基質(zhì)加標(biāo)法在水產(chǎn)動(dòng)物不同價(jià)態(tài)無機(jī)砷定量分析中的應(yīng)用

詹倩云，史永富，黃宣運(yùn)，黃冬梅，楊光昕，蔡友瓊

(1.中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東青島 266003；2.農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心(上海)，上海 200090 )

基質(zhì)加標(biāo)法在水產(chǎn)動(dòng)物不同價(jià)態(tài)無機(jī)砷定量分析中的應(yīng)用

詹倩云1,2，史永富2，黃宣運(yùn)2，黃冬梅2，楊光昕2，蔡友瓊2

(1.中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東青島 266003；2.農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心(上海)，上海 200090 )

通過對(duì)流動(dòng)相種類、濃度、pH和泵速等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，確立了分析水產(chǎn)動(dòng)物中不同價(jià)態(tài)無機(jī)砷的基質(zhì)加標(biāo)-液相色譜-原子熒光光譜聯(lián)用測(cè)定方法，并應(yīng)用該法測(cè)定了魚類、蝦類、貝類和蟹類等樣品中的砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)含量。結(jié)果表明，在以pH 5.5、25 mmol·L-1磷酸氫二銨溶液為流動(dòng)相，泵速為60 r·min-1的檢測(cè)條件下，砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)的回收率在94.2%～ 101%之間；魚、蝦、蟹類中的砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)檢出率較低，而貝類樣品的檢出率較高，且不同貝類樣品的砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)含量差異較大。通過與外標(biāo)法在標(biāo)準(zhǔn)曲線、精密度和回收率等方面的比較發(fā)現(xiàn)，該法能夠較大限度的消除基質(zhì)效應(yīng)的影響，校正前處理過程中的誤差，對(duì)砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

基質(zhì)加標(biāo)法； 無機(jī)砷； 形態(tài)； 定量分析； 水產(chǎn)動(dòng)物

砷是自然界中常見的元素，具有類金屬的特性[1]。長(zhǎng)期以來，砷被認(rèn)為是一種對(duì)人體健康有害的元素，且水產(chǎn)品是人體砷暴露的來源之一[2-3]。近年來，由于水體環(huán)境污染，有關(guān)水產(chǎn)品中砷超標(biāo)的報(bào)道不時(shí)見諸報(bào)端[4]，從而引發(fā)了消費(fèi)者對(duì)水產(chǎn)品安全的擔(dān)憂，也給水產(chǎn)品行業(yè)帶來了不良影響。研究顯示，過多食用或長(zhǎng)期攝入砷含量超標(biāo)的食品，會(huì)對(duì)心、肝、腎等器官以及神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等造成損害[2,5]。隨著對(duì)砷毒性研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)砷的毒性大小是隨著其形態(tài)不同而變化的[6]。在自然界中，砷的主要形態(tài)有砷酸鹽[As(Ⅴ)] 、亞砷酸鹽 [As(Ⅲ)] 、一甲基砷化合物 (MMA) 、二甲基砷化合物(DMA) 、三甲基砷的氧化物(TMAO) 、 砷甜菜堿 (AsB) 、砷膽堿 (AsC) 和砷糖(AsS)等[7]。其中，有機(jī)砷形態(tài)大多無毒，僅有 MMA 和 DMA 有較小的毒性，而無機(jī)砷[即As(Ⅴ)和As(Ⅲ)]的毒性最高，已被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARc)確認(rèn)為致癌物[8]。因此，對(duì)水產(chǎn)品中不同形態(tài)的無機(jī)砷進(jìn)行定量分析具有重要的意義。

目前，已開發(fā)了多種聯(lián)用技術(shù)用于水產(chǎn)品中無機(jī)砷的形態(tài)分離檢測(cè)[9-14]。其中，液相色譜-原子熒光光譜法由于靈敏度高、選擇性好、線性范圍寬、操作簡(jiǎn)便、使用成本低等優(yōu)勢(shì)，被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)品中砷形態(tài)的分析[12-14]。2016年3月21日起正式實(shí)施的食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)-食品中總砷及無機(jī)砷的測(cè)定(GB 5009.11-2014)中也將其作為無機(jī)砷檢測(cè)的第一法。

然而，在實(shí)際使用液相色譜-原子熒光光譜法測(cè)定無機(jī)砷形態(tài)的過程中，由于水產(chǎn)動(dòng)物基體成分復(fù)雜，樣品前處理過程較為繁瑣，使用外標(biāo)法定量易造成檢測(cè)結(jié)果偏差較大[15]。本文依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB 5009.11-2014)，創(chuàng)造性的將基質(zhì)加標(biāo)法用于水產(chǎn)動(dòng)物中無機(jī)砷形態(tài)的定量分析，比較了基質(zhì)加標(biāo)法和外標(biāo)法定量分析不同無機(jī)砷形態(tài)中的差異。通過優(yōu)化分析條件，確立了基質(zhì)加標(biāo)-液相色譜-原子熒光光譜聯(lián)用測(cè)定水產(chǎn)動(dòng)物中不同形態(tài)無機(jī)砷的定量分析方法，以期能夠最大限度消除基質(zhì)效應(yīng)的干擾，校正前處理過程中的誤差，使測(cè)定結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

硝酸(國(guó)藥集團(tuán)，優(yōu)級(jí)純)，正己烷(國(guó)藥集團(tuán)，分析純)，鹽酸(國(guó)藥集團(tuán)，優(yōu)級(jí)純)，硼氫化鈉(永華化學(xué)科技公司，分析純)，氫氧化鈉(國(guó)藥集團(tuán)，優(yōu)級(jí)純)，磷酸氫二銨(天津光復(fù)化學(xué)公司，優(yōu)級(jí)純)，磷酸二氫銨(永華化學(xué)科技公司，優(yōu)級(jí)純)，砷(Ⅲ)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(1.011 μmol·g-1，GBW08666，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心)，砷(Ⅴ)標(biāo)準(zhǔn)溶液(10 μg·mL-1，美國(guó)Agilent公司)。

全自動(dòng)樣品消解系統(tǒng)(Auto Digiblock S60，北京萊伯泰科儀器公司)，原子熒光形態(tài)分析儀(SAP-20，北京吉天儀器公司)，低溫高速離心機(jī)(日本Hitach公司)，高速離心機(jī)(湘儀公司)，超純水儀，pH計(jì)(上海偉業(yè)儀器廠)，C18-SPE小柱(Agela，美國(guó)SCIEX公司)，0.22 μm水相濾膜(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技公司)。

1.2 樣品前處理

魚類樣品[大黃魚(Larimichthyscrocea)、帶魚(Trichiurusjaponicus)、草魚(Ctenopharyngodonidellus)、鳊(Parabramispekinensis)、鯉(Cyprinuscarpio)、鳙(Aristichthysnobilis)]購(gòu)于上海市銅川路水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng)。蟹類樣品[三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)、中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)]，蝦類樣品[凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)、日本沼蝦(Macrobrachiumnipponense)、哈氏仿對(duì)蝦(Parapenaeopsishardwickii)、克氏原螯蝦(Procambarusclarkii)]，貝類樣品[四角蛤蜊(Mactraveneriformis)、縊蟶(Sinonovaculaconstricta)、文蛤(Meretrixmeretrix)、貽貝(Mytilusedulis)、青蛤(Cyclinasinensis)]購(gòu)于上海東方國(guó)際水產(chǎn)中心。魚、蝦類樣品均取肌肉部分，蟹類樣品取可食部分，貝類樣品去殼取肉，切碎勻漿后，于-18 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

準(zhǔn)確稱取(2.00±0.05)g樣品于50 mL平底塑料管中，加入20 mL 0.15 mol·L-1硝酸溶液，將塑料管蓋子擰緊后振搖約30 s，放置過夜。將塑料管置于石墨消解儀中于90 ℃熱浸提2.5 h，取出塑料管冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移入50 mL離心管中，以10 000 r離心8 min。取上清液5 mL轉(zhuǎn)入另一離心管中，加入5 mL正己烷，振搖1 min，以4 800 r離心6 min，棄去上層正己烷，加入5 mL正己烷重復(fù)操作一次。取離心后下層水相，經(jīng)0.22 μm水相濾膜過濾，C18小柱凈化后，上機(jī)分析。同時(shí)做試劑空白。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制

分別用超純水配制濃度均為1 μg·mL-1的砷(Ⅲ)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、砷(Ⅴ)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液及砷(Ⅲ)砷(Ⅴ)砷混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4 ℃冰箱避光存放。

1.3.2 基質(zhì)加標(biāo)曲線的繪制

取5個(gè)稱好樣品的平底塑料管，分別向其加入砷(Ⅲ)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1、0.2、0.4、1.0、2.0 mL，砷(Ⅴ)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1、0.2、0.4、1.0、2.0 mL，再向每管中加入0.15 mol·L-1硝酸溶液補(bǔ)齊至20 mL，即三價(jià)砷和五價(jià)砷的質(zhì)量濃度在5個(gè)管中分別為5、10、20、50、100 ng·mL-1。加標(biāo)樣品前處理方法同1.2。采用保留時(shí)間進(jìn)行定性，分別以三價(jià)砷和五價(jià)砷的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.3 外標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

將1 μg·mL-1的砷混合標(biāo)準(zhǔn)使用液用0.15 mol·L-1硝酸溶液稀釋成5、10、20、50、100 ng·mL-1系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，上機(jī)分析。以保留時(shí)間定性，分別以三價(jià)砷和五價(jià)砷的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4 儀器條件

液相條件：陰離子交換色譜柱(PRP-X 100，250 mm×4.1 mm，10 μm，Hamilton公司)；流動(dòng)相25 mmol·L-1磷酸氫二銨溶液(甲酸調(diào)節(jié)至pH 5.5)，流速1.5 mL·min-1；柱溫25 ℃；進(jìn)樣量100 μL。

形態(tài)分析預(yù)處理裝置條件：泵速 60 r·min-1；載流20%鹽酸溶液(體積分?jǐn)?shù))；還原劑5 g·L-1NaOH+30 g·L-1NaBH4。

原子熒光條件：砷燈總電流60 mA；負(fù)高壓270 V；載氣(氬氣)流速300 mL·min-1；屏蔽氣(氬氣)流速500 mL·min-1；原子化器高度8 mm。

2 結(jié)果與討論

經(jīng)稀硝酸提取后，砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)都以陰離子形式存在[16]。根據(jù)兩種組分離子對(duì)PRP-X 100陰離子交換色譜柱的固定相的親和力不同，經(jīng)流動(dòng)相洗脫而分離，然后在酸性條件下與強(qiáng)還原劑NaBH4反應(yīng)，生產(chǎn)氣態(tài)化合物，再用原子熒光光譜儀進(jìn)行定量測(cè)定。因此，流動(dòng)相的類型、濃度、pH和泵速等因素對(duì)獲得良好分離效果具有重要的意義。

2.1 流動(dòng)相及其濃度的選擇

在液相色譜-原子熒光光譜法測(cè)定食品中不同砷形態(tài)的研究中，廣泛使用磷酸銨鹽作為緩沖液[15]。本研究比較了磷酸二氫銨(NH4H2PO4)和磷酸氫二銨[(NH4)2HPO4]作為流動(dòng)相對(duì)峰型和保留時(shí)間的影響。由圖1所示，當(dāng)采用磷酸二氫銨作為流動(dòng)相時(shí)，砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)的峰形平緩，略有拖尾；而采用磷酸氫二銨作為流動(dòng)相時(shí)，基線更平更穩(wěn)，目標(biāo)峰特別是砷(Ⅴ)的峰形也更為尖銳。因此選用磷酸氫二銨作為流動(dòng)相。

圖1 不同流動(dòng)相下的兩種無機(jī)砷形態(tài)的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖Fig.1 Standard chromatogram of two inorganic arsenic form in different mobile phase

本研究考察了pH 5.8時(shí)，不同濃度磷酸氫二銨溶液對(duì)20 ng·mL-1砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)標(biāo)液的保留時(shí)間的影響，如圖2所示。

由圖2可知，兩種砷形態(tài)均能得到很完全的分離。隨著磷酸氫二銨溶液濃度的增加，砷(Ⅲ)的保留時(shí)間幾乎不變，砷(Ⅴ)的保留時(shí)間逐步縮短。結(jié)合圖譜分析，當(dāng)流動(dòng)相濃度小于20 mmol·L-1時(shí)，砷(Ⅴ)保留時(shí)間較長(zhǎng)，譜峰拖尾，展寬嚴(yán)重，不利于定量分析。而高濃度的流動(dòng)相雖然能明顯縮短分析時(shí)間，但基線較高，且易在色譜柱上結(jié)晶，堵塞色譜柱從而降低柱效[17]。當(dāng)流動(dòng)相濃度為25 mmol·L-1時(shí)，峰形尖銳，因此采用25 mmol·L-1磷酸氫二銨作為流動(dòng)相以達(dá)到最佳分離效果。

圖2 流動(dòng)相的濃度對(duì)砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)保留時(shí)間的影響Fig.2 Effects of the concentration of mobile phase on the retention time of As(Ⅲ) and As (Ⅴ)

2.2 流動(dòng)相pH的確定

實(shí)驗(yàn)以25 mmol·L-1磷酸氫二銨作為流動(dòng)相，考察了不同pH值對(duì)20 ng·mL-1砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)標(biāo)液的保留時(shí)間的影響，如圖3所示。

圖3 流動(dòng)相pH對(duì)保留時(shí)間的影響Fig.3 Effects of mobile phase pH on the retention time

由圖3可知，隨著流動(dòng)相pH的提高，砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)的保留時(shí)間均先略微縮短后呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢(shì)。當(dāng)pH值為5.5時(shí)，兩種無機(jī)砷形態(tài)的保留時(shí)間最短，當(dāng)分析樣品數(shù)量較大時(shí)，這有利于節(jié)省分析時(shí)間，節(jié)省試劑的消耗。因此，流動(dòng)相的最佳pH值為5.5。

2.3 形態(tài)預(yù)處理?xiàng)l件的確定

形態(tài)分析預(yù)處理裝置SAP-20使用同樣的泵速提升還原劑和載流，泵速的大小直接影響著還原劑(NaBH4)溶液和載流(鹽酸溶液)的進(jìn)液流速，進(jìn)而影響到氧化還原反應(yīng)的程度和氫化物的發(fā)生量。本實(shí)驗(yàn)對(duì)泵的轉(zhuǎn)速大小進(jìn)行優(yōu)化，以10 ng·mL-1的兩種形態(tài)砷混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，研究泵速在40～80 r·min-1條件下砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)的峰熒光響應(yīng)面積值，如圖4所示。泵速過低或過高時(shí)，還原劑和載流均不能與從液相中流出的目標(biāo)物充分反應(yīng)。泵速為60 r·min-1時(shí)兩種目標(biāo)峰的熒光響應(yīng)值最大，因此確定最佳泵速為60 r·min-1。

圖4 泵速對(duì)兩種無機(jī)砷形態(tài)的峰面積的影響Fig.4 Effects of pump rate on the peak area of two forms of As

2.4 方法學(xué)評(píng)價(jià)

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

以5個(gè)基質(zhì)加標(biāo)帶魚樣品的砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，熒光響應(yīng)峰面積值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其測(cè)定線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限見表1。

用砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限如表2所示，檢出限以3倍空白的標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算。

由表1和表2所示，基質(zhì)加標(biāo)法和外標(biāo)法的

線性范圍和定量限均相同。由于外標(biāo)法的標(biāo)液不經(jīng)過繁復(fù)的前處理步驟，因此其線性相關(guān)系數(shù)和檢出限略優(yōu)于基質(zhì)加標(biāo)法。GB5009.11-2014中水產(chǎn)動(dòng)物樣品的檢出限是0.03 mg·kg-1，定量限是0.08 mg·kg-1，而本文中基質(zhì)加標(biāo)法的檢出限是0.04 mg·kg-1，定量限是0.06 mg·kg-1，基質(zhì)加標(biāo)法的定量準(zhǔn)確性優(yōu)于國(guó)標(biāo)。由于水產(chǎn)動(dòng)物中無機(jī)砷含量較低[14]，因此，該法不會(huì)在實(shí)際應(yīng)用過程中受限。

2.4.2 回收率

在最佳分析條件下，上機(jī)檢測(cè)砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)加標(biāo)量為6、8、10 ng·mL-1的樣品，每個(gè)濃度做3個(gè)平行，分別用基質(zhì)加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線和外標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量并計(jì)算回收率，結(jié)果如表3、表4所示。

如表3和表4所示，基質(zhì)加標(biāo)法定量的加標(biāo)回收率為94.2% ～101 %，外標(biāo)法定量的加標(biāo)回收率為71.0% ～109%。結(jié)果表明，基質(zhì)加標(biāo)法檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度及穩(wěn)定性更高。這是因?yàn)榛|(zhì)加標(biāo)法校正了前處理過程中的誤差，降低了樣品基質(zhì)效應(yīng)的干擾，使測(cè)定結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠，更好的滿足了分析的需要。

2.5 不同種類水產(chǎn)動(dòng)物樣品測(cè)定

采用本實(shí)驗(yàn)所確立的基質(zhì)加標(biāo)法測(cè)定魚類、蝦類、貝類和蟹類等水產(chǎn)品的砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)含量，結(jié)果如表5所示。魚、蝦、蟹類中的砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)檢出率較低，而貝類樣品檢出率較高。5種不同貝類樣品的砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)含量差異較大，但均遠(yuǎn)低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB 2762-2012)水產(chǎn)品(除魚類及其制品外)無機(jī)砷含量限量(0.5 mg·kg-1)，這可能是貝類產(chǎn)地的海水和海洋沉積物的砷含量不同所致[18-19]。

表1 基質(zhì)加標(biāo)法線性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Linear experiment results of standard addition method

表2 外標(biāo)法線性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Linear experiment results of external standard method

表3 基質(zhì)加標(biāo)法測(cè)定的回收率Tab.3 Recoveries from standard addition method

表4 外標(biāo)法測(cè)定的回收率Tab.4 Recoveries from external standard method

表5 不同種類水產(chǎn)動(dòng)物樣品測(cè)定結(jié)果Tab.5 Content of two arsenic forms in different aquatic product samples

3 小結(jié)

本研究將基質(zhì)加標(biāo)法用于水產(chǎn)動(dòng)物中無機(jī)砷形態(tài)的定量分析，通過優(yōu)化流動(dòng)相種類、濃度、pH和泵速等參數(shù)，確立了基質(zhì)加標(biāo)-液相色譜-原子熒光光譜聯(lián)用測(cè)定水產(chǎn)動(dòng)物中不同形態(tài)無機(jī)砷的定量分析方法，并將該法用于測(cè)定魚、蝦、貝、蟹等水產(chǎn)動(dòng)物樣品中的砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)含量。研究結(jié)果顯示，在以pH 5.5 、25 mmol·L-1磷酸氫二銨溶液為流動(dòng)相，泵速為60 r·min-1的檢測(cè)條件下，砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)的回收率在94.2% ～101 %之間；魚、蝦、蟹類中的砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)檢出率較低，而貝類樣品的檢出率較高，不同貝類樣品的砷(Ⅲ)和砷(Ⅴ)含量差異較大。通過與外標(biāo)法在標(biāo)準(zhǔn)曲線、精密度和回收率等方面的比較發(fā)現(xiàn)，該方法準(zhǔn)確度高，能夠較大限度的降低基質(zhì)效應(yīng)的影響，校正前處理過程中的誤差，適合水產(chǎn)動(dòng)物樣品中不同價(jià)態(tài)無機(jī)砷的定量測(cè)定。

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Application of standard addition method in the quantitation of different inorganic arsenic speciation in animal-origin seafood

ZHAN Qian-yun1,2，SHI Yong-fu2，HUANG Xuan-yun2， HUANG Dong-mei2，YANG Guang-xin2，CAI You-qiong2

(1.CollegeofFoodScienceandEngineering，OceanUniversityofChina，ShandongQingdao266003，China；2.FisheryProductsQualityInspectionandTestCenter(Shanghai)oftheMinistryofAgriculture,theMinistryofAgriculture，Shanghai200090，China)

Arsenic has long been considered as a harmful element for people’s health. Excessive consumption or long-term intake of arsenic-rich food would damage the organs including the heart, liver, kidney, as well as the nervous system and digestive system severely. Animal-origin seafood is one of the main sources of arsenic exposure for human beings. In recent years, news on the high level of arsenic in seafood has been existing in the press from time to time due to the water pollution. As the growing acknowledgement of the toxicity of arsenic research, it has been found that the toxicity of arsenic varies with different speciations. Among numerous speciations of arsenic, most of organic arsenic are non-toxic， while the inorganic arsenic which is primarily composed of arsenic (Ⅲ) and arsenic (Ⅴ) has the strongest toxicity. So it has been recognized as a carcinogen by the International Agency for Research on Cancer ( IARC). Therefore, it is of great importance for the quantitative analysis of different speciations of inorganic arsenic in animal-origin seafood. Nowadays, the Liquid Chromatography-Atomic Fluorescence Spectrometry(LC-AFS) has been extensively used in the analysis of arsenic speciation in aquatic products. However, the external standard method is likely to cause the significant deviation in quantitative detection results because of the complex interfering substances in the samples and the complicated pretreatment in the practical application process for using LC-AFS to analyze the speciation of inorganic arsenic. This study creatively used the standard addition method for the quantitative analysis of different inorganic arsenic speciation in animal-origin aquatic products. A standard addition method of Liquid Chromatography coupled with Atomic Fluorescence Spectrometry was identified after the optimization of several parameters including the type, concentration, pH of the mobile phase and the pump rate. Then the content of arsenic (Ⅲ) and arsenic (V) of samples in fishes, shrimps, shells and crabs was determined by this method. The results showed that arsenic (Ⅲ) and arsenic (Ⅴ) were separated optimally under the conditions of the 60 r·min-1of the pump rate, pH 5.5 and 25 mmol·L-1ammonium dibasic phosphate as the mobile phase. The average recovery ranged from 94.2% to 101%. The detection rates of arsenic (Ⅲ) and arsenic (Ⅴ) in shells were significantly higher than the other species. Owing to the different arsenic levels of water and sediment, different shells have different concentration of arsenic (Ⅲ) and arsenic (Ⅴ). Comparing with the external standard method, this method was proved to be useful for eliminating matrix effects and correcting the errors during the process of pretreatment.

standard addition method; inorganic arsenic; speciation; quantitative analysis; animal-origin seafood

1004-2490(2017)02-0225-08

2016-09-15

農(nóng)業(yè)部公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(項(xiàng)目編號(hào)201503108)

詹倩云(1991-)，女，四川旺蒼人，碩士研究生，食品科學(xué)專業(yè)。E-mail:zhanqianyun0927@163.com

蔡友瓊，研究員。Tel:13917288112，E-mail:caiyouqiong@163.com

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