前列腺癌與前列腺增生合并前列腺炎患者M(jìn)MPs表達(dá)的比較研究

毛祖杰 劉鋒 張琦 祁小龍 魏海彬 張大宏

前列腺癌與前列腺增生合并前列腺炎患者M(jìn)MPs表達(dá)的比較研究

毛祖杰 劉鋒 張琦 祁小龍 魏海彬 張大宏

目的 比較前列腺癌（PCa）與前列腺增生（BPH）合并前列腺炎患者金屬基質(zhì)蛋白酶（MMPs）表達(dá)。方法 選擇確診為PCa患者28例（PCa組）、BPH合并前列腺炎患者30例（BPH組）。采用ELISA法檢測血清MMP-2、MMP-9和MMP-14水平，采用放免法檢測血清前列腺特異性抗原（PSA）水平，采用免疫組化法對病變組織中MMP-2、MMP-9、MMP-14的陽性表達(dá)率進(jìn)行判定；比較兩組患者M(jìn)MPs及PSA。 結(jié)果 PCa組患者血清MMP-2、MMP-9、MMP-14和PSA水平均高于BPH組（均P＜0.05）。PCa組患者病變組織中MMP-2、MMP-9和MMP-14的陽性表達(dá)率為50.0%、53.6%和42.9%，分別高于BPH組的20.0%、10.0%和16.7%（均P＜0.05）。 結(jié)論 PCa與BPH合并前列腺炎患者M(jìn)MPs表達(dá)明顯不同，有助于對兩者作出鑒別診斷；MMPs家族在PCa中表達(dá)的變化可為發(fā)病機(jī)制的研究提供參考。

前列腺癌 前列腺增生 前列腺炎 金屬基質(zhì)蛋白酶

前列腺增生（BPH）是中老年男性人群的高發(fā)病，其常伴有慢性前列腺炎，臨床表現(xiàn)為尿頻、尿急、夜尿增多、排尿困難、尿道不適及疼痛感，嚴(yán)重影響其正常生活[1-2]。前列腺癌（PCa）是發(fā)生在前列腺部位的癌性病變，近年來流行病學(xué)調(diào)查顯示中國男性PCa發(fā)病率逐年增長，2008年男性PCa粗發(fā)病率為3.33%[3]。金屬基質(zhì)蛋白酶（MMPs）是一種水解酶類，可降解機(jī)體內(nèi)各種細(xì)胞外基質(zhì)成分并破壞其基質(zhì)膜。目前有體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)炎癥細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞的浸潤及轉(zhuǎn)移與產(chǎn)生MMPs的能力具有相關(guān)性[4-5]，然而關(guān)于MMPs在PCa與BPH合并前列腺炎患者中表達(dá)的比較研究較少。因此，筆者采集PCa與BPH合并前列腺炎患者的血清樣本，對MMPs及相關(guān)免疫因子含量進(jìn)行檢測與比較，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選擇2014年11月至2015年11月本院確診為PCa患者28例（PCa組）、BPH合并前列腺炎患者（BPH組）30例。PCa組患者年齡為49～78（64.2±11.5）歲，均行PCa根治切除術(shù)；BPH組患者年齡為44～69（59.8± 12.4）歲，均行前列腺電切手術(shù)治療。兩組患者平均年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）?；加衅渌乔傲邢俨课话┳?，心、肝、腎、腦等重要臟器病變，免疫性疾病者均不納入本研究。本研究取得所有患者及其家屬的知情同意。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 （1）血清樣本采集：術(shù)前1d晨起空腹抽取肘靜脈 5ml，置于室溫下1h，3 500r/min離心10min，取上清液即血清樣本，置于－20℃保存待測。（2）組織標(biāo)本采集：行病灶部位的組織切除術(shù)，取1.5cm× 0.5cm×0.5cm的病變組織標(biāo)本，用4%的中性甲醛固定液進(jìn)行固定并保存待測。

1.2.2 檢測方法 （1）血清樣本檢測：應(yīng)用ELISA法對血清中MMP－14、MMP－9及MMP－2的含量進(jìn)行檢測[6]，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行操作；采用放免法（RIA）[7]對兩組患者血清中前列腺特異性抗原（PSA）進(jìn)行檢測。（2）組織樣本檢測：應(yīng)用免疫組化法對甲醛固定的組織樣本進(jìn)行組織內(nèi)MMP－2、MMP－9及MMP－14的檢測，首先將組織標(biāo)本脫水、包埋，每個(gè)樣本連續(xù)切成3μm厚的切片，切3份進(jìn)行MMP－2、MMP－9及MMP－14的免疫標(biāo)記，使用鼠抗人單克隆抗體即用型試劑盒，按照說明書進(jìn)行免疫組化的染色操作。

1.2.3 評價(jià)方法 血清PSA的正常參考范圍為0～4μg/L[8]。免疫組化的結(jié)果根據(jù)顯微鏡高倍視野（×200）下對陽性細(xì)胞著色程度進(jìn)行判定[9]：不著色為0分，淺棕色為1分，深棕色為2分；著色細(xì)胞數(shù)＜5%為0分，5%～25%為1分，＞25%～50%為2分，＞50%為3分；將染色分值與著色細(xì)胞數(shù)分值相乘，最后得分0分為（－），1分為（+），2～3分為（++），4～6分為（+++）；其中（++）、（+++）表示陽性，（－）、（+）表示陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料用?表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 血清MMPs及PSA水平比較 PCa組患者的MMP－2、MMP－9、MMP－14和PSA水平均高于BPH組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

2.2 病變組織中MMPs陽性表達(dá)率比較 PCa組患者的MMP－2、MMP－9和MMP－14的陽性表達(dá)均高于BPH組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表2。

表1 兩組患者血清MMPs及PSA水平比較

表2 兩組患者病變組織中MMPs陽性表達(dá)率比較[例（%）]

3 討論

PCa是男性泌尿生殖系統(tǒng)中的高發(fā)腫瘤，是一種極易發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移的惡性腫瘤，其在腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間伴隨基底膜破壞、結(jié)締組織基質(zhì)浸潤的發(fā)生過程[10]。BPH合并前列腺炎屬于良性的前列腺病變，其在臨床診斷中易與PCa早期癥狀混淆而發(fā)生誤診。MMPs以酶原形式從胞內(nèi)分泌到胞外，它在體外通過有機(jī)汞制劑反應(yīng)才有活性，在體內(nèi)可經(jīng)一系列蛋白酶級聯(lián)而激活。MMPs屬于消化細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的蛋白水解酶，目前研究認(rèn)為前列腺腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移與MMPs的過度表達(dá)有關(guān)[11]。MMPs酶系中的MMP－2、MMP－9研究較為廣泛，其中MMP－9能分解呼吸道和肺內(nèi)的結(jié)構(gòu)復(fù)合物如ECM、基底膜，可參與呼吸道和肺的重建，加強(qiáng)膠原質(zhì)膠體中膠原細(xì)胞和MMP－13的溶膠原活動；MMP－2主要降解Ⅳ、Ⅴ型膠原及明膠，與胃癌、胰腺癌等的分化轉(zhuǎn)移存在密切聯(lián)系[12－13]。本研究對MMP－2、MMP－9、MMP－14進(jìn)行了檢測，MMP－14主要存在于腫瘤細(xì)胞膜上，可激活前MMP－2并直接降解細(xì)胞外基質(zhì)，目前有研究認(rèn)為MMP－14在胃癌、喉癌、肝癌及乳腺癌中的表達(dá)具有臨床意義[14－15]。

本研究對PCa、BPH合并前列腺炎患者血清MMP－2、MMP－9、MMP－14和PSA水平進(jìn)行檢測與比較，同時(shí)取術(shù)后病變組織樣本進(jìn)行免疫組化檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCa組患者的血清MMP－2、MMP－9、MMP－14和PSA水平均高于BPH組，病變組織中MMP－2、MMP－9、MMP－14陽性表達(dá)率亦明顯高于BPH組，提示PCa患者M(jìn)MP－2、MMP－9和MMP－14高表達(dá)與癌變的發(fā)病機(jī)制存在相關(guān)性。本研究還發(fā)現(xiàn)BPH合并前列腺炎患者M(jìn)MP－2表達(dá)水平也較高，但是否與BPH、前列腺炎的病理過程相關(guān)需要進(jìn)一步研究。

綜上所述，PCa與BPH合并前列腺炎患者M(jìn)MPs表達(dá)明顯不同，有助于對兩者作出鑒別診斷；MMPs家族在PCa中表達(dá)的變化可為發(fā)病機(jī)制的研究提供參考。

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Expression of MMPs in patients with prostate cancer and benign prostatic hyperplasia complicated with prostatitis

MAO Zujie,LIU Feng,ZHANG Qi,et al.Department of Urology,Zhejiang Provincial People′s Hospital,Hangzhou 310014，China

Prostate cancer Prostatic hyperplasia Prostatitis MMPs

2017-03-17）

（本文編輯：陳丹）

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.9.2017-583

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技平臺項(xiàng)目（2017ZD008）

310014 杭州，浙江省人民醫(yī)院泌尿外科

毛祖杰，E-mail：kirk@zju.edu.cn

【 Abstract】 Objective To investigate the expression of matrix metalloproteinases(MMPs)in patients with prostate cancer and prostatic hyperplasia combined with prostatitis. Methods Twenty eight patients with prostate cancer(PCa group)and 30 patients with benign prostatic hyperplasia and prostatitis(BPH group)admitted from November 2014 to November 2015 were enrolled in the study.Serum levels of MMP-2,MMP-9,MMP-14 and prostate special antigen (PSA)were measured by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)and radioimmunoassay,respectively.The expressions of MMP-2,MMP-9 and MMP-14 in tissue samples were detected by immunohistochemistry. Results The serum levels of MMP-2,MMP-9,MMP-14 and PSA in patients with prostate cancer were higher than those in BPH group(P＜0.05).The positive rates of MMP-2,MMP-9 and MMP-14 in tissue of PCa patients were 50.0%,53.6%and 42.9%,which were higher than those in BPH group (20.0%, 10.0%,16.7%,respectively)(P＜0.05).Conclusion The serum levels and tissue expression of MMP-2,MMP-9 and MMP-14 in prostate cancer are higher than those in patients of benign prostatic hyperplasia patients with prostatitis,indicating that MMPs may be associated with the occurrence and development of prostate cancer.