Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子在老年大腸癌患者中的作用

黃文海，俞建平，姚君良，李炳

1.復(fù)旦大學(xué)附屬金山醫(yī)院普外科,上海201508；2.復(fù)旦大學(xué)附屬金山醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，上海201508

Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子在老年大腸癌患者中的作用

黃文海1，俞建平1，姚君良1，李炳2

1.復(fù)旦大學(xué)附屬金山醫(yī)院普外科,上海201508；2.復(fù)旦大學(xué)附屬金山醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，上海201508

目的探討Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子在老年大腸癌患者中的作用。方法選取48例65歲以上的大腸癌患者（A組）、32例65歲以下的大腸癌患者（B組）、同期健康體檢的48例65歲以上健康者（C組）、32例65歲以下的健康者（D組），分別用流式細(xì)胞儀和Bio-Plex懸浮芯片技術(shù)檢測(cè)外周血中Th17細(xì)胞比例及IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22和IL-23水平，用免疫熒光共聚焦顯微鏡分析大腸癌患者癌組織和癌旁組織中IL-17表達(dá)水平。結(jié)果 大腸癌患者外周血中Th17細(xì)胞比例高于健康者（＜0.05），老年患者高于中青年患者（＜0.05）。大腸癌患者外周血中IL-17A、IL-21、IL-22和IL-23水平高于健康者（＜0.05），老年患者IL-17A和IL-23水平高于中青年患者（＜0.05），而老年患者IL-21和IL-22水平與中青年患者比較無(wú)明顯差異（＞0.05）；IL-17F水平在各組人群中無(wú)明顯差異（＞0.05）。癌組織IL-17表達(dá)高于癌旁組織（＜0.05），老年患者IL-17表達(dá)水平明顯高于中青年患者（＜0.05）。結(jié)論 Th17細(xì)胞與大腸癌及年齡有相關(guān)性，可能在老年大腸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。

Th17細(xì)胞；細(xì)胞因子；老年；大腸癌

大腸癌是一種嚴(yán)重威脅人類健康的消化道惡性腫瘤，近年來(lái)發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。腫瘤細(xì)胞具有無(wú)限增殖、逃避凋亡的特性，以及促進(jìn)血管生成、侵襲組織和轉(zhuǎn)移的能力，在這種復(fù)雜的過(guò)程中，腫瘤微環(huán)境中的非腫瘤成分可以參與其調(diào)節(jié)[1-2]，其中免疫微環(huán)境與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。老年患者大腸癌比較高發(fā)，其原因可能是隨著年齡的增加，免疫系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)及功能發(fā)生一定的變化，體內(nèi)存在一定的促炎-抗炎失衡，使機(jī)體處于一種長(zhǎng)期慢性低度炎癥狀態(tài)，促進(jìn)炎癥相關(guān)性癌癥的發(fā)生[3-4]。CD4+T細(xì)胞在腫瘤免疫應(yīng)答中起重要的輔助作用，Th17細(xì)胞是一群以分泌IL-17為主要特征的CD4+T細(xì)胞亞群，參與多種炎癥和自身免疫性疾病，近年來(lái)，Th17細(xì)胞在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用越來(lái)越引起人們的關(guān)注。很多研究證實(shí)，在肝癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌等患者腫瘤組織內(nèi) Th17細(xì)胞比例明顯升高[5-8]，提示Th17細(xì)胞可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但仍有很多爭(zhēng)議。本文通過(guò)檢測(cè)老年大腸癌患者、中青年大腸癌患者、老年健康者、中青年健康者外周血中Th17細(xì)胞比例及其細(xì)胞因子水平以及老年大腸癌患者、中青年大腸癌患者癌組織、癌旁組織內(nèi)IL-17表達(dá)水平，探討Th17細(xì)胞在老年大腸癌患者中的相關(guān)作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月—2014年12月在復(fù)旦大學(xué)附屬金山醫(yī)院普外科手術(shù)的48例65歲以上大腸癌患者（A組）、32例65歲以下大腸癌患者（B組）、同期健康體檢的48例65歲以上健康者（C組）及32例65歲以下健康者（D組）。其中A組男性30例，女性18例，年齡65～85歲，平均（69.8±7.8）歲；B組男性19例，女性13例，年齡47～64歲，平均（58.4±7.8）歲；C組男性29例，女性19例，年齡65～84歲，平均（70.4±5.6）歲；D組男性15例，女性17例，年齡45～63歲，平均（60.5±6.2）歲。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):大腸癌患者均經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)，實(shí)驗(yàn)前簽署知情同意書(shū)，檢查資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：大腸癌患者接受過(guò)放療、化療及免疫治療，患有免疫性及感染性疾病，有嚴(yán)重心肝肺腎疾病者。

1.3 方法抽取每位研究對(duì)象清晨空腹外周血3m L，用于外周血 Th17細(xì)胞比例、血清 IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22、IL-23水平測(cè)定。術(shù)中腫瘤組織切下后及時(shí)切取癌組織和癌旁組織（距腫瘤邊緣至少5 cm），用于檢測(cè) IL-17表達(dá)水平。外周血 Th17細(xì)胞比例采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行測(cè)定，血清IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22、IL-23水平采用 Bio-Plex懸浮芯片技術(shù)檢測(cè)，IL17表達(dá)水平采用免疫熒光共聚焦顯微鏡分析。比較各組相關(guān)指標(biāo)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用 檢驗(yàn)或方差分析。＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組外周血中Th17細(xì)胞比例比較 A組患者的外周血Th17細(xì)胞比例高于B組、C組和D組(＜0.05)，B組患者的外周血Th17細(xì)胞比例高于C組和D組（＜0.05），C組與D組之間外周血Th17細(xì)胞比例無(wú)明顯差異（＞0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 各組外周血中Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子水平比較血清IL-17A、IL-23水平A組高于B組、C組和D組（＜0.05），B組高于C組和D組（＜0.05），C組和D組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05）。血清IL-17F水平 4組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05）。血清IL-21、IL-22水平 A組、B組均高于 C組、D組（＜0.05），但A、B組和C、D組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 A、B 2組癌組織和癌旁組織中IL-17表達(dá)比較通過(guò)免疫熒光共聚焦顯微鏡分析，A、B 2組癌組織中 IL-17表達(dá)均高于癌旁組織，A組癌組織中 IL-17表達(dá)高于B組，2組癌旁組織中IL-17表達(dá)無(wú)明顯差異。見(jiàn)圖1。

3 討論

大腸癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤，病因尚未完全清楚，治療上主要為手術(shù)治療為主的綜合治理，但是療效有限，特別在中晚期患者中的治療效果并不理想，尋找大腸癌的發(fā)病機(jī)制對(duì)大腸癌的治療具有一定意義。長(zhǎng)期慢性炎癥增加癌癥的患病風(fēng)險(xiǎn)，同慢性肝炎與肝癌、慢性胃炎與胃癌的關(guān)系一樣，炎癥性腸病增加大腸癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[9]，可以說(shuō)大腸癌也屬于炎癥相關(guān)性腫瘤之一。免疫系統(tǒng)在癌癥的免疫監(jiān)視和調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)方面發(fā)揮重要作用。老年人具有炎性衰老和免疫衰老等衰老改變的特點(diǎn)，老年人的炎性衰老特點(diǎn)使老年人處于慢性低度炎癥狀態(tài)，使老年人發(fā)生腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)增加。

表1 各組外周血中Th17細(xì)胞比例比較（%）

表2 各組外周血中Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子水平比較

圖1 大腸癌組織和癌旁組織中IL-17表達(dá)比較

CD4+T細(xì)胞在整個(gè)細(xì)胞免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作用，Th17細(xì)胞是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一類新型效應(yīng) CD4+T細(xì)胞，具有獨(dú)特的分化發(fā)育機(jī)制[10]，能夠分泌細(xì)胞因子，表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子，在免疫病理學(xué)反應(yīng)中具有重要意義[11-12]。本研究發(fā)現(xiàn)，外周血中 Th17細(xì)胞的比例，大腸癌患者明顯高于健康人群，且老年患者要高于中青年患者，提示 Th17細(xì)胞與大腸癌及年齡有一定相關(guān)性。

Th17細(xì)胞主要通過(guò)其分泌的細(xì)胞因子來(lái)發(fā)揮效應(yīng)，如IL-17、IL-21、IL-22、IL-23、IL-6、TNF-等，不同的細(xì)胞因子產(chǎn)生的效應(yīng)不同，這可能是 Th17細(xì)胞在腫瘤免疫中作用不確定的原因。有些研究認(rèn)為Thl7細(xì)胞促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)[13]，而另一些研究則認(rèn)為抑制腫瘤進(jìn)展[14]，甚至有學(xué)者提出Thl7細(xì)胞在腫瘤細(xì)胞免疫中不起任何作用，只是作為一個(gè)“旁觀者”存在[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，IL-17A、IL-21、IL-22、IL-23在大腸癌患者外周血中的水平要明顯高于健康人群，并且IL-17A、IL-23在老年患者外周血中的水平高于中青年患者。IL-17A是Th17細(xì)胞最主要的效應(yīng)細(xì)胞因子，IL-23在 Th17細(xì)胞的初始分化中并不起主要作用，但其存在卻有利于維持Th17細(xì)胞的增殖和存活。最近的證據(jù)表明 IL-23/IL-17軸參與了多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展[16-17]，提示 Th17細(xì)胞可能在大腸癌的發(fā)生發(fā)展，尤其在老年患者中發(fā)揮作用。

Th17細(xì)胞在大腸癌患者中水平增高可能有兩方面的原因:一方面是因?yàn)槟[瘤微環(huán)境可以為 Th17細(xì)胞的分化和擴(kuò)增起到促進(jìn)作用，比如腫瘤細(xì)胞高表達(dá)IL-1、IL-6、IL-8和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子等，均可以促進(jìn) Th17細(xì)胞的分化和增殖；另一方面腫瘤微環(huán)境中存在著大量的趨化因子，有利于 Th17細(xì)胞向腫瘤組織聚集[18]。本次研究發(fā)現(xiàn)大腸癌組織中IL-17表達(dá)高于癌旁組織，并且老年患者癌組織中IL-17表達(dá)高于中青年患者，而 IL-17主要由 Th17細(xì)胞產(chǎn)生，提示Th17細(xì)胞可能在某些趨化因子的作用下向大腸癌病變部位聚集，然后分泌相關(guān)的細(xì)胞因子發(fā)揮效應(yīng)。但Th17細(xì)胞對(duì)老年大腸癌到底是促進(jìn)作用還是抑制作用，尚需進(jìn)一步研究。

探討 Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子在老年大腸癌中的作用機(jī)制將可能有助于尋找抑制炎癥性腸病向腫瘤轉(zhuǎn)變的新方法，并且通過(guò)免疫治療，更好的提高大腸癌的診療效果，為老年腫瘤與免疫方向研究提供新的思路。

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The Role of Th17 Cells and Related Cytokines in Elderly Patients w ith Colorectal Cancer

Huang Wenhai1,Yu Jianping1,Yao Junliang1,Li Bin2*
1.Department of Surgery;2.Central Laboratory;Jinshan Hospital A ffiliated to Fudan University,Shanghai,201508,P.R.China

Objective To investigate the roleof Th17 cellsand related cytokinesin elderly patientsw ith colorectalcancer. Methods 48 patients w ith colorectal cancer over 65 years old were enrolled in group A,32 patients w ith colorectal cancer under 65 years old in group B,48 norm over 65 years old in group Cand 32 norm under 65 years old in group D;flow cytometry and Bio-Plex suspension chip technology were applied in detecting the proportion of Th17 cells and the levels of IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22、IL-23 in peripheral blood of the patients and the norm while the immunofluorescence confocal microscope was applied in detecting the levels of IL-17 in cancer tissue and adjacent tissue.Results The percentage of Th17 cells in peripheral blood of the patients w ith colorectal cancer was higher than that of the norm (＜0.05),and that in the elderly patients was higher than thatin theyoung patients(＜0.05);the levelsof IL-17A,IL-21,IL-22and IL-23 in peripheralblood of thepatients w ith colorectal cancer were higher than those of the norm (＜0.05);the levels of IL-17A,IL-23 in elderly patients were higher than those in young patients(＜0.05);there existed no significant difference in the levels of IL-21,IL-22 between the elderly patients and the young patients(＞0.05),and no obvious difference in the level of IL-17F among the 4 groups;the expression of IL-17 in cancer tissue was higher than that in adjacent tissues(＜0.05),and that in the elderly patients was higher than that in young patients(＜0.05).Conclusions Th17 cells are correlated to colorectal cancer and the age of patients,which may play a certain role in the occurrence and progress of colorectal cancer in elderly patients.

Th17 cells;cytokines;elderly;colorectal cancer

2016-11-21）

（本文編輯：夏世金）

上海市金山區(qū)衛(wèi)計(jì)委優(yōu)秀青年人才培養(yǎng)項(xiàng)目（JWKJKTYQ-201205）

李炳，電子信箱：13788998975@126.com

*Corresponding author:Li Bing,E-mail:13788998975@126.com