中國(guó)沙棘乙醇提取物的體外及對(duì)HepG2細(xì)胞的抗氧化活性

蘇海蘭,魏 娟,畢 陽(yáng),*,李霽昕,Yury Zubarev,Alexander Kanarskiy

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅蘭州 730070;2.“利沙文科”西伯利亞園藝研究所,巴爾瑙爾 656045)

中國(guó)沙棘乙醇提取物的體外及對(duì)HepG2細(xì)胞的抗氧化活性

蘇海蘭1,魏 娟1,畢 陽(yáng)1,*,李霽昕1,Yury Zubarev2,Alexander Kanarskiy2

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅蘭州 730070;2.“利沙文科”西伯利亞園藝研究所,巴爾瑙爾 656045)

本文從生化角度全面分析了中國(guó)沙棘乙醇提取物的體外抗氧化活性,并在評(píng)價(jià)細(xì)胞毒性的基礎(chǔ)上,以HepG2細(xì)胞為模型,利用流式細(xì)胞儀評(píng)估了提取物的細(xì)胞抗氧化能力。結(jié)果表明,中國(guó)沙棘乙醇提取物對(duì)ABTS自由基具有良好的清除效果,當(dāng)濃度為5 mg/mL時(shí),其清除能力與陽(yáng)性對(duì)照BHT相當(dāng);中國(guó)沙棘乙醇提取物對(duì)NO自由基也有良好的清除效果,但其整體清除能力不及BHT;當(dāng)濃度為5 mg/mL時(shí),中國(guó)沙棘乙醇提取物對(duì)亞油酸脂質(zhì)過(guò)氧化表現(xiàn)抑制,但其抑制效果低于BHT;中國(guó)沙棘乙醇提取物的總抗氧化能力隨濃度的增大而增強(qiáng),當(dāng)濃度為5 mg/mL時(shí),其總抗氧化能力與同濃度下的BHT接近。在濃度為0.05～5 mg/mL范圍內(nèi),中國(guó)沙棘乙醇提取物對(duì)HepG2細(xì)胞不顯示毒性;當(dāng)處理濃度為0.5、1、5 mg/mL時(shí),中國(guó)沙棘乙醇提取物的陽(yáng)性細(xì)胞率與陽(yáng)性對(duì)照相比分別降低了75.22%、72.36%和78.2%。中國(guó)沙棘乙醇提取物不僅在體外條件下具有良好的抗氧化活性,而且在HepG2細(xì)胞內(nèi)表現(xiàn)出良好的抗氧化能力。

沙棘,乙醇提取物,抗氧化,HepG2細(xì)胞

中國(guó)沙棘(Hippophaerhamnoidessubsp. Sinensis)屬胡頹子科沙棘屬灌木[1]。廣泛分布于我國(guó)的西北和華北等地,是我國(guó)栽培沙棘的主要品種。中國(guó)沙棘漿果富含維生素、黃酮及類胡蘿卜素等多種活性成分[2],具有良好的抗氧化、抗腫瘤、抗癌、抗衰老以及調(diào)節(jié)免疫等功能[3]。

抗氧化是多種沙棘活性成分的重要特性。范惠玲等[2]發(fā)現(xiàn),中國(guó)沙棘漿果甲醇提取液能有效清除NO自由基、羥基自由基以及超氧陰離子自由基,顯示出較好的抗氧化活性。中國(guó)沙棘果渣總黃酮能夠有效抑制油脂氧化、可清除超氧陰離子和羥自由基[4]。俄羅斯大果沙棘(H.rhamnoidesssp. Russia)漿果提取物不僅具有較好的體外抗氧化活性,而且可抑制癌細(xì)胞的增殖[5]。大果沙棘果渣黃酮可抑制結(jié)腸癌 HT29 細(xì)胞的生長(zhǎng),對(duì)該細(xì)胞DNA表現(xiàn)致?lián)p[6]。此外,印度柳葉沙棘(H.salicifoliaD. Don)漿果和葉片乙醇提取物也具有良好的自由基清除能力及抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用,對(duì)人類神經(jīng)細(xì)胞IMR32的氧化應(yīng)激損傷具有保護(hù)作用[7]。同樣,俄羅斯大果沙棘漿果黃酮對(duì)ABTS+·、DPPH·、羥自由基、超氧自由基均有很好的抑制效果[8]。然而,中國(guó)沙棘在生化水平的抗氧化評(píng)價(jià)并不系統(tǒng),在細(xì)胞水平上也僅限于抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)?；贖epG2細(xì)胞模型反映中國(guó)沙棘細(xì)胞抗氧化活性的研究尚未見報(bào)道。

本文通過(guò)中國(guó)沙棘漿果乙醇提取物對(duì)ABTS、NO自由基清除效果、總抗氧化能力、抗亞油酸脂質(zhì)過(guò)氧化能力的測(cè)定,以及對(duì)HepG2細(xì)胞內(nèi)抗氧化能力的研究,驗(yàn)證中國(guó)沙棘乙醇提取物的抗氧化功能。以期擴(kuò)大中國(guó)沙棘的應(yīng)用范圍,為篩選天然抗氧化劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

沙棘漿果于2012年11月采自甘肅華池高原圣果基地,紙箱包裝次日運(yùn)至本實(shí)驗(yàn)室于-80 ℃下貯藏待用;HepG2(人肝癌細(xì)胞) 上海拜力生物有限公司,液氮凍存;MTS Promega公司;FBS、DMEM、0.25%胰酶(含EDTA) Hyclone公司;ABTS、DCFH-DA Sigma-Aldrich公司;2,6-二叔丁基對(duì)甲苯酚(BHT)及其余試劑 國(guó)產(chǎn)分析純。

UV-2450型紫外可見分光光度計(jì) 日本島津公司;V111584 型iMARK酶標(biāo)儀 美國(guó)BIO-RAD公司;Cell Lab Quanta SC型流式細(xì)胞儀 美國(guó)Beckman公司;DH-1850R型高速臺(tái)式冷凍離心機(jī) 上海德洋意邦儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 乙醇提取物的制備 參照梁楷等[9]方法,準(zhǔn)確稱取2.0 g沙棘漿果置于研缽中,研磨搗碎,采用乙醇濃度51%,料液比1∶22,在86 ℃下水浴回流提取1 h,離心收集于4 ℃避光保存。

1.2.2 HepG2細(xì)胞培養(yǎng) 參照Wen等[10]方法,將HepG2細(xì)胞培養(yǎng)于含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液中,且將其置于37 ℃、含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每2～3 d用含0.25% EDTA的胰酶消化傳代。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 乙醇提取物清除ABTS自由基的測(cè)定 參照Chun等[11]方法。將5 mL的7 mmol/L ABTS和88 μL的140 mmol/L高硫酸鉀混合,在室溫,避光的條件下靜置過(guò)夜,形成ABTS自由基儲(chǔ)備液。使用前用無(wú)水乙醇(1∶88)稀釋成工作液,后將工作液于30 ℃、734 nm波長(zhǎng)下確定其吸光值是否在0.70±0.02。若在0.70±0.02內(nèi),則可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。用51%乙醇分別配制濃度為0.5、1、2、3、4、5 mg/mL的沙棘乙醇提取物樣品溶液,以抗氧化劑BHT溶液(0.5、1、2、3、4、5 mg/mL)作為陽(yáng)性對(duì)照。取0.1 mL樣液,加入4 mL ABTS自由基溶液,30 ℃下混合10 s,在734 nm測(cè)其吸光值A(chǔ)。51%乙醇替代樣液作為陰性對(duì)照組,于734 nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)0。清除率由式(1)計(jì)算:

式(1)

1.2.4 乙醇提取物清除NO自由基的測(cè)定 參照Dong等[12]的方法。在反應(yīng)中,取10 mmol/L亞硝基鐵氰化鈉溶液5 mL加入試管中,再分別加入10 mg/mL樣品(沙棘乙醇提取物)0.5、1、2、3、4、5 mL,補(bǔ)蒸餾水至10 mL,混合均勻后,在室溫下反應(yīng)150 min。51%乙醇取代樣液作為陰性對(duì)照組,以BHT作為陽(yáng)性對(duì)照。溶液反應(yīng)后,添加Griess試劑(l%對(duì)氨基苯磺酸,2%磷酸,0.1% N-1-萘乙二胺鹽酸鹽)0.5 mL。在546 nm下,測(cè)定所形成的發(fā)色基團(tuán)的吸光值。清除率計(jì)算見式(2):

式(2)

其中:A0為空白組的吸光度,A為加沙棘乙醇提取物后的吸光度。

1.2.5 乙醇提取物抑制亞油酸脂質(zhì)過(guò)氧化的測(cè)定 參照張京芳等[13]的方法。分別配制5 mg/mL的沙棘乙醇提取物溶液、BHT溶液作為樣品液,取1 mL樣品液于具塞試管中,然后分別加入1 mL 2.5%亞油酸(v/v)溶液,2 mL 0.05 mol/L磷酸緩沖液(pH7.0),1 mL蒸餾水,于40 ℃恒溫下培養(yǎng)。取培養(yǎng)液0.1 mL,按順序加入4.7 mL乙醇(75%)、0.1 mL硫氰酸銨(30%)、0.1 mL氯化亞鐵(0.02 mol/L,用3.5%鹽酸配制),混合均勻后,室溫下準(zhǔn)確反應(yīng)3 min,在波長(zhǎng)500 nm下測(cè)吸光值A(chǔ),51%乙醇取代替樣液作為陰性對(duì)照組A0。抑制率計(jì)算見公式(3):

式(3)

1.2.6 乙醇提取物總抗氧化能力的測(cè)定 參照Prieto等[14]的方法稍作修改。取0.4mL樣品液(0.5、1、2、3、4、5mg/mL),再加入4mL磷鉬試劑(內(nèi)含0.6mol/L濃硫酸、28mmol/L磷酸鈉、4mmol/L鉬酸銨),混合均勻后,于95 ℃水浴中保溫90min,取出冷卻至室溫,陰性對(duì)照液用0.4mL溶劑代替樣品液。以BHT為陽(yáng)性對(duì)照,于 695nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。依據(jù)吸光度變化來(lái)檢測(cè)總抗氧化性能的高低。

圖1 中國(guó)沙棘乙醇提取物對(duì)ABTS自由基(A), NO自由基(B), 亞油酸脂質(zhì)過(guò)氧化(C),總抗氧化能力(D)的影響 Fig.1 Effects of ethanol extracts of Chinese seabuckthorn on ABTS free radicals(A), NO free radicals(B),linoleic acid lipid peroxidation(C),total antioxidant capacity(D)

1.2.7 乙醇提取物對(duì)HepG2細(xì)胞毒性的測(cè)定 參照顧梅等[15]的方法稍作修改。收集對(duì)數(shù)期HepG2細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞懸液濃度,將其接種于96孔培養(yǎng)板中,接種使待測(cè)細(xì)胞密度1000～10000cells/孔,置于5%CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h使其貼壁,培養(yǎng)24h后加入不同濃度的沙棘乙醇提取物,每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孔,于5% CO2,37 ℃繼續(xù)孵育24 h;然后加MTS試劑,再繼續(xù)孵育1～3 h后,在490 nm處測(cè)量各孔的吸光度值A(chǔ)1,以單純培養(yǎng)液作為空白孔,測(cè)定吸光度值為A0,以未做任何處理作為對(duì)照,測(cè)定吸光度值A(chǔ)。細(xì)胞存活率見公式(4)計(jì)算:

式(4)

1.2.8 乙醇提取物細(xì)胞內(nèi)抗氧化活性測(cè)定 參照張紅城等[16]的方法。取對(duì)數(shù)期的HepG2細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞懸液濃度接種于6孔培養(yǎng)板中于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后去掉原培養(yǎng)液,用預(yù)冷的PBS清洗1次;加入不同濃度的沙棘乙醇提取物處理30 min,之后去掉培養(yǎng)基用預(yù)冷的PBS清洗一次,加入25 μmol/L DCFH-DA溶液,5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)30 min,去掉培養(yǎng)基后用預(yù)冷的PBS清洗3次,以充分洗去未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針。再加入15 mmol/L H2O2刺激40 min,收集細(xì)胞并制成細(xì)胞懸液,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度,激發(fā)波長(zhǎng)為488 nm,發(fā)射波長(zhǎng)為525 nm。

上述各項(xiàng)測(cè)定均重復(fù)進(jìn)行3次。

1.3 數(shù)據(jù)處理

全部數(shù)據(jù)采用Excel 2007計(jì)算平均值及標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 中國(guó)沙棘乙醇提取物的體外抗氧化能力

中國(guó)沙棘乙醇提取物對(duì) ABTS自由基具有良好的清除能力,在0～5 mg/mL的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,當(dāng)濃度為5 mg/mL時(shí),其清除率已接近同濃度陽(yáng)性對(duì)照BHT。陽(yáng)性對(duì)照BHT顯示出更好的 ABTS自由基的清除能力,當(dāng)濃度為0.5 mg/mL時(shí),其清除率就已達(dá)90%(圖1A)。而陰性對(duì)照對(duì)ABTS自由基始終未表現(xiàn)清除作用。

中國(guó)沙棘乙醇提取物對(duì)NO自由基也有良好的清除效果,隨著濃度的提高,對(duì)NO自由基的清除能力也逐漸增強(qiáng),但整體清除能力不及陽(yáng)性對(duì)照BHT,當(dāng)濃度為0.5 mg/mL時(shí),乙醇提取物對(duì)NO自由基的清除率低于BHT 12.7%,當(dāng)濃度為5 mg/mL時(shí),乙醇提取物對(duì)NO自由基的清除率是陽(yáng)性對(duì)照BHT的81%(圖1B),而陰性對(duì)照對(duì)NO自由基始終未表現(xiàn)清除作用。

當(dāng)濃度為5 mg/mL 時(shí),中國(guó)沙棘乙醇提取物和BHT 均對(duì)亞油酸的脂質(zhì)過(guò)氧化作用表現(xiàn)抑制,但中國(guó)沙棘乙醇提取物的抑制效果不及BHT,而與對(duì)照相比,中國(guó)沙棘乙醇提取物對(duì)亞油酸脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制率占對(duì)照的61.2%(圖1C)。

中國(guó)沙棘乙醇提取物的總抗氧化活性隨濃度的增大而增強(qiáng),當(dāng)濃度為5 mg/mL時(shí),其總抗氧化活性與同濃度下的陽(yáng)性對(duì)照BHT接近,但中國(guó)沙棘乙醇提取物的總抗氧化活性不及BHT(圖1D)。陰性對(duì)照的總抗氧化活性始終維持在較低的水平。

2.2 中國(guó)沙棘乙醇提取物對(duì)HepG2細(xì)胞的毒性及細(xì)胞內(nèi)抗氧化活性的影響

2.2.1 對(duì)HepG2細(xì)胞的毒性 中國(guó)沙棘乙醇提取物在0.05～5 mg/mL時(shí),對(duì)HepG2細(xì)胞的存活率無(wú)抑制作用(圖2);且在0.1～5 mg/mL時(shí),提取物反而對(duì)HepG2細(xì)胞的存活率有促進(jìn)作用,但在整個(gè)濃度范圍內(nèi)中國(guó)沙棘乙醇提取物對(duì)HepG2細(xì)胞的存活率與對(duì)照組一致,證明在實(shí)驗(yàn)濃度(0.05～5 mg/mL)內(nèi)對(duì)細(xì)胞無(wú)毒作用,故后繼實(shí)驗(yàn)中提取物濃度選定在5 mg/mL以內(nèi)進(jìn)行。

圖2 不同濃度中國(guó)沙棘乙醇提取物 對(duì)HepG2細(xì)胞存活率的影響Fig.2 Effects of ethanol extracts of Chinese seabuckthorn at different concentrations on the viability of HepG2 cells

2.2.2 中國(guó)沙棘乙醇提取物的細(xì)胞內(nèi)抗氧化活性 陰性對(duì)照(NTC)未經(jīng)過(guò)氧化氫刺激,HepG2細(xì)胞陽(yáng)性細(xì)胞率相對(duì)較低,僅為6.87%;當(dāng)用過(guò)氧化氫處理后,HepG2細(xì)胞內(nèi)顯示出高含量的活性氧,且陽(yáng)性對(duì)照(PTC)的陽(yáng)性細(xì)胞率達(dá)到了84.17%;而HepG2細(xì)胞經(jīng)乙醇提取物(0.5、1、5 mg/mL)處理后,其陽(yáng)性細(xì)胞率與陽(yáng)性對(duì)照相比分別降低了75.22%、72.36%和78.2%。由此表明,中國(guó)沙棘乙醇提取物在HepG2細(xì)胞內(nèi)表現(xiàn)出良好的抗氧化能力(圖3)。

圖3 不同濃度中國(guó)沙棘乙醇提取物 對(duì)HepG2細(xì)胞陽(yáng)性細(xì)胞率的影響Fig.3 Effect of ethanol extracts of Chinese seabuckthorn at different concentrations on positive cell ratio of HepG2 cells注：Blank(空白);NTC(陰性對(duì)照);PTC(陽(yáng)性對(duì)照); A, B, C分別為0.5,1,5(mg/mL)提取物處理組。

3 結(jié)論與討論

沙棘漿果富含類黃酮、多酚、維生素等多種活性成分[17],具有良好的抗氧化性[18]。本研究發(fā)現(xiàn),中國(guó)沙棘漿果乙醇提取物對(duì)ABTS、NO自由基具有良好的清除能力,且在濃度為5 mg/mL時(shí)，提取物的總抗氧化能力與陽(yáng)性對(duì)照BHT的總抗氧化能力相當(dāng)。此外,中國(guó)沙棘漿果乙醇提取物還能有效清除HepG2細(xì)胞內(nèi)的活性氧。雖然中國(guó)沙棘漿果的體外抗氧化研究已有零星報(bào)道,但有關(guān)中國(guó)沙棘漿果乙醇提取物體外生化水平抗氧化活性的系統(tǒng)分析以及應(yīng)用HepG2細(xì)胞模型的細(xì)胞抗氧化研究屬首次報(bào)道。

本研究結(jié)果顯示,中國(guó)沙棘表現(xiàn)出的良好抗氧化活性,與采用乙醇處理漿果后大量黃酮等酚類物質(zhì)溶出密切相關(guān)。該結(jié)果與前人采用乙醇提取楊梅和葡萄皮渣中的酚類物質(zhì)結(jié)果類似[19-20]。由于乙醇具備良好溶解性及細(xì)胞穿透力,當(dāng)用一定體積分?jǐn)?shù)的乙醇處理果實(shí)原料時(shí),使得組織細(xì)胞內(nèi)外的濃度差變大,從而促進(jìn)了黃酮的溶出[21]。

本研究發(fā)現(xiàn),中國(guó)沙棘漿果乙醇提取物除了對(duì)ABTS自由基具有良好的清除作用外,還可抑制亞油酸脂質(zhì)過(guò)氧化。而該結(jié)果與俄羅斯大果沙棘黃酮粗提物對(duì)ABTS自由基具有清除能力[8],及印度柳葉沙棘漿果乙醇提取物可抑制亞油酸脂質(zhì)過(guò)氧化[7]的結(jié)果類似。本研究還發(fā)現(xiàn),中國(guó)沙棘漿果乙醇提取物可有效清除NO自由基,且清除效果明顯優(yōu)于甲醇提取物對(duì)NO自由基的清除效果[2]。本研究采用的四種體外抗氧化評(píng)價(jià)方法均是基于抗氧化劑具有良好的供氫或供電子的能力。而黃酮正是通過(guò)分子中的酚羥基提供氫原子與自由基反應(yīng)產(chǎn)生較穩(wěn)定的半醌式自由基而實(shí)現(xiàn)清除自由基的目的[22]。因此,中國(guó)沙棘乙醇提取物所表現(xiàn)出良好的抗氧化活性與其中較高的總黃酮含量密切相關(guān)[23]。

上述研究均為基于生化水平的體外測(cè)定,并不能準(zhǔn)確反映抗氧化成分在機(jī)體內(nèi)部的生物利用率、吸收、運(yùn)輸、代謝及其在機(jī)體內(nèi)有效的作用濃度。因此,一種基于細(xì)胞模型的生物方法,即細(xì)胞抗氧化(cellular antioxidantactivity,CAA)法被廣泛用于抗氧化活性的評(píng)價(jià)體系中[24]。與傳統(tǒng)化學(xué)法相比,CAA法更能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)植物化學(xué)物質(zhì)在機(jī)體內(nèi)的抗氧化效果[25]。本研究結(jié)果顯示,中國(guó)沙棘乙醇提取物可以有效降低HepG2細(xì)胞的陽(yáng)性細(xì)胞率。該結(jié)果與印度柳葉沙棘漿果乙醇提取物改善淋巴細(xì)胞的抗氧化活性[26],及黑莓粗提物對(duì)人類腸道細(xì)胞INT-407具有細(xì)胞抗氧化能力[27]的結(jié)果類似。

有研究表明,葡萄的總抗氧化活性與其總酚及總黃酮含量呈顯著相關(guān)性,其CAA活性與葡萄中的總黃酮具有顯著相關(guān)性[28]。也有人發(fā)現(xiàn),具有某些特殊結(jié)構(gòu)的類黃酮的CAA活性較強(qiáng)[29],這些物質(zhì)包括異鼠李素、山奈酚、楊梅酮等[30]。由于異鼠李素、山奈酚、槲皮素等化合物普遍存在于中國(guó)沙棘漿果中[31]。因此,推測(cè)中國(guó)沙棘漿果的細(xì)胞抗氧化活性可能與這些成分密切相關(guān)。此外,中國(guó)沙棘還含有多糖、有機(jī)酸、類胡蘿卜素、維生素等多種抗氧化成分,因此,其良好的抗氧化活性除了與其高含量的總酚及總黃酮相關(guān)外,也與這些組分相關(guān),并且是多種組分之間相互協(xié)同作用的結(jié)果[32]。但何種組分對(duì)中國(guó)沙棘漿果的抗氧化貢獻(xiàn)最大,這些組分之間如何發(fā)揮抗氧化協(xié)同作用尚有待今后進(jìn)一步研究。

綜上所述,中國(guó)沙棘乙醇提取物可有效清除ABTS自由基、NO自由基,在亞油酸脂質(zhì)過(guò)氧化方面具有較好的抑制效果,并表現(xiàn)出良好的總抗氧化能力,當(dāng)濃度為5 mg/mL時(shí),其ABTS自由基的清除效果及總抗氧化能力與陽(yáng)性對(duì)照BHT相當(dāng)。此外,中國(guó)沙棘乙醇提取物對(duì)HepG2細(xì)胞也具有良好的抗氧化能力。中國(guó)沙棘良好的抗氧化活性與其較高的總酚及總黃酮含量密切相關(guān)。

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Antioxidant activity of ethanol extracts from Chinese seabuckthorn berriesinvitroand on HepG2 cells

SU Hai-lan1,WEI Juan1,BI Yang1,*,LI Ji-xin1,Yury Zubarev2,Alexander Kanarskiy2

(1.College of Food Science and Engineering,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China;2.Lisavenko Research Institute of Horticulture for Siberia,Barnaul 656045,Russia)

In this research,the antioxidant capacity of ethanol extracts from Chinese seabuckthorn berries was comprehensively analyzedinvitroat biochemical level. On the basis of evaluation of cytotoxicity,flow cytometry method was used to analysis the cellular antioxidant activity of the ethanol extracts in HepG2 cells. The results showed that the extracts had an effectively removal effect on ABTS free radicals,when the concentration reached at 5 mg/mL,the scavenging rate was similar to that of positive control BHT. The extracts also effectively inhibited NO free radicals,however,the inhibition rate was weaker than that of BHT at the same concentration. The extracts at 5 mg/mL significantly inhibited lipid peroxidation,however,the inhibition rate was lower than that of BHT at the same concentration. The total antioxidant capacity was enhanced as the concentration increased,when the concentration reached at 5 mg/mL,the total antioxidant capacity was similar to that of BHT. Among the concentration of 0.05～5 mg/mL,the extracts showed no cytotoxicity. At the concentration of 0.5,1,5 mg/mL,the positive cells rate of extracts was reduced by 75.22%,72.36% and 78.2% compared with the positive control respectively. It is suggested that ethanol extracts from Chinese seabuckthorn not only had a stronger antioxidant capacity at biochemical level,but also had an antioxidant ability at the cellular level.

seabuckthorn;ethanol extracts;antioxidant;HepG2 cells

2016-09-09

蘇海蘭(1992-)，女，碩士研究生，研究方向:果蔬采后生物學(xué)與技術(shù),E-mail：18298332380@163.com。

*通訊作者:畢陽(yáng)(1962-)，男，博士，教授，研究方向:果蔬采后生物學(xué)與技術(shù),E-mail：biyang@gsau.edu.cn。

國(guó)家科技部國(guó)際合作專項(xiàng)2014DFR31230。

TS201.3

A

1002-0306(2017)05-0093-05

10.13386/j.issn1002-0306.2017.05.009