小遠(yuǎn)志中口山酮類化學(xué)成分及生物活性研究

周凌云， 余小紅， 耿圓圓， 華 燕

(1.皖南醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，安徽 蕪湖241002；2.西南林業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，云南 昆明 650224)

小遠(yuǎn)志中口山酮類化學(xué)成分及生物活性研究

ZHOU Lingyun

周凌云1,2， 余小紅2， 耿圓圓2， 華 燕2*

(1.皖南醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，安徽 蕪湖241002；2.西南林業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，云南 昆明 650224)

以小遠(yuǎn)志干燥根莖為原料，采用乙醇提取、硅膠柱層析、Sephadex LH-20、MCI-gel和半制備型HPLC分離等方法對小遠(yuǎn)志中口山酮類化學(xué)成分進(jìn)行研究。從中分離得到18個口山酮類化合物，根據(jù)理化性質(zhì)及ESI-MS、1H NMR、13C NMR等波譜數(shù)據(jù)，分別鑒定為：1,7-二羥基口山酮(1)，3,6-二羥基-1,2,7,8-四甲氧基口山酮(2)，1,7-二羥基-5,6-二甲氧基口山酮(3)，1,5-二羥基-6,7-二甲氧基口山酮(4)，6-羥基-1,7-二甲氧基口山酮 (5)，7-羥基-1-甲氧基口山酮(6)，3,8-二羥基-1,2,4-三甲氧基口山酮(7)，6,8-二羥基-1,2,3-三甲氧基口山酮(8)，1,3,6-三羥基-2,7,8-三甲氧基口山酮(9)，3-羥基-1,2,8-三甲氧基口山酮(10)，1,3,7-三羥基口山酮(11)，1,6-二羥基-2,3-二氧亞甲基-7,8-二甲氧基口山酮(12)，1,7-二羥基-2,3-二甲氧基口山酮(13)，1,6-二羥基-5,7-二甲氧基口山酮(14)，3,7-二羥基-1,2-二甲氧基口山酮(15)，3,7-二羥基-1,2,8-三甲氧基口山酮(16)，1,2,3,7-四甲氧基口山酮(17)，1,6-二羥基-3,5,7,8-四甲氧基口山酮(18)，除化合物13外，其它化合物均為首次從該植物中分離得到。對其中分離所得量較多的化合物1～7進(jìn)行了抗氧化及抗菌實驗，發(fā)現(xiàn)化合物4和1有較好的抗氧化活性，對ABTS·的IC50值分別為12和13 mg/L；化合物3對金黃色葡萄球菌有一定的抑制作用，MIC值為217 μmol/L。

小遠(yuǎn)志；口山酮類化學(xué)成分; 抗氧化；抗菌

口山酮是一類重要的天然產(chǎn)物，具有廣泛的生理活性[1-2]，在很多高等植物中均有分布，而該類化學(xué)成分最重要的來源為遠(yuǎn)志科植物，該科包括22個屬，1 300余種[3]。小遠(yuǎn)志(PolygalasibiricaL. var.megalophaFr.)為云南特有品種，僅分布在云南中部和西北部。小遠(yuǎn)志民間藥用清熱解毒，祛風(fēng)止痛[4]。國內(nèi)外對該種植物化學(xué)成分研究較少,主要為黃酮類和多糖類成分[5-9]?，F(xiàn)代藥理研究表明小遠(yuǎn)志多糖有抗腫瘤活性[10]，小遠(yuǎn)志醇提取物有抗蛇毒活性[11]。然而，對于小遠(yuǎn)志口山酮類化合物報道較少，宛瑜等[5]從小遠(yuǎn)志中分離鑒定了7個口山酮類成分，但對其生物活性沒有進(jìn)行深入研究。為充分揭示小遠(yuǎn)志中口山酮類成分，發(fā)掘其藥用價值，本研究對小遠(yuǎn)志中口山酮類化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)分析，并進(jìn)一步測定了其抗氧化和抗菌活性。

1 實 驗

1.1 材料、試劑與儀器

小遠(yuǎn)志(PolygalasibiricaL. var.megalophaFr.)，采自云南省昭通市永善縣，由西南林業(yè)大學(xué)林學(xué)院杜凡教授鑒定為遠(yuǎn)志科植物小遠(yuǎn)志，標(biāo)本(2012010)保存在西南林業(yè)大學(xué)林學(xué)院植物資源利用系藥用植物教研室。柱色譜硅膠、薄層色譜硅膠，青島海洋化工廠；反相填充材料RP-18(40～60 μm)，Merk公司；Sephadex LH-20 (40～70 μm)，瑞典Amersham Pharmacia公司；D101 大孔樹脂，山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司；MCI-gel (70～150 μm)，Mitsubishi Chemical Corporation；常用分離試劑，工業(yè)級重蒸；乙腈，色譜純；ABTS，北京酷來搏科技有限公司；萬古霉素，上海生工生物工程技術(shù)有限公司。白色念珠菌(Moniliaalbican)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)和綠膿桿菌(Pseudomonasaeruginosa)，均由西南林業(yè)大學(xué)微生物實驗室提供。

電噴霧電離質(zhì)譜(ESI-MS)在甲醇中由Waters Xevo TQ-S三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀或Bruker HTC/Esquire spectrometer液相-離子阱色譜聯(lián)用儀測定；1H NMR和13C NMR譜由Bruker AM-400 MHz和Avance III-600 MHz超導(dǎo)核磁共振儀測定；半制備采用Agilent-HP 1100高效液相色譜儀，HPLC半制備柱(Agilent，Zorbax SB-C18，250 mm × 9.4 mm，5 μm)進(jìn)行分離純化。UV-2450紫外可見分光光度計，北京島津儀器有限公司。

1.2 提取分離

小遠(yuǎn)志干燥根莖約5 kg，粉碎后過篩(178 μm)，用75%的乙醇回流提取3次，每次40 L,分別提取4、2和2 h,合并提取液，減壓濃縮得到浸膏約1.7 kg。浸膏稀釋3倍，用溫水超聲波溶解，抽濾后過D101大孔吸附樹脂，先用9 L水洗脫，再用12 L 65%乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮得到500.0 g粗提樣品，經(jīng)硅膠柱層析，用氯仿-甲醇 (30 ∶1～ 0 ∶1，體積比) 梯度洗脫，合并后得到8個部分Fr.1～Fr.8。

Fr.1 (6.1g) 經(jīng)硅膠柱層析，用石油醚-丙酮(20 ∶1～ 0 ∶1，體積比) 洗脫，TLC檢測后合并得到5個組分Fr.1.1～ Fr.1.5。組分Fr.1.2經(jīng)過結(jié)晶和重結(jié)晶后得到化合物1 (620.7 mg)；組分Fr.1.3經(jīng)過硅膠柱層析，用石油醚-丙酮(15 ∶1～3 ∶1，體積比)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)反復(fù)洗脫，得到了化合物3 (169.7 mg)，4(71.9 mg) 和5(50.0 mg)；組分Fr.1.4經(jīng)過反復(fù)硅膠(石油醚-丙酮，體積比15 ∶1～1 ∶1；氯仿-甲醇，體積比20 ∶1～5 ∶1)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)柱層析，最后經(jīng)半制備型HPLC分離，以乙腈-水 (45 ∶55, 體積比) 為流動相，得到了化合物13 (1.8 mg)，18 (1.3 mg)。

Fr.2 (6.6 g) 首先用MCI-gel進(jìn)行脫色，脫色后的樣品經(jīng)TLC檢測后合并得到4個組分Fr.2.1～ Fr.2.4。組分Fr.2.1經(jīng)過反復(fù)硅膠(石油醚-丙酮，體積比10 ∶1～1 ∶1；氯仿-甲醇，體積比20 ∶1～3 ∶1)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)，最終得到了化合物6 (15.1 mg) 和7 (23.8 mg)；組分Fr.2.2經(jīng)過反復(fù)硅膠(石油醚-丙酮，體積比10 ∶1～0 ∶1；氯仿-甲醇，體積比10 ∶1～2 ∶1)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)，最后經(jīng)半制備型HPLC分離，以乙腈-水 (40 ∶60, 體積比) 為流動相，最終得到了化合物9 (3.0 mg)；組分Fr.2.3經(jīng)過反復(fù)硅膠(石油醚-丙酮，體積比4 ∶1～0 ∶1；氯仿-甲醇，體積比8 ∶1～2 ∶1)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)，最后經(jīng)半制備型HPLC分離，以乙腈-水 (38 ∶72, 體積比) 為流動相，最終得到了化合物12 (1.8 mg)。

Fr.3 (16.5 g) 首先用MCI-gel進(jìn)行脫色，脫色后的樣品經(jīng)RP-18，用甲醇-水(30 ∶70～90 ∶10，體積比)洗脫，TLC檢測后合并得到4個組分Fr.3.1～ Fr.3.4。組分Fr.3.1經(jīng)過硅膠柱層析，用石油醚-丙酮(5 ∶1～0 ∶1，體積比)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)反復(fù)洗脫，最后經(jīng)半制備型HPLC分離，以乙腈-水 (38 ∶62, 體積比) 為流動相，最終得到了化合物10 (3.0 mg)和11 (4.2 mg)；組分Fr.3.2經(jīng)過硅膠柱層析，用石油醚-丙酮(2 ∶1～0 ∶1，體積比)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)反復(fù)洗脫，最后經(jīng)半制備型HPLC分離，以乙腈-水 (35 ∶65, 體積比) 為流動相，最終得到了化合物14 (3.0 mg)，15 (2.0 mg)，16 (2.0 mg) 和17 (1.3 mg)；組分Fr.3.3經(jīng)過反復(fù)硅膠(石油醚-丙酮，體積比5 ∶1～0 ∶1；氯仿-甲醇，體積比8 ∶1～2 ∶1)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)，最后經(jīng)半制備型HPLC分離，以乙腈-水 (35 ∶65, 體積比) 為流動相，最終得到了化合物2 (2.5 mg) 和17 (1.0 mg)；組分Fr.3.4經(jīng)過反復(fù)硅膠(石油醚-丙酮，體積比3 ∶1～0 ∶1；氯仿-甲醇，體積比5 ∶1～2 ∶1)和凝膠Sephadex LH-20(甲醇)，最后經(jīng)半制備型HPLC分離，以乙腈-水 (33 ∶67, 體積比) 為流動相，最終得到了化合物8 (1.2 mg)。

1.3 生物活性測定

1.3.1 抗氧化活性測定 參考文獻(xiàn)[12]報道的ABTS總自由基清除試驗方法，測定化合物1～7(分離所得量少的單體化合物未進(jìn)行測定)及對照品維生素C的抗氧化能力。

1.3.2 抗菌活性測定 參考文獻(xiàn)[13～14]報道的抗菌實驗方法，測定化合物1～7和對照品萬古霉素對白色念珠菌(M.albican)、金黃色葡萄球菌(S.aureus)、大腸埃希氏菌(E.coli)和綠膿桿菌(P.aeruginosa)的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色針晶；分子式：C13H8O4，相對分子質(zhì)量為228；ESI-MS(m/z)：227 [M-H]-；1H NMR (400 MHz, 丙酮-d6)δ：12.70 (1H, s, OH-1), 9.04 (1H, s, OH-7), 7.67 (1H, t,J=8.4 Hz, H-3), 7.58 (1H, d,J=3.1 Hz, H- 8), 7.49 (1H, d,J=9.3 Hz, H-5), 7.41 (1H, dd,J=9.1, 3.1 Hz, H- 6), 6.97 (1H, d,J=8.4, Hz, H- 4), 6.74 (1H, d,J=8.3Hz, H-2)；13C NMR (100 MHz, 丙酮-d6)δ：162.7 (s, C-1), 110.5 (d, C-2), 137.8 (d, C-3), 107.7 (d, C- 4), 120.2 (d, C-5), 126.1 (d, C- 6), 155.0 (s, C-7), 109.1 (d, C- 8), 182.9 (s, C-9), 157.3 (s, C- 4a), 121.8 (s, C- 8a), 107.8 (s, C-9a), 151.0 (s, C-10a)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]對照基本一致，故鑒定為1,7-二羥基口山酮。

化合物2：黃色粉末；分子式：C17H16O8，相對分子質(zhì)量為348；ESI-MS(m/z)：349 [M+H]+，371 [M+Na]+和387 [M+K]+；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：6.48 (2H, s, H- 4, 5), 3.78 (6H, s, 1, 8-OMe), 3.73 (6H, s, 2, 7-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：152.7 (s, C-1, 8), 138.9 (s, C-2, 7), 158.4 (s, C-3, 6), 98.9 (d, C- 4, 5), 172.5 (s, C-9), 153.0 (s, C- 4a, 10a), 108.2 (s, C- 8a, 9a), 61.4 (q, 1, 8-OMe), 60.6 (q, 2, 7-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]對照基本一致，故鑒定為3,6-二羥基-1,2,7,8-四甲氧基口山酮。

化合物3：黃色粉末；分子式：C15H12O6，相對分子質(zhì)量為288；ESI-MS(m/z)：311 [M+Na]+和289 [M+H]+；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ：13.20 (1H, s, OH-1), 7.55 (1H, t,J= 8.4 Hz, H-3), 6.84 (1H, d,J= 8.1 Hz, H- 4), 6.68 (1H, s, H- 8), 6.66 (1H, d,J= 11.1 Hz, H-2), 3.84 (3H, s, 6-OMe), 3.77 (3H, s, 5-OMe)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ：161.2 (s, C- 1), 110.0 (d, C-2), 136.1 (d, C-3), 106.0 (d, C- 4), 153.3 (s, C-5), 138.9 (s, C- 6), 153.8 (s, C-7), 99.3 (d, C- 8), 180.4 (s, C-9), 154.8 (s, C- 4a), 107.9 (s, C- 8a), 107.5 (s, C-9a), 154.8 (s, C-10a), 61.7 (q, 5-OMe), 60.8 (q, 6-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]對照基本一致，故鑒定為1,7-二羥基-5,6-二甲氧基口山酮。

化合物4：黃色結(jié)晶；分子式：C15H12O6，相對分子質(zhì)量為288；ESI-MS(m/z)：311 [M+Na]+和289 [M+H]+；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ：12.88 (1H, s, OH-1), 7.65 (1H, t,J=8.3 Hz, H-3), 7.26 (1H, s, H- 8), 7.07 (1H, d,J=7.7 Hz, H- 4), 6.76 (1H, d,J=7.5 Hz, H-2), 3.90 (3H, s, 6-OMe), 3.89 (3H, s, 7-OMe)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ：160.8 (s, C-1), 110.0 (d, C-2), 136.4 (d, C-3), 107.2 (d, C- 4), 134.9 (s, C-5), 146.5 (s, C- 6), 148.2 (s, C-7), 99.4 (d, C- 8), 180.3 (s, C-9), 155.5 (s, C- 4a), 111.2 (s, C- 8a), 107.7 (s, C-9a), 146.3 (s, C-10a), 61.0 (q, 6-OMe), 56.0 (q, 7-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]對照基本一致，故鑒定為1,5-二羥基- 6,7-二甲氧基口山酮。

化合物5：白色粉末；分子式：C15H12O5，相對分子質(zhì)量為272；ESI-MS(m/z)：317 [M+K]+，311 [M+Na]+和289 [M+H]+；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ：7.62 (1H, t,J=8.5 Hz, H-3), 7.39 (1H, s, H- 8), 7.04 (1H, d,J=7.8 Hz, H- 4), 6.90 (1H, d,J=8.2 Hz, H-2), 6.84 (1H, s, H-5), 3.86 (3H, s, 1-OMe), 3.84 (3H, s, 7-OMe)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ：160.0 (s, C-1), 106.1 (d, C-2), 134.4 (d, C-3), 109.5 (d, C- 4), 102.3 (d, C-5), 153.8 (s, C- 6), 146.0 (s, C-7), 105.6 (d, C- 8), 173.6 (s, C-9), 157.4 (s, C- 4a), 114.4 (s, C- 8a), 111.3 (s, C-9a), 150.5 (s, C-10a), 56.1 (q, 1-OMe), 56.8 (q, 7-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]對照基本一致，故鑒定為6-羥基-1,7-二甲氧基口山酮。

化合物6：黃色粉末；分子式：C14H10O4，相對分子質(zhì)量為242；ESI-MS(m/z)：265 [M+Na]+；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：7.67 (1H, t,J=8.5 Hz, H-3), 7.42 (1H, d,J=8.9 Hz, H-5), 7.38 (1H, d,J=2.8 Hz, H- 8), 7.21 (1H, dd,J=9.2, 2.5 Hz, H- 6), 7.08 (1H, d,J=8.3 Hz, H- 4), 6.92 (1H, d,J= 7.9 Hz, H-2), 3.87 (3H, s, 1-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：160.2 (s, C-1), 109.7 (d, C-2), 135.5 (d, C-3), 105.9 (d, C- 4), 118.9 (d, C-5), 123.8 (d, C- 6), 153.9 (s, C-7), 108.9 (d, C- 8), 174.9 (s, C-9), 157.5 (s, C- 4a), 123.1 (s, C- 8a), 111.2 (s, C-9a), 148.1 (s, C-10a), 56.3 (q, 1-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]對照基本一致，故鑒定為7-羥基-1-甲氧基口山酮。

化合物7：黃色晶體；分子式：C16H14O7，相對分子質(zhì)量為318；ESI-MS(m/z)：357 [M+K]+，341 [M+Na]+和319 [M+H]+；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：13.88 (1H, s, OH- 8), 7.58 (1H, t,J= 8.1 Hz, H- 6), 6.95 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 6.70 (1H, d,J=8.0 Hz, H-7), 3.82 (3H, s, 1-OMe)，3.73 (3H, s, 2-OMe)，3.73 (3H, s, 4-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：133.4 (s, C-1), 150.3 (s, C-2), 153.3 (s, C-3), 140.5 (s, C- 4), 107.6 (d, C-5), 137.3 (d, C- 6), 111.4 (d, C-7), 162.9 (s, C- 8), 182.5 (s, C-9), 149.1 (s, C- 4a), 108.6 (s, C- 8a), 109.5 (s, C-9a), 156.6 (s, C-10a), 62.0 (q, 1-OMe), 61.8 (q, 2-OMe), 61.7 (q, 4-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]對照基本一致，故鑒定為3,8-二羥基-1,2,4-三甲氧基口山酮。

化合物8：黃色粉末；分子式：C16H14O7，相對分子質(zhì)量為318；ESI-MS(m/z)：317 [M-H]-；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：13.88 (1H, s, OH- 8), 8.28 (1H, s, OH- 6), 6.46 (1H, s, H- 4), 6.44 (1H, s, H-7), 6.23 (1H, d, s, H-5), 3.81 (3H, s, 1-OMe)，3.79 (3H, s, 2-OMe)，3.74 (3H, s, 3-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：152.5 (s, C-1), 139.7 (s, C-2), 154.1 (s, C-3), 96.3 (d, C- 4), 91.4 (d, C-5), 164.8 (s, C- 6), 99.5 (d, C-7), 162.5 (s, C- 8), 178.9 (s, C-9), 155.9 (s, C- 4a), 108.6 (s, C- 8a), 102.3 (s, C-9a), 155.9 (s, C-10a), 61.3 (q, 1-OMe), 60.1 (q, 2-OMe), 55.6 (q, 3-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]對照基本一致，故鑒定為6,8-二羥基-1,2,3-三甲氧基口山酮。

化合物9：黃色粉末；分子式：C16H14O8，相對分子質(zhì)量為334；ESI-MS(m/z)：335 [M+H]+，357 [M+Na]+和373 [M+K]+；1H NMR (600 MHz, MeOD)δ：6.64 (1H, s, H-5), 6.32 (1H, s, H- 4), 3.95 (3H, s, 8-OMe), 3.88 (3H, s, 7-OMe), 3.85 (3H, s, 2-OMe)；13C NMR (150 MHz, MeOD)δ：154.5 (s, C-1), 131.9 (s, C-2), 155.9 (s, C-3), 94.4 (d, C- 4), 100.6 (d, C-5), 159.8 (s, C- 6), 140.2 (s, C-7), 153.9 (s, C- 8), 181.8 (s, C-9), 159.2 (s, C- 4a), 108.4 (s, C- 8a), 103.8 (s, C-9a), 155.8 (s, C-10a), 60.9 (q, 2-OMe), 61.7 (q, 7-OMe), 62.4 (q, 8-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]對照基本一致，故鑒定為1,3,6-三羥基-2,7,8-三甲氧基口山酮。

化合物10：黃色粉末；分子式：C16H14O6，相對分子質(zhì)量為302；ESI-MS(m/z)：301 [M+H]-；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：7.58 (1H, t,J=8.2 Hz, H- 6), 6.97 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 6.87 (1H, d,J=8.1 Hz, H-7), 6.54 (1H, s, H- 4), 3.84 (3H, s, 8-OMe)，3.79 (3H, s, 1-OMe)，3.74 (3H, s, 2-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：152.8 (s, C-1), 139.2 (s, C-2), 156.4 (s, C-3), 98.9 (d, C- 4), 108.9 (d, C-5), 133.9 (d, C- 6), 106.1 (d, C-7), 159.9 (s, C- 8), 173.1 (s, C-9), 152.8 (s, C- 4a), 112.3 (s, C- 8a), 108.9 (s, C-9a), 156.4 (s, C-10a), 61.4 (q, 1-OMe), 60.5 (q, 2-OMe), 56.0 (q, 8-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]對照基本一致，故鑒定為3-羥基-1,2,8-三甲氧基口山酮。

化合物11：黃色粉末；分子式：C13H8O5，相對分子質(zhì)量為244；ESI-MS(m/z)：243 [M-H]-；1H NMR (400 MHz, 丙酮-d6)δ：12.96 (1H, s, OH-1), 754 (1H, s, H- 8), 7.39 (1H, d,J=8.9 Hz, H-5), 7.29 (1H, d,J=8.8 Hz, H-6), 6.38 (1H, s, H- 4), 6.23 (1H, s, H-2)；13C NMR (100 MHz, 丙酮-d6)δ：164.5 (s, C-1), 98.6 (d, C-2), 166.5 (s, C-3), 94.5 (d, C- 4), 119.6 (d, C-5), 125.0 (d, C- 6), 154.9 (s, C-7), 109.2 (d, C- 8), 181.9 (s, C-9), 158.9 (s, C- 4a), 121.8 (s, C- 8a), 103.3 (s, C-9a), 150.6 (s, C-10a)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]對照基本一致，故鑒定為1,3,7-三羥基口山酮。

化合物12：黃色粉末；分子式：C16H12O8，相對分子質(zhì)量為332；ESI-MS(m/z)：333 [M+H]+；1H NMR (600 MHz, MeOD)δ：6.57 (1H, s, H-5), 6.46 (1H, s, H- 4), 6.10 (2H, s, -O-CH2-O), 3.93 (3H, s, 8-OMe)，3.86 (3H, s, 7-OMe)；13C NMR (150 MHz, MeOD)δ：154.2 (s, C-1), 130.3 (s, C-2), 159.5 (s, C-3), 89.5 (d, C- 4), 100.9 (d, C-5), 159.8 (s, C- 6), 141.2 (s, C-7), 155.3 (s, C- 8), 181.5 (s, C-9), 153.5 (s, C- 4a), 107.4 (s, C- 8a), 106.1 (s, C-9a), 156.3 (s, C-10a), 103.9 (t, -O-CH2-O), 62.3 (q, 8-OMe), 61.6 (q, 7-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25]對照基本一致，故鑒定為1,6-二羥基-2,3-二氧亞甲基-7,8-二甲氧基口山酮。

化合物13：黃色粉末；分子式：C15H12O6，相對分子質(zhì)量為288；ESI-MS(m/z)：311 [M+Na]+和289 [M+H]+；1H NMR (600 MHz, MeOD)δ：13.20 (1H, s, OH-1), 7.55 (1H, t,J=8.4 Hz, H-5), 6.84(1H, d,J=8.1 Hz, H- 4), 6.68(1H, s, H- 8), 6.66 (1H, d,J=11.1 Hz, H- 6), 3.84 (3H, s, 2-OMe), 3.77 (3H, s, 3-OMe)；13C NMR (150 MHz, MeOD)δ：154.5 (s, C-1), 132.8 (s, C-2), 161.6 (s, C-3), 91.9 (d, C- 4), 120.0 (d, C-5), 125.7 (d, C- 6), 156.3 (s, C-7), 109.1 (d, C- 8), 182.3 (s, C-9), 155.5 (s, C- 4a), 121.8 (s, C- 8a), 104.7 (s, C-9a), 151.3 (s, C-10a), 61.1 (q, 2-OMe), 56.9 (q, 3-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[26]對照基本一致，故鑒定為1,7-二羥基-2,3-二甲氧基口山酮。

化合物14：黃色粉末；分子式：C15H12O6，相對分子質(zhì)量為288；ESI-MS(m/z)：287 [M-H]-；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：13.41 (1H, s, OH-1), 8.25 (1H, s, OH-6), 7.57 (1H, t,J=8.1 Hz, H-3), 7.16 (1H, s, H- 8), 7.00 (1H, d,J=7.9 Hz, H- 4), 6.70 (1H, d,J= 8.2 Hz, H-2), 3.85 (3H, s, 7-OMe), 3.83 (3H, s, 5-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：161.0 (s, C-1), 109.5 (d, C-2), 135.4 (d, C-3), 106.8 (d, C- 4), 134.8 (s, C-5), 148.5 (s, C- 6), 147.4 (s, C-7), 98.9 (d, C- 8), 180.2 (s, C-9), 155.4 (s, C- 4a), 117.8 (s, C- 8a), 107.6 (s, C-9a), 134.7 (s, C-10a), 60.2 (q, 5-OMe), 55.7 (q, 7-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[27]對照基本一致，故鑒定為1,6-二羥基-5,7-二甲氧基口山酮。

化合物15：黃色粉末；分子式：C15H12O6，相對分子質(zhì)量為288；ESI-MS(m/z)：289 [M+H]+，311 [M+Na]+和327 [M+K]+；1H NMR (600 MHz, MeOD)δ：7.49 (1H, d,J=2.8 Hz, H- 8), 7.30 (1H, d,J=9.0 Hz, H-5), 7.17 (1H, dd,J=8.8, 2.8 Hz, H- 6), 6.59 (1H, s, H- 4), 3.92 (3H, s, 1-OMe), 3.87 (3H, s, 2-OMe)；13C NMR (150 MHz, MeOD)δ：155.0 (s, C-1), 141.1 (s, C-2), 156.8 (s, C-3), 101.1 (d, C- 4), 119.4 (d, C-5), 123.8 (d, C- 6), 150.0 (s, C-7), 110.0 (d, C- 8), 177.0 (s, C-9), 162.1 (s, C- 4a), 124.2 (s, C- 8a), 110.0 (s, C-9a), 155.0 (s, C-10a), 62.2 (q, 1-OMe), 61.6 (q, 2-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[28]對照基本一致，故鑒定為3,7-二羥基-1,2-二甲氧基口山酮。

化合物16：黃色粉末；分子式：C16H14O7，相對分子質(zhì)量為318；ESI-MS(m/z)：357 [M+K]+，341 [M+Na]+和319 [M+H]+；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：7.17 (1H, d,J=8.9 Hz, H- 6), 7.04 (1H, d,J=8.8 Hz, H-5), 6.27 (1H, s, H- 4), 3.84 (3H, s, 1-OMe)，3.80 (3H, s, 8-OMe)，3.74 (3H, s, 2-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：152.7 (s, C-1), 138.1 (s, C-2), 156.4 (s, C-3), 99.4 (d, C- 4), 112.6 (d, C-5), 121.9 (d, C- 6), 146.3 (s, C-7), 145.3 (s, C- 8), 173.4 (s, C-9), 154.1 (s, C- 4a), 117.2 (s, C- 8a), 108.9 (s, C-9a), 148.8 (s, C-10a), 61.5 (q, 1-OMe), 61.2 (q, 2-OMe), 60.4 (q, 8-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]對照基本一致，故鑒定為3,7-二羥基-1,2,8-三甲氧基口山酮。

化合物17：黃色粉末；分子式：C17H16O6，相對分子質(zhì)量為316；ESI-MS(m/z)：315 [M-H]-；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：7.68 (1H, d,J=2.3 Hz, H- 8), 7.37 (1H, d,J=8.9 Hz, H-5), 7.24 (1H, dd,J=8.8, 2.3 Hz, H- 6), 6.63 (1H, s, H- 4), 4.13 (3H, s, 1-OMe), 4.03 (3H, s, 2-OMe), 3.93 (3H, s, 3-OMe), 3.88 (3H, s, 7-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：153.4 (s, C-1), 139.5 (d, C-2), 158.7 (s, C-3), 96.1 (d, C- 4), 116.5 (s, C-5), 123.6 (s, C- 6), 154.5 (s, C-7), 106.3 (s, C- 8), 175.2 (s, C-9), 156.1 (s, C- 4a), 122.7 (s, C- 8a), 110.3 (s, C-9a), 149.7 (s, C-10a), 61.9 (q, 1-OMe), 61.3 (q, 2-OMe), 56.1 (q, 3-OMe), 55.8 (q, 7-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]對照基本一致，故鑒定為1,2,3,7-四甲氧基口山酮。

化合物18：黃色粉末；分子式：C17H16O8，相對分子質(zhì)量為348；ESI-MS(m/z)：347 [M-H]-；1H NMR (600 MHz, CDCl3)δ：13.32 (1H, s, OH-1), 6.44 (1H, s, H-2), 6.33 (1H, s, H- 4), 4.04 (3H, s, 8-OMe), 4.02 (3H, s, 5-OMe), 3.98 (3H, s, 7-OMe), 3.88 (3H, s, 3-OMe)；13C NMR (150 MHz, CDCl3)δ：163.6 (s, C-1), 97.3 (d, C-2), 166.1 (s, C-3), 92.3 (d, C- 4), 138.0 (s, C-5), 151.6 (s, C- 6), 148.4 (s, C-7), 131.7 (s, C- 8), 180.3 (s, C-9), 156.6 (s, C- 4a), 108.7 (s, C- 8a), 103.6 (s, C-9a), 147.3 (s, C-10a), 62.1 (q, 8-OMe), 61.8 (q, 5-OMe), 61.8 (q, 7-OMe), 55.8 (q, 3-OMe)。該化合物的光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[29]對照基本一致，故鑒定為1,6-二羥基-3,5,7,8-四甲氧基口山酮。

化合物1～18的結(jié)構(gòu)如圖1所示。

2.2 生物活性測定結(jié)果

2.2.1 抗氧化活性 以Vc(IC50= 7 mg/L)作為陽性對照，測試了化合物1～7對ABTS自由基的清除能力，結(jié)果見表1。結(jié)果顯示化合物1和4具有較好的抗氧化活性，其IC50值分別為13和12 mg/L。

表1 化合物1～7對ABTS自由基的清除能力

圖1 化合物1～18的結(jié)構(gòu)

2.2.2 抗菌活性 以萬古霉素(MIC=0.69 μmol/L，MBC=1.38 μmol/L)作為陽性對照，所測定的化合物1～7中僅化合物3對金黃色葡萄球菌表現(xiàn)出一定的抑制作用，其MIC值為217 μmol/L。

3 結(jié) 論

本研究對小遠(yuǎn)志中口山酮化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，從中分離到了18個化合物，除化合物13外，其它化合物均為首次從該植物中分離得到。對分離所得量較多的化合物1～7進(jìn)行抗氧化和抗菌活性測定，發(fā)現(xiàn)化合物4和1有較好的抗氧化活性，對ABTS·的IC50值分別為12和13 mg/L；化合物3對金黃色葡萄球菌有一定的抑制作用，MIC值為217 μmol/L。

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Chemical Constituents and Bioactivities of Xanthones fromPolygalasibiricaL. var.megalophaFr.

ZHOU Lingyun1,2, YU Xiaohong2, GENG Yuanyuan2, HUA Yan2

(1. School of Pharmacy,Wannan Medical College, Wuhu 241002, China；2. College of Forestry, Southwest Forestry University, Kunming 650224, China)

Eighteen compounds were isolated by ethanol extraction, silica gel column chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography, MCI-gel column chromatography and semi-preparative HPLC from the dried roots ofPolygalasibiricaL. var.megalophaFr. Their structures were identified as 1,7-dihydroxy xanthone (1), 3,6-dihydroxy-1,2,7,8-tetramethoxy xanthone (2), 1,7-dihydroxy-5,6- dimethoxy xanthone (3), 1,5-dihydroxy-6,7-dimethoxy xanthone (4), 6-hydroxy-l,7-dimethoxy xanthone (5), 7-hydroxy-1-methoxy xanthone (6), 3,8-dihydroxy- 1,2,4-trimethoxy xanthone (7), 6,8-dihydroxy-1,2,3-trimethoxy xanthone (8), 1,3,6-trihydroxy-2,7,8-trimethoxy- xanthone (9), 3-hydroxy-1,2,8-trimethoxy xanthone (10), 1,3,7-trihydroxy xanthone (11), 1,6-dihydroxy-2,3-methylene-dioxy-7,8-dimethoxy xanthone (12)，1,7-dihydroxy-2,3-dimethoxy xanthone (13), 1,6-dihydroxy-5,7-dimethoxy xanthone (14), 3,7-dihydroxy-1,2-dimethoxy xanthone (15), 3,7- dihydroxy- 1,2,8-trimethoxy xanthone (16), 1,2,3,7-tetramethoxy xanthone (17), 1,6-dihydroxy-3,5,7,8-tetramethoxy xanthone (18) by ESI-MS,1H NMR,13C NMR. All compounds except 13 were isolated from this plant for the first time. The antioxidant and antimicrobial activities of compound 1-7 were studied. And the results showed that the compound 4(IC50= 12 mg/L)and compound 1(IC50= 13 mg/L)showed good ABTS scavenging activity and compound 3(MIC = 217 μmol/L)had certain inhibitory activity againstStaphylococcusaureus.

Polygala.sibiricaL. var.megalophaFr.; xathones; antioxidant; antimicrobial

10.3969/j.issn.0253-2417.2017.02.016

2016- 07- 05

國家自然科學(xué)基金資助項目(31260083)；皖南醫(yī)學(xué)院校重點科研項目培育基金(WK2016Z06)

周凌云(1980— )，男，安徽蕪湖人，博士生，主要從事中藥活性成分研究

*通訊作者：華 燕，女，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事天然藥物化學(xué)的研究；E-mail:huayan1216@163.com。

TQ35

A

0253-2417(2017)02- 0121- 08

周凌云，余小紅，耿圓圓，等.小遠(yuǎn)志中口山酮類化學(xué)成分及生物活性研究[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2017，37(2)：121-128.