艾粉質(zhì)量標準初步研究

王凱 胡璇 龐玉新

摘要 [目的]初步研究不同批次的艾納香提取物艾粉質(zhì)量標準。[方法]取來自貴州不同地區(qū)49批艾粉（艾納香提取物）為研究材料，對其外觀形狀進行觀察描述，測定其溶解性、含水量等物理特性，采用薄層層析法（TLC）進行定性分析以及GC指紋圖譜進行相似度評價。[結(jié)果]艾粉為白色、塊狀、鹽粒狀或顆粒狀結(jié)晶，手捻不易碎，具清香氣，味辛、涼，具揮發(fā)性，幾乎不溶于水，易溶于乙醇、乙醚、氯仿，艾粉含水量不高于24%為宜。艾粉樣品中l(wèi)-龍腦TCL斑點清晰，β-石竹烯、花椒油素顯相同顏色的斑點或沒有斑點，分離良好。GC指紋圖譜僅得到2個共有峰，確認為有效成分l-龍腦和樟腦，相似度基本都在0.9以上。[結(jié)論]該研究結(jié)果為艾粉在生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)，同時進一步促進高質(zhì)量天然冰片的生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞 艾粉；薄層色譜；GC指紋圖譜；質(zhì)量控制

中圖分類號 R284 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2017）25-0128-03

Abstract [Objective]To make a preliminary development of quality standard for Aifen [the extract powder of Blumea Balsamifera （L.） DC.]. [Method]Fortynine batches of Aifen collected from different regions in Guizhou were used as research materials for this study. The appearance traits was observed and described， the solubility and water content were determined. TCL was used for qualitative analysis and similarity evaluation was obtained by GC fingerprint. [Result]Aifen was white， blocky， salt granular and granulate. It was unbreakable by hand twist. Aifen was volatile with fragrant smell and tasted sheen and cool. It was almost insoluble in water， but easily dissolved in trichloromethane， ethanol， diethyl ether. Its water content should be no more than 24%. TLC spots of lborneol were clear in those Aifen samples. βcaryophyllene and xanthoxylin appeared the same color spots or no spots. The three components all separated well. Only two common peaks were collected in the fingerprint and confirmed to be lborneol and camphor. The similarities between the entire chromatographic profiles of Aifen samples were basically all all over 0.90. [Conclusion]This study will provide reference and basis for the quality control of Aifen in the production process. Meanwhile， it will further promote the production of highquality natural borneol.

Key words Aifen；Thinlayer chromatography （TCL）；GC fingerprint；Quality control

艾納香為菊科植物艾納香[Blumea Balsamifera（L.）DC.]的新鮮或干燥地上部分，是黎、苗族等少數(shù)民族重要的民族藥，俗稱娜龍（黎藥名）、大風艾、大葉艾，具有祛風除濕、消腫散瘀、活血解毒等功效[1-2]。艾粉是艾納香的葉和枝經(jīng)水蒸氣蒸餾提煉出來的粗加工品，作為原料前體物可進一步加工得到艾片[3]。艾片作為天然冰片的來源之一，被廣泛應用于咽立爽、八寶驚風散、金骨蓮膠囊、心胃止痛膠囊等中成藥中[4]，其開竅醒神、清熱止痛的功效已經(jīng)得到廣大消費者的認可。隨著人們生活水平的提高，返璞歸真的意識與日俱增，以天然冰片為原料的藥品、日化用品越來越受到青睞[5]。

艾片的質(zhì)量直接取決于艾粉的質(zhì)量，艾粉的主要成分是l-龍腦，目前還缺少關(guān)于艾粉質(zhì)量控制的相關(guān)研究報道，大多數(shù)文獻都是對艾納香以及其終產(chǎn)物艾片進行研究[6-7]。筆者取來自貴州不同地區(qū)49批艾粉（艾納香提取物）為研究材料，對其外觀形狀進行觀察，物理性狀進行測定，并對其有效成分進行定性分析，對艾粉質(zhì)量標準進行初步研究，為艾粉在生產(chǎn)應用中的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品。艾粉主產(chǎn)區(qū)為貴州，該研究的艾粉樣品均為貴州不同產(chǎn)地收集（2013、2014年秋季收集），均保存于低溫干燥中。經(jīng)中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院龐玉新研究員鑒定為菊科植物艾納香[Blumea balsamifera （L.）DC.]經(jīng)水蒸氣蒸餾提取而得的初提物艾粉。

1.1.2 儀器。電子天平（Sartorius公司）；Agilent 7890A氣相色譜儀（配有氫火焰離子化檢測器FID，載氣高純氮氣，助燃氣為空氣，燃氣為氫氣），HP-5毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm），OpenLAB CDS 工作站，G4513A自動進樣器。

1.1.3 試劑。對照品樟腦（純度≥98%，批號21506，購自Aladdin公司），l-龍腦（純度≥98%，批號10147015，購自Alfa Aesar公司），β-石竹烯（純度≥98%，批號111819-201001，購自中國食品藥品檢定研究院），花椒油素（純度≥98%，批號D2683，購自TCI公司），乙酸乙酯為色譜純（Fisher Scientific公司），其他試劑均為分析純。

1.1.4 處理軟件。指紋圖譜數(shù)據(jù)處理軟件為《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2004 A版）。

1.2 方法

1.2.1 理化性質(zhì)。

1.2.1.1 溶解性測定方法。參照《中國藥典》[8]2015版一部凡例中“性狀”項下對溶解度的測定法。

1.2.1.2

水分測定。參照《中國藥典》[8]2015版四部通則水分測定第四法。

1.2.2 TCL鑒別。

1.2.2.1

對照品溶液的制備。取對照品l-龍腦、β-石竹烯、花椒油素適量，分別加乙醇制成3、2、1 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。

1.2.2.2

供試品溶液的制備。取艾粉樣品10.0 mg，加乙醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。

1.2.2.3 不同溶劑展開。參照《中國藥典》[8]2015版藥典薄層色譜法，吸取上述對照品和供試品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，分別以不同展開劑系統(tǒng)進行展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。

1.2.3 指紋圖譜研究。

1.2.3.1

供試品溶液的制備。取同一艾粉樣品0.1 g，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，然后精密量取1 mL置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

1.2.3.2

參照物溶液的制備。分別精密稱取對照品樟腦、l-龍腦對照品適量，加乙酸乙酯溶解并定容，制成質(zhì)量濃度分別為0.43、10.05 mg/mL的混合液，作為混合對照品儲備液。

1.2.3.3

色譜條件。色譜柱為HP-5毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm），程序升溫（30 ℃，保持5 min，以10 ℃/min程序升溫至50 ℃，以2 ℃/min升溫至100 ℃，再以4 ℃/min升溫至160 ℃，保持13 min。），載氣為高純氮氣，流量6.5 mL/min；不分流，F(xiàn)ID檢測器，檢測器溫度260 ℃，進樣口溫度220 ℃。按l-龍腦計算理論塔板數(shù)及分離度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，理論塔板數(shù)不低于50 000，分離度>4，符合指紋圖譜的相關(guān)要求[9]。該色譜條件作為GC條件。

2 結(jié)果與分析

2.1 理化性質(zhì)

2.1.1 性狀鑒別。各批次艾粉為白色、塊狀、鹽粒狀或顆粒狀結(jié)晶，手捻不易碎，具清香氣，味辛、涼，具揮發(fā)性。

2.1.2 溶解性測定。從表1可以看出，艾粉易溶于乙醚、乙醇、氯仿，幾乎不溶于水。

2.1.3 水分測定。由圖1可知，15、16、19、23、31、33、36、44、48批樣品與大多數(shù)樣品含水量差異較大，但80%的艾粉樣品含水量不高于24%。通過對各批次樣品的測定，建議艾粉在質(zhì)量控制的過程中含水量不高于24%為宜。

2.2 TCL鑒別

不同溶劑展開系統(tǒng)試驗結(jié)果見表2，試驗結(jié)果表明選擇石油醚-乙酸乙酯（9∶1）作為展開系統(tǒng)較為適宜。供試品色譜中，以0.5%香草醛的10%硫酸乙醇溶液為顯色劑，在與對照品色譜相應的位置上，l-龍腦顯相同顏色的斑點，β-石竹烯、花椒油素顯相同顏色的斑點或沒有斑點（圖2）。

2.3 指紋圖譜研究

2.3.1 檢測方法的檢驗。

2.3.1.1 精密度試驗。按“1.2.3.3”色譜條件，取同一供試品溶液連續(xù)進樣6次，測定，記錄其色譜圖。考察色譜峰的相對保留時間和峰面積比值的一致性。試驗結(jié)果表明，各色譜峰的相對保留時間和相對峰面積比值的RSD值均小于3%，表明進樣的精密度良好。

2.3.1.2 穩(wěn)定性試驗。按“1.2.3.3”色譜條件，取同一供試品溶液分別在0、2、4、8、12、24 h進樣，考察色譜峰的相對保留時間和峰面積比值的一致性[9]。試驗結(jié)果表明，各色譜峰的相對保留時間和相對峰面積比值的RSD值均小于3%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.1.3 重復性試驗。按“1.2.3.3”色譜條件，取同一批號的供試品6份，分別進行測定?？疾焐V峰的相對保留時間和峰面積比值的一致性。試驗結(jié)果表明，各色譜峰的相對保留時間和相對峰面積比值的RSD值均小于3%，表明該方法重復性良好。

2.3.2 指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)。

2.3.2.1 指紋圖譜采集及共有峰的標定。將49批艾粉樣品按“1.2.3.1”方法進行制備得到進樣樣品，依法測定記錄色譜圖得到49批艾粉GC指紋圖譜，將其全部導入《中藥指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2004 A版），生成對照指紋圖譜（圖3a），共標定反映艾粉內(nèi)在質(zhì)量的2個共有色譜峰。通過標準品保留時間的定性得知，1號色譜峰為樟腦（16.778 min），2號色譜峰為l-龍腦（18.082 min），保留時間均穩(wěn)定（圖3b）。結(jié)合不同批次艾粉GC色譜峰狀況，發(fā)現(xiàn)2號峰l-龍腦峰型對稱、響應值高并且為艾粉中主要藥效指標成分，故選擇其為內(nèi)標參照峰，計算樟腦的相對保留時間和相對峰面積[10]。

2.3.2.2 特征指紋圖譜的建立及相似度評價。

根據(jù)所建立的GC指紋圖譜方法，連續(xù)得到49批艾粉的指紋圖譜，建立了艾粉指紋圖譜疊加模式色譜圖（圖4），將各色譜圖與特征指紋圖譜（圖3a）相比較，采用相似系數(shù)進行了相似度判別，結(jié)果發(fā)現(xiàn)（表3），49批艾粉樣品中有48批的指紋圖譜相似度均在0.9以上，表明48份不同批次艾粉的化學成分相似。

3 結(jié)論與討論

該研究采用6種不同展開溶劑分別針對艾粉中的l-龍腦、β-石竹烯和花椒油素進行了薄層色譜鑒別，發(fā)現(xiàn)采用石油醚-乙酸乙酯（9∶1）作為展開系統(tǒng)雖然底色干擾較為嚴重，但是各斑點分開較好，Rf值較適宜。在與對照品色譜相應的位置上，l-龍腦顯相同顏色的斑點，β-石竹烯、花椒油素顯相同顏色的斑點或沒有斑點，說明在艾粉不同批次的樣品中，l-龍腦為共有成分，β-石竹烯、花椒油素并不是所有艾粉樣品都含有的成分。

在艾粉指紋圖譜建立的過程中，比較不同程序升溫方法，以30 ℃保持5 min，然后以10 ℃/min程序升溫至50 ℃，以2 ℃/min升溫至100 ℃，以4 ℃/min升溫至160 ℃，保持13 min，可檢測到17個色譜峰，60 min中內(nèi)出峰完全，且色譜基線平穩(wěn)，各色譜峰分離達到最佳效果，故確定該方法為最佳程序升溫法。試驗過程中比較了不同柱流速色譜圖，當采用不同柱流速時，分離效果無明顯差異，說明柱流速對樣品的分離影響較小，該試驗選擇了系統(tǒng)默認的柱流速（6.5 mL/min）。

目前相關(guān)報道均是對不同產(chǎn)地艾納香藥材以及其提取物艾納香油進行指紋圖譜研究[11-12]，艾粉作為其主要提取物，藥材本身的質(zhì)量、提取工藝以及儲藏方法都會對其質(zhì)量產(chǎn)生影響。該試驗首次對49批艾粉樣品的指紋圖譜進行研究，樣品量較大，具有較好的代表性。但49批樣品僅得到2個共有峰，這可能與艾粉的提取工藝和大樣本量有關(guān)，不同批次含有的有效成分不同，TCL結(jié)果表明有的批次含有花椒油素，有的批次含有β-石竹烯。利用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2004 A版）對艾粉指紋圖譜的相似度進行研究，結(jié)果表明49批艾粉樣品中有48批的指紋圖譜相似度均在0.9以上。試驗結(jié)果表明該方法建立的艾粉指紋圖譜特征性強，可結(jié)合薄層鑒別條件對艾粉質(zhì)量進行初步研究，為艾粉在生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)，同時也為生產(chǎn)質(zhì)量穩(wěn)定的艾片提供可靠的保證。

參考文獻

[1] 官玲亮，龐玉新，王丹，等.中國民族特色藥材艾納香研究進展[J].植物遺傳資源學報，2012，13（4）：695-698.

[2] 龐玉新，謝小麗，陳振夏，等.艾納香本草考證[J].貴州農(nóng)業(yè)科學，2014，42（6）：10-13.

[3] 江興龍，潘俊鋒，司健，等.貴州艾納香產(chǎn)地采收提取艾粉技術(shù)研究[J].生物質(zhì)化學工程，2006，40（1）：17-20.

[4] 師琴麗，覃軍章，王用平，等.貴州優(yōu)勢苗族藥物艾納香及其產(chǎn)品[J].中藥材，2003，26（z1）：87-88.

[5] 高爾剛，歐國騰，葉升亮.艾納香產(chǎn)業(yè)發(fā)展對策[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2016，44（24）：212-215.

[6] 李海艷，楊全，龐玉新，等.天然冰片、冰片和艾片的鑒別[J].中國醫(yī)院用藥評價與分析，2016，16（2）：186-189.

[7] 陳振振，杜守穎，陸洋，等.艾片與麝香酮芳香開竅作用機制研究[J].中藥材，2014，37（3）：460-464.

[8] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：化學工業(yè)出版社，2015：5，76，104.

[9] 劉怡，孟江，陳磊.苦參黃酮類成分HPLC指紋圖譜研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2013，24（3）：282-285.

[10] 羅國安，梁瓊鱗，王義明.中藥指紋圖譜：質(zhì)量評價、質(zhì)量控制與新藥研發(fā)[M].北京：化學工業(yè)出版社，2009.

[11] 劉常青，段海霞，宋力飛，等.不同時期艾納香藥材的氣相指紋圖譜研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2016，12（21）：28-31.

[12] 胡璇，陳振夏，王凱，等.艾納香油質(zhì)量標準初步研究[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學，2016，36（9）：87-91.