利用液相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)研究二元表面活性劑體系–啶蟲脒微乳劑熱貯穩(wěn)定性＊

趙振東，謝艷麗

利用液相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)研究二元表面活性劑體系–啶蟲脒微乳劑熱貯穩(wěn)定性＊

趙振東1，2，謝艷麗2

(1.海南國際旅游島發(fā)展研究院，?？?570228； 2.海南大學材料與化工學院，?？?570228)

應(yīng)用液相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)評價復配的陰／非離子二元表面活性劑復合體系–啶蟲脒微乳劑的熱貯穩(wěn)定性。將二元表面活性劑復合體系–啶蟲脒微乳劑于(54±2)℃下貯藏14天，取出后于室溫下干燥24 h，用液相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用儀測定啶蟲脒含量。該法線性擬合方程為y=97 060.72x+542 587.4，線性范圍為0.01～0.25 mg／L，相關(guān)系數(shù)為0.999 8。方法檢出限為0.001 mg／L(S／N=3)，色譜保留時間和色譜峰面積重復性分別為0.31%，1.44%(n=6)，加標回收率為86.23%～107.20%。該法具有簡單、準確和靈敏的特點。

液相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)；表面活性劑；啶蟲脒；熱貯穩(wěn)定性

農(nóng)藥乳油使用大量有毒溶劑，嚴重污染環(huán)境。農(nóng)藥微乳劑以水替代有機溶劑，是當今研究熱點之一。微乳液是由油、水、表面活性劑組成的有序多元體系，具有界面面積較大、界面張力超低、熱力學穩(wěn)定等性質(zhì)。由于其特殊組成及結(jié)構(gòu)，微乳液作為有機分子聚集體，具有很強的增溶、增敏及增穩(wěn)作用［1–2］。O／W型微乳液作為藥物載體已廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥等領(lǐng)域。

啶蟲脒是高效廣譜內(nèi)吸性新型殺蟲劑，能夠有效防治果蔬蚜蟲，同時能夠用來防治對有機磷、氨基甲酸酯以及擬除蟲菊酯類等產(chǎn)生耐藥性的害蟲［3–5］，它具有低毒，環(huán)境污染小的特點。其中3%啶蟲脒微乳劑已經(jīng)得到了廣泛應(yīng)用。

當前微乳劑多采用單一性質(zhì)的表面活性劑作為助劑。在實際應(yīng)用中，由二元體系表面活性劑混合物形成的膠束聚集體常顯示出與單一表面活性劑明顯不同的特性，還具有優(yōu)越的協(xié)同增效作用，對實現(xiàn)高效率的微乳液性能十分重要。熱貯穩(wěn)定性關(guān)系到藥品貯運、降解和藥效，筆者擬采用陰／非離子二元表面活性劑混合體系復配啶蟲脒微乳液，并考察其熱貯穩(wěn)定性指標。

啶蟲脒的分析方法主要有氣相色譜法、氣相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜法和液相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用法(LC–MS)或液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜法(LC–MS／MS)［6–18］。其中氣相色譜法和氣相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用法主要用于分析揮發(fā)性組分。水基啶蟲脒微乳液必須經(jīng)過復雜的前處理，有效提取啶蟲脒組分，除去難揮發(fā)水溶性基質(zhì)方可用氣相色譜法檢測，分析過程繁瑣，成本高。相比較而言，液相色譜法不需要進行樣品前處理，特別適用于水溶性微乳劑類樣品分析。采用液相色譜–紫外檢測器即可直接測定啶蟲脒含量，該法缺點是靈敏度偏低。啶蟲脒屬氨基甲酸酯類化合物，可以采用液相色譜–柱后衍生–熒光檢測的方法，有效提高響應(yīng)靈敏度，但實驗過程略顯繁瑣，衍生化試劑成本高，毒性大，易造成環(huán)境二次污染。液相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)已經(jīng)非常成熟，該法結(jié)合液相色譜強分離能力和質(zhì)譜的高靈敏度特點，普適性和專一性都非常強，特別適用于水基化微乳劑的測定，而且無需樣品前處理。

筆者擬采用LC–MS技術(shù)直接測定陰／非離子二元表面活性劑復合體系–3%啶蟲脒微乳劑中啶蟲脒的含量，并據(jù)此評價該微乳劑的熱貯穩(wěn)定性。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

超高效液相色譜–高分辨質(zhì)譜聯(lián)用儀：LC–MS–IT–TOF型，日本島津公司；

數(shù)顯恒溫水浴鍋：HH–6型，常州澳華儀器有限公司；

電子天平：AUY220型，日本島津公司；

磁力加熱攪拌器：DF–101S型，金壇市醫(yī)療儀器廠；

超純水系統(tǒng)：Purelab Ultra型，美國Pall公司；

乙腈：HPLC級，美國Fisher公司；

啶蟲脒：純度為99%，德國Dr. Ehrenstofer GmbH公司；

乳化劑：由陰離子表面活性劑和多種非離子表面活性劑復配而成；

實驗用水均由超純水系統(tǒng)制備，電阻率為18.2 MΩ·cm。

1.2 實驗方法

1.2.1 微乳劑制備

將定量溶劑及原藥加入反應(yīng)器中，攪拌至完全溶解。再加入陰離子表面活性劑及多種非離子表面活性劑等助劑，用水定容，充分攪拌即得到3%啶蟲脒陰／非離子二元表面活性劑復合體系微乳劑。

1.2.2 熱貯穩(wěn)定性考察

稱取一定量微乳劑，密封于廣口瓶中，置于恒溫箱中于(54±2)℃貯藏14天，取出，放入干燥器中，室溫冷卻后于24 h內(nèi)測定啶蟲脒含量。

1.2.3 實驗步驟

樣品用乙腈稀釋，經(jīng)0.45μm有機膜過濾上機分析，每樣平行測定3次。

1.3 儀器工作條件

1.3.1 液相色譜條件

色譜柱：Acquity HSS–T3柱(100 mm×2.1 mm，

1.8μm，美國Waters公司)；柱溫：45℃；進樣體積：2 μL；流動相：1‰甲酸水溶液–乙腈，流量為0.3 mL／min，梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度淋洗程序

1.3.2 質(zhì)譜條件

ESI正負離子同時掃描模式；正離子電壓：4.5 kV；負離子電壓：–3.5 kV；霧化氣：氮氣，流量為1.5 L／min；干燥氣：氮氣，壓力為100 kPa；冷卻氣：氬氣；檢測器電壓：1.8 kV；Heat Block 溫度：200℃；CDL 溫度：200℃；掃描范圍：m／z200～300；離子累積時間：15 ms。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化

正負離子同時掃描模式靈敏度優(yōu)于單一正離子掃描模式。單一掃描模式下，相反電荷離子占據(jù)噴霧針表面，中和部分電荷，減少了目標離子數(shù)量，從而降低了靈敏度。而正負離子同時掃描時，電場力推開噴霧針表面過剩相反電荷，從而提高響應(yīng)靈敏度。故選擇正負離子同時掃描模式。

此外，質(zhì)荷比范圍越窄，響應(yīng)靈敏度越高，這是背景離子減少、目標離子數(shù)量增加所致。離子累積時間直接關(guān)系離子數(shù)量，累積時間過短則靈敏度低，累積時間過長則影響峰形及采集曲線點數(shù)。綜合考慮，選擇離子累積時間為15 ms。

2.2 色譜柱選擇

比較兩根常用沃特世超高效色譜柱(HSS–T3 和C18)對啶蟲脒的分離效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩根色譜柱并無明顯區(qū)別，最終選用HSS–T3色譜柱。

2.3 流動相選擇

試驗比較甲醇–水和乙腈–水對啶蟲脒的分離效果，二者差異不明顯。由于乙腈對一些弱極性雜質(zhì)清除能力更強，最終選擇乙腈–水作為流動相。啶蟲脒在流動相中主要以［M+H］+(m／z223.074 5)離子形式存在。若添加少量有機酸，可以有效增加液相中［M+H］+離子數(shù)量，從而提高靈敏度。試驗了不同比例甲酸的流動相，結(jié)果表明隨著甲酸含量增加，啶蟲脒響應(yīng)強度明顯提高；當甲酸含量達到1‰時靈敏度基本穩(wěn)定，再增加無明顯效果。最終選擇1‰甲酸水溶液–乙腈體系作為流動相。梯度洗脫的目的是為了有效分離啶蟲脒與表面活性劑，從而保證檢測靈敏度。

2.4 基質(zhì)效應(yīng)

電噴霧質(zhì)譜存在較強基質(zhì)效應(yīng)，原因主要是不同基質(zhì)增強或抑制目標物氣相離子的形成效率。微乳劑樣品中含有大量的陰離子和非離子表面活性劑，它們具有良好的疏水和親水兩性性質(zhì)。一方面，在噴霧液滴形成過程中，更容易占據(jù)液滴表面，阻礙目標物向液滴表面轉(zhuǎn)移，從而抑制目標物氣相離子的形成。另一方面，帶有相反電荷的表面活性劑中和了部分目標物離子，降低了液滴電荷密度，不利于形成更小液滴。以上原因均導致靈敏度下降。

為減少基質(zhì)效應(yīng)影響，一方面通過分離方法優(yōu)化，減少啶蟲咪出峰時雜質(zhì)的干擾。另一方面，通過試驗比較空白基質(zhì)加標和溶劑響應(yīng)值變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)依然存在明顯的抑制效應(yīng)。因此，最終采用空白基質(zhì)配制系列標準溶液繪制工作曲線，以保證標準溶液與樣品響應(yīng)一致，提高測量結(jié)果的準確度。

2.5 離子流色譜圖

在1.3儀器工作條件下，將二元表面活性劑體系–啶蟲脒微乳劑樣品用乙腈逐級稀釋后直接進樣分析，離子流色譜如圖1所示。由圖1可見，啶蟲脒與樣品基質(zhì)色譜峰分離良好，色譜峰形尖銳對稱，便于定量。

圖1 二元表面活性劑體系–啶蟲脒微乳劑的離子流色譜圖

2.6 線性方程與線性范圍

精密稱取一定量啶蟲脒對照品于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得到1 000 mg／L啶蟲脒標準儲備液。按照1.2實驗方法制備空白基質(zhì)，然后取一定體積儲備液用空白基質(zhì)逐級稀釋成0.01，0.025，0.05，0.1，0.25 mg／L系列標準工作溶液。

在1.3.1色譜條件下依次分析系列標準溶液，啶蟲脒的保留時間為5.67 min。以標準工作溶液的質(zhì)量濃度(x，mg／L)為橫坐標，色譜峰面積響應(yīng)值(y)為縱坐標，擬合得線性方程y=97 060.72x+542 587.4，線性范圍為0.01～0.25 mg／L，相關(guān)系數(shù)(r)為0.999 8。

2.7 檢出限和定量限

采用逐級稀釋方法，截取一段噪音信號，利用3倍信噪比作為檢出限，10倍信噪比作為定量下限，計算得其檢出限為0.001 mg／L，定量下限為0.003 mg／L。

2.3 兩組血脂及CRP水平比較 治療后，兩組血脂指標比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療前，A組與B組CRP水平比較[(4.84±1.29)mg/L比(4.82±1.34)mg/L]，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后，兩組CRP水平均降低，且B組為(3.47±0.76)mg/L，低于A組的(3.79±0.65)mg/L，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.8 精密度試驗

按照1.2.1的方法制備0.02 mg／L啶蟲脒基質(zhì)標準溶液，連續(xù)測試6針，記錄每針的色譜保留時間和色譜峰面積，計算相對標準偏差，相關(guān)數(shù)據(jù)見表2。由表2可知，色譜保留時間及色譜峰面積6次測量結(jié)果的相對標準偏差分別為0.31%和1.44%。

表2 精密度試驗結(jié)果

2.9 加標回收試驗

按照1.2.1方法制備空白基質(zhì)加標溶液，逐級稀釋后分別添加啶蟲脒0.05，0.1，0.5 mg／L。樣品經(jīng)0.45 μm有機膜過濾后直接進樣分析，加標回收試驗結(jié)果見表3。

表3 加標回收試驗結(jié)果

由表3可知，3個加標水平回收率為86.23%～107.20%，表明本法測量準確度較高。

2.10 樣品測定

在1.3.1色譜條件下，將樣品用乙腈逐級稀釋后直接進樣分析(如圖1所示)，每個樣品平行測定3次，結(jié)果見表4。由表4可知，二元表面活性劑復合體系–3%啶蟲脒乳劑配方于(54±2)℃恒溫14天后分解率＜5%，符合熱貯穩(wěn)定性要求。

表4 二元表面活性劑復合體系–3%啶蟲脒乳劑熱貯穩(wěn)定性試驗結(jié)果 %

3 結(jié)語

采用LC–MS技術(shù)直接測定陰／非離子二元表面活性劑復合體系–3%啶蟲脒微乳劑含量，該法具有操作簡單、準確和靈敏度高等特點。

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一種測定木制品中木餾油的方法

申請(專利權(quán))人：通標標準技術(shù)服務(wù)(上海)有限公司

摘要本發(fā)明涉及一種測定木制品中木餾油的方法，包括以下步驟：(1)稱取粉碎且混合均勻的試樣，加入提取溶劑甲苯、示蹤劑和內(nèi)標標準溶液，渦旋混合均勻，超聲提?。?2)采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，對所得樣品提取溶液中的木餾油標記物進行測定；(3)根據(jù)步驟(2)所得的色譜圖和質(zhì)譜圖，分析確認樣品提取溶液中是否含有木餾油特有的多環(huán)芳烴標記物或酚類標記物，以判定樣品中是否含有相應(yīng)的木餾油；再對被選作木餾油標記物的多環(huán)芳烴和酚類化合物進行鑒別和定量；最終，由樣品中標記物的含量經(jīng)換算得到樣品中木餾油的含量；本發(fā)明方法快速、簡單，通過半定量的方法對法規(guī)所禁止使用的4種木餾油在樣品中的含量進行了測定，檢測限均為50 mg／kg。

一種瘦肉精類檢測方法

公開(公告)號:CN106546545A 公開(公告)日：2017.03.29

申請(專利權(quán))人：無錫艾科瑞思產(chǎn)品設(shè)計與研究有限公司

摘要本發(fā)明公開了一種瘦肉精類檢測方法，取5～12 g待測樣品，絞碎至粒徑0.18～0.28 mm(60～80目)，加入15～30 mL高氯酸溶液，在70～80℃的溫度下超聲提取20～30 min，冷卻至室溫，離心，取上清液，沉淀加4～8 mL高氯酸溶液洗滌，離心取上清液，合并兩次上清液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH，先用20～30 mL乙醚，振蕩提取20 min，回收有機相，再用15～25 mL乙醚萃取兩次，合并有機相蒸干，用鹽酸溶液溶解蒸干固體，用去離子水定容至10 mL，得到待測樣品；采用紫外可見分光光度計測定吸光度，由標準曲線得到待測樣品中瘦肉精類的含量。本發(fā)明測定結(jié)果準確度高；操作簡單、測定成本低；檢測反應(yīng)速度快，使用方便，產(chǎn)生的廢液幾乎不產(chǎn)生二次污染，檢測范圍寬、最低檢出限低、靈敏度高。

Study on Stability of Thermal Storage in Binary Ionic／Nonionic Surfactants–Acetamiprid Microemulsion by LC–MS

Zhao Zhendong1， 2, Xie Yanli2
(1. Institute for the Development of Hainan International Tourism Island, Haikou 570228, China; 2. College of Materials and Chemical Engineering, Hainan University， Haikou 570228, China)

Study on thermal storage stability of binary ionic／nonionic surfactants-acetamiprid microemulsion was developed by LC–MS. After being stored for 14 day at (54±2)℃, the binary ionic／nonionic surfactants-acetamiprid microemulsion was dried for 24 h at room temperature, and acetamiprid in it was determined by LC–MS. The results showed good linearity with linear equation ofy=97 060.72x+542 587.4, ranging from 0.01 mg／L to 0.25 mg／L, the correlation coefficient was 0.999 8. The detection limit was 0.001 mg／L. The repeatability of chromatograph retention time and peak area was 0.31% and 1.44%(n=6), respectively. The standard recoveries were between 86.23% and 107.20%. The method is simple, reliable and sensitive.

LC–MS; surfactant; acetamiprid; stability of thermal storage

O657.7

A

1008–6145(2017)03–0027–04

*海南省自然科學基金項目(20152020)；國家重大科學儀器設(shè)備開發(fā)專項(2012YQ090229)

聯(lián)系人：趙振東；E-mail: zhaozhd898@126.com

2017–02–18

10.3969／j.issn.1008–6145.2017.03.006