻水象甲越冬成蟲遷入時期及卵量調(diào)查 插秧后3、7、10、15、20 d，采用五點取樣法調(diào)查100株秧苗，檢查稻水象甲成蟲數(shù)量；同時采用五點取樣法，采集10株秧苗，帶回室內(nèi)在解剖鏡下檢查其上的卵量。

1.2.3 最佳施用時期分析 結(jié)合室內(nèi)測定結(jié)果，以及田間稻水象甲遷入時期和產(chǎn)卵情況，綜合分析YS03球孢白僵菌防治稻水象甲成蟲的最佳時期。

采用SPSS 17.0和Excel 2003對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，采用單因素方差分析（One-way ANOVA）和Duncan’s新復(fù)極差法進行差異顯著性檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 YS03球孢白僵菌對不同時期稻水象甲成蟲取食和產(chǎn)卵的影響

由表1可知，用YS03球孢白僵菌處理不同時期稻水象甲，其取食斑長度、產(chǎn)卵量均沒有顯著差異，僅在取食斑個數(shù)上，插秧后15、20 d采集的成蟲處理與對照和插秧后3 d采集的成蟲處理差異顯著。由此可以得出，插秧后不同時期施用YS03球孢白僵菌對稻水象甲越冬成蟲的取食和產(chǎn)卵量沒有明顯影響。

2.2 YS03球孢白僵菌對不同時期稻水象甲成蟲的致病力

從表2可以看出，不同時期稻水象甲被YS03球孢白僵菌感染后，均出現(xiàn)不同程度死亡，插秧后10 d 施菌，藥后24 d殺蟲效果達100%。方差分析顯示，插秧后施菌不同時期之間、稻水象甲之間死亡率差異不顯著，但不同施菌時期處理10 d后均與對照存在不同程度差異。由此表明，插秧后各施菌時期在處理10 d后均有較好殺蟲效果。

表1 YS03球孢白僵菌對不同時期稻水象甲成蟲取食和產(chǎn)卵的影響

表2 YS03球孢白僵菌對不同時期稻水象甲成蟲的致病力

圖1 插秧后不同時期稻水象甲成蟲數(shù)量

2.3 稻水象甲田間成蟲遷入動態(tài)及卵量調(diào)查

2.3.1 田間稻水象甲越冬成蟲遷入時期及數(shù)量 稻水象甲越冬成蟲在插小秧后陸續(xù)遷入秧田。田間調(diào)查顯示，插小秧后蟲量先增加，后又逐漸減少，插秧后7 d的蟲量顯著高于插秧后15、20 d的蟲量。插秧后7 d，田間稻水象甲的蟲量最多（圖1），插秧15 d后，秧田內(nèi)稻水象甲的數(shù)量逐漸減少。由此可見，稻水象甲在插秧3 d之后，迅速遷入秧田。

2.3.2 田間稻水象甲產(chǎn)卵量 插小秧后不同時期田間稻水象甲產(chǎn)卵量差異顯著。從圖2可以看出，產(chǎn)卵量先增加，后又逐漸減少，插秧后10 d，稻水象甲的產(chǎn)卵量最多，剛插秧卵量最少。插秧后7 d、10 d稻水象甲產(chǎn)卵量與其他時間的產(chǎn)卵量差異顯著。綜合圖1得出，稻水象甲在插秧3 d之后，迅速遷入秧田并產(chǎn)卵，插秧后10 d達產(chǎn)卵量高峰。

2.4 稻水象甲越冬成蟲田間防治適期分析

室內(nèi)實驗表明，YS03球孢白僵菌對不同時期稻水象甲越冬成蟲的取食和產(chǎn)卵的影響是一致的；插秧后各施菌時期在處理10 d后均有較好殺成蟲效果。田間調(diào)查結(jié)果顯示，稻水象甲越冬成蟲遷入秧田的高峰期是在插小秧后7 d，產(chǎn)卵高峰期是在插小秧后10 d。施菌時期必須在成蟲遷入秧田高峰期前，因此，施用該菌防治稻水象甲的最佳時期應(yīng)在插秧后3 ～7 d為宜。

圖2 插秧后不同時期稻水象甲產(chǎn)卵量

3 討論

稻水象甲的生物防治備受重視，其中白僵菌防治稻水象甲一直是研究的熱點。本試驗通過室內(nèi)和田間試驗綜合分析，提出利用YS03球孢白僵菌防治稻水象甲最佳時期在插秧后3 ～7 d，為生產(chǎn)上防治稻水象甲提供指導(dǎo)。

日本學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)白僵菌和綠僵菌能感染稻水象甲成蟲［14］，為蟲生真菌防治稻水象甲拉開序幕。國內(nèi)越來越多學(xué)者致力于白僵菌防治稻水象甲的研究［15］，吉林省XJ8為靶標(biāo)害蟲（水稻二化螟、稻水象甲）?；远玖ψ罡叩陌捉┚辏?6］，蔣明星等從稻水象甲蟲體上分離出6種球孢白僵菌菌株，在108個孢子/mL高劑量處理中，藥后6 d成蟲累積死亡率達45%～90%，稻水象甲成蟲在感染球孢白僵菌后仍能產(chǎn)卵，且死亡之前的產(chǎn)卵量接近同期的健康成蟲，只是因感染后壽命縮短才使總產(chǎn)卵量有所減少［17］。本試驗也表明，感染白僵菌YS03菌株后，其成蟲的產(chǎn)卵量也無顯著差異。王鵬等［18］研究發(fā)現(xiàn)，接種白僵菌15 d累計稻水象甲蟲口死亡率為44.3%～8.3%；關(guān)志堅等研究表明，白僵菌可濕性粉劑對稻水象甲具有較好的防治效果，施用白僵菌可濕性粉劑（TVP紅）15 d后，稻水象甲死亡率達86%［19］。YS03球孢白僵菌系本項目組篩選出的優(yōu)效菌株［11］，室內(nèi)26℃條件下藥后15 d供試稻水象甲成蟲平均校正死亡率達95.66%；項目組又進一步研究了YS03球孢白僵菌對稻水象甲的田間防治效果，結(jié)果表明，5.0×109個孢子/mL藥劑量下，球孢白僵菌YS03菌株對稻水象甲成蟲田間防治效果為40%～60%，減少水稻產(chǎn)量損失率達18.75個百分點［12］。Isely等［20］研究表明，稻水象甲通常在灌水后7 d大量侵入稻田，最后密度很快下降。本試驗在插秧7 d后蟲量達高峰期，結(jié)果基本吻合。他們的研究還顯示，在灌水后1～2周內(nèi)稻水象甲達到產(chǎn)卵的高峰期，本試驗的稻水象甲產(chǎn)卵高峰期在插秧后10 d，這一結(jié)果也基本相同。生物防治稻水象甲效果較好，但速效性差一些［21］，稻水象甲的田間防治效果也受多種因素影響，略低于室內(nèi)實驗的防效，把握合適的施藥時期尤為重要。

室內(nèi)實驗結(jié)果表明，插秧后不同時期的稻水象甲成蟲對白僵菌感染的反應(yīng)均沒有顯著差異，也就是說，利用白僵菌防治稻水象甲的防治適期主要決定于稻水象甲遷入及產(chǎn)卵情況。越冬稻水象甲成蟲遷入秧田的時期及產(chǎn)卵高峰期在各地有所不同，也隨著栽培制度的不同而有所變化，因此，在利用YS03球孢白僵菌防治稻水象甲時，施用的最佳時期應(yīng)該按照實際情況進行靈活調(diào)整。

［1］Zou L，Stout J M，Dunand T R. The effects of feeding by the rice water weevil，Lissorhoptrus Oryzophilus oryzophilus Kuschel，on the growth and yield［J］. Agricultural and Forest Entomology，2004，6（1）：47-53.

［2］孫汝川，毛志農(nóng). 稻水象［M］. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1996：159.

［3］峗薇，楊大星，彭炳富，等. 貴州稻水象甲越冬場所的初步調(diào)查與分析［J］. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（6）：90-93.

［4］峗薇，楊茂發(fā)，廖啟榮，等. 兩種育秧方式下稻水象甲幼蟲的空間分布型及其抽樣技術(shù)［J］.植物保護學(xué)報，2013，40（2）：128–132.

［5］王佳武，趙伊英. 稻水象甲防治的研究進展［J］. 黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015（7）：150-152.

［6］蔡明，邢巖，趙鐵成，等. 2000年稻水象甲大發(fā)生原因及控制對策［J］. 遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，2000（5）：36-37.

［7］Zhang Z T，Stout M J，Shang H W，et al. Adaptations of larvae and pupae of the rice water weevil，Lissorhoptrus oryzophilus Kuschel（Coleoptera：Curculionidae），to living in flooded soils［J］. Journal of the kansas Entomological society，2006，79（2）：176-183.

［8］張燕杏，王凱學(xué)，賓利，等. 稻水象甲生態(tài)學(xué)研究進展［J］. 中國植保導(dǎo)刊，2014，34（9）：58-62.

［9］Saito T，Hirai K，Way O M. The rice water weevil Lissorhoptrus oryzophilus Kuschel（Coleoptera：Curculionidae）［J］. Applied Entomology and Zoology，2005，40（1）：31–39.

［10］朱曉敏, 王義升, 王德仲, 等. 白僵菌對稻水象甲成蟲毒力測定//植?？萍紕?chuàng)新與農(nóng)業(yè)精準(zhǔn)扶貧—— 中國植物保護學(xué)會2016年學(xué)術(shù)年會論文集［C］. 北京：中國植物保護學(xué)會，2016：463.

［11］徐進，楊茂發(fā)，楊大星，等. 不同球孢白僵菌對稻水象甲成蟲的致病力的測定［J］. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（3）：69-72.

［12］徐進，楊茂發(fā)，狄雪塬，等. 球孢白僵菌YS03菌株對稻水象甲的田間防治效果［J］. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2015，28（4）：1630-1633.

［13］谷曉平，袁淑杰，吳戰(zhàn)平. 貴州山地氣候要素分布式研究［M］. 北京：氣象出版社，2009：130-199.

［14］Yozhlzawa E. Microbial control of the rice water weevil with entomogenous fungi//In：Hirai K. Establishment spread and management of the rice water weevil and migratory rice pests in east Asia［C］. Narc Tsukuba，1993.

［15］李增智. 昆蟲真菌學(xué)的發(fā)展//中國蟲生真菌研究與應(yīng)用［C］. 北京：中國植物保護學(xué)會，1996：1-5.

［16］田志來，朱曉敏，駱家玉，等. 吉林省水稻主要害蟲廣譜性白僵菌菌株篩選［J］. 中國生物防治學(xué)報，2014，30（5）：665-671.

［17］蔣明星，商晗武，程家安. 球孢白僵菌對稻水象甲成蟲的毒力測定［J］. 植物保護學(xué)報，2002，29（3）：287-288.

［18］關(guān)志堅，付文君，吐爾遜·阿合買提，等. 白僵菌對稻水象甲防治效果［J］. 農(nóng)村科技，2014（12）：38-39.

［19］王鵬，司懷軍，吳家和. 不同球孢白僵菌株毒殺稻水象甲成蟲的效果分析［J］. 生物學(xué)雜志，2016，33（1）：17-20.

［20］Isely D，Schwardt H H. The rice water weevil［J］. Univ. Arkansas Agr. Expt. Sta. Bull，1934，299：43.

［21］李春滾，汪濤，余南生. 稻水象甲的防治研究進展［J］. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2016（11）：177-178.

（責(zé)任編輯 楊賢智）

Research on optimum time period of Beauveria bassiana YS03 against Lissorhoptrus oryzophilus

DI Xue-yuan1，YANG Mao-fa1，2，YAN Bin1，ZOU Xiao3
（1. Institute of Entomology，Guizhou University/Guizhou Provincial Key Laboratory for Agricultural Pest Management of the Mountainous Region，Guiyang 550025，China；2. College of Tobacco Science，Guizhou University，Guiyang 550025，China；3. Institute of Fungus Resources，Guizhou University，Guiyang 550025，China）

This paper determined the effects of Beauveria bassiana YS03 on feeding，oviposition and pathogenicity of rice water weevil（Lissorhoptrus oryzophilus） in different periods，investigated the seedling time and spawning peak of rice water weevil adults，to study the optimum time of YS03 to prevent and control rice water weevil. The results showed that in different periods，the effects of YS03 on feeding and oviposition of rice water weevil were not significantly different，and YS03 had good insecticidal effect on rice water weevil adults after 10 days. Field survey indicated that rice water weevils were fast migrating to rice seeding after 3 days，the adult peak appeared in 7 days，and spawning peak appeared in 10 days. 7 days after transplanting，the adult numbers and fecundity of rice water weevil were significantly higher than those in other time. So 3-7 days after rice seedlings planting，spraying B. bassiana YS03 had excellent control effect.

Lissorhoptrus oryzophilus；Beauveria bassiana；invasive pest；pathogenicity；control

S435.112+.6

A

1004-874X（2017）03-0108-05

2017-01-07

貴州省農(nóng)業(yè)科技攻關(guān)項目（黔 科合NY字[2014]3015號）

狄雪塬（1992-），女，在讀博士生，E-mail: xiaomdd@126.com

楊茂發(fā)（1968-），男，土家族，博士，教授，E-mail: gdgdly@126.com

狄雪塬，楊茂發(fā)，嚴(yán) 斌，等. YS03球孢白僵菌防治稻水象甲最佳時期試驗［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，44（3）：108-112.