米邦塔仙人掌多糖的提取純化及體外抗氧化活性

林 款,徐叢玥,梁 征,茹 琴,李超英,2,*

(1.江漢大學(xué)武漢生物醫(yī)學(xué)研究院,湖北武漢 430056;2.漢濟生物科技(武漢)有限公司,湖北武漢 430075)

米邦塔仙人掌多糖的提取純化及體外抗氧化活性

林 款1,徐叢玥1,梁 征1,茹 琴1,李超英1,2,*

(1.江漢大學(xué)武漢生物醫(yī)學(xué)研究院,湖北武漢 430056;2.漢濟生物科技(武漢)有限公司,湖北武漢 430075)

目的:研究米邦塔仙人掌多糖的純化及體外抗氧化活性。方法:用水提醇沉的方法提取得到米邦塔仙人掌粗多糖polysaccharides from Opuntia Milpa Alta(MAP),MAP經(jīng)過DEAE-纖維素-52柱純化得到多糖MAP1和MAP2,經(jīng)過DEAE-瓊脂糖-CL-6B柱純化得到多糖MAP3。采用凝膠滲透色譜(GPC)分析多糖的相對分子質(zhì)量,采用體外抗氧化評價體系研究米邦塔仙人掌多糖抗氧化活性。結(jié)果:MAP1相對分子質(zhì)量(Mn)為476.9,MAP2相對分子質(zhì)量(Mn)分布為5449、9724、529 ku,MAP3相對分子質(zhì)量(Mn)分布為13270、15.87、474 ku。體外抗氧化活性結(jié)果顯示,MAP的總抗氧化能力最高,MAP2和MAP3對羥基自由基、超氧陰離子和DPPH自由基的清除作用均高于MAP,其中MAP2的各項抗氧化指標(biāo)的活性均高于MAP3。結(jié)論:純化后的MAP2具有較好的抗氧化活性,米邦塔仙人掌多糖體外抗氧化活性與其相對分子質(zhì)量有關(guān)。

米邦塔仙人掌,多糖,純化,相對分子質(zhì)量,體外抗氧化

米邦塔仙人掌(Opuntia Milpa Alta)屬仙人掌科、仙人掌屬、雙子葉植物,是墨西哥農(nóng)業(yè)專家經(jīng)過多年的種植、人工雜交、選育后培育出來的食用仙人掌品種[1]。近年來的研究表明,仙人掌的藥理作用已涉及到抑菌、抗炎、免疫、降血糖、抗癌及預(yù)防心腦血管疾病等范疇[2-3]。仙人掌的諸多功效與其化學(xué)成分密切相關(guān),主要包括多糖類、黃酮類、有機酸類、生物堿類和甾醇類等多種天然活性物質(zhì)[4-5]。

從植物中提取的多糖是由多個單糖或單糖衍生物聚合而成的大分子化合物[6],具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗疲勞、降血糖、抗病毒、抗氧化等生理活性[7-9]。目前對于米邦塔仙人掌多糖的研究大多停留在提取方法和結(jié)構(gòu)分析的階段,各實驗室對米邦塔仙人掌多糖結(jié)構(gòu)特征的研究結(jié)果也存在一定差異,對于多糖的相對分子質(zhì)量與生理活性之間關(guān)系的研究較少[10-11]。因此,深入研究米邦塔仙人掌多糖的構(gòu)效關(guān)系具有重要的意義。

自由基是機體氧化反應(yīng)產(chǎn)生的有害物質(zhì),是慢性疾病和衰老死亡的主要參與者,對人體的健康危害極大[12],因此,一些天然有效的自由基清除劑成為了當(dāng)今的研究熱點。從米邦塔仙人掌中提取的多糖是一種天然的活性物質(zhì),目前其生理活性的研究主要停留在降血脂和降血糖方面[13-14],而對于米邦塔仙人掌多糖的抗氧化活性研究鮮見研究報道。本研究采用水提醇沉提取米邦塔仙人掌多糖,用陰離子交換材料純化后分析相對分子質(zhì)量,并對其體外抗氧化活性進行研究,為米邦塔仙人掌多糖的活性研究和資源利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

米邦塔仙人掌 繁星花卉園藝中心;DEAE-纖維素-52、DEAE-瓊脂糖-CL-6B 北京瑞達恒輝科技發(fā)展有限公司;苯酚、濃硫酸、氯化鈉、Tris-HCl、氫氧化鈉、水楊酸、維生素C(VC)、硫酸亞鐵、鄰苯三酚、無水乙醇、過氧化氫、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、D-半乳糖醛酸、阿拉伯糖、甲醇、乙醚、丙酮 國藥集團化學(xué)試劑有限公司;總抗氧化能力檢測試劑盒 上海源葉生物公司。

恒溫加熱磁力攪拌器、多功能粉碎機 河南省予華儀器有限公司;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、BSZ-100型自動部分收集器 上海亞榮生化儀器廠;冷凍干燥機 上海豫明儀器有限公司;紫外-可見分光光度計 Perkin Elmer;酶標(biāo)儀、離心機 Thermo Fisher Scientific;安捷倫1100液相色譜儀 安捷倫科技有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 米邦塔仙人掌粗多糖(MAP)的制備 參照文獻所報道的方法并加以改進[15-16]。取新鮮的米邦塔仙人掌,洗凈后切片,烘干后用粉碎機打粉,以料液比為1∶2(g/mL)加入石油醚脫脂。取脫脂后的仙人掌粉末,以1∶28(g/mL)的料液比加入蒸餾水,83 ℃攪拌3 h,離心取上清液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至1/4體積,加入250 U/mg的胰蛋白酶,37 ℃水浴0.5 h。向提取液中加入4倍體積的95%乙醇,靜置過夜,離心得到沉淀,將沉淀依次用無水乙醇、丙酮、乙醚清洗3次,冷凍干燥后得到粗多糖樣品MAP。

1.2.2 米邦塔仙人掌多糖的純化

1.2.2.1 陰離子交換柱DEAE-纖維素-52純化 稱取0.1 g MAP,加入10 mL蒸餾水充分?jǐn)嚢枞芙?10000 r/min離心15 min,上清液過DEAE-纖維素-52柱。上樣吸附半個小時,用蒸餾水和0.5 mol/L NaCl分別洗脫,流速2 mL/min,每管收集8 mL。用苯酚-硫酸法在482 nm處測定每管吸光度,以試管編號為橫坐標(biāo),吸光度值為縱坐標(biāo)繪制洗脫曲線。收集合并洗脫峰段溶液,旋蒸濃縮和透析脫鹽后,進行冷凍干燥得到水洗脫部分多糖MAP1和鹽洗脫部分多糖MAP2[17]。

1.2.2.2 陰離子交換柱DEAE-瓊脂糖-CL-6B純化 稱取0.05 g MAP,加入10 mL蒸餾水充分?jǐn)嚢枞芙夂?0000 r/min離心15 min,上清液過DEAE-瓊脂糖-CL-6B柱。上樣吸附半個小時,用蒸餾水洗3個柱體積,棄去,然后用0.1 mol/L NaCl洗脫,流速1.5 mL/min,每管收集6 mL。其他步驟同1.2.2.1,冷凍干燥后得到MAP3[18]。

1.2.3 總糖和糖醛酸含量的測定 分別取2 mL 0.03 mg/mL的各多糖溶液,2 mL阿拉伯糖各標(biāo)準(zhǔn)品溶液,向各管加入4%的苯酚溶液0.5 mL,迅速滴加5 mL濃硫酸,搖勻,冷卻至室溫,靜置15 min,測定其在482 nm處的吸光度,另取2 mL蒸餾水同法操作為參比。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中總糖的含量[19]。

分別取1 mL 0.5 mg/mL的各多糖溶液,1 mL D-半乳糖醛酸各標(biāo)準(zhǔn)品溶液,在冰水浴中分別加入濃硫酸溶液6 mL,混勻,于80 ℃水浴加熱20 min,取出后立即冷卻至室溫,加入0.15%咔唑溶液0.2 mL,搖勻,室溫下保持2 h后,在530 nm處測定吸光度,用1 mL蒸餾水作為參比。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中糖醛酸的含量[20]。

1.2.4 米邦塔仙人掌多糖相對分子質(zhì)量的測定

1.2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 不同分子量的葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品186、10、40、70、500、2000 ku,分別用流動相溶解配制成2 mg/mL的溶液,按照色譜條件在凝膠滲透色譜(GPC)上進行分析,記錄洗脫峰保留時間。

1.2.4.2 樣品相對分子質(zhì)量(Mn)的測定 分別取米邦塔仙人掌多糖MAP1、MAP2和MAP3配制成2 mg/mL的溶液,用流動相溶解,按照色譜條件在凝膠滲透色譜(GPC)上進行分析,記錄樣品保留時間。由樣品保留時間計算MAP1、MAP2、MAP3在凝膠柱上的洗脫體積,從而獲得分配系數(shù),通過公式換算得到米邦塔仙人掌多糖的相對分子質(zhì)量Mn[21]。

1.2.4.3 凝膠滲透色譜(GPC)條件 色譜柱PL aquagel-OH MIXED(7.5 mm×300 mm,8 μm);流動相:0.05 mol/L磷酸二氫鈉/磷酸氫二鈉水溶液(pH6.7)。進樣量30 μL,流速0.9 mL/min,溫度35 ℃,檢測器為示差折光檢測器。

1.2.5 米邦塔仙人掌多糖體外抗氧化活性測定

1.2.5.1 總抗氧化能力測定(ABTS法) ABTS自由基清除活性測定使用ABTS總抗氧化能力評價方法。ABTS在氧化劑的作用下生成綠色的ABTS+,使用前12～16 h將ABTS反應(yīng)原液與過硫酸鉀混合,用PBS稀釋調(diào)整在734 nm吸光度為0.70±0.05。后添加10 μL樣品或trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液,2～6 min后在734 nm測量吸光度,結(jié)果表示為Trolox等效抗氧化能力[22]。

1.2.5.2 清除羥基自由基活性測定 向試管中加入不同濃度多糖溶液1.0 mL,FeSO4溶液(1.8 mmol/mL)2.0 mL,水楊酸-乙醇(1.8 mmol/mL)1.5 mL,最后加濃度為0.3%的H2O2溶液0.1 mL啟動反應(yīng),振蕩混合,37 ℃水浴保溫30 min,在波長510 nm下測量吸光度值。以1.0 mL蒸餾水代替多糖溶液,其余操作同上作為空白,VC作陽性對照[23]。

清除率(%)=[(A0-AS)/A0]×100

式中,A0為空白管的吸光度,AS為樣品的吸光度。

1.2.5.3 對超氧陰離子清除作用的測定 配制0.2 mL不同濃度的多糖溶液,加入5 mL 0.05 mol/L Tris-HCl緩沖溶液(pH8.2),25 ℃水浴10 min,加入0.2 mL 6 mmol/L的鄰苯三酚溶液,搖勻后每隔30 s在325 nm處測定吸光度值,4 min內(nèi)測量完成。以0.1 mL水代替多糖溶液,0.2 mL水代替鄰苯三酚作為參比,0.1 mL蒸餾水代替多糖溶液作對照溶液,其余同上操作,VC作陽性對照[21]。

清除率(%)=(1-樣品斜率/對照斜率)×100

式中,斜率指以時間為橫坐標(biāo),相應(yīng)吸光度值為縱坐標(biāo)進行線性回歸分析,所得回歸方程的斜率。

1.2.5.4 對DPPH自由基清除作用的測定 取1 mL不同濃度多糖溶液,依次加入3 mL 0.004% DPPH甲醇溶液,充分混勻,避光靜置20 min后,以甲醇作空白對照,517 nm波長測吸光度,以蒸餾水代替多糖溶液作陰性對照(Aj),VC作陽性對照[24]。

清除率(%)=(1-Ai/Aj)× 100

式中,Aj為空白管的吸光度,Ai為樣品的吸光度。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

統(tǒng)計學(xué)分析用SPSS19.0軟件進行,實驗結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,各組結(jié)果采用LSD顯著性差異測驗進行單向方差分析,顯著水平為0.05,極顯著水平為0.01。

2 結(jié)果與討論

2.1 陰離子交換柱純化米邦塔仙人掌多糖

MAP經(jīng)DEAE-纖維素-52柱純化,洗脫曲線如圖1所示,1～20管用蒸餾水洗脫,21～60管用0.5 mol/L NaCl溶液洗脫,兩部分均有洗脫峰出現(xiàn),因此,收集水洗脫的組分MAP1和0.5 mol/L NaCl溶液洗脫的組分MAP2。根據(jù)相關(guān)文獻報道,水洗脫組分MAP1可能為不帶電荷的中性多糖,而MAP2為酸性多糖[25-26]。MAP1得率較低,因此不作后續(xù)抗氧化活性研究。

圖1 MAP在DEAE-纖維素-52柱上的洗脫曲線Fig.1 The elution curve of MAP in column of DEAE-cellulose-52

用另外不同的DEAE-瓊脂糖-CL-6B柱對MAP進行純化,洗脫曲線如圖2所示,1～65管用0.1 mol/L NaCl溶液洗脫,收集洗脫組分MAP3。根據(jù)相關(guān)文獻報道,米邦塔仙人掌多糖 MAP3為酸性多糖[25]。

圖2 MAP在DEAE-瓊脂糖-CL-6B柱上的洗脫曲線Fig.2 The elution curve of MAP in column of DEAE-Sepharose-CL-6B

2.2 米邦塔仙人掌多糖的總糖含量

采用苯酚-硫酸法測定總糖含量,求得線性回歸方程如下:y=0.01x+0.142(R2=0.999),標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸光度在3～60 μg/mL濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。根據(jù)回歸方程計算出MAP總糖含量為43.6%,MAP1總糖含量為10.2%,MAP2總糖含量為76.1%,MAP3總糖含量為86.95%。MAP1總糖含量較低,經(jīng)過陰離子交換柱處理的多糖總糖含量有所提高。

2.3 米邦塔仙人掌多糖的糖醛酸含量

以D-半乳糖醛酸作為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求得線性回歸方程為:y=2.669x+0.039(R2=0.993),標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸光度在0.05～0.5 mg/mL濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。計算MAP、MAP1、MAP2和MAP3的糖醛酸含量,見圖3,結(jié)果表明用陰離子交換柱處理能顯著提高糖醛酸的含量(p<0.01),其中MAP2糖醛酸含量最高,達到67%。分析原因為水洗脫除去了MAP中的中性多糖,剩下的酸性多糖糖醛酸含量較高,并且?guī)в写罅康恼姾?因此容易被NaCl溶液洗脫下來。

圖3 米邦塔仙人掌多糖的糖醛酸含量Fig.3 The content of uronic acid in polysaccharides from Opuntia Milpa Alta

2.4 米邦塔仙人掌多糖的相對分子質(zhì)量

系列標(biāo)準(zhǔn)品葡聚糖186、10、40、70、500、2000 ku保留時間和洗脫體積見表1,通過凝膠柱上的洗脫體積、凝膠柱分配系數(shù),相對分子質(zhì)量之間的計算公式,求得各項常數(shù),得到相互之間的線性關(guān)系。

表1 標(biāo)準(zhǔn)品的GPC保留時間和洗脫體積

米邦塔仙人掌多糖MAP1、MAP2、MAP3通過凝膠滲透色譜分析,得到色譜圖如圖4所示,記錄MAP1、MAP2、MAP3色譜峰的保留時間,計算出MAP1、MAP2、MAP3的相對分子質(zhì)量(Mn)。各多糖組分分子量(Mn)分布如表2所示,其中MAP1組分較為單一,相對分子質(zhì)量(Mn)較小,根據(jù)前面的測定,MAP1的總糖和糖醛酸含量均較低,因此初步推斷MAP1主要成份可能是果膠酸類物質(zhì)。MAP2的色譜圖中出現(xiàn)了三個不同的峰,通過分析 MAP2主要含有三種不同相對分子質(zhì)量的多糖,最大的相對分子質(zhì)量(Mn)達到5449 ku。用不同的陰離子交換柱得到的MAP3也是一種雜多糖,主要的三種成分的相對分子質(zhì)量(Mn)分布與MAP1較為相近,但其中的最大相對分子質(zhì)量(Mn)有差異,分析原因是不同的陰離子交換材料吸附多糖的能力各不相同,所用的洗脫液濃度也不相同,因此得到的多糖相對分子質(zhì)量(Mn)有所差異。較大的相對分子質(zhì)量可能與米邦塔仙人掌多糖的黏度大也存在一定的關(guān)系。

表2 米邦塔仙人掌多糖的相對分子質(zhì)量(Mn)

圖4 MAP1(A)、MAP2(B)、MAP3(C)的GPC色譜圖Fig.4 The GPC chromatograms of MAP1(A)、MAP2(B)、MAP3(C)

2.5 米邦塔仙人掌體外抗氧化活性

2.5.1 總抗氧化能力 由圖5可知,米邦塔仙人掌多糖的總抗氧化能力值隨著濃度的增加而增加,當(dāng)濃度增加至10 mg/mL時,最大的抗氧化能力到了0.68 mmol/g。其中MAP的抗氧化能力最好,分析原因可能是粗多糖中含有酚類和色素類的小分子雜質(zhì),這些物質(zhì)具有很強的還原能力,增加了粗多糖的抗氧化能力。當(dāng)濃度大于4 mg/mL時,MAP2的抗氧化能力逐漸大于MAP3,這是因為MAP3具有較大的相對分子質(zhì)量,較大的聚合度導(dǎo)致多糖結(jié)構(gòu)中具有還原能力的基團沒有完全顯露出來,因此降低了抗氧化的能力。

圖5 米邦塔仙人掌多糖的總抗氧化能力Fig.5 The total antioxidant capacity of polysaccharides

2.5.2 對羥基自由基的清除作用 由圖6可知,米邦塔仙人掌多糖的清除羥基自由基能力隨著濃度的增加而增加,三種多糖均具有較好的清除羥基自由基的能力。當(dāng)濃度增加至6 mg/mL后,MAP2的清除效果最好,最大的清除率達到了70%。MAP和MAP2對羥基自由基清除率的IC50值分別是7.38、5.98 mg/mL。VC對羥基自由基清除率的IC50值是0.2 mg/mL,抗氧化效果優(yōu)于米邦塔仙人掌多糖。MAP清除羥基自由基的能力稍低于MAP2,說明經(jīng)過純化可以提高多糖的清除羥基自由基的能力。MAP3的清除能力最弱可能是過大的相對分子質(zhì)量和聚合度所導(dǎo)致的。因此，多糖對羥基自由基的清除能力與多糖的純度和相對分子質(zhì)量均有一定的關(guān)系。

圖6 米邦塔仙人掌多糖對羥基自由基的清除率 Fig.6 The hydroxyl radical clearance rate of polysaccharides

2.5.3 對超氧陰離子的清除作用 如圖7所示,同陽性對照VC相比較,米邦塔仙人掌多糖對超氧陰離子的清除效果較差。隨著濃度的增加,對超氧陰離子的清除作用只有小幅度的增加,當(dāng)濃度達到最大時,MAP、MAP2、MAP3的清除率仍未達到50%。MAP2和MAP3對超氧陰離子的清除活性均高于MAP,說明經(jīng)過陰離子交換柱處理過的多糖對超氧陰離子的清除作用增強。結(jié)果表明米邦塔仙人掌多糖對水楊酸體系中的超氧陰離子的清除作用不明顯。

圖7 米邦塔仙人掌多糖對超氧陰離子的清除率Fig.7 The superoxide anion clearance rate of polysaccharides

2.5.4 對DPPH自由基的清除作用 如圖8所示,同陽性對照VC相比較,米邦塔仙人掌多糖對DPPH自由基的清除效果不明顯。MAP2在濃度達到10 mg/mL時,對DPPH自由基清除率達到了51%,而MAP和MAP3在濃度2～10 mg/mL范圍內(nèi),對DPPH自由基清除率均低于50%。MAP2和MAP3對DPPH自由基清除率均高于MAP,說明經(jīng)過純化的多糖對DPPH自由基的清除作用增強。

圖8 米邦塔仙人掌多糖對DPPH自由基的清除率Fig.8 The DPPH radical clearance rate of polysaccharides

3 結(jié)論

本研究結(jié)果表明,MAP經(jīng)過陰離子交換柱的處理,可以得到初步的純化。將得到的MAP1、MAP2和MAP3進行滲透凝膠色譜分析,表明MAP的相對分子量(Mn)為476.9 ku,是一種中性多糖,MAP2的Mn為5449、9724、529 ku,是一種酸性雜多糖。MAP3的Mn為13270、15.87、474 ku,是一種高分子量、高度聚合的酸性雜多糖。相對分子質(zhì)量的測定結(jié)果與其他實驗室的報道有一定的差別[15],這可能與色譜柱的測定條件和方法有關(guān)。

在體外抗氧化活性測定實驗中,同VC相比,米邦塔仙人掌多糖的體外抗氧化活性較弱,而MAP2和MAP3對羥基自由基、超氧陰離子和DPPH自由基的清除作用均高于MAP,說明經(jīng)過陰離子交換柱的處理后,米邦塔仙人掌多糖的體外抗氧化活性有所提高。MAP3的體外抗氧化體系中的各項指標(biāo)的清除率均低于MAP2,說明多糖的抗氧化能力與相對分子質(zhì)量(Mn)有很大關(guān)系,相對分子質(zhì)量小的多糖具有更強的抗氧化能力。MAP的總抗氧化能力高于MAP2和MAP3,這可能歸功于粗多糖中酚類等一些具有強還原能力物質(zhì)的存在,因此,在后面的研究中可以對米邦塔仙人掌多糖進行進一步的分離純化。純化后的米邦塔仙人掌多糖具有一定的體外抗氧化活性,但對其發(fā)揮生理活性的作用機制還有待進一步的研究。

[1]沈文,單承英,張衛(wèi)明.米邦塔仙人掌的研究進展與開發(fā)應(yīng)用[J].中國野生資源,2014,33(1):4-8.

[2]Gao J,Han Y L,Jin Z Y,et al. Protective effect of polysaccharides from Opuntia dillenii Haw fruits on streptozotocin-induced diabetic rats[J]. Carbohydr Polym,2015,124:25-34.

[3]Kang J W,Shin J K,Koh E J,et al. Opuntia ficus-indica seed attenuates hepatic steatosis and promotes M2 macrophage polarization in high-fat diet-fed mice[J]. Nutrition Research,2016,36:369-379.

[4]Antunes-Ricardo M,Gutiérrez-Uribe J A,López-Pacheco F,et al.Invivoanti-inflammatory effects of isorhamnetin glycosides isolated from Opuntia ficus-indica(L.)Mill cladodes[J]. Industrial Crops and Products,2015,76:803-808.

[5]羅川,張萬年.米邦塔仙人掌化學(xué)成分研究[J]. Chinese Traditional Aand Herbal Drugs,2011,42(3):437-439.

[6]繆月秋,顧龔平,吳國榮.植物多糖水解及其產(chǎn)物的研究進展[J].中國野生植物資源,2005,24(2):4-7.

[7]李爾春,丁紅軍,金曉輝.天然植物多糖的結(jié)構(gòu)及活性研究進展[J].食品與藥品,2007,8(4):51-54.

[8]Lefsih K,Delattre C,Pierre G,Michaud P,et al. Extraction,characterization and gelling behavior enhancement of pectins from the cladodes of Opuntia ficus indica[J]. International Journal of Biological Macromolecules,2016,82:645-652.

[9]Tian L,Zhao Y,Guo C,et al. A comparative study on the antioxidant activities of an acidic polysaccharide and various solvent extracts derived from herbal Houttuynia cordata[J]. Carbohydrate Polymers,2011,83:537-544.

[10]Schepetkin I A,Xie G,Kirpotina L N,et al. Macrophage immunomodulatory activity of polysaccharides isolated from Opuntia polyacantha[J]. International Immunopharmacology,2008,8:1455-1466.

[11]孫璇,王仲孚,黃琳娟.米邦塔仙人掌膠多糖化學(xué)組成的檢測[J].西北大學(xué)學(xué)報,2010,40(2):273-276.

[12]邱秀琴.自由基與抗氧化劑對人體健康的再評價[J].實用醫(yī)技雜志,2007,14(32):4498-4500.

[13]Berraaouan A,Abderrahim Z,Hassane M,et al. Evaluation of protective effect of cactus pear seed oil(Opuntia ficus-indica L. MILL.)against alloxan-induced diabetes in mice[J]. Asian Pacific Journal Of Tropical Medicine,2015,8:532-537.

[14]Yang N,Zhao M,Zhu B,et al. Anti-diabetic effects of polysaccharides from Opuntia monacantha cladode in normal and streptozotocin-induced diabetic rats[J]. Innovative Food Science & Emerging Technologies,2008,9:570-574.

[15]Cai W,Gu X,Tang J. Extraction,purification and characterization of the polysaccharides from Opuntia milpa alta[J]. Carbohydrate Polymers,2008,71:403-410.

[16]Sepúlveda E,Sáenz C,Aliaga E,et al. Extraction and characterization of mucilage in Opuntia spp[J]. Journal of Arid Environments,2007,68:534-545.

[17]Chen Y,Zhao B,Huang X,et al. Purification and neuroprotective effects of polysaccharides from Opuntia Milpa Alta in cultured cortical neurons[J]. International Journal of Biological Macromolecules,2011,49:681-687.

[18]蔡為榮,顧小紅,湯堅.仙人掌多糖提取純化及其抗凝血活性研究[J].食品科學(xué),2010,31(6):131-136.

[19]董群,鄭麗伊,方積年.改良的苯酚硫酸法測定多糖和寡糖含量的研究[J]. 中國藥學(xué)雜志,1996,31(9):550-553.

[20]王文平,郭祀遠,李琳,等.野木瓜多糖中糖醛酸含量測定[J].工藝技術(shù),2007,32(10):85-86.

[21]何鋼,劉嵬,李會萍,等.銀杏葉多糖分離純化結(jié)構(gòu)鑒定及抗氧化活性研究[J].食品工業(yè)科技,2015,36(22):81-86.

[22]Zhang D Y,Luo M,Wang W,et al. Variation of active constituents and antioxidant activity in pyrola[P. incarnata Fisch.]from different sites in Northeast China[J]. Food Chemistry,2013,141:2213-2219.

[23]郭曉強,何鋼,倩姚,等.普通念珠藻中多糖的分離純化研究[J].現(xiàn)代藥物與臨床,2013,28(3):328-330.

[24]何念武,楊興斌,田靈敏,等.黃瓜多糖的體外抗氧化活性[J].食品科學(xué),2011,32(19):70-74.

[25]Zhao L,Dong Y,Chen G,et al. Extraction,purification,characterization and antitumor activity of polysaccharides from Ganoderma lucidum[J]. Carbohydrate Polymers,2010,80:783-789.

[26]萬建華,顧洪雁.馬鈴薯渣果膠多糖分離純化及結(jié)構(gòu)初探[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(19):7970-7973.

Extraction,purification and antioxidant activity of polysaccharides from Opuntia Milpa Altainvitro

LIN Kuan1,XU Cong-yue1,LIANG Zheng1,RU Qin1,LI Chao-ying1,2,*

(1.Wuhan Institutes of Biomedical Sciences,Jianghan University,Wuhan 430056,China;2.Hanjea(Wuhan)Biological Technology Limited Liability Company,Wuhan 430075,China)

Objective:To investigate the purification of polysaccharides from Opuntia Milpa Alta and the antioxidant activityinvitro. Methods:Crude polysaccharides from Opuntia Milpa Alta(MAP)was extracted by water extraction and alcohol sedimentation. Two polysaccharides named MAP1 and MAP2 were achieved after MAP was purified through DEAE-cellulose-52,and another polysaccharide named MAP3 was achieved through DEAE-Sepharose-CL-6B. The relative molecular mass of polysaccharides was analyzed by gel permeation chromatography(GPC)and the antioxidant activity was investigatedinvitro. Results:The relative molecular mass(Mn)of MAP1 was 476.9 ku,MAP2 contained three relative molecular mass(Mn)5449,9724,529 ku,MAP3 contained 13270,15.87,474 ku. The results of antioxidant activityinvitroshowed that,MAP had the highest total antioxidant capacity,the activity of MAP2 and MAP3 were higher than MAP in scavenging hydroxyl radical,superoxide anion and DPPH radical,and MAP2 had a higher clearance rate than MAP3 in the whole antioxidant indicators. Conclusion:The results indicated that MAP2 had a better antioxidant activity,while antioxidant activity of polysaccharideinvitrowas associated with relative molecular mass.

Opuntia Milpa Alta;polysaccharides;purification;relative molecular mass;antioxidant activityinvitro

2016-10-28

林款(1990-)，女，碩士，實驗員，研究方向：天然產(chǎn)物化學(xué)，E-mail:link.whibs@aliyun.com。

*通訊作者:李超英(1958-)，男，博士，教授，研究方向：神經(jīng)系統(tǒng)疾病，E-mail:licy.whibs@aliyun.com。

TS201.2

A

1002-0306(2017)05-0140-06

10.13386/j.issn1002-0306.2017.05.018