高效液相色譜法測定武力拔寒散中橙皮苷的含量＊

趙磊，孫艷濤，張晗，馬琳琳，于浪天

(1.四平市食品藥品檢驗所，吉林四平 136000； 2.吉林師范大學(xué)化學(xué)學(xué)院，吉林四平 136000；3.吉林師范大學(xué)環(huán)境友好材料制備與應(yīng)用省部共建教育部重點實驗室，吉林四平 136000；4.中國醫(yī)科大學(xué)，南京 211198)

高效液相色譜法測定武力拔寒散中橙皮苷的含量＊

趙磊1，孫艷濤2，3，張晗2，3，馬琳琳2，3，于浪天4

(1.四平市食品藥品檢驗所，吉林四平 136000； 2.吉林師范大學(xué)化學(xué)學(xué)院，吉林四平 136000；3.吉林師范大學(xué)環(huán)境友好材料制備與應(yīng)用省部共建教育部重點實驗室，吉林四平 136000；4.中國醫(yī)科大學(xué)，南京 211198)

建立液相色譜測定武力拔寒散中橙皮苷含量的方法。以甲醇為流動相A，以冰乙酸–水(1∶300)為流動相B，進行梯度洗脫，檢測波長為284 nm，流量為1.0 mL／min，柱溫為30℃。橙皮苷的質(zhì)量濃度在1.190 3～119.03 μg／mL范圍與色譜峰面積線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，檢出限為300 ng／g。樣品加標(biāo)回收率為95.00%～98.50%，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.0%(n=6)。該方法簡單、快速、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可為全面評價和控制武力拔寒散制劑的質(zhì)量提供依據(jù)。

武力拔寒散；花椒；橙皮苷；高效液相色譜法

武力拔寒散是一種中藥制劑，它具有祛風(fēng)散寒，活血通絡(luò)的功效，主要用于治療感受風(fēng)寒，筋骨麻木，肩背酸痛，腰痛寒腿，飲食失調(diào)，胃寒作痛，腎寒精冷，子宮寒冷，行經(jīng)腹痛，寒濕帶下等癥［1–3］。武力拔寒散制劑收錄于中國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中(WS3–B–1751–94)［4］，現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有性狀鑒別與顯微鑒別。為了更好地控制與評價該制劑，需要對該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進行進一步的研究，建立一種快速、準(zhǔn)確的檢測方法。

武力拔寒散是由白花菜子、花椒(青椒去目)二味藥經(jīng)提取加工制成的制劑，花椒是《中華人民共和國藥典》收載的常用中藥材［5–7］。青花椒中主要含有揮發(fā)油、酰胺類物質(zhì)和生物堿等成分［8–11］，具有多種藥理活性［12–14］。研究表明，橙皮苷具有抗氧化、抗炎、抗癌、抗菌、抗病毒等功效，目前尚未見有關(guān)花椒中橙皮苷檢測方法的報道?；ń分袚]發(fā)油成分容易受外界條件影響，因此測定橙皮苷的含量可以更好地控制花椒的質(zhì)量，進而能夠更好地對武力拔寒散藥品進行質(zhì)量監(jiān)控，提高用藥安全。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：1260型，美國安捷倫科技有限公司；

超純水器：2001B型，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；

電子天平：BT125D型，感量為0.1／0.01 mg，上海精密科學(xué)儀器有限公司天平儀器廠；

超聲波清洗器：SK5200H型，功率為300 W，頻率為60 Hz，上?？茖?dǎo)儀器有限公司；

橙皮苷對照品：批號為110712–201316，含量為95.38%，中國食品藥品檢定研究院；

橙皮苷對照品溶液：0.119 0 mg／mL，精密稱取橙皮苷對照品5.95 mg，置于50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至標(biāo)線，混勻；

甲醇：HPLC級，賽默飛世爾(中國)有限公司；

武力拔寒散：(1)批號為3101029，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，(2)按處方工藝［白花菜子600 g、花椒(青椒去目)500 g，將以上二味藥材粉碎成粗粉，過篩，混勻］自制兩批，批號分別為20151107，20151209；

實驗用水為超純水，符合GB／T 6682–2008 《分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法》要求。

1.2 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB–C18柱［250 mm×4.6 mm，5 μm，安捷倫科技(中國)有限公司］；檢測波長：284 nm；柱溫：30 ℃；進樣體積：5 μL；流動相流量：1.0 mL／min；流動相：A組分為甲醇，B組分為冰乙酸–水(1∶300)，梯度洗脫，洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

1.3 樣品處理

取武力拔寒散樣品，混勻，精密稱量1.122 g，置于具塞錐形瓶中，加入甲醇100 mL，超聲處理30 min，放冷，過濾，用30 mL甲醇分別洗滌殘渣及容器，合并濾液，蒸干，殘渣用甲醇溶解后，定容至10 mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液分析。

1.4 陰性樣品處理

按照武力拔寒散處方工藝，去除花椒(去目)藥材，白花菜子粉碎成粗粉，過篩，混勻，精密稱量0.605 g，置于具塞錐形瓶中，加入甲醇100 mL，超聲處理30 min，放冷，過濾，用30 mL甲醇分別洗滌殘渣及容器，合并濾液，蒸干，殘渣用甲醇溶解后，定容至10 mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取條件選擇

分別以甲醇、20%甲醇、水作為提取溶劑進行試驗，結(jié)果表明甲醇的提取率最高，回收率達到96.91%。以甲醇為提取溶劑，提取時間分別選擇5，10，20，30和40 min進行提取試驗，結(jié)果表明，隨著提取時間的增加提取率隨之增高，提取30 min以后提取率趨于穩(wěn)定，因此提取時間定為30 min。

2.2 色譜條件優(yōu)化

參照文獻［12–15］，選擇ODS色譜柱作為分析色譜柱，實驗發(fā)現(xiàn)規(guī)格為(250 mm×4.6 mm，5 μm)的色譜柱優(yōu)于(150 mm×4.6 mm，5 μm)的色譜柱。分別以甲醇–冰乙酸水溶液(1∶300)、甲醇–水、甲醇–0.1%磷酸作為流動相進行試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)色譜峰形差別較大，采用甲醇為流動相(A)，以冰乙酸–水(1∶300)為流動相(B)效果最佳。由于樣品中雜質(zhì)峰多，為了縮短分析時間，采用梯度洗脫方式，對強保留物質(zhì)進行洗脫。洗脫初始甲醇為38%，運行35 min，保證橙皮苷色譜峰完全分離。36～40 min甲醇占比為100%，目的是沖洗色譜柱，洗脫強保留物質(zhì)，減少分析時間。41～70 min甲醇占比38%，該階段為平衡色譜柱時間。在優(yōu)化的色譜條件下，橙皮苷對照品溶液、武力拔寒散樣品溶液、陰性樣品溶液的色譜圖分別見圖1～圖3。由圖1～圖3可見，橙皮苷與樣品中其它成分色譜峰分離良好，色譜峰形比較理想，可以進行定量分析。

圖1 橙皮苷對照品溶液、寒散樣品溶液、陰性樣品溶液高效液相色譜圖

2.3 線性關(guān)系和檢出限

精密吸取橙皮苷對照品溶液0.1，3，5，7，10 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至標(biāo)線，混勻，配制成質(zhì)量濃度分別為1.190，35.70，59.50，83.3，119.0 μg／mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，依次取溶液注入液相色譜儀，按照1.2色譜條件對樣品進行測定，以色譜峰面積(y)為縱坐標(biāo)，溶液的質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo)，進行線性回歸，以橙皮苷色譜峰的信噪比(S／N)為3時計算橙皮苷的檢出限，線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限結(jié)果見表2。

表2 線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限

2.4 精密度試驗

取批號為3101029的武力拔寒散樣品6份，按照1.3方法制備樣品溶液，并依照1.2色譜條件進行測定，計算樣品中橙皮苷的含量及其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表3。由表3可知，本法測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.0%，表明本法測量精密度良好。

表3 樣品中橙皮苷含量測定結(jié)果

2.5 穩(wěn)定性試驗

取批號為3101029的武力拔寒散樣品1.0758 g，按照1.3方法制備樣品溶液，分別放置3，6，9，12，15 h，按照1.2色譜條件測定色譜峰面積，考察方法的穩(wěn)定性，測定結(jié)果見表4。

表4 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

由表4可知，橙皮苷色譜峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.76%(n=5)，表明樣品溶液在15 h內(nèi)基本穩(wěn)定，說明該分析方法穩(wěn)定性良好。

2.6 加標(biāo)回收試驗

精密稱取已知含量的武力拔寒散樣品6份(批號為3101029，取樣量按約含橙皮苷0.4 mg)，分別依次精密加入以甲醇配制的質(zhì)量濃度為0.119 0 mg／mL的橙皮苷對照品溶液3，5，5，10，10 mL，按1.3方法制備加標(biāo)樣品溶液，并依次進行測定，計算橙皮苷的標(biāo)回收率，結(jié)果見表5。由表5可知，橙皮苷的加標(biāo)回收率為95.00%～98.50%，表明本方法測定結(jié)果準(zhǔn)確度較高。

表5 加標(biāo)回收試驗結(jié)果

3 結(jié)語

參照液相色譜法測定橙皮苷的色譜條件，利用高效液相色譜法定量分析制劑中含量較高的橙皮苷。采用甲醇–冰乙酸水溶液(1∶300)作為流動相進行梯度洗脫，所得色譜峰峰形對稱，可以有效地縮短分析時間，滿足分析要求。該方法具有專屬性強、精密度高、重復(fù)性好的特點，為控制武力拔寒散制劑的質(zhì)量提供理論依據(jù)。

［1］ 馮西恩，岳劍平.武力拔寒散致接觸性皮炎1例［J］.中國麻風(fēng)皮膚病雜志，2006，22(1): 87.

［2］潘桂光，高文平.武力拔寒散配合理療及內(nèi)服藥治療面神經(jīng)麻痹［J］.中國臨床醫(yī)藥研究雜志，2003，92: 9 205.

［3］宣引根，張國慶，王勇飛，等.中藥外敷法治療強直性脊柱炎68例臨床觀察［J］.中醫(yī)外治雜志，2003，12(2): 6–7.

［4］衛(wèi)生部.藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑(第9冊)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1994: 90.

［5］羅雅杰，曹瑜，何強，等.三種花椒抗氧化活性對比研究［J］.中國調(diào)味品，2016，41(2): 26–30.

［6］姚佳，蒲彪.青花椒的研究進展［J］.中國調(diào)味品，2010，35(6): 35–39.

［7］王宇，巨勇，王釗.花椒屬植物中生物活性成分研究近況［J］.中草藥，2002，33(7): 666–670.

［8］石雪萍，張衛(wèi)明.紅花椒和青花椒的揮發(fā)性化學(xué)成分比較研究［J］.中國調(diào)味品，2010，35(2): 102–105.

［9］賈利蓉，趙志峰，雷紹榮，等.漢源青花椒揮發(fā)油的成分分析［J］.食品與機械，2008，24(3): 105–108.

［10］羅凱，朱琳，闞建全.氣相色譜法測定不同產(chǎn)地花椒揮發(fā)油中芳樟醇和檸檬烯含量的研究［J］.中國糧油學(xué)報，2012，27(8): 119–123.

［11］郭文生，王忠華，郭放，等.主客體包結(jié)法選擇分離青花椒揮發(fā)油中的化學(xué)成分［J］.化學(xué)學(xué)報，2007，65(23): 2 731–2 737.

［12］羅雅杰，曹瑜，何強，等.三種花椒抗氧化活性對比研究［J］.中國調(diào)味品，2016，41(2): 26–30.

［13］麻琳，何強，趙志峰，等.三種花椒精油的化學(xué)成分及其抑菌作用對比研究［J］.中國調(diào)味品，2016，41(8): 11–16.

［14］韓勝男，李妍，張曉杭，等.花椒揮發(fā)油的提取工藝優(yōu)化及抗腫瘤活性分析［J］.食品科學(xué)，2014，35(18): 13–16.

［15］錢妍，趙春景.反相高效液相色譜法測定胃舒顆粒中橙皮苷的含量［J］.中國藥房，2005，16(2): 140–141.

［16］王福霞，彭柳，康紅英，等. HPLC法測定開胸順氣丸中橙皮苷的含量［J］.中國藥房，2008，19(18): 1 413–1 414.

［17］劉永剛，盧建秋，劉珍清，等.高效液相色譜法測定藿香正氣水中橙皮苷等4種成分的含量［J］.時珍國醫(yī)國藥，2006，17(10): 1 947–1 948.

［18］張明昶，邵進明，彭小冰，等.反相高效液相色譜法測定不同制法華蓋散中橙皮苷的含量［J］.時珍國醫(yī)國藥，2010，21(1): 22–23.

一種基于光學(xué)傳感器的紙張?zhí)妓徕}含量測定的新方法與裝置

公開(公告)號：CN106525743A 公開(公告)日：2017.03.22

申請(專利權(quán))人：福建農(nóng)林大學(xué)

摘要本發(fā)明涉及碳酸鈣含量測定的技術(shù)領(lǐng)域，公開一種基于光學(xué)傳感器的紙張?zhí)妓徕}含量測定的新方法與裝置。該裝置包括用于分散紙張和加酸酸化的酸化反應(yīng)槽、沉淀劑儲存槽、計量泵、溶液混合器、設(shè)有比色皿的光學(xué)檢測系統(tǒng)和計算機，所述酸化反應(yīng)槽和沉淀劑儲存槽分別通過設(shè)有閥門和計量泵的管道連通溶液混合器，溶液混合器連通比色皿，所述比色皿設(shè)有出液口。該方法通過對紙張進行酸化處理后，對酸化溶液進行光譜檢測得到所述紙張中碳酸鈣含量。本發(fā)明裝置結(jié)構(gòu)簡單，操作簡便，極大的改善了檢測的工作強度，減小人工操作的誤差。能夠快速實現(xiàn)準(zhǔn)確測定紙張中的碳酸鈣含量，檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度高。

一種基于膜富集比色快速檢測紙質(zhì)包裝材料中甲醛含量的方法

公開(公告)號：CN106525839A 公開(公告)日：2017.03.22

申請(專利權(quán))人：上海煙草集團有限責(zé)任公司;上海煙草包裝印刷有限公司

摘要本發(fā)明提供一種基于膜富集比色快速檢測紙質(zhì)包裝材料中甲醛含量的方法，包括以下步驟：(1)取甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，加入顯色試劑，獲得標(biāo)準(zhǔn)顯色溶液；(2)將標(biāo)準(zhǔn)顯色溶液中顯色產(chǎn)物富集至過濾膜上，與色卡比較，制作比色卡；(3)將紙質(zhì)包裝材料試樣加水混合，浸泡提取后移取上層清液，加入顯色試劑，獲得顯色溶液；(4)將顯色溶液中的顯色產(chǎn)物富集至過濾膜上，獲得顯色過濾膜；(5)將顯色過濾膜與比色卡進行比色，從而獲得試樣中甲醛含量。本發(fā)明提供的上述方法，首次將膜富集與比色法進行結(jié)合用于甲醛的檢測中，能夠快速測定紙質(zhì)包裝材料及其油墨中甲醛含量，提高測定準(zhǔn)確性和靈敏度。

一種測定合金鋼中痕量氧、氮元素的方法

公開(公告)號：CN106525757A 公開(公告)日：2017.03.22

申請(專利權(quán))人：陜西宏遠(yuǎn)航空鍛造有限責(zé)任公司

摘要本發(fā)明涉及一種測定合金鋼中痕量氧、氮含量的方法，包括步驟1：試驗條件準(zhǔn)備；步驟2：制備試樣；步驟3：空白試驗；步驟4：氧氮分析儀校準(zhǔn)(4.1：使用鋼中氧氮含量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校準(zhǔn)，4.2：測定鋼中氧氮含量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)確定校準(zhǔn))；步驟5：測定試樣中痕量氧氮含量。本發(fā)明提高了測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，解決了合金鋼中痕量氧、氮含量的測定難題。

一種采用B-Z化學(xué)振蕩反應(yīng)測定重酒石酸去甲腎上腺素含量的方法

公開(公告)號：CN106525926A 公開(公告)日：2017.03.22

申請(專利權(quán))人：遼寧石油化工大學(xué)

摘要本發(fā)明涉及一種采用B-Z化學(xué)振蕩法測定重酒石酸去甲腎上腺素含量的方法，通過對影響振蕩反應(yīng)的4種主要因素，(NH4)2Ce(SO4)3，KBrO3，HOOCCH2COOH，H2SO4濃度進行探討，確定了B-Z反應(yīng)中重酒石酸去甲腎上腺素檢測的最佳濃度條件；進而考察了最佳的振蕩反應(yīng)溫度。在最佳實驗條件下，通過重酒石酸去甲腎上腺素對B-Z化學(xué)振蕩體系擾動的大小與其濃度成線性關(guān)系來測定其含量，可用于重酒石酸去甲腎上腺素的日常例行分析檢測。

一種赭曲霉毒素A含量檢測方法

公開(公告)號：CN106556585A 公開(公告)日：2017.04.05

申請(專利權(quán))人：百奧森(江蘇)食品安全科技有限公司

摘要本發(fā)明公開了一種赭曲霉毒素A含量檢測方法，包括以下步驟：樣品前處理：取蔬果樣品碾碎，加入萃取劑，混勻，采用超聲波快速萃取30～60 min，萃取溫度為30～40℃，離心，取上清，將上清過赭曲霉毒素A免疫親和柱純化，依次用真菌毒素清洗緩沖液、水淋洗免疫親和柱，然后用甲醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液過濾，取濾液得到待測樣品溶液；所述萃取劑為乙腈和四氫呋喃的混合液。本發(fā)明可用于復(fù)雜基體中痕量組的赭曲霉毒素A定量快速測定，結(jié)果更加準(zhǔn)確，更有利于目前市場的發(fā)展與推廣。

一種檢測食品中果糖的方法

公開(公告)號：CN106525801A 公開(公告)日：2017.03.22

申請(專利權(quán))人：蘭州大學(xué);蘭州大學(xué)中衛(wèi)高新技術(shù)研究院

摘要本發(fā)明提供了一種檢測食品中果糖的方法，其步驟為a.配制儲備液；b.制備標(biāo)準(zhǔn)溶液；c.測定熒光光譜；d.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。熒光譜圖中存在572 nm和500 nm兩個峰，基于兩個波長的熒光強度比值對果糖進行檢測。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，分析時間短，操作條件溫和，重現(xiàn)性好，且對果糖的檢出限低，具有快速、簡便、穩(wěn)定和高靈敏的優(yōu)點。

Determination of Hesperidin in Wuli Bahan Powders by High Performance Liquid Chromatography

Zhao Lei1, Sun Yantao2， 3, Zhang Han2， 3, Ma Linlin2，3, Yu Langtian4
(1. Siping Institute for Food and Drug Control, Siping 136000, China; 2. College of Chemistry, Jilin Normal University, Siping 136000, China; 3. Key Laboratory of Preparation and Applications of Environmmental Frendly Materials, Jilin Normal University, Siping 136000, China; 4. Chinese Pharmaceutical University, Nanjing 211198, China)

A method was established to determine hesperidin in Wuli Bahan powders by high performance liquid chromatography. The mobile phase was methanol (A) and acetic acid–water (1∶300)(B) with gradient elution program. The flow rate was 1.0 mL／min and the detection wavelength was 284 nm. The column temperature was 30℃. The content of hesperidin had good linear relationship with the chromatographic peak area in the range of 1.190 3–119.03 μg／mL with the correlation coefficient of 0.999 9, the detection limit was 300 ng／g. The sample recovery rates were 95.00%–98.50%, and the RSD was 1.0%(n=6). The method is simple, rapid, accurate and reproducible, which provides a reference for quality control of Wuli Bahan powders.

Wuli Bahan powders; chinese prickly ash; hesperidin; HPLC

O657.7

A

1008–6145(2017)03–0050–04

*2016國家級大學(xué)創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目(201610203010)；四平市科技局項目(2014042)

聯(lián)系人：趙磊；E-mail: zhaolei0433@sina.com

2017–03–13

10.3969／j.issn.1008–6145.2017.03.011