• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    免疫球蛋白IgG3恒定區(qū)和觸珠蛋白與肺結核病的相關性分析

    2017-06-05 09:02:54施力穎牟寶華江婷婷
    浙江醫(yī)學 2017年9期
    關鍵詞:肺結核病空洞蛋白質

    施力穎 牟寶華 江婷婷

    免疫球蛋白IgG3恒定區(qū)和觸珠蛋白與肺結核病的相關性分析

    施力穎 牟寶華 江婷婷

    目的 探討免疫球蛋白IgG3恒定區(qū)(IGHG3)和觸珠蛋白(HPT)與肺結核病的相關性。方法 采用ELISA法檢測IGHG3和HPT在50例初治肺結核病患者和36例健康對照者血清中的含量;并收集肺結核病患者臨床檢測資料,包括血漿纖維蛋白原(FIB)、PT、APTT、TT、血糖、C反應蛋白(CRP)、TG等檢測指標,分析差異情況以及IGHG3和HPT與患者臨床檢測結果的相關性。結果 肺結核病患者IGHG3、HPT含量明顯高于健康對照組(均P<0.01)。肺結核病患者FIB、APTT、CRP值與正常范圍有明顯差異(均P<0.05)。IGHG3含量與CRP含量呈正相關(r=0.372,P=0.014),HPT含量與肺結核病患者空洞型病變呈正相關(r=0.28,P= 0.04)。通過邏輯回歸將IGHG3和HPT組成蛋白質模型,ROC曲線結果顯示該模型鑒別肺結核病和健康對照組的靈敏度為90.90%,特異度為80.80%,AUC值為0.866。結論 IGHG3和HPT可能是肺結核病潛在生物標志物。

    肺結核病 血清 免疫

    肺結核病是結核分枝桿菌(Mtb)感染引起的慢性肺部感染性疾病,占各器官結核病總數(shù)的80%以上。據(jù)WHO最新報道,2015年全球新發(fā)肺結核病患者1 040萬例,死亡人數(shù)達180萬例[1]。血清蛋白質參與機體凝血、免疫、代謝、物質交換、運輸、生長信號調節(jié)等多種重要的生理功能,其組成和含量變化,受機體病理狀態(tài)的影響,對于疾病的致病機制、分子標志物和藥物作用靶點研究具有重要意義。因此,研究肺結核病患者血清差異表達蛋白質對肺結核病的防控具有重要作用。研究表明,肺結核病患者機體會對Mtb產(chǎn)生遲發(fā)型超敏反應,與巨噬細胞表面Fc受體的提呈作用及病理改變密切相關[2]。免疫球蛋白G(IgG)是血清中含量最高的免疫球蛋白,具有重要的免疫學功能,人IgG3對蛋白質及多肽類抗原的親和力較強,可與Fc受體結合,免疫功能較強[3],但在肺結核病患者與正常人之間的差異情況卻未曾研究。肺結核病患者組織肉芽腫內的巨噬細胞處于低氧狀態(tài)[4],能抑制Mtb感染[5]。當組織低氧時,會引起觸珠蛋白(HPT)含量升高,這類蛋白質在肺結核病患者與正常人之間的差異情況也未曾研究。因此,筆者擬采用ELISA法測定肺結核病患者血清中IgG3恒定區(qū)(IGHG3)和HPT含量,并與健康人群進行對照,分析兩者與肺結核病的相關性。

    1 對象和方法

    1.1 對象 收集2012年1月到2014年5月中國醫(yī)科大學紹興醫(yī)院的初治活動性肺結核病患者50例,男25例,女25例,年齡18~75(41.54±15.50)歲。依據(jù)中國衛(wèi)生部發(fā)布的肺結核病診斷標準,凡符合下列項目之一者即確診為肺結核?。海?)痰結核菌檢查陽性(包括涂片或培養(yǎng));(2)痰結核菌陰性,胸部X線檢查有典型的活動性結核病變表現(xiàn);(3)疑似肺結核病者,經(jīng)臨床X線檢查隨訪、觀察后,可排除其他肺部病變;(4)臨床上已排除其他原因引起之胸腔積液,可診斷結核性胸膜炎。排除AIDS、肺外結核、糖尿病、乙肝等其他疾病,以及免疫抑制劑使用者。收集2012年1月到2014年5月浙江醫(yī)院的健康獻血者36例作為健康對照組,男17例,女19例,年齡18~75(43.06±16.38)歲。無肺結核病、糖尿病、乙肝、AIDS等疾病。本研究經(jīng)每位受試者知情同意,并由華南理工大學醫(yī)學院倫理委員會批準。兩組患者性別、年齡等一般資料比較均無統(tǒng)計學差異(均P>0.05)。

    1.2 IGHG3、HPT檢測 受試者均于晨起空腹抽血5.0ml于不抗凝真空采血管中,4h內于4℃、3 000r/min離心10min,吸取上層血清,血清分裝后保存于-80℃?zhèn)溆?。同時,收集受試者臨床檢測資料。人IGHG3 ELISA試劑盒(中國CUSABIO公司),其稀釋倍數(shù)為1∶5 000,檢測范圍是2.75~2 000ng/ml;人Haptoglobin ELISA試劑盒(英國Abcam公司),其稀釋倍數(shù)為1∶2 000,最低檢測濃度是0.07μg/ml。具體實驗操作:(1)使用前將試劑盒中所有試劑、工作標準品和樣品,置于室溫20~30℃。(2)取出96孔板,并在每孔加入25μl標準品或樣品,立即向每個孔中加入25μl生物素化的蛋白質,混勻后蓋上密封膠帶,室溫孵育1h。(3)用200μl洗滌緩沖液洗滌5次,倒出內容物,在吸水紙巾上輕拍4~5次,徹底清除液體。(4)每孔中加入50μl鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連接物(SP連接物),室溫孵育30min。(5)再次洗滌5次。(6)每孔加入50μl底物,并于室溫孵育10min或直至液體顏色變藍。(7)每孔加入50μl終止液,并立即于450nm處讀取吸光度。進行兩次實驗重復。ELISA試劑盒所使用的96孔板,其底部預先包被有被測蛋白質的特異性抗體,待加入標準品或被檢樣本后,相應的蛋白質會與預先包被的抗體結合,孵育和洗滌后;加入的生物素化的特異性蛋白質抗體,會與已固定的蛋白質結合,孵育和洗滌后;加入SP連接物與之結合;最后加入顯色底物,孵育后終止顯色。采用微孔板分光光度計(美國Bio-Rad公司)檢測吸光度值,根據(jù)檢測到的吸光度值,繪制的標準曲線測量出樣本中的蛋白質含量。

    1.3 肺結核病患者臨床檢測指標分析 對患者臨床檢測指標進行收集和統(tǒng)計分析,包括血漿纖維蛋白原(FIB)、PT、APTT、TT、血糖、C反應蛋白(CRP)、TG等臨床檢測值,并與正常范圍中值進行比較。觀察肺結核病患者胸部CT檢查結果:是否存在空洞型病變存以及空洞型病變的類型。

    1.4 統(tǒng)計學處理 應用SPSS version 16.0和GraphPad Prism version 5統(tǒng)計軟件,正態(tài)分布的計量資料以表示,兩組間比較采用t檢驗;非正態(tài)分布的計量資料以中位數(shù),兩組間比較采用Mann-Whitney U檢驗。采用單樣本t檢驗檢測肺結核病患者臨床檢測結果,用Spearman相關分析蛋白質檢測值與臨床檢測指標的相關性。使用MedCalc軟件(version 11.4)進行ROC曲線分析蛋白質的靈敏度和特異度,通過邏輯回歸方法建立蛋白質模型。

    2 結果

    2.1 兩組患者IGHG3和HPT含量及ROC曲線分析ELISA實驗結果顯示,肺結核病患者組IGHG3含量為2.16μg/μl,HPT含量為 1 632.31μg/ml,健康對照組IGHG3含量為1.02μg/μl,HPT含量為796.00μg/ml,兩組IGHG3、HPT含量的比較差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.01);ROC曲線分析結果顯示,IGHG3蛋白的AUC為0.79,靈敏度為74.0%,特異度為79.4%(圖1a);HPT蛋白AUC值為0.684,靈敏度為48.0%,特異度為86.1%(圖1b)。通過邏輯回歸建立蛋白質模型,邏輯回歸方程為Logit(p)=-2.6441+1.1693×(IGHG3)+0.0009406×(HPT),該模型鑒別診斷肺結核病AUC值為0.866,靈敏度為90.90%,特異度為80.80%(圖1c)。

    2.2 肺結核病患者臨床檢查指標分析 肺結核病患者FIB、APTT、CRP值與正常范圍比較差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.01),PT、TT、血糖、TG值與正常范圍比較差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05),詳見表1。根據(jù)患者胸部CT檢查結果,將病理改變分為空洞型和非空洞型,空洞型肺結核包括蟲蝕樣空洞、薄壁空洞、干酪空洞和纖維空洞,包括多發(fā)空洞或單發(fā)空洞;CT檢查結果顯示無空洞的患者為非空洞型肺結核。在進行統(tǒng)計學分析時,將空洞型患者標記為1,將非空洞型患者標記為0,再采用Spearman相關分析結核空洞型、非空洞型與IGHG3、HPT含量的相關性;同時,分析FIB、PT、APTT、TT、血糖等檢測結果與IGHG3和HPT含量的相關性。分析結果顯示,IGHG3與CRP呈正相關(r=0.372,P= 0.014),HPT與肺結核病患者空洞病變呈正相關(r= 0.280,P=0.04),IGHG3、HPT與其他臨床檢測指標無相關性,詳見表2。

    圖1 IGHG3、HPT的ROC曲線分析圖(a:IGHG3;b:HPT;c:IGHG3+HPT)

    表1 肺結核病患者臨床檢測指標結果分析

    表2 IGHG3、HPT與臨床檢測指標的相關性

    3 討論

    肺結核病是一種慢性感染性疾病,固有免疫在Mtb入侵時起著機體免疫首要防線的關鍵作用[6],肉芽腫的形成是肺結核病的重要病理過程,其與單核細胞和巨噬細胞等免疫過程相關[7]。隨著Mtb感染程度的不同,患者可表現(xiàn)為不同的病理改變。肺結核病的病理改變主要有增生性病變、滲出性病變、變質性病變。病理改變情況受機體的免疫力、變態(tài)反應性,以及Mtb的入侵數(shù)量和毒力強度影響較大。本研究檢測結果顯示,肺結核病患者FIB、APTT、CRP水平與正常范圍有統(tǒng)計學差異,表明患者的凝血可能存在異常,并且可能存在急性炎癥反應。

    有研究表明固有免疫應答與肺結核病的進展不無相關[8-9],這種免疫應答機制同樣會導致機體的組織損傷[10]。機體會針對Mtb及其代謝產(chǎn)物產(chǎn)生遲發(fā)型超敏反應(Ⅳ型變態(tài)反應),它以T淋巴細胞為介導,并以巨噬細胞為效應細胞,以另一亞群T淋巴細胞釋放炎性介質、淋巴細胞毒素等,使局部組織出現(xiàn)滲出性炎癥甚至干酪樣壞死,表現(xiàn)為病灶惡化、浸潤、進展等病理變化[2]。IGHG3能與中性粒細胞、巨噬細胞上的IgG Fc受體(FcγR)結合,從而發(fā)揮對巨噬細胞的調理作用,并促進巨噬細胞吞噬功能;IGHG3還能與樹突細胞表面表達的FcγRI高親和結合[11],增加樹突細胞將抗原提呈給T淋巴細胞的作用[12]。本實驗中,肺結核病患者IGHG3水平顯著高于健康對照組。此外,本研究還發(fā)現(xiàn)患者IGHG3含量與急性炎癥反應蛋白CRP含量存在顯著正相關。因此,筆者認為IGHG3與肺結核病患者的Ⅳ型變態(tài)反應相關,可能是通過巨噬細胞作用及T淋巴細胞的介導的相關作用參與肺結核病的病理改變過程;同時,升高的IGHG3還可能與患者的急性炎癥反應相關。

    有研究表明低氧狀態(tài)能抑制Mtb感染[5],Mtb侵入機體巨噬細胞形成肉芽腫[13],而肉芽腫內及被Mtb感染的巨噬細胞處于低氧狀態(tài)[14]。組織低氧狀態(tài)會導致血液中Hb含量增加。Hb能將肺表面的氧運輸至需氧組織,提高血液中的氧利用率,但Hb含量增加導致氧自由基的產(chǎn)生,從而引起組織氧化性損傷的發(fā)生[15]。HPT是一種急性反應蛋白,能結合并消除Hb。本實驗中,肺結核病患者血清HPT含量顯著高于正常人,筆者認為HPT可能與肺結核病患者的組織低氧狀況相關,與患者病理改變相關,HPT含量的升高有助于減少低氧引起的組織氧化性損傷的發(fā)生。

    空洞是肺結核病的常見影像學表現(xiàn),是由浸潤型肺結核、肺結核球的干酪樣壞死組織發(fā)生液化、脫落和排出形成。肺結核空洞的形成是結核活動性的表現(xiàn)之一[16]。當機體免疫力低下,結核桿菌感染后病變不易局限時,組織容易液化壞死而形成空洞[17]。肺結核病患者HPT含量顯著高于健康睡著組,并與空洞的存在呈正相關,表明肺結核病患者血清HPT含量的升高,提示了患者結核活動性的增強。

    此外,ROC曲線分析和邏輯回歸分析結果顯示,IGHG3和HPT組成的蛋白質模型,在診斷肺結核病患者時具有良好的靈敏度和特異度,該蛋白質模型的AUC為0.866,表明血清IGHG3和HPT是肺結核病的潛在生物標志物。

    [1] World Health Organization.GlobalTuberculosis Report 2016.http: //www.who.int/mediacentre/factsheets/fs104/en/

    [2] Lange C,Sester M.TB or not TB:the role of immunodiagnosis[J]. EurJ Immunol,2012,42(11):2840-2843.doi:10.1002/eji.201242950.

    [3] Bruhns P,Iannascoli B,England P,et al.Specificity and affinity of human Fcgamma receptors and their polymorphic variants for human IgG subclasses[J].Blood,2009,113(16):3716-3725.doi: 10.1182/blood-2008-09-179754.

    [4] Tsai M C,Chakravarty S,Zhu G,et al.Characterization of the tuberculous granuloma in murine and human lungs:cellular composition and relative tissue oxygen tension[J].Cell Microbiol, 2006,8(2):218-232.doi:10.1111/j.1462-5822.2005.00612.x.

    [5] Froguel P,Ndiaye N C,Bonnefond A,et al.A Genome-Wide Association Study Identifies rs2000999 as a Strong Genetic Determinant of Circulating Haptoglobin Levels[J].PLOS ONE,2012,7 (3):e32327.doi:10.1371/journal.pone.0032327.

    [6] Wang C,Li Y Y,Li X,et al.Serum complement C4b,fibronectin, and prolidase are associated with the pathological changes of pulmonarytuberculosis[J].BMCInfectDis,2014,14:52.doi:10.1186/ 1471-2334-14-52.

    [7]李雪冰,李寶蘭,賴百塘,等.肺結核患者血清MMP-9和VEGF水平檢測的臨床研究[J].中國防癆雜志,2007,29(2):184-185.

    [8] Kleinnijenhuis J,Oosting M,Joosten L A,et al.Innate immune recognition of Mycobacterium tuberculosis[J].Clin Dev Immunol, 2011,2011:405310.doi:10.1155/2011/405310.

    [9] VankayalapatiR,Barnes P F.Innate and adaptive immune responses to human Mycobacterium tuberculosis infection[J].Tuberculosis(Edinb),2009,89(Suppl1):S77-S80.doi:10.1016/S1472-9792(09)70018-6.

    [10] Hernandez-Pando R,Orozco H,Aguilar D.Factors that deregulate the protective immune response in tuberculosis[J].Arch Immunol Ther Exp(Warsz),2009,57(5):355-367.doi:10.1007/ s00005-009-0042-9.

    [11] Nimmerjahn F,Ravetch J V.Fcγ receptors as regulators of immune responses[J].Nat Rev Immunol,2008,8(1):34-47.doi:10. 1038/nri2206.

    [12] Maglione P J,Xu J,Casadevall A,et al.Fc γ receptors regulate immune activation and susceptibility during Mycobacterium tuberculosis infection[J].J Immunol,2008,180(5):3329-3338.

    [13] Russell D G,Cardona P J,Kim M J,et al.Foamy macrophages and the progression of the human tuberculosis granuloma[J]. Nat Nat Immunol,2009,10(9):943-948.doi:10.1038/ni.1781.

    [14] Nickel D,Busch M,Mayer D,et al.Hypoxia triggers the expression of human β defensin 2 and antimicrobial activity against Mycobacterium tuberculosis in human macrophages[J].J Immunol,2012,188(8):4001-4007.doi:10.4049/jimmunol.

    [15] Babu R,Bagley J H,Di C,et al.Thrombin and hemin as central factors in the mechanisms of intracerebral hemorrhage-induced secondary brain injury and as potential targets for intervention[J].Neurosurg Focus,2012,32(4):E8.doi:10.3171/ 2012.1.FOCUS11366.

    [16] 楊鈞,張海青,周新華,等.肺結核空洞的CT表現(xiàn)及病理基礎[J].中國醫(yī)學影像技術,2007,23(12):1831-1833.

    [17] 卜建玲,馬玙.糖尿病與肺結核[J].中國抗生素雜志,2004,29(12): 738-741.

    Serum IGHG3 and HPT levels in patients with pulmonary tuberculosis


    SHI Liying,MOU Baohua,JIANG Tingting.Department of Clinical Laboratory,Zhejiang Hospital,Hangzhou 310013,China

    Tuberculosis Serum Immunity

    2017-01-16)

    (本文編輯:嚴瑋雯)

    10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.9.2017-130

    華南理工大學醫(yī)學院科學研究項目(yxy2016006)

    310013 杭州,浙江醫(yī)院檢驗科(施力穎);中國醫(yī)科大學紹興醫(yī)院科教科(牟寶華);華南理工大學醫(yī)學院(江婷婷)

    江婷婷,E-mail:ttjiang@scut.edu.cn

    【 Abstract】 Objective To investigate serum Ig Gamma-3 Chain C Region(IGHG3)and Haptoglobin(HPT)levels in patients with pulmonary tuberculosis(TB).Methods Serum IGHG3 and HPT levels were tested by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)in 50 TB patients and 36 healthy subjects.Plasma fibrinogen(FIB),prothrombin time(PT),activated partial thromboplastin time(APTT),thromboplastin time(TT),blood glucose,C reaction protein(CRP),triglyceride(TG)were measured. Results Serum IGHG3)and HPT levels in TB patients were significant higher than those in healthy controls(P<0.0001 and P= 0.0037).There were significant differences in plasma FIB,APTT and CRP levels between TB patients and healthy controls (P= 0.04,P=0.004,P=0.0001,respectively).Serum IGHG3 level was significantly correlated with serum CRP(r=0.372,P=0.014),and the serum HPT level was significantly correlated with the existence of tuberculosis cavity(r=0.28,P=0.04).A protein model consisting of IGHG3 and HPT was established by logistic regression analysis,and the sensitivity,specificity,and area under curve(AUC)of the model was 90.90%,80.80%,and 0.866,respectively. Conclusion IGHG3 and HPT may be potential biomarkers for TB patients.

    猜你喜歡
    肺結核病空洞蛋白質
    蛋白質自由
    肝博士(2022年3期)2022-06-30 02:48:48
    健康教育對于肺結核病防控管理的效果研究
    人工智能與蛋白質結構
    海外星云(2021年9期)2021-10-14 07:26:10
    空洞的眼神
    蛋白質計算問題歸納
    莫西沙星和左氧氟沙星在耐多藥肺結核病治療方案中的效果比較
    用事實說話勝過空洞的說教——以教育類報道為例
    新聞傳播(2015年20期)2015-07-18 11:06:46
    110例耐藥肺結核病臨床特征分析
    牛肺結核病的病理形態(tài)學探討
    臭氧層空洞也是幫兇
    世界科學(2013年11期)2013-03-11 18:09:47
    少妇 在线观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 中亚洲国语对白在线视频| 日韩欧美免费精品| 久久久久久久精品吃奶| av网站免费在线观看视频| 久久性视频一级片| 欧美丝袜亚洲另类 | 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日韩欧美三级三区| 久久九九热精品免费| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲最大成人中文| 国产精品影院久久| 日韩视频一区二区在线观看| 国产单亲对白刺激| 9191精品国产免费久久| 99国产极品粉嫩在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 大香蕉久久成人网| 九色国产91popny在线| 少妇 在线观看| 精品人妻在线不人妻| 午夜亚洲福利在线播放| 可以免费在线观看a视频的电影网站| netflix在线观看网站| 亚洲 国产 在线| 国产精品久久久人人做人人爽| 久热这里只有精品99| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 亚洲情色 制服丝袜| 一级黄色大片毛片| 精品国产美女av久久久久小说| 免费搜索国产男女视频| 级片在线观看| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| av欧美777| 男女下面插进去视频免费观看| 欧美丝袜亚洲另类 | 1024视频免费在线观看| 久久热在线av| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久久久久大精品| 老司机午夜十八禁免费视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 精品一品国产午夜福利视频| 黄片大片在线免费观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲久久久国产精品| 给我免费播放毛片高清在线观看| 久久青草综合色| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产三级黄色录像| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产精品亚洲美女久久久| 黄色 视频免费看| 天堂√8在线中文| 男人操女人黄网站| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲熟女毛片儿| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产一区二区三区在线臀色熟女| a在线观看视频网站| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲中文字幕日韩| 国产亚洲欧美在线一区二区| 性欧美人与动物交配| 欧美乱色亚洲激情| 免费搜索国产男女视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲精品国产区一区二| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产麻豆69| 午夜日韩欧美国产| 涩涩av久久男人的天堂| 一级,二级,三级黄色视频| 成人18禁在线播放| 一区二区三区激情视频| 色综合站精品国产| 免费在线观看黄色视频的| 亚洲精品av麻豆狂野| 18禁观看日本| 一夜夜www| 精品日产1卡2卡| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产高清激情床上av| 麻豆av在线久日| 两个人看的免费小视频| 久久欧美精品欧美久久欧美| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产激情久久老熟女| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 亚洲精品av麻豆狂野| 日韩精品青青久久久久久| 日韩视频一区二区在线观看| e午夜精品久久久久久久| 两个人看的免费小视频| 9色porny在线观看| 国产激情欧美一区二区| 91九色精品人成在线观看| 亚洲专区字幕在线| 午夜两性在线视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 国产精品亚洲av一区麻豆| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲一区二区三区不卡视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 久久国产精品人妻蜜桃| 国产1区2区3区精品| 黄色成人免费大全| 男女午夜视频在线观看| 精品乱码久久久久久99久播| 又大又爽又粗| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产高清视频在线播放一区| 大型av网站在线播放| 伦理电影免费视频| 97碰自拍视频| 中国美女看黄片| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 神马国产精品三级电影在线观看 | 久久久国产精品麻豆| 国产精品亚洲av一区麻豆| 97人妻天天添夜夜摸| 黄片小视频在线播放| 99香蕉大伊视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 午夜久久久久精精品| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 黄频高清免费视频| 久久久久久久久免费视频了| 日韩成人在线观看一区二区三区| 免费看十八禁软件| 91在线观看av| 国产91精品成人一区二区三区| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲最大成人中文| 岛国视频午夜一区免费看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 不卡av一区二区三区| 在线永久观看黄色视频| 美女 人体艺术 gogo| 日韩国内少妇激情av| 午夜福利一区二区在线看| 午夜免费激情av| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲欧美日韩无卡精品| 青草久久国产| 精品国内亚洲2022精品成人| 波多野结衣高清无吗| 18禁美女被吸乳视频| 欧美大码av| 午夜视频精品福利| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 黑人欧美特级aaaaaa片| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 一本久久中文字幕| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 99国产精品免费福利视频| x7x7x7水蜜桃| 国产精品99久久99久久久不卡| 天堂动漫精品| 久久久国产成人精品二区| 一二三四在线观看免费中文在| АⅤ资源中文在线天堂| 校园春色视频在线观看| 好男人电影高清在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 91大片在线观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产成人系列免费观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 十八禁网站免费在线| 老司机午夜十八禁免费视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 嫩草影院精品99| 在线播放国产精品三级| 自线自在国产av| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产精品一区二区免费欧美| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产国语露脸激情在线看| 欧美激情久久久久久爽电影 | 又黄又粗又硬又大视频| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 午夜福利成人在线免费观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 日日爽夜夜爽网站| 精品国产美女av久久久久小说| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲一区中文字幕在线| 国产三级黄色录像| www.精华液| 久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 最近最新中文字幕大全电影3 | 国产又爽黄色视频| 一级作爱视频免费观看| 成年版毛片免费区| 国产av精品麻豆| 欧美大码av| 日本五十路高清| www.www免费av| 9191精品国产免费久久| 久久精品影院6| 老司机福利观看| 欧美性长视频在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美一级毛片孕妇| 丁香六月欧美| 久久久久久久午夜电影| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产精品国产高清国产av| 亚洲国产看品久久| 电影成人av| 国产精品一区二区在线不卡| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲全国av大片| 欧美日韩乱码在线| 日本在线视频免费播放| 免费在线观看影片大全网站| 久久久久久大精品| 国产精品永久免费网站| 亚洲专区中文字幕在线| 国产成人精品久久二区二区91| xxx96com| 在线观看www视频免费| 免费av毛片视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 老鸭窝网址在线观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 99久久99久久久精品蜜桃| 色在线成人网| 午夜亚洲福利在线播放| 成年女人毛片免费观看观看9| 91九色精品人成在线观看| 亚洲自拍偷在线| 露出奶头的视频| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲av片天天在线观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 天天添夜夜摸| 少妇的丰满在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 99国产精品一区二区三区| 美女午夜性视频免费| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 男人操女人黄网站| svipshipincom国产片| 黑人操中国人逼视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 丰满的人妻完整版| 久久中文字幕人妻熟女| aaaaa片日本免费| 9191精品国产免费久久| 18禁观看日本| 日韩三级视频一区二区三区| 操出白浆在线播放| 99国产精品99久久久久| 99国产极品粉嫩在线观看| 黄色视频不卡| 可以在线观看的亚洲视频| 欧美日本视频| 日本五十路高清| 美女高潮到喷水免费观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲av美国av| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 久久天堂一区二区三区四区| 丝袜人妻中文字幕| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产精品影院久久| 精品免费久久久久久久清纯| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产精品免费视频内射| 国产精品免费一区二区三区在线| 这个男人来自地球电影免费观看| 久久青草综合色| 成人国产一区最新在线观看| 男女下面进入的视频免费午夜 | 18禁美女被吸乳视频| 久久午夜综合久久蜜桃| av天堂在线播放| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 99香蕉大伊视频| 日日夜夜操网爽| 不卡一级毛片| 88av欧美| 国产极品粉嫩免费观看在线| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 成人三级做爰电影| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 国产1区2区3区精品| 又黄又爽又免费观看的视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 91av网站免费观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久久久水蜜桃国产精品网| aaaaa片日本免费| 看片在线看免费视频| 美女大奶头视频| 久久精品91无色码中文字幕| 国产在线精品亚洲第一网站| 少妇 在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| bbb黄色大片| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 久久人人精品亚洲av| 国产成人精品久久二区二区91| av天堂久久9| av免费在线观看网站| 国产精品久久久av美女十八| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲欧美激情在线| 99精品欧美一区二区三区四区| 国内精品久久久久久久电影| 欧美乱色亚洲激情| 一进一出好大好爽视频| 操出白浆在线播放| 波多野结衣巨乳人妻| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久中文字幕一级| 日本三级黄在线观看| 激情视频va一区二区三区| 黄色视频不卡| 久久草成人影院| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲av第一区精品v没综合| av天堂久久9| www.自偷自拍.com| 国产伦人伦偷精品视频| 伦理电影免费视频| 村上凉子中文字幕在线| 久久亚洲真实| 伦理电影免费视频| 国产精品影院久久| 久久久久国内视频| 看片在线看免费视频| 国产av在哪里看| 91成人精品电影| 国产精品日韩av在线免费观看 | 亚洲欧美激情在线| 国产成人精品在线电影| 成熟少妇高潮喷水视频| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲av熟女| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产一区在线观看成人免费| 男人操女人黄网站| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 午夜a级毛片| 电影成人av| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久人妻av系列| 亚洲自拍偷在线| 久久香蕉激情| 欧美精品亚洲一区二区| 国产av精品麻豆| 欧美久久黑人一区二区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 制服诱惑二区| 曰老女人黄片| 黄色视频,在线免费观看| 91大片在线观看| 精品久久久久久,| 热99re8久久精品国产| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产伦人伦偷精品视频| 成人欧美大片| 99国产精品免费福利视频| 国产高清videossex| 欧美在线黄色| 三级毛片av免费| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产精华一区二区三区| 女性被躁到高潮视频| 午夜影院日韩av| 久久人人精品亚洲av| 69av精品久久久久久| 99riav亚洲国产免费| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久精品影院6| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 日韩欧美国产一区二区入口| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 操美女的视频在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 欧美激情高清一区二区三区| 国产精品 欧美亚洲| 午夜精品国产一区二区电影| 男女之事视频高清在线观看| 国产高清videossex| 久久欧美精品欧美久久欧美| 满18在线观看网站| av电影中文网址| 午夜福利18| 成年人黄色毛片网站| 欧美性长视频在线观看| 大陆偷拍与自拍| 亚洲在线自拍视频| 亚洲片人在线观看| 日韩欧美在线二视频| 国产99白浆流出| 欧美激情高清一区二区三区| 欧美国产日韩亚洲一区| 一区二区三区激情视频| 国产伦人伦偷精品视频| 色av中文字幕| 亚洲专区中文字幕在线| 国产国语露脸激情在线看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 欧美在线一区亚洲| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 天堂√8在线中文| 成人18禁在线播放| av在线播放免费不卡| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美精品啪啪一区二区三区| 91成年电影在线观看| 亚洲在线自拍视频| 男女下面进入的视频免费午夜 | 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲在线自拍视频| 免费少妇av软件| 精品一区二区三区四区五区乱码| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲九九香蕉| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久精品国产清高在天天线| 国产单亲对白刺激| 午夜福利高清视频| 日韩av在线大香蕉| 国产精品1区2区在线观看.| cao死你这个sao货| 在线观看舔阴道视频| 国产精品日韩av在线免费观看 | 亚洲,欧美精品.| 久久草成人影院| 成人国产一区最新在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 老司机深夜福利视频在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 日韩大尺度精品在线看网址 | 国内精品久久久久精免费| 一a级毛片在线观看| 精品久久蜜臀av无| 男人舔女人的私密视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产免费av片在线观看野外av| 少妇被粗大的猛进出69影院| 午夜成年电影在线免费观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 黄色视频不卡| 99热只有精品国产| 午夜福利18| 禁无遮挡网站| 久久国产亚洲av麻豆专区| 一区福利在线观看| 一本久久中文字幕| 黄片播放在线免费| 免费看a级黄色片| 夜夜爽天天搞| 超碰成人久久| 人成视频在线观看免费观看| 动漫黄色视频在线观看| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 男女午夜视频在线观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲在线自拍视频| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲最大成人中文| 大香蕉久久成人网| 午夜精品国产一区二区电影| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 一区福利在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 嫩草影院精品99| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 久久久久国内视频| 大型黄色视频在线免费观看| 成人亚洲精品av一区二区| 国产精品久久久久久精品电影 | 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲成a人片在线一区二区| 在线观看免费视频网站a站| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲专区字幕在线| 一区二区三区精品91| 国产精品影院久久| 亚洲国产中文字幕在线视频| www.999成人在线观看| 丝袜美足系列| 亚洲黑人精品在线| 久久婷婷成人综合色麻豆| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产精品野战在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产在线观看jvid| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产精品精品国产色婷婷| 老司机在亚洲福利影院| 久99久视频精品免费| 欧美在线黄色| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 在线观看66精品国产| 18禁黄网站禁片午夜丰满| av在线播放免费不卡| 我的亚洲天堂| 99国产综合亚洲精品| 国产视频一区二区在线看| 国产成人av教育| 亚洲片人在线观看| 看片在线看免费视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 在线观看www视频免费| 欧美丝袜亚洲另类 | 夜夜躁狠狠躁天天躁| 免费看美女性在线毛片视频| 一级a爱视频在线免费观看| 免费在线观看黄色视频的| av在线播放免费不卡| 真人做人爱边吃奶动态| 视频在线观看一区二区三区| 精品人妻1区二区| 午夜久久久久精精品| 黑丝袜美女国产一区| 少妇 在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产成人免费无遮挡视频| 麻豆一二三区av精品| 国产精品久久久久久精品电影 | 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产亚洲精品久久久久5区| 中出人妻视频一区二区| 99国产精品99久久久久| 国产精品久久久久久精品电影 | 日韩大码丰满熟妇| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲熟妇熟女久久| www.精华液| 美女大奶头视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 性色av乱码一区二区三区2| 久久精品91蜜桃| 91麻豆av在线| 国产午夜精品久久久久久| 免费无遮挡裸体视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | a级毛片在线看网站| 黄色 视频免费看| 国产熟女午夜一区二区三区| 久久精品91蜜桃| 一级作爱视频免费观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 精品不卡国产一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一小说| 精品福利观看| 亚洲七黄色美女视频| 757午夜福利合集在线观看| 国产高清有码在线观看视频 | 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产又色又爽无遮挡免费看| 欧美丝袜亚洲另类 | 黄片小视频在线播放| 中文字幕精品免费在线观看视频| tocl精华| avwww免费| 亚洲av成人一区二区三| 一本久久中文字幕| 国产真人三级小视频在线观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久久久九九精品影院| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 99国产精品一区二区三区| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 一本久久中文字幕| 国产又色又爽无遮挡免费看| 9191精品国产免费久久|