• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    響應(yīng)面法優(yōu)化超聲波輔助乙醇/鹽雙水相萃取梔子中京尼平苷

    2017-06-05 15:22:56劉磊磊勝2婕2
    關(guān)鍵詞:雙水干粉梔子

    劉磊磊, 趙 帥, 王 歡, 彭 勝2, 郭 婕2

    (1.吉首大學(xué) 林產(chǎn)化工工程湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 湖南 張家界 427000;2.湖南省植物功能成分利用協(xié)同創(chuàng)新中心, 湖南 張家界 427000)

    響應(yīng)面法優(yōu)化超聲波輔助乙醇/鹽雙水相萃取梔子中京尼平苷

    LIU Leilei

    劉磊磊1,, 趙 帥1, 王 歡1, 彭 勝1,2, 郭 婕1,2

    (1.吉首大學(xué) 林產(chǎn)化工工程湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 湖南 張家界 427000;2.湖南省植物功能成分利用協(xié)同創(chuàng)新中心, 湖南 張家界 427000)

    采用超聲波輔助乙醇/鹽雙水相萃取技術(shù)對(duì)梔子中京尼平苷的提取分離效果進(jìn)行了系統(tǒng)研究,在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)曲面試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行優(yōu)化,進(jìn)一步比較了該方法與超聲波溶劑提取法、熱回流提取法等傳統(tǒng)方法對(duì)京尼平苷的提取效果。結(jié)果表明:超聲波輔助乙醇/鹽雙水相萃取的最佳工藝條件為構(gòu)建10.0 g乙醇/NaH2PO4雙水相體系,其中加入無水乙醇4 mL(即體系中乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為31.56%),NaH2PO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15.00%,超聲波溫度為30 ℃,超聲波時(shí)間為30 min,梔子干粉加入量為0.03 g,上相中京尼平苷的得率為51.77 mg/g。該方法提取時(shí)間短、提取溫度較低,而且得率較高,對(duì)梔子中京尼平苷的提取效果明顯優(yōu)于超聲波溶劑提取法和熱回流提取法等傳統(tǒng)方法。

    雙水相體系;超聲波輔助;梔子;京尼平苷

    茜草科植物梔子的果實(shí)是我國(guó)一味傳統(tǒng)中藥,是衛(wèi)生部公布的第1批藥食兩用資源,具有護(hù)肝、利膽、降壓、鎮(zhèn)靜、止血、消腫等作用,中醫(yī)臨床上常用于治療黃疸型肝炎、扭挫傷、高血壓、糖尿病等[1-3]。京尼平苷(GP)屬于環(huán)烯醚萜類結(jié)構(gòu),是梔子的主要藥效成分,隨產(chǎn)地和采摘時(shí)間不同含GP為3%~8%,GP對(duì)消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和中樞神經(jīng)疾病有顯著療效,具有抗癌、抗炎和治療軟組織損傷的作用[4-8]。GP的傳統(tǒng)提取分離方法,一般從梔子干果或梔子黃色素廢液中提取,選用甲醇、乙醇、水等極性溶劑作為提取溶劑,采用冷浸、滲漏、熱回流等方法提取,活性炭脫色,乙酸乙酯脫脂,再用柱層析進(jìn)一步分離純化,洗脫液用丙酮重結(jié)晶可得京尼平苷單體,一般100 g梔子可得到2.0 g GP單體[9]。由此可見,傳統(tǒng)分離方法步驟繁多、繁瑣耗時(shí),產(chǎn)率偏低,成本較高,同時(shí)存在溶劑殘留問題。雙水相萃取技術(shù)(ATPS)作為一種新型液/液萃取分離技術(shù),具有易于放大、可連續(xù)化操作、易集成技術(shù)、綠色環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)[10]。自從1956年Albertsson[11]首次采用聚合物/聚合物ATPS技術(shù)實(shí)現(xiàn)葉綠素的分離以來,ATPS技術(shù)在黃酮、生物堿、萜類及多酚等天然產(chǎn)物的分離純化中有著廣泛的應(yīng)用[12-13]。近年來,ATPS技術(shù)被報(bào)道用于GP的提取分離。Pan等[14]采用ATPS技術(shù)從500 g梔子中得到純度為77%的GP產(chǎn)品39 g,同時(shí)發(fā)現(xiàn)增加鹽濃度和減少PE62濃度均能增加GP在鹽相的分配系數(shù)。ATPS組成一般有2種聚合物、聚合物和鹽、離子液體和鹽、小分子親水有機(jī)溶劑和鹽等體系。特別是親水有機(jī)溶劑/鹽ATPS體系,具有溶劑容易回收、成本低廉、易于放大等優(yōu)點(diǎn),在天然活性成分分離中具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),與超聲波及微波技術(shù)聯(lián)用后,利用超聲波與微波的空化作用、機(jī)械作用和熱效應(yīng)原理,實(shí)現(xiàn)提取分離同步完成,簡(jiǎn)化傳統(tǒng)工藝,能有效提高提取效率,在中藥活性成分的分離中應(yīng)用較多,比如,降香中鷹嘴豆芽素A[15]、丹參中紫草酸B[16]、金銀花中黃酮和糖[17]、木豆根中染料木素和芹菜素[18]。本研究構(gòu)建多種親水性有機(jī)溶劑/鹽ATPS體系,輔助超聲波提取技術(shù)提取分離梔子中GP,采用單因素試驗(yàn)和響應(yīng)曲面優(yōu)化提取分離工藝,并與超聲波溶劑提取法、熱回流提取法進(jìn)行了對(duì)比,旨在尋找適合梔子中京尼平苷提取分離的時(shí)間短、能耗低、得率高的有效方法。

    1 實(shí) 驗(yàn)

    1.1 原料、試劑與儀器

    梔子購于安徽省亳州市貢藥飲片廠(批號(hào):140624),粉碎,80 ℃烘干后放置在干燥器內(nèi),避光常溫保存,備用(京尼平苷為5.8%);京尼平苷對(duì)照品(批號(hào):141115,HPLC測(cè)得純度≥98%),上海如吉生物科技有限公司;無水乙醇、正丙醇、異丙醇和無機(jī)鹽均為分析純;甲醇,HPLC色譜純?cè)噭?,購于天津康科德科技有限公司;水為去離子水。

    LC-20A高效液相色譜儀,日本島津公司;SB-25-12DT型超聲波清洗儀,寧波新藝生物科技股份有限公司;TDL- 40B型離心機(jī),上海安亭科學(xué)儀器廠;AL204型萬分之一天平,梅特勒-托利多(上海)有限公司。

    圖1 雙水相相圖Fig.1 The phase diagrams of aqueous two-phase at room temperature

    1.2 雙水相相圖的繪制

    為了確定小分子醇和2種無機(jī)鹽水溶液的分相范圍,采用濁點(diǎn)法[19]繪制了正丙醇、異丙醇、乙醇 3種小分子醇與NaH2PO4和(NH4)2SO4兩種無機(jī)鹽所組成的雙水相相圖,結(jié)果見圖1。如圖1所示,圖中描繪的曲線為雙節(jié)線,在曲線上方區(qū)域內(nèi)為分相區(qū)域,在曲線下方為均相區(qū)域。在分相區(qū)域內(nèi),上相為富集小分子醇相,下相為富集無機(jī)鹽相,由此確定分相時(shí)醇及鹽的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。實(shí)驗(yàn)過程中,先配置一定濃度無機(jī)鹽水溶液,通過滴定管逐滴滴加小分子醇,逐漸增加小分子醇的用量來改變濁點(diǎn)位置,從而繪制雙節(jié)線。當(dāng)小分子醇加入過多時(shí),由于鹽析作用導(dǎo)致無機(jī)鹽結(jié)晶析出,影響雙水相體系組成的確定。

    1.3 超聲波輔助雙水相萃取梔子中京尼平苷

    在15 mL具塞PP離心管中精確加入一定質(zhì)量的無機(jī)鹽和去離子水,充分溶解后,加入一定質(zhì)量的無水乙醇,使得雙水相體系總質(zhì)量為10.0 g。稱取一定質(zhì)量的梔子干粉加入到該雙水相體系中,在超聲波作用(功率為240 W)下于一定溫度下提取一定時(shí)間;然后進(jìn)行離心處理(4 000 r/min,15 min),以加快雙水相體系分相速率,離心后上下兩相間界面清晰(GP主要富集于上相中),梔子殘?jiān)扛患谏舷聝上嘀g。將上下相溶液全部移出置于有刻度的10 mL玻璃試管內(nèi),分別記錄上、下相體積。上、下相溶液過0.45 μm有機(jī)濾膜,并進(jìn)行HPLC檢測(cè)。通過式(1)~(3)計(jì)算分配系數(shù)(K)、相比(R)和得率(Y)。

    K=Ct/Cb

    (1)

    R=Vt/Vb

    (2)

    Y=CtVt/(1 000md)

    (3)

    式中:Ct、Cb—上、下兩相中GP的質(zhì)量濃度,mg/L;Vt、Vb—上、下兩相溶液的體積,mL;md—梔子加入量,g。

    1.4 GP的HPLC檢測(cè)

    GP色譜條件:液相色譜柱為Agilent TC C18柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流動(dòng)相為甲醇- 0.1%磷酸水溶液,體積比35∶65;檢測(cè)波長(zhǎng)238 nm;流速1.0 mL/min;柱溫35 ℃;進(jìn)樣量20 μL。

    精密稱取一定量的GP對(duì)照品于5 mL容量瓶中,用50%甲醇水溶液溶解并定容,得到1 046 mg/L的 GP對(duì)照品儲(chǔ)備液,4 ℃保存,備用。采用逐級(jí)稀釋法將對(duì)照品儲(chǔ)備液稀釋,制得質(zhì)量濃度分別為 2.1、10.7、26.8、66.9、167.4、418.4和1 046 mg/L GP的對(duì)照品溶液。按上述色譜條件進(jìn)行HPLC檢測(cè),以對(duì)照品質(zhì)量濃度(mg/L)為橫坐標(biāo)(X),色譜峰面積為縱坐標(biāo)(Y),繪制對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)行線性回歸分析,確定回歸方程為:Y=30 188X+71 261(R2=0.999 9,n=8),線性范圍為2.1~1 046 mg/L。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同條件對(duì)超聲波輔助雙水相萃取效果的影響

    2.1.1 雙水相體系 在前期研究中,考察了乙醇與NaH2PO4、(NH4)2SO4、K3PO4、K2HPO4、KH2PO4和NaCl共6種無機(jī)鹽的分相情況[20],結(jié)果顯示:NaCl溶液和乙醇不能形成雙水相體系,KH2PO4在水中溶解度偏小,其他4種無機(jī)鹽可以和乙醇形成穩(wěn)定的雙水相體系。由于K3PO4和K2HPO4的水溶液顯弱堿性,而GP分子對(duì)堿性溶液敏感,所以重點(diǎn)考察了(NH4)2SO4和NaH2PO4兩種無機(jī)鹽的分相能力。文獻(xiàn)報(bào)道[21],正丙醇、異丙醇和乙醇3種小分子醇的分相能力為:正丙醇>異丙醇>乙醇,與圖1結(jié)果一致。因此,選用(NH4)2SO4和NaH2PO4作為分相無機(jī)鹽,正丙醇、異丙醇和乙醇作為分相有機(jī)溶劑,構(gòu)建雙水相體系,分別對(duì)梔子中GP進(jìn)行提取分離,由醇、無機(jī)鹽和水構(gòu)建10.0 g雙水相體系,加入0.1 g梔子干粉,超聲波輔助萃取溫度30 ℃,超聲波作用時(shí)間30 min,結(jié)果見表1。由表1可知,乙醇/(NH4)2SO4和乙醇/NaH2PO4對(duì)梔子中GP具有較好的分離效果,但是(NH4)2SO4在構(gòu)建的雙水相體系中很容易結(jié)晶析出,而且乙醇/NaH2PO4所組成的雙水相體系可以得到較高的得率、分配系數(shù)和相比,所以選用乙醇/NaH2PO4為最佳ATPS體系。

    2.1.2 NaH2PO4質(zhì)量分?jǐn)?shù) 為了優(yōu)化NaH2PO4的質(zhì)量分?jǐn)?shù),分別稱取1.50~2.70 g(即質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%~27%)的NaH2PO4與質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%乙醇構(gòu)建10.0 g雙水相體系,加入0.1 g梔子干粉,溫度30℃,超聲波時(shí)間30 min,結(jié)果見表1。由表1可知,隨著NaH2PO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加,GP的得率先由47.68 mg/g增加到48.14 mg/g,后又下降至39.06 mg/g。由此可以推斷,隨著NaH2PO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加,GP分子與無機(jī)鹽之間的靜電作用增大,導(dǎo)致GP易富集到上相;同時(shí)相比變小,乙醇相體積減小,導(dǎo)致上相中GP得率先升高后下降。所以選擇NaH2PO4的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18%。

    表1 不同醇/無機(jī)鹽雙水相體系對(duì)梔子中GP提取分離效果的影響

    2.1.3 乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù) 由圖1可知,當(dāng)乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)低于20%時(shí),需要較高質(zhì)量分?jǐn)?shù)的NaH2PO4水溶液才能形成雙水相體系,而當(dāng)乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于36%時(shí),雙水相體系中有NaH2PO4析出。為了優(yōu)化乙醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù),向含有1.80 g(18%)NaH2PO4的雙水相體系中,加入2.40~3.20 g(24%~32%)乙醇和 0.1 g梔子干粉,溫度30 ℃,超聲波提取30 min,結(jié)果見圖2(a)。由圖2(a)可知,當(dāng)乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)由24%增加到32%時(shí),分配系數(shù)和相比呈現(xiàn)明顯增大趨勢(shì),而GP的得率在乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%時(shí)達(dá)到最大。由此可知,乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)是影響GP提取分離的重要影響因素。所以選用18%NaH2PO4/30%乙醇雙水相體系進(jìn)行后續(xù)研究。

    2.1.4 提取溫度 在由18%NaH2PO4與30%乙醇組成的雙水相體系中,加入0.1 g梔子干粉,設(shè)定超聲波作用時(shí)溫度在20 ℃到60 ℃之間,提取30 min,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖2(b)。由圖2(b)可知,溫度由20 ℃上升到30 ℃時(shí),GP的得率明顯增加;溫度在30 ℃到50 ℃變化時(shí),GP的得率變化不明顯,當(dāng)溫度達(dá)到60 ℃時(shí),GP的得率明顯下降。原因可能是升高溫度可以增強(qiáng)超聲波傳質(zhì)作用,增大GP的得率;而溫度過高時(shí),梔子中更多雜質(zhì)溶出,抑制了GP的溶出,導(dǎo)致GP的得率減小?;诘湍芎囊螅x用30 ℃作為超聲波提取溫度。

    2.1.5 提取時(shí)間 在確定雙水相體系組成為18%NaH2PO4和30%乙醇,加入0.1 g 梔子干粉,提取溫度為30 ℃條件下,選擇提取時(shí)間為20~60 min,考察時(shí)間對(duì)GP得率的影響,結(jié)果見圖2(c)。由圖2(c)可知,在提取時(shí)間為30 min時(shí),分配系數(shù)、相比和得率均達(dá)到最大值;提取時(shí)間超過30 min后,分配系數(shù)、相比和得率均逐漸下降。原因可能是延長(zhǎng)提取時(shí)間,可以將GP更充分溶出,萃取更加徹底;但是過長(zhǎng)的提取時(shí)間導(dǎo)致更多的雜質(zhì)溶出,影響雙水相萃取的選擇性分配,使GP得率下降。所以提取時(shí)間選用30 min。

    2.1.6 梔子干粉加入量 在上述優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下,梔子干粉加入量選擇為0.03~0.50 g,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖2(d)。由圖2(d)可知,梔子干粉加入量對(duì)相比影響不大;梔子干粉加入量在0.03~0.40 g范圍內(nèi),分配系數(shù)逐漸降低,當(dāng)梔子干粉加入量為0.50 g時(shí),分配系數(shù)略有升高;隨著梔子干粉加入量的增加,GP得率則是先增加到50.18 mg/g,后下降至41.02 mg/g。這可能是由于梔子干粉加入量為0.05 g時(shí),GP在上相中溶解達(dá)到飽和,增加梔子干粉加入量,上相中GP的量仍然保持不變,所以導(dǎo)致GP得率先增加后下降[22]。此外,隨著梔子干粉加入量的增加,體系中GP分子和雜質(zhì)也都增加,減弱了雙水相體系的分離效果,導(dǎo)致GP得率下降。所以梔子干粉加入量選用0.05 g。

    圖2 不同條件對(duì)分配系數(shù)、相比和得率的影響

    2.2 響應(yīng)曲面法優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

    依據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,在超聲波提取溫度30 ℃和提取時(shí)間30 min條件下,選擇NaH2PO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)(X1)、乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)(X2)和梔子干粉加入量(X3)為自變量,GP得率(Y)為應(yīng)變量,采用Desgin-Expert 8.05b軟件進(jìn)行3因素3水平響應(yīng)曲面回歸分析,響應(yīng)曲面分析試驗(yàn)因素設(shè)計(jì)及試驗(yàn)結(jié)果見表2。

    表2 響應(yīng)曲面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

    對(duì)回歸方程進(jìn)行方差分析,結(jié)果見表3。

    表3 回歸模型方差分析

    響應(yīng)曲面圖可以用來解釋變量之間的相互作用以及用來測(cè)定在最大響應(yīng)條件下每個(gè)變量的最佳水平。依據(jù)二次多元回歸方程,固定其中某一個(gè)因素,可以作出另外2個(gè)因素的響應(yīng)曲面圖,結(jié)果見圖3。由圖3可知,在所選范圍內(nèi)存在極值點(diǎn),即響應(yīng)面最高點(diǎn),其中圖3(a)中曲線坡度較陡,表明NaH2PO4和乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)交互作用明顯,而圖3(b)和3(c)中圖曲面平緩,表明梔子干粉加入量和NaH2PO4以及梔子干粉加入量和乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)之間的交互作用較小,這與方差分析結(jié)果一致。由Design-Expert軟件對(duì)模型方程進(jìn)行GP得率的最大化分析,得到GP的最大響應(yīng)值(Y)時(shí),因素X1、X2、X3對(duì)應(yīng)的值分別為15.00%、31.19%、0.03 g,GP得率最大預(yù)測(cè)值為52.28 mg/g。

    圖3 響應(yīng)曲面圖

    2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

    為檢測(cè)響應(yīng)曲面法所得結(jié)果的可靠性,進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)??紤]到實(shí)驗(yàn)的可操作性,加入無水乙醇 4 mL(即體系中乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為31.56%),NaH2PO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)15.00%,梔子干粉加入量0.03 g,超聲波溫度為30 ℃,提取時(shí)間為30 min,進(jìn)行6次平行實(shí)驗(yàn),GP得率分別為51.94、51.83、52.14、51.56、51.59和51.54 mg/g,平均值為51.77 mg/g,RSD為0.24%,接近模型最佳預(yù)測(cè)值52.28 mg/g,由此可知該模型可靠。

    2.4 與傳統(tǒng)提取方法對(duì)比

    對(duì)比實(shí)驗(yàn)中選擇《中華人民共和國(guó)藥典》2015版一部中梔子中GP的提取方法和經(jīng)典的熱回流提取作為參考。《中華人民共和國(guó)藥典》中提取方法:稱取梔子干粉1.00 g,加50%甲醇水溶液10 mL,超聲波處理40 min,過濾,定容至25 mL,濾液進(jìn)行HPLC定量檢測(cè);熱回流提取法:稱取梔子干粉1.00 g,加20 mL去離子水,溫度設(shè)定為100 ℃,回流時(shí)間為1 h,回流次數(shù)為2次,過濾,定容至100 mL,濾液進(jìn)行HPLC定量檢測(cè)。3種提取方法的比較結(jié)果如表4所示。由表4可知,熱回流提取法提取效果最好,超聲波輔助乙醇/鹽雙水相萃取(UAATPE)法次之,《藥典》提取法最差。進(jìn)一步對(duì)比3種提取方法的提取時(shí)間和提取溫度可知,UAATPE法所用提取時(shí)間最短、提取溫度較低,而且得率與熱回流提取法相差不大。由此可知,UAATPE法提取梔子中GP具有提取效果良好、提取時(shí)間短、能耗低等優(yōu)點(diǎn)。

    3 結(jié) 論

    3.1 采用超聲波輔助乙醇/鹽雙水相萃取(UAATPE)梔子中京尼平苷(GP),在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選出最優(yōu)的雙水相體系及最佳工藝條件為:在10.0 g乙醇/NaH2PO4雙水相體系中,加入無水乙醇4 mL(即體系中乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為31.56%)、NaH2PO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)15.00%、超聲波溫度 30 ℃、時(shí)間30 min、梔子干粉加入量0.03 g,上相中GP的得率高達(dá)51.77 mg/g。

    3.2 該UAATPE技術(shù)對(duì)梔子干粉中GP的提取涉及液-固萃取和液-液萃取2個(gè)過程,在液-固分離中,超聲波作用加快了提取速度;在液-液萃取中,利用雙水相萃取技術(shù)的選擇性分配原理將GP主要富集在上相中,而雜質(zhì)和全部不溶物被保留在水相或兩相界面間,從而實(shí)現(xiàn)梔子中GP的提取和分離同步完成。與《中華人民共和國(guó)藥典》中超聲波溶劑提取法及熱回流提取法等傳統(tǒng)方法相比,UAATPE技術(shù)提取時(shí)間最短、提取溫度較低,而且得率也較高,作為一種多功能萃取方法,具有提取時(shí)間短、能耗低等優(yōu)點(diǎn),提取分離效果優(yōu)于傳統(tǒng)方法。

    [1] 中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典:第一部[M]. 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2015: 248. Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People′s Republic of China:Volume Ⅰ[M]. Beijing: China Medicine Science and Technology Press, 2015: 248.

    [2] TANG W C, EISENBRAND G. Chinese Drugs of Plant Origin-GardeniajasminoidesEillis [M]. Berlin: Springer-Verlag, 1992: 539-543.

    [3] CHANG W L, WANG H Y, SHI L S, et al. Immunosuppressive iridoids from the fruits ofGardeniajasminoides[J]. Journal of Natural Products, 2005, 68(11): 1683-1685.

    [4] DENG Y H, GUAN M F, XIE X X, et al. Geniposide inhibits airway inflammation and hyperresponsiveness in a mouse model of asthma [J]. International Immunopharmacology, 2013, 17(3): 561-567.

    [5] CHEN J Y, WU H, LI H, et al. Anti-inflammatory effects and pharmacokinetics study of geniposide on rats with adjuvant arthritis [J]. International Immunopharmacology, 2015, 24(1): 102-109.

    [6] FU Y H, LIU B, LIU J H, et al. Geniposide, fromGardeniajasminoidesEllis, inhibits the inflammatory response in the primary mouse macrophages and mouse models [J]. International Immunopharmacology, 2012, 14(4): 792-798.

    [7] WANG G F, WU S Y, XU W, et al. Geniposide inhibits high glucose-induced cell adhesion through the NF-κB signaling pathway in human umbilical vein endothelial cells [J]. Acta Pharmacologica Sinica, 2010, 31(8): 953-962.

    [8] WANG C J, WANG S W, LIN J K. Suppressive effect of geniposide on the hepatotoxicity and hepatic DNA binding of aflatoxin B1 in rats [J]. Cancer Letters, 1991, 60(2): 95-102.

    [9] 鄭禮勝, 倪娜, 劉向前, 等. 京尼平苷和京尼平研究及應(yīng)用現(xiàn)狀 [J]. 藥物評(píng)價(jià)研究, 2012, 35(4): 289-298. ZHENG L S, NI N, LIU X Q, et al. Study and application of geniposide and genipin [J]. Drug Evaluation Research, 2012, 35(4): 289-298.

    [10] RATANAPONGLEKA K. Recovery of biological products in aqueous two phase systems [J]. International Journal of Chemical Engineering and Applications, 2010, 1(2): 191-198.

    [11] ALBERTSSON P A. Partition of Cell Particles and Macromolecules [M]. New York: Wiley, 1986.

    [12] FEDERICO R R, JORGE B, OSCAR A, et al. Aqueous two-phase affinity partitioning systems: Current applications and trends [J]. Journal of Chromatography A, 2012, 1244: 1-13.

    [13] 劉磊磊, 李秀娜, 趙帥. 雙水相萃取在中藥活性成分提取分離中的應(yīng)用進(jìn)展 [J]. 中草藥, 2015, 46(5): 766-773. LIU L L, LI X N, ZHAO S. Advances in application of aqueous two-phase system in separation and purification of active constituents from Chinese materia medica [J]. Chinese Traditional Herb Drugs, 2015, 46(5): 766-773.

    [14] PAN I H, CHIU H H, LU C H, et al. Aqueous two-phase extraction as an effective tool for isolation of geniposide from gardenia fruit [J]. Journal of Chromatography A, 2002, 977(2): 239-246.

    [15] MA F Y, GU C B, LI C Y, et al. Microwave-assisted aqueous two-phase extraction of isoflavonoids fromDalbergiaodoriferaT. Chen leaves [J]. Separation and Purification Technology, 2013, 115: 136-144.

    [16] GUO Y X, HAN J, ZHANG D Y, et al. An ammonium sulfate/ethanol aqueous two-phase system combined with ultrasonication for the separation and purification of lithospermic acid B fromSalviamiltiorrhizaBunge [J]. Ultrasonics Sonochemistry, 2012, 19(4): 719-724.

    [17] LIU Y, HAN J, WANG Y, et al. Selective separation of flavones and sugars from honeysuckle by alcohol/salt aqueous two-phase system and optimization of extraction process [J]. Separation and Purification Technology, 2013, 118: 776-783.

    [18] ZHANG D Y, ZU Y G, FU Y J, et al. Aqueous two-phase extraction and enrichment of two main flavonoids from pigeon pea roots and the antioxidant activity [J]. Separation and Purification Technology, 2013, 102: 26-33.

    [19] ASENJO J A, ANDREWS B A. Aqueous two-phase systems for protein separation: Phase separation and applications [J]. Journal of Chromatography A, 2012, 1238: 1-10.

    [20] 趙帥, 劉磊磊, 郭婕, 等. 雙水相氣浮溶劑浮選法分離富集杜仲葉中京尼平苷酸 [J]. 中草藥, 2015, 46(16): 2400-2406. ZHAO S, LIU L L, GUO J, et al. Separation and enrichment of geniposidic acid from leaves ofEucommiaulmoides by aqueous two-phase flotation [J]. Chinese Traditional Herb Drugs, 2015, 46(16): 2400-2406.

    [21] JIANG X M, LU Y M, TAN C P, et al. Combination of aqueous two-phase extraction and cation-exchange chromatography: New strategies for separation and purification of alliin from garlic powder [J]. Journal of Chromatography B, 2014, 957: 60-67.

    [22] FAN J P,CAO J, ZHANG X H, et al. Optimization of ionic liquid based ultrasonic assisted extraction of puerarin from radixPuerariaelobataeby response surface methodology [J]. Food Chemistry, 2012, 135(4): 2299-2306.

    Optimization of Ultrasonic Assisted Extraction of Geniposide from Gardenia Fruits by Using Ethanol/Salt Aqueous Two-phase System with Response Surface Method

    LIU Leilei1,2, ZHAO Shuai1, WANG Huan1, PENG Sheng1,2, GUO Jie1,2

    (1.Key Laboratory of Hunan Forest Products and Chemical Industry Engineering, Jishou University, Zhangjiajie 427000, China;2.Hunan Co-innovation Center for Utilization of Botanical Functional Ingredients, Zhangjiajie 427000, China)

    An ultrasonic-assisted technology combined with ethanol/NaH2PO4aqueous two-phase system (UAATPE) was developed for the extraction and purification of geniposide (GP) from gardenia fruits. Based on the results of single factor experiments, the Box-Behnken Design combined with response surface methodology was applied to optimize the operating parameters. Furthermore, the comparisons with ultrasonic solvent extraction, heat reflux extraction, and ultrasonic-assisted aqueous two-phase extraction were also assessed. GP was mainly extracted into the top ethanol-rich phase. And the optimal experimental conditions were 10.0 g ethanol/salt aqueous two-phase system,NaH2PO4mass fraction 15.00%, ethanol 4 mL(ethanol mass fraction 31.56%), extraction temperature 30 ℃, extraction time 30 min and sample loading 0.03 g. And the maximum yield of GP in top phase was 51.77 mg/g. The comparison results indicated that ultrasonic-assisted aqueous two-phase extraction was more efficient and environmentally friendly than ultrasonic solvent extraction and heat reflux extraction, for the technique had the shorter extraction time, the lower extraction temperature and the higher extraction efficiency.

    aqueous two-phase systems; ultrasonic assisted; gardenia fruits; geniposide

    10.3969/j.issn.0253-2417.2017.02.012

    2016- 06-27

    國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31560105);湖南省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(14JJ6037)

    劉磊磊(1984— ),男,河南汝州人,講師,博士,主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)與分離新方法研究;E-mail:liull126@126.com。

    TQ35

    A

    0253-2417(2017)02- 0093- 08

    劉磊磊,趙帥,王歡,等.響應(yīng)面法優(yōu)化超聲波輔助乙醇/鹽雙水相萃取梔子中京尼平苷[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè),2017,37(2):93-100.

    猜你喜歡
    雙水干粉梔子
    清熱消暑山梔子
    梔子(趙潤(rùn)懷 攝)
    超聲輔助雙水相提取大黃中蒽醌類成分
    干粉滅火器
    六月梔子香
    金色年華(2016年11期)2016-02-28 01:42:20
    菊葉香藜干粉熏香抑菌研究
    西藏科技(2015年12期)2015-09-26 12:13:50
    少年情懷,梔子初心
    醇與離子液體二元雙水相體系萃取四環(huán)素
    溫度誘導(dǎo)雙水相提取分離白藜蘆醇苷的研究
    FZXA型懸掛式干粉滅火裝置(不銹鋼防爆型)
    久久久精品免费免费高清| 一区二区三区激情视频| 美女主播在线视频| 久久人妻熟女aⅴ| 久久天堂一区二区三区四区| 成年av动漫网址| 午夜激情av网站| 观看美女的网站| 精品卡一卡二卡四卡免费| 日日爽夜夜爽网站| 国产精品人妻久久久影院| 国产成人啪精品午夜网站| 日本vs欧美在线观看视频| 国产国语露脸激情在线看| 大话2 男鬼变身卡| 一个人免费看片子| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| av天堂久久9| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产有黄有色有爽视频| 人妻一区二区av| 在线观看人妻少妇| 在线 av 中文字幕| 久久国产亚洲av麻豆专区| 成人三级做爰电影| 七月丁香在线播放| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 成年人免费黄色播放视频| 久久久国产欧美日韩av| 伊人久久国产一区二区| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲成色77777| 国产精品.久久久| 精品免费久久久久久久清纯 | 日韩视频在线欧美| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 色精品久久人妻99蜜桃| 日韩av不卡免费在线播放| 精品福利永久在线观看| 久久久久久久久久久久大奶| 久久性视频一级片| 一区二区三区精品91| 国产免费福利视频在线观看| 交换朋友夫妻互换小说| 成人毛片60女人毛片免费| 久久免费观看电影| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 久久久欧美国产精品| 人妻 亚洲 视频| 国产又色又爽无遮挡免| 国产av码专区亚洲av| 免费人妻精品一区二区三区视频| 精品一区二区免费观看| 丰满乱子伦码专区| 国产精品女同一区二区软件| 中国国产av一级| 大片免费播放器 马上看| 好男人视频免费观看在线| 色婷婷久久久亚洲欧美| 9热在线视频观看99| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 午夜免费观看性视频| 亚洲第一青青草原| 久久免费观看电影| 日日撸夜夜添| 日韩大片免费观看网站| 午夜免费鲁丝| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲av综合色区一区| 下体分泌物呈黄色| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 最近手机中文字幕大全| 日日爽夜夜爽网站| 久久影院123| 国产精品偷伦视频观看了| 色网站视频免费| 亚洲欧美色中文字幕在线| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久精品国产a三级三级三级| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 18禁观看日本| 久久久久久久大尺度免费视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 成年人午夜在线观看视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久精品久久精品一区二区三区| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲欧洲日产国产| 精品一区在线观看国产| 十分钟在线观看高清视频www| 日韩伦理黄色片| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 一区在线观看完整版| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 成年美女黄网站色视频大全免费| 久久久亚洲精品成人影院| 日韩一本色道免费dvd| 一级,二级,三级黄色视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 欧美激情高清一区二区三区 | 2018国产大陆天天弄谢| 少妇人妻久久综合中文| 性少妇av在线| 男女国产视频网站| 亚洲国产欧美网| 中文字幕精品免费在线观看视频| 秋霞在线观看毛片| 伊人久久国产一区二区| 男女床上黄色一级片免费看| 在线看a的网站| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 99香蕉大伊视频| 国产97色在线日韩免费| av一本久久久久| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲av福利一区| 在线观看三级黄色| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| svipshipincom国产片| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产视频首页在线观看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 中文字幕高清在线视频| 午夜福利影视在线免费观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久久久久久国产电影| 国产又色又爽无遮挡免| 男的添女的下面高潮视频| 欧美中文综合在线视频| 少妇 在线观看| 搡老岳熟女国产| 日韩欧美一区视频在线观看| 色94色欧美一区二区| 两性夫妻黄色片| xxx大片免费视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产精品一二三区在线看| kizo精华| 午夜福利网站1000一区二区三区| 色综合欧美亚洲国产小说| 中文字幕精品免费在线观看视频| 成年av动漫网址| 国产伦理片在线播放av一区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 青草久久国产| 国产人伦9x9x在线观看| 最近2019中文字幕mv第一页| 亚洲成人国产一区在线观看 | 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产成人精品在线电影| 只有这里有精品99| 国产亚洲欧美精品永久| 毛片一级片免费看久久久久| 久久精品久久久久久久性| 国产av一区二区精品久久| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 中文欧美无线码| 午夜激情久久久久久久| 男男h啪啪无遮挡| 999精品在线视频| 热99久久久久精品小说推荐| 99精国产麻豆久久婷婷| 91aial.com中文字幕在线观看| 少妇的丰满在线观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 97精品久久久久久久久久精品| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲av日韩在线播放| 七月丁香在线播放| 青春草国产在线视频| 成人免费观看视频高清| 国产亚洲最大av| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲国产欧美一区二区综合| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 久久99精品国语久久久| 国产精品嫩草影院av在线观看| 深夜精品福利| 国产亚洲欧美精品永久| 中文字幕亚洲精品专区| av网站免费在线观看视频| 看免费av毛片| 两个人免费观看高清视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 无限看片的www在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 操美女的视频在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 亚洲av在线观看美女高潮| 久久久久久久久久久久大奶| 日韩免费高清中文字幕av| 免费在线观看完整版高清| 一级毛片 在线播放| 99热全是精品| 黄频高清免费视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 免费在线观看完整版高清| 国产97色在线日韩免费| 午夜精品国产一区二区电影| 丝袜人妻中文字幕| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 另类亚洲欧美激情| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产成人欧美| 日韩av不卡免费在线播放| 精品少妇内射三级| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 七月丁香在线播放| 性色av一级| 成年美女黄网站色视频大全免费| 亚洲成人手机| 黄片小视频在线播放| 十分钟在线观看高清视频www| 丰满饥渴人妻一区二区三| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产视频首页在线观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 99精品久久久久人妻精品| 欧美日韩精品网址| 免费观看av网站的网址| 亚洲成人手机| 久久鲁丝午夜福利片| www.精华液| 伊人久久国产一区二区| 99香蕉大伊视频| 午夜激情av网站| 免费高清在线观看日韩| 亚洲情色 制服丝袜| 天天影视国产精品| 日日撸夜夜添| www.自偷自拍.com| 最黄视频免费看| 国产黄色视频一区二区在线观看| 成年美女黄网站色视频大全免费| 国产99久久九九免费精品| 欧美黑人精品巨大| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 久久久欧美国产精品| av片东京热男人的天堂| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产激情久久老熟女| av女优亚洲男人天堂| 国产亚洲欧美精品永久| 国产精品国产三级国产专区5o| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 一级毛片我不卡| 国产午夜精品一二区理论片| av福利片在线| 日韩欧美精品免费久久| 日韩视频在线欧美| 久久99精品国语久久久| 黄色怎么调成土黄色| 日日啪夜夜爽| 亚洲人成电影观看| 热re99久久国产66热| 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲av成人精品一二三区| av女优亚洲男人天堂| 老汉色av国产亚洲站长工具| 一本色道久久久久久精品综合| 麻豆乱淫一区二区| 久久鲁丝午夜福利片| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 亚洲精品成人av观看孕妇| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产成人精品久久久久久| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 一级黄片播放器| 伦理电影大哥的女人| 性少妇av在线| 9热在线视频观看99| 美女高潮到喷水免费观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产精品蜜桃在线观看| 国产精品一区二区在线观看99| 一级片'在线观看视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产毛片在线视频| 操出白浆在线播放| 校园人妻丝袜中文字幕| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 性少妇av在线| 水蜜桃什么品种好| 久久av网站| 性少妇av在线| www日本在线高清视频| 人妻 亚洲 视频| 久久性视频一级片| 9191精品国产免费久久| 国产精品久久久av美女十八| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 丰满乱子伦码专区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 色网站视频免费| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 激情视频va一区二区三区| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产伦人伦偷精品视频| 日韩av免费高清视频| 少妇 在线观看| 岛国毛片在线播放| 精品久久蜜臀av无| 免费黄色在线免费观看| 黄片小视频在线播放| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 伊人久久国产一区二区| 满18在线观看网站| 观看美女的网站| 晚上一个人看的免费电影| 精品免费久久久久久久清纯 | 欧美xxⅹ黑人| 搡老乐熟女国产| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 激情五月婷婷亚洲| 久久久久久人妻| 日韩一本色道免费dvd| 精品久久久精品久久久| 在线天堂中文资源库| 欧美另类一区| tube8黄色片| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 久久青草综合色| 欧美黄色片欧美黄色片| 黄片播放在线免费| 曰老女人黄片| 又大又黄又爽视频免费| 男女下面插进去视频免费观看| 99久久综合免费| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 一区二区三区激情视频| 秋霞伦理黄片| 在线观看免费日韩欧美大片| 成人三级做爰电影| 亚洲色图综合在线观看| 老司机影院成人| 97在线人人人人妻| 大香蕉久久网| 观看av在线不卡| 精品少妇内射三级| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 777米奇影视久久| 婷婷色综合www| 免费黄网站久久成人精品| 女性生殖器流出的白浆| 欧美在线一区亚洲| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 国产精品.久久久| 国产极品粉嫩免费观看在线| 午夜免费鲁丝| 亚洲精品国产区一区二| 亚洲国产日韩一区二区| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产日韩欧美视频二区| 91精品三级在线观看| 视频区图区小说| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久精品国产亚洲av高清一级| 最新在线观看一区二区三区 | 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 在现免费观看毛片| 精品一品国产午夜福利视频| 国产黄色免费在线视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲av综合色区一区| 久久久久久久久久久免费av| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产1区2区3区精品| 日本欧美视频一区| 久久久国产一区二区| 日韩视频在线欧美| 免费av中文字幕在线| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲人成网站在线观看播放| 青春草亚洲视频在线观看| 久久天堂一区二区三区四区| 精品一区在线观看国产| 久久亚洲国产成人精品v| 久久热在线av| 亚洲国产日韩一区二区| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产精品av久久久久免费| 久久精品国产综合久久久| 国产av精品麻豆| 日韩免费高清中文字幕av| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产成人精品久久久久久| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 人成视频在线观看免费观看| 欧美成人午夜精品| 国产精品无大码| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 黄片无遮挡物在线观看| 如何舔出高潮| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲欧美一区二区三区国产| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 日本欧美视频一区| 熟女av电影| av网站免费在线观看视频| 最近最新中文字幕免费大全7| 在线 av 中文字幕| 亚洲精品一二三| 99热网站在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 老司机深夜福利视频在线观看 | 国产精品免费大片| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 免费观看人在逋| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 99久久人妻综合| 成人手机av| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 只有这里有精品99| 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲av日韩在线播放| 狂野欧美激情性xxxx| 精品亚洲成国产av| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 搡老乐熟女国产| 久久久久精品人妻al黑| 久久精品国产综合久久久| 在线看a的网站| 亚洲欧美激情在线| 操出白浆在线播放| 搡老岳熟女国产| 国产精品欧美亚洲77777| 国产成人一区二区在线| 在线观看免费高清a一片| 夫妻性生交免费视频一级片| 美女国产高潮福利片在线看| 国产精品成人在线| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲精品一二三| 久久 成人 亚洲| 香蕉丝袜av| 老司机在亚洲福利影院| 成人黄色视频免费在线看| 丝瓜视频免费看黄片| xxx大片免费视频| 久久久欧美国产精品| 高清不卡的av网站| 黄频高清免费视频| 国产乱来视频区| av福利片在线| 天天影视国产精品| 久久午夜综合久久蜜桃| 老司机影院毛片| 国产老妇伦熟女老妇高清| 这个男人来自地球电影免费观看 | 中文字幕色久视频| 国产不卡av网站在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 免费观看av网站的网址| 欧美成人午夜精品| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 美女午夜性视频免费| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲人成77777在线视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲人成电影观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 多毛熟女@视频| 国产在线视频一区二区| 在现免费观看毛片| 亚洲熟女精品中文字幕| 午夜影院在线不卡| 精品第一国产精品| 色网站视频免费| 久热爱精品视频在线9| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 9色porny在线观看| 人体艺术视频欧美日本| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 母亲3免费完整高清在线观看| 在线观看www视频免费| 国产麻豆69| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产av国产精品国产| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 水蜜桃什么品种好| 少妇被粗大猛烈的视频| 久久狼人影院| 久久97久久精品| 精品免费久久久久久久清纯 | 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 日韩视频在线欧美| 国产99久久九九免费精品| 黄频高清免费视频| 国产精品久久久久久精品古装| 99热网站在线观看| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲欧美一区二区三区久久| 又大又爽又粗| 涩涩av久久男人的天堂| 国产精品女同一区二区软件| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲熟女毛片儿| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产又色又爽无遮挡免| 一级毛片我不卡| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| av线在线观看网站| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产精品一区二区在线观看99| 国产精品一区二区精品视频观看| 午夜老司机福利片| 考比视频在线观看| av卡一久久| 午夜日本视频在线| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲国产精品一区三区| 欧美激情高清一区二区三区 | 免费不卡黄色视频| 亚洲,欧美精品.| 一本大道久久a久久精品| 久久性视频一级片| 国产精品久久久av美女十八| 国产99久久九九免费精品| 亚洲精品aⅴ在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 大片电影免费在线观看免费| www.av在线官网国产| 亚洲国产精品成人久久小说| 又大又黄又爽视频免费| 另类亚洲欧美激情| 9191精品国产免费久久| 18在线观看网站| 丝袜喷水一区| av国产精品久久久久影院| 成人毛片60女人毛片免费| 三上悠亚av全集在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产成人精品在线电影| 韩国高清视频一区二区三区| 最近的中文字幕免费完整| 国产一区二区在线观看av| 亚洲第一青青草原| 欧美国产精品va在线观看不卡| 欧美日韩视频精品一区| 日韩视频在线欧美| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲精品视频女| videos熟女内射| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 精品免费久久久久久久清纯 | 欧美日韩综合久久久久久| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产97色在线日韩免费| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲精品日本国产第一区| 少妇被粗大猛烈的视频| 精品人妻在线不人妻| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 在线观看免费日韩欧美大片| 精品一区二区三卡| 色播在线永久视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产又爽黄色视频| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 中文字幕av电影在线播放| 又大又爽又粗| 悠悠久久av| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产精品久久久av美女十八| 国产激情久久老熟女| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 人人妻人人澡人人看| 中文字幕亚洲精品专区| 99热国产这里只有精品6| 搡老岳熟女国产| 中国国产av一级| 精品酒店卫生间| 美女国产高潮福利片在线看| 久久99精品国语久久久| 精品人妻一区二区三区麻豆| 精品午夜福利在线看| h视频一区二区三区| 欧美另类一区|