脫敏煎治療男性免疫性不育對精漿炎癥因子表達(dá)的影響

夭榮平魏任雄王輝郜都周俊史波崔云

脫敏煎治療男性免疫性不育對精漿炎癥因子表達(dá)的影響

夭榮平魏任雄王輝郜都周俊史波崔云

免疫性不育；炎癥因子；免疫珠試驗(yàn)；脫敏煎

不育癥的發(fā)病因素復(fù)雜，其中20%～30%的不育癥與免疫因素有關(guān)[1]。西醫(yī)首選類固醇類激素治療男性免疫性不育，但療效尚不滿意。近年來我們運(yùn)用經(jīng)驗(yàn)方“脫敏煎”治療該病取得了較為滿意的臨床效果，但是脫敏煎的具體作用機(jī)制尚未明確。炎癥因子異常表達(dá)是男性免疫性不育的重要影響因素[2]，本研究通過觀察脫敏煎治療男性免疫性不育影響精漿炎癥因子白介素-6（IL-6）和可溶性細(xì)胞黏附分子-1（sICAM-1）在治療前后表達(dá)的差異，揭示脫敏煎治療該病的一種可能作用機(jī)制，為臨床用脫敏煎治療該病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 對象選取2012年8月—2015年2月來我院男科就診男性免疫性不育癥患者67例，年齡22～41歲，平均（28.9±13.1）歲,病程2～13年，平均（4.3± 5.5）年，婚齡2.8～13年，平均（5.1±5.4）年，身體健康，夫妻性生活正常，未采取任何避孕措施，女方均經(jīng)婦科檢查，輸卵管通暢實(shí)驗(yàn)以及B超、內(nèi)分泌測定等排除女方不孕因素。根據(jù)研究對象進(jìn)入研究的時(shí)間順序，采用區(qū)組隨機(jī)化方法分為脫敏煎組34例，年齡24～41歲，平均（29.6±14.3）歲；醋酸潑尼松組33例，年齡22～39歲，平均（28.2±11.9）歲。另外選擇同期因女方因素不孕前來檢查的生育力評估正常的健康男性31名為健康對照組，年齡22～35歲，平均（27.1± 13.9）歲。所有對象均簽署知情同意書，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)同意。各組年齡、婚齡等基線資料方面等差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），臨床資料有可比性。

1.2 病例選擇依照2000年WHO發(fā)布的免疫性不育的診斷標(biāo)[3]：性及射精功能正常，在至少一份精液中，混合抗球蛋白反應(yīng)實(shí)驗(yàn)或免疫珠試驗(yàn)（immunobead test，IBT）有不少于50%活動(dòng)精子表面被覆抗體，排除內(nèi)分泌、遺傳、惡性腫瘤、血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病、慢性阻塞性肺疾病及肝腎功能異常者。

1.3 治療方法脫敏煎組患者予脫敏煎方湯（方藥主要組成：女貞子15g，黃芩12g，徐長卿15g，牡丹皮15g，百合10g，丹參30g，防風(fēng)10g，每劑水煎3次）口服，1天3次，1次200mL連續(xù)用藥60天，為1個(gè)療程。醋酸潑尼松組患者口服醋酸潑尼松片，1次5mg，1天3次，60天為1個(gè)療程。兩組治療期間均停用其他藥物。

1.4 標(biāo)本采集方法依WHO要求，采集精液前禁性生活3～7天，排小便，洗凈雙手，用手淫法收集全部精液于干燥消毒的精液采集器內(nèi)，置37℃多維混勻恒溫箱，觀察精液液化時(shí)間，待充分液化后行精子濃度、精子存活率、精子活力、免疫珠試驗(yàn)等檢查，3000r/min離心15min，取精漿置-80℃冰箱保存待用，用以批量測定測IL-6和sICAM-1。

表1 兩組患者治療前后及健康對照組精液常規(guī)參數(shù)比較

表1 兩組患者治療前后及健康對照組精液常規(guī)參數(shù)比較

注：與治療前比較，*P＜0.05，**P＜0.01；PR：前向運(yùn)動(dòng)精子；SLT：精液液化時(shí)間

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1.5 檢測方法依照WHO《人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊》（第5版）要求進(jìn)行精液分析[4]，液化時(shí)間通過肉眼觀察和顯微鏡進(jìn)行識別判讀，待精液液化后借用北京偉力計(jì)算機(jī)輔助精子分析系統(tǒng)，在帶有加熱37℃載物臺的顯微鏡下分析精子活力和精子濃度，精子存活率采用低滲膨脹實(shí)驗(yàn)（HOS），IBT試驗(yàn)試劑由深圳華康生物醫(yī)學(xué)工程有限公司提供（批號為20140401、20141107）。用酶聯(lián)免疫吸附（ELSA）方法測定IL-6和sICAM-1的含量,設(shè)試劑空白及標(biāo)本空白，各標(biāo)本平行測定2次，取平均值（兩次結(jié)果偏倚≥10%重新測定），所用試劑盒購自美國Bender MedSystems公司（批號D130301、D130219），分析儀器為芬蘭Denley Dragon酶標(biāo)儀（波長為450nm），方法按操作說明進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)，精液質(zhì)量參數(shù)和精漿IL-6、 sICAM-1符合正態(tài)分布，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差示；多組間比較采用單因素方差分析；兩組間比較采用t檢驗(yàn)。精液免疫珠試驗(yàn)呈偏態(tài)分布，用中位數(shù)（四分位區(qū)間）表示[M（P25～P75]，采用非參數(shù)Mann-Whitney U檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 各組精液常規(guī)參數(shù)比較治療前三組對象精子存活率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.89，P＜0.05）、精子前向運(yùn)動(dòng)比率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.24，P＜0.01）；脫敏煎組和醋酸潑尼松組治療前、治療后各參數(shù)比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；脫敏煎組和潑尼松組治療前后各自比較，精子存活率、前向運(yùn)動(dòng)精子比率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。見表1。

2.2 各組精漿細(xì)胞因子水平比較治療前三組比較IL-6（F=6.06，P＜0.01）、sICAM-1（F=7.83，P＜0.01）差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但兩治療組治療前IL-6和sICAM-1差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后三組比較，IL-6差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.46，P＜0.05）、sICAM-1差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.04，P＜0.01）；脫敏煎組治療后與健康對照組比較，IL-6無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），sICAM-1差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；醋酸潑尼松組治療后與健康對照組比較，IL-6差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），sICAM-1差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；脫敏煎組治療后IL-6、sICAM-1較醋酸潑尼松組明顯下調(diào)（P均＜0.05）；脫敏煎組治療前后比較IL-6、sICAM-1差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），醋酸潑尼松組治療前后比較IL-6無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），sICAM-1差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組患者治療前后及健康對照組細(xì)胞因子比較

表2 兩組患者治療前后及健康對照組細(xì)胞因子比較

注：與治療前比較，*P＜0.01；IL-6：白細(xì)胞介素-6；sICAM-1：可溶性細(xì)胞黏附分子-1

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2.3 兩組患者治療前、后免疫珠試驗(yàn)結(jié)果比較兩組治療前差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（U=544.5，P=0.836），治療后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（U=316.8，P=0.018）。脫敏煎組患者治療前后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（U=58.5，P= 0.000），醋酸潑尼松組治療前后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（U=384.3，P=0.037）。見表3。

3 討論

據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球不育癥患病率5%～30%[5]。免疫因素是不育癥發(fā)病的重要影響因素，在生殖道損傷、生殖系統(tǒng)炎癥感染、外傷及外科手術(shù)損傷及梗阻等因素下，使血睪屏障開放調(diào)節(jié)異常，導(dǎo)致精母細(xì)胞、精子細(xì)胞、精子與機(jī)體免疫系統(tǒng)接觸發(fā)生自身免疫應(yīng)答，形成多種類型的抗精子抗體，從而導(dǎo)致男性免疫性不育[6-8]。目前西醫(yī)治療主要用類固醇類藥物[9]，但診治效果尚不滿意，長期使用不良反應(yīng)較大，易引起內(nèi)分泌失調(diào)、免疫力下降、易感染、腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)癥以及胃潰瘍等，并且停藥后產(chǎn)生反跳現(xiàn)象。

表3 兩組患者治療前后免疫珠試驗(yàn)結(jié)果比較[%，M（P25～P75）]

經(jīng)驗(yàn)方脫敏煎選用女貞子、炒黃芩、徐長卿、牡丹皮、百合、丹參、防風(fēng)，藥理研究[10]表明，女貞子、百合補(bǔ)腎益氣，并且女貞子可增強(qiáng)細(xì)胞表面受體活性，促進(jìn)T細(xì)胞活動(dòng)，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。丹參、丹皮活血化瘀可調(diào)節(jié)機(jī)體血液循環(huán)，特別是微循環(huán)[11]，另外丹參有自由基清除功能[12]，對已形成的免疫復(fù)合物有促進(jìn)吸收和消除的作用。炒黃芩和徐長卿清熱利濕具有抗菌消炎作用[13]。全方具有活血化瘀、抗菌消炎，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子分泌和免疫功能，增強(qiáng)精漿免疫抑制物活性，加速免疫復(fù)合物的消除，從而達(dá)到治療男性免疫性不育的功能。IL-6和sICAM-1是重要的炎癥細(xì)胞因子，我們前期的研究結(jié)果表明[14]，男性免疫性不育患者炎癥因子IL-6、sICAM-1精漿表達(dá)水平明顯高于正常人，炎癥因子的異常表達(dá)與免疫性不育密切相關(guān)。本研究通過分別用脫敏煎和醋酸潑尼松干預(yù)男性免疫性不育患者，結(jié)果顯示，脫敏煎和醋酸潑尼松組治療前IL-6、sICAM-1精漿表達(dá)均明顯差異于健康對照組（P＜0.01），經(jīng)治療后脫敏煎組和醋酸潑尼松組IL-6和sICAM-1均有不同程度的表達(dá)下調(diào)，尤以脫敏煎組下調(diào)更為顯著（P＜0.05）。提示脫敏煎均對男性免疫性不育病情有一定的改善，在去除炎癥介質(zhì)、調(diào)節(jié)免疫功能方面具有優(yōu)勢。免疫珠試驗(yàn)是目前公認(rèn)的最敏感的特異性方法[15]，因此我們選用了免疫珠試驗(yàn)用以判斷脫敏煎和醋酸潑尼松干預(yù)男性免疫性不育的療效判斷，結(jié)果顯示，治療后脫敏煎組精子被覆的抗體減少程度大于醋酸潑尼松組（P＜0.05）。提示脫敏煎在改善免疫功能、抑制免疫復(fù)合物的形成、去除免疫性不育患者免疫復(fù)合物方面可能優(yōu)于醋酸潑尼松。

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（收稿：2016-06-27修回：2016-08-03）

浙江省寧波市自然科學(xué)基金（No.2013A610273）（No.2016A 610200）

浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬寧波醫(yī)院檢驗(yàn)科（寧波315020）

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