多指標正交實驗優(yōu)化蒙藥泡囊草制膏、牛奶浸泡法炮制工藝Δ

包明蘭 烏云嘎 巴根那 奧·烏力吉 王秀蘭

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

工藝與制備

多指標正交實驗優(yōu)化蒙藥泡囊草制膏、牛奶浸泡法炮制工藝Δ

包明蘭 烏云嘎*巴根那 奧·烏力吉 王秀蘭

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

目的：優(yōu)選炮制泡囊草的最佳工藝。方法：以山莨菪堿和莨菪堿為綜合指標，采用高效液相色譜法進行含量測定，采用L9(3)4正交試驗設(shè)計法考察泡囊草制膏工藝(加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù))、泡囊草牛奶浸泡法(加牛奶量、浸泡時間、烘干溫度、烘干時間)對炮制工藝的影響，確定最佳炮制工藝。結(jié)果：泡囊草制膏法最佳工藝為加藥材的8倍量水，煎煮3次，每次30min；泡囊草牛奶浸泡法最佳工藝為加藥材的4.5倍牛奶，浸泡4h，40℃溫度烘干2.5h。結(jié)論：該研究為泡囊草炮制工藝的標準化操作提供了科學(xué)的參考依據(jù)。

泡囊草；炮制工藝；正交實驗；山莨菪堿；莨菪堿

泡囊草系茄科植物泡囊草(PhysochlainaPhysaloides(L)G.Don)的干燥根[1]。具有殺“黏”，消腫，解痙，鎮(zhèn)痛之功能。用于胃“黏”痧，炭疽，“亞麻”病，“黏”癥，腦刺痛，牙痛，陽痿病[2-3]。由于泡囊草有大毒，常采用奶制法、制膏法或烘干[4]法炮制，但缺乏規(guī)范的炮制工藝?，F(xiàn)代研究表明泡囊草的有效成分，山莨菪堿、莨菪堿、東莨菪堿和阿托品具有平喘止咳,安神鎮(zhèn)驚之功效[5]。本研究以山莨菪堿和莨菪堿的含量為綜合指標，采用正交實驗對泡囊草的牛奶浸泡法[6]、制膏法工藝進行了優(yōu)化研究，以其為規(guī)范泡囊草的炮制工藝提供技術(shù)參數(shù)。

1 材料與方法

1.1 儀器：日本島津LC-20AD高效液相色譜儀；HH2數(shù)顯恒溫水浴鍋(蘇州威爾)；AUW120D電子天平(沈陽龍騰)；DHG-9240A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海鴻都)；KQ-600DB數(shù)控超聲波清洗器(昆山)等。

1.2 試藥與試劑：泡囊草(批號20160630)采于錫林郭勒阿巴嘎旗；山莨菪堿對照品(BZP1402)，莨菪堿對照品(BZP1400)均有中國藥品生物制品鑒定所提供；甲醇為色譜純，其余為分析純，水為超純水。

2 實驗方法

2.1 色譜條件：島津LC-20AT分析型高效液相色譜儀，lnertsil NH2ColumnsC18(4.6×300mm，5μm)流動相為甲醇：水(含0.02mol/L醋酸鈉溶液和0.02%三乙胺，并用冰乙酸調(diào)PH6.0)；流速：1.0mL·min-1；檢測波長：215nm；柱溫：35℃；進樣量：10μL。

2.2 對照品溶液的制備：取莨菪堿1.5mg，精密稱定，置100mL容量瓶，加甲醇至刻度，得濃度為0.015mg/mL莨菪堿對照品溶液。取山莨菪堿1.5mg，精密稱定，置10mL容量瓶，加甲醇至刻度，從溶液中取2mL加3mL甲醇稀釋，得濃度為0.06mg/mL的山莨菪堿對照品溶液[7]。

2.3 供試品溶液的制備：精密稱取9份泡囊草生品和制膏法、牛奶浸泡法的炮制品各約1.0g，加甲醇25mL，超聲處理40min，冷卻，稱重，用甲醇補重，過慮，濾液各精密吸取1mL，加甲醇定容至10mL，制成樣品液。

表1 泡囊草制膏工藝正交實驗考察因素與水平表

表2 制膏法的L9(34)正交實驗

注：結(jié)果=(山莨菪堿×50%+莨菪堿×50%)×100%

2.4 正交實驗設(shè)計優(yōu)選泡囊草炮制工藝

2.4.1 正交實驗設(shè)計優(yōu)化泡囊草制膏法工藝：稱取泡囊草生品9份，每份約5.0g，按表1設(shè)計的因素水平和表2的L9(3)4正交設(shè)計條件，制備供試品。采用HPLC法以山莨菪堿和莨菪堿含量結(jié)果為綜合指標進行方差分析(表3)，對泡囊草制膏法炮制工藝進行優(yōu)選。

表3 方差分析表

注：F0.02(2,2)=19.00

表4 泡囊草牛奶浸泡法工藝正交實驗考察因素與水平表

表5 牛奶浸泡法的L9(34)正交實驗

注：結(jié)果=(山莨菪堿×50%+莨菪堿×50%)×100%

表6 方差分析表

注：F0.02(2,2)=19.00

2.4.2 正交實驗設(shè)計優(yōu)化泡囊草牛奶浸泡法工藝：稱取泡囊草生品9份，每份約5.0g，按表4設(shè)計的因素水平和表5的L9(3)4正交設(shè)計條件，制備供試品。采用HPLC法以山莨菪堿和莨菪堿含量結(jié)果為綜合指標進行方差分析(表6)，對泡囊草牛奶浸泡法工藝進行優(yōu)選。

3 結(jié)果與分析

3.1 制膏法的正交實驗設(shè)計結(jié)果：表3結(jié)果表明，各因素的影響規(guī)律為A>C>B>D，結(jié)合直觀分析結(jié)果，最終確定泡囊草制膏法最佳工藝為A1B1C3D3即加藥材的8倍量水，煎煮3次，每次30min，合并煎煮液濃縮至膏狀，即得。

3.2 牛奶浸泡法的正交實驗設(shè)計結(jié)果：表6結(jié)果表明，各因素的影響規(guī)律D>B>A>C，結(jié)合直觀分析結(jié)果，最終確定泡囊草牛奶浸泡法最佳工藝為A2B2C1D1，即加藥材的4.5倍量牛奶，浸泡4h，40℃溫度烘干2.5h至得。

4 討論

4.1 蒙藥炮制與臨床療效之間有著密切關(guān)系，大部分藥材需經(jīng)過炮制才能用于臨床和制劑的生產(chǎn)。泡囊草有毒必須經(jīng)炮制入藥，因此該試驗在現(xiàn)行的有關(guān)泡囊草藥材炮制基礎(chǔ)上，通過正交試驗設(shè)計、多指標含量測定的綜合評分方法，優(yōu)選出泡囊草牛奶浸泡法和制膏法最佳炮制工藝，在加量、時間、溫度、次數(shù)等方面確定了具體因素，對于規(guī)范泡囊草的炮制工藝，科學(xué)合理應(yīng)用于臨床，保證泡囊草的質(zhì)量有一定的意義。

4.2 山莨菪堿和莨菪堿是目前已知的泡囊草藥材的有效成分，該試驗采用綜合評分的方法，在工藝優(yōu)化的評價指標中綜合考慮了各指標的變化影響。最終確定牛奶浸泡法和制膏法工藝的評價指標為(山莨菪堿×50%+莨菪堿×50%)×100%的綜合評分。

[1]國家中醫(yī)藥管理局.中華本草蒙藥卷〔M〕.上海：上?？萍汲霭嫔?2004.233.

[2]朱亞民.內(nèi)蒙古植物藥志(第三卷)[S].1989.17～19.

[3]國家中醫(yī)藥管理局.中華本草夢瑤卷[M].上海：上?？萍汲霭嫔?，2004.233.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·蒙藥分冊〔M〕.1998.31.

[5]劉曉平.莨菪類藥物的研究進展與臨床應(yīng)用[J].中華醫(yī)史雜志,1999,29(1):46-47.

[6]吳香杰.蒙藥炮制學(xué)[M].呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社，2011.200.

[7]張潤祥.HPLC法測定蒙藥材泡囊草(混-浩日素)中莨菪堿的含量[J].中國藥品標準，2011；12(6)：419～421.

2016年12月20日收稿

Optimization of the optimal processing technology of Physochlaina by multi-indexes orthogonal test

BAO Ming-lan2WU Yun-ga1BA Gen-na2AO Wu-liji2WANG Xiu-lan2

(1.College of Mongolian Medicine and Pharmacology，Inner Mongolia University for the Nationalities，Master of 2015 grade student;2.College of Mongolian Medicine and Pharmacology，Inner Mongolia University for the Nationalities，Inner Mongolia Tongliao 028000，China)

Objective:To optimize processing technology of Physochlaina.Method:With anisodamine and scopolamine as a comprehensive index，using high performance liquid chromatography.By L9(34) orthogonal experiment，effects of Paste making process(the amount of water，decocting time and time)，Milk soaking method(milk amount，soaking time，drying temperature，drying time)，on varies products of grinder gardenia were investigated.To determine the optimal processing technology of Physochlaina.Results:Paste the optimal process for 8 times the amount of water and medicine，3times decoction，every time 30min，the best process for the 4.5times the milk，soaked 4h,40 degrees Celsius temperature drying 2.5h for milk soaking methodof Physochlaina.Conclusion:The study provides scientific reference basis for regulating gardenia processing technology.

Physochlaina;processing technique;orthogonal experiment;Anisodamine;Scopolamine

內(nèi)蒙古自治區(qū)蒙醫(yī)藥科技重大專項子課題(GCY201508036)

包明蘭(1979-)女，副教授，博士，研究方向：蒙藥炮制與方劑作用機制研究

R291.2

A

1006-6810(2017)04-0053-03

*內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院2015級碩士研究生