燒傷患者中性粒細(xì)胞趨化因子變化分析

何永勝

（河南長(zhǎng)垣市人民醫(yī)院，燒傷科，河南 長(zhǎng)垣 453400）

感染是燒傷患者常見(jiàn)的一種并發(fā)癥，其發(fā)病率及死亡率均很高，是導(dǎo)致燒傷患者休克或死亡的一個(gè)主要原因 [1]。中性粒細(xì)作為機(jī)體防御反應(yīng)的第一道防線(xiàn)，在機(jī)體感染時(shí)有重要的免疫應(yīng)答功能，而趨化因子則能誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞遷移至感染灶。本研究選取燒傷患者和健康者為研究對(duì)象，來(lái)探討燒傷患者外周血中性粒細(xì)胞趨化因子的變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取56例2018年2月至2020年5月來(lái)我院救治的燒傷患者為研究組，其中30例患者為男性，26例患者為女性；平均年齡35.67±6.12歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：⑴均為燒傷患者；⑵均是成年患者；⑶患者的意識(shí)均清晰，可以進(jìn)行語(yǔ)言的交流；⑷患者均有簽署知情同意書(shū)。同時(shí)選取同時(shí)期所招募的健康志愿者60例為對(duì)照組，男性33例，女性27例，平均年齡35.81±6.01歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴肝腎功能不全的患者；⑵合并心、肝、腎等重要器官并發(fā)癥的患者；⑶凝血功能障礙的患者；⑷有免疫功能疾病的患者；⑸合并意識(shí)障礙的患者。本研究通過(guò)了我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的審核。

1.2 方法與觀(guān)察指標(biāo)

試驗(yàn)做3次，取平均值。

1.2.1 中性粒細(xì)胞的趨化距離

①將0.55g瓊脂糖加入由美國(guó)Gibco公司提供的含1.6mL熱滅活胎牛血清的18.4mL RPMI 1640培養(yǎng)基中，然后與由美國(guó)Gibco公司提供的2.3mL含鎂、鈣離子的Hank平衡鹽溶液輕微振蕩混勻。② 將上述配置溶液放入70℃的熱水浴中靜置20s后加入無(wú)包被直徑35mm的培養(yǎng)皿中，室溫冷卻凝固后使用空心管打3個(gè)孔（3.5mm孔徑），孔間距均為2.4mm。負(fù)壓吸取孔內(nèi)的瓊脂糖后室溫靜置后備用。③取兩組患者外周血的中性粒細(xì)胞（兩組患者均在入院后1d、3d、5d取外周靜脈血，然后用流式細(xì)胞儀來(lái)檢測(cè)中性粒細(xì)胞的純度＞95%[6]，用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)），調(diào)整細(xì)胞濃度至1×107個(gè)?mL-1。在兩邊的孔中均加入10μL的調(diào)整好的中性粒細(xì)胞，在中間孔加入10μL的物質(zhì)量的趨化物IL-8（濃度10μmol/L）。然后將培養(yǎng)皿放入37℃培養(yǎng)箱（二氧化碳的體積分?jǐn)?shù)為5%）中進(jìn)行2h的培養(yǎng)，然后將培養(yǎng)皿放于40倍倒置的顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察中性粒細(xì)胞趨化到中間趨化物的距離。

1.2.2 CXCR1與CXCR2受體陽(yáng)性率

入院3d時(shí)取上述兩組患者外周血的中性粒細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度到1×106個(gè)?mL-1 ，然后在4℃下離心10min（400×g），接著用預(yù)冷的PBS重新懸浮細(xì)胞，3次后棄上清液用100μL結(jié)合緩沖液重新懸浮細(xì)胞。然后向懸浮細(xì)胞加入依次加入藻紅蛋白標(biāo)記及別藻藍(lán)蛋白標(biāo)記的鼠抗人CXCR1及CXCR2流失抗體（由美國(guó)BD公司提供）進(jìn)行孵育30min，然后離心棄去上清液，用500μL的結(jié)合緩沖液重新懸浮細(xì)胞，然后用流式細(xì)胞儀來(lái)檢測(cè)CXCR1與CXCR2的陽(yáng)性率。

1.2.3 炎性細(xì)胞因子的水平

采取兩組研究對(duì)象的靜脈血，靜置30min后離心（400×g ）10min取血清按ELISA檢測(cè)試劑盒來(lái)檢檢測(cè)兩組患者血清中IL-6、IL-10水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究使用SPSS 24.0處理數(shù)據(jù)。采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）來(lái)描述計(jì)量資料，組間比較為t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者中性粒細(xì)胞的趨化距離

研究組患者入院1d、3d、5d時(shí)中性粒細(xì)胞的趨化距離均明顯短于對(duì)照組（p＜0.05），詳見(jiàn)表1。

表1 兩組患者中性粒細(xì)胞的趨化距離對(duì)比（X± SD）

2.2 兩組患者中性粒細(xì)胞趨化因子受體陽(yáng)性表達(dá)的比較

研究組患者入院3d時(shí)中性粒細(xì)胞趨化因子受體CXCR1與CXCR2受體陽(yáng)性率均明顯低于對(duì)照組（p＜0.05），詳見(jiàn)表2。

表2 兩組患者中性粒細(xì)胞趨化因子受體陽(yáng)性表達(dá)的比較（±SD）

表2 兩組患者中性粒細(xì)胞趨化因子受體陽(yáng)性表達(dá)的比較（±SD）

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2.3 研究組患者不同燒傷程度患者中性粒細(xì)胞趨化因子受體陽(yáng)性表達(dá)的比較

依據(jù)1970年全國(guó)燒傷會(huì)議討論所通過(guò)的燒傷程度分為輕度燒傷組、中度燒傷組和重度燒傷組。重度燒傷組患者的入院3d時(shí)中性粒細(xì)胞趨化因子受體CXCR1與CXCR2受體陽(yáng)性率明顯低于輕度燒傷組與中度燒傷組，中度燒傷組入院3d時(shí)中性粒細(xì)胞趨化因子受體CXCR1與CXCR2受體陽(yáng)性率明顯低于輕度燒傷組，詳見(jiàn)表3。

2.4 炎性細(xì)胞因子水平的比較

研究組患者IL-6、IL-10及TNF-α的水平想高于對(duì)照組，性能見(jiàn)表4。

表 3研究組患者不同燒傷程度患者中性粒細(xì)胞趨化因子受體陽(yáng)性表達(dá)的比較（±SD）

表 3研究組患者不同燒傷程度患者中性粒細(xì)胞趨化因子受體陽(yáng)性表達(dá)的比較（±SD）

注：與輕度燒傷組比較，#P＜0.05；與中度燒傷組比較，*P＜0.05。

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表4 兩組研究 對(duì)象炎性細(xì)胞因子的比較（±SD）

表4 兩組研究 對(duì)象炎性細(xì)胞因子的比較（±SD）

注：與對(duì)照組相比，*P＜0.05。

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3 討論

嚴(yán)重?zé)齻颊卟粌H要遭受身體的痛苦，而且還會(huì)遭受精神上的痛苦，這是由于患者的身體在嚴(yán)重?zé)齻髮?duì)溫度的敏感性及耐受度都有所降低，其患處會(huì)有增生、瘙癢等癥狀，降低患者的免疫力，進(jìn)而會(huì)引發(fā)各種并發(fā)癥。

感染是燒傷患者最常見(jiàn)的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，是造成患者死亡的主要因素之一[2]?？刂聘腥臼桥R床工作治療燒傷患者的一個(gè)極其重要難題，有效地控制燒傷患者的感染是降低燒傷患者病死率的關(guān)鍵[3]。

本研究結(jié)果顯示燒傷患者外周血中CXCR1的陽(yáng)性表達(dá)率及CXCR2的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯降低，這一結(jié)果提示在燒傷患者感染期間，外周血中性粒細(xì)胞的趨化功能受到損害，因此感染部位發(fā)揮抗感染、吞噬病原微生物的功能有一定障礙，其原因可能是與趨化因子受體（CXCY1及CXCR2）的陽(yáng)性表達(dá)減少相關(guān)。本研究結(jié)果還顯示重度燒傷患者的外周血中CXCR1的陽(yáng)性表達(dá)率及CXCR2的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于中度及輕度燒傷組患者；中度燒傷組患者外周血中CXCR1的陽(yáng)性表達(dá)率及CXCR2的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于低度燒傷組患者[4-5]。這是對(duì)上述結(jié)果的進(jìn)一步證實(shí)。此外本研究顯示研究組患者的炎性細(xì)胞因子水平明顯高于對(duì)照組，這說(shuō)明燒傷患者的炎性反應(yīng)明顯高于健康人群。

綜上所述，燒傷患者早期外周血中性粒細(xì)胞的趨化功能存在著障礙，可能與中性粒細(xì)胞趨化因子（CXCY1及CXCR2）的陽(yáng)性表達(dá)率減少相關(guān)。