云南蠶區(qū)家蠶品種資源對(duì)家蠶核型多角體病毒的抗性評(píng)價(jià)分析

邵榆嵐 唐芬芬 張一川 張永紅 朱峰 白興榮

摘要：【目的】全面掌握云南蠶區(qū)家蠶品種資源的抗家蠶核型多角體病毒（BmNPV）能力，為挖掘具有特色的家蠶抗病材料及培育適應(yīng)當(dāng)?shù)氐目共∑贩N提供參考?！痉椒ā坎捎萌g起蠶經(jīng)口添食相同濃度病毒、逐日調(diào)查存活率的方法，對(duì)200個(gè)家蠶品種（品系）進(jìn)行BmNPV抗性評(píng)價(jià)和篩選；并通過接種后每日存活數(shù)、各發(fā)育時(shí)期存活率等指標(biāo)分析云南蠶區(qū)家蠶品種資源對(duì)BmNPV的抗性水平、發(fā)病死亡規(guī)律、不同抗性品種的發(fā)病死亡時(shí)期及同一品種不同品系間抗性差異。【結(jié)果】云南蠶區(qū)家蠶品種資源中抗BmNPV的品種有731、795、854B、872A、966B、B黃肉色繭、P50、山河B、選二甲白和竹印，感病品種包括955、242A、242B、963B、DW3、錦秀A、錦秀B、日、野乙和云夏A油。各抗病品種和感病品種首次出現(xiàn)死亡差異的時(shí)間截點(diǎn)分別是接種后96 和48 h，二者相差48 h；部分抗病品種在秋季對(duì)BmNPV的抗性水平低于春季；同一家蠶品種A系和B系的抗病性差異不顯著（P>0.05）。【結(jié)論】云南蠶區(qū)家蠶品種資源中大多數(shù)品種的抗BmNPV能力屬于中等水平，其中P50為BmNPV抗性最強(qiáng)品種。對(duì)未知品種進(jìn)行抗BmNPV測(cè)定時(shí)，可選擇接種后168 h作為抗性評(píng)價(jià)的時(shí)間截點(diǎn)。

關(guān)鍵詞： 家蠶品種；核型多角體病毒（BmNPV）；抗性評(píng)價(jià)；云南蠶區(qū)

中圖分類號(hào)： S884.51 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2017）03-0517-07

0 引言

【研究意義】家蠶核型多角體病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus，BmNPV）隸屬于桿狀病毒科（Baculoviridae），為雙鏈DNA病毒，其感染家蠶后的典型病癥是家蠶體軀腫脹且呈乳白色，與其他家蠶病毒病存在明顯區(qū)別，能夠通過肉眼判斷。據(jù)家蠶流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，BmNPV是云南蠶區(qū)發(fā)生較廣且危害嚴(yán)重的主要病原（白興榮等，2010），生產(chǎn)上多于三齡后發(fā)病，一旦發(fā)病即迅速蔓延，目前尚無直接有效的治療藥物，消毒預(yù)防、抗病育種仍是主要的防病措施。因此，全面掌握云南蠶區(qū)家蠶品種資源的抗BmNPV能力，對(duì)促進(jìn)云南桑蠶產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】家蠶核型多角體病毒病的發(fā)生主要與家蠶自身抗性、飼養(yǎng)環(huán)境和病毒侵染力等有關(guān)（唐芬芬等，2015），且有研究證實(shí)，不同家蠶品種對(duì)BmNPV存在品種間、系統(tǒng)間及化性間的抗性差異（陳克平等，1991；朱勇等，1998）。錢荷英等（2006）研究表明，家蠶對(duì)BmNPV經(jīng)口感染的抵抗性遺傳方式受一對(duì)主效基因和若干微效基因控制。吳福泉等（2010）研究發(fā)現(xiàn)，通過對(duì)家蠶累代添食BmNPV可提高其抵抗能力，且經(jīng)濟(jì)性狀穩(wěn)定。對(duì)于家蠶品種（品系）的抗BmNPV篩選，無論是抗病育種還是抗病基因挖掘均具有重要意義。劉曉勇等（2004）在高抗材料和敏感材料的基礎(chǔ)上，采用RAPD篩選獲得抗BmNPV的相關(guān)分子標(biāo)記（GenBank登錄號(hào)AY380833）；徐安英等（2013）以含Bm-

NPV耐受基因的品種為母本，培育獲得高抗BmNPV的新品種——華康2號(hào)。但目前有關(guān)家蠶抗BmNPV品種的測(cè)定尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)可參考，主要是由于人工接種方法和時(shí)間、評(píng)定指標(biāo)、統(tǒng)計(jì)時(shí)間等不同而呈現(xiàn)不同結(jié)果（陳克平等，1991；朱勇等，1998；錢荷英等，2006）。其中，評(píng)定家蠶抗病性的指標(biāo)有發(fā)病率、健蛹率、潛育期、半數(shù)致死期和半數(shù)致死劑量等（林昌麒，1987；陳義安等，2016）；人工接種方法主要是在各齡起蠶時(shí)皮下注射或經(jīng)口添食，而經(jīng)口添食又分為直接家蠶口器滴喂法和桑葉病毒液浸漬法或涂抹法；統(tǒng)計(jì)時(shí)間方面，為防止二次感染，通常在接種后3或4 d統(tǒng)計(jì)發(fā)病情況。【本研究切入點(diǎn)】隨著云南蠶區(qū)家蠶品種資源的收集和引進(jìn)，發(fā)現(xiàn)其在當(dāng)?shù)嘏c原產(chǎn)地的抗病性試驗(yàn)成績(jī)存在明顯差異，可能與云南的自然氣候條件有關(guān)，但具體原因有待進(jìn)一步研究證實(shí)?！緮M解決的關(guān)鍵問題】對(duì)云南蠶區(qū)保存的200個(gè)二化性家蠶資源品種（品系）進(jìn)行BmNPV抗性測(cè)定，全面掌握云南蠶區(qū)家蠶品種資源的抗BmNPV能力，為挖掘具有特色的家蠶抗病材料及培育適應(yīng)當(dāng)?shù)氐目共∑贩N提供參考。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試家蠶品種（品系）均由云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶桑蜜蜂研究所家蠶資源保存研究室提供，均為二化性品種，其中日系品種110個(gè)、中系品種90個(gè)。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 BmNPV多角體準(zhǔn)備 實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)繁BmNPV，采用家蠶普種菁松×皓月，接種后于五齡出現(xiàn)全身發(fā)白、腫脹時(shí)收集發(fā)病蠶，經(jīng)3 d自然腐敗后4 ℃保存?zhèn)溆?。取適量發(fā)病蠶尸體置于研缽中研磨，組織液用夾帶薄層棉花的3層紗布過濾2次，收集濾液。濾液用滅菌水稀釋，然后進(jìn)行差速離心。首先采用500 r/min離心5 min，棄沉淀取上清液，6000 r/min離心20 min，取出沉淀中的白色部分，其余沉淀加滅菌水混合振蕩后再進(jìn)行高速離心，反復(fù)高速離心并收集白色沉淀部分，用滅菌水懸浮，呈灰白色，含大量病毒多角體。隨后降低離心速度和時(shí)間，5000 r/min離心10 min以除去沉淀外層灰褐色部分，多次重復(fù)，待顯微鏡觀察細(xì)菌含量極少時(shí)收集沉淀，用少量滅菌水懸浮，呈純白色，得到的高純高濃度病毒多角體液4 ℃保存。使用當(dāng)天取適量病毒多角體液用滅菌水稀釋，采用血球計(jì)數(shù)板測(cè)定濃度，制備所需濃度的BmNPV多角體液。

1. 2. 2 家蠶品種對(duì)BmNPV抗性的初步篩選 供試家蠶品種（品系）于春季分兩批養(yǎng)蠶至三齡起，當(dāng)天采摘適齡新鮮桑葉，清洗晾干后選擇無皺桑葉，用直徑7 cm的打孔器制成大小一致的圓形葉，以1×107個(gè)/mL的BmNPV多角體液浸漬桑葉，待桑葉表面水分蒸發(fā)后，以等量桑葉給三齡起蠶經(jīng)口接種。每個(gè)品種（品系）每個(gè)重復(fù)90頭健康蠶，置于帶蓋塑料盒中飼養(yǎng)（每盒12片帶毒桑葉），2次重復(fù)。接種期防止桑葉凋萎，保證食盡桑葉，第2餐開始更換普通新鮮桑葉。從第2 d開始逐日調(diào)查發(fā)病死亡數(shù)。為防止二次感染，上午喂蠶前去除殘葉蠶沙，更換墊紙和塑料盒，下午喂蠶前用新鮮石灰粉進(jìn)行蠶體、蠶座消毒。每天喂蠶結(jié)束后用含1%有效氯的漂白粉水進(jìn)行蠶室地面消毒。

1. 2. 3 部分家蠶品種對(duì)BmNPV抗性的二次篩選 根據(jù)春季全面篩選結(jié)果，選取存活率較高的家蠶常規(guī)品種（品系）和彩色繭品種于秋季進(jìn)行二次篩選。添毒濃度和方法、調(diào)查方法、消毒方法與第1次篩選相同。每個(gè)品種（品系）每個(gè)重復(fù)30頭健康蠶，每盒4片帶毒桑葉，3次重復(fù)。

1. 3 統(tǒng)計(jì)分析

第1次篩選各品種（品系）存活率、死亡數(shù)和第2次篩選部分品種（品系）春秋兩季存活率、彩色繭品種的抗性篩選數(shù)據(jù)采用Excel 2007統(tǒng)計(jì)及制作圖表，同一品種A系和B系品種的抗性比較采用SPSS 19.0進(jìn)行獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2. 1 200個(gè)家蠶品種（品系）對(duì)BmNPV抗性的調(diào)查結(jié)果

三齡起各家蠶品種（品系）添食病毒的發(fā)育時(shí)期與相應(yīng)接種后時(shí)數(shù)如表1所示。三齡起蠶接種BmNPV后逐日調(diào)查存活率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)接種48 h后有16個(gè)品種的死亡數(shù)超過2/3，即存活率不到30%；接種后96 h（四齡起），多數(shù)品種出現(xiàn)大批量死亡，35%品種（70個(gè)）的存活率在80%以上，13%品種（26個(gè)）的存活率低于40%，52%品種（104個(gè)）的存活率在40%～79%；隨著日齡的增長(zhǎng)，接種后240 h（五齡起），有2個(gè)品種存活率高于80%，78%品種（156個(gè)）的存活率低于40%，其中4個(gè)品種全部死亡；至上簇時(shí)，有26個(gè)品種結(jié)繭化蛹。由圖1可知，存活率在40%～59%的品種占有率在各時(shí)期分布較均衡，80%以上存活率的品種在前期占有率較高，但后期幾乎不存在高存活率的品種。

當(dāng)BmNPV接種濃度為1×107個(gè)/mL時(shí)，云南蠶區(qū)家蠶抗BmNPV能力整體屬于中等水平，特別是常規(guī)品種中未發(fā)現(xiàn)高抗品種。于三齡起蠶接種BmNPV后，少數(shù)品種在感染早期死亡明顯，四齡后存活數(shù)極少，如242B和2002A等；部分品種除在三眠期前后及四眠期前后死亡數(shù)少量上升外，其他時(shí)間死亡數(shù)較少，如新松B和浙蕾乙等；部分品種三齡、四齡期死亡數(shù)較少，五齡后死亡數(shù)明顯增加，如山11和蘇鎮(zhèn)A等；部分品種只有在四齡起蠶時(shí)死亡數(shù)增加，其他時(shí)間死亡量較少，如竹嶺A和選二甲花等。

調(diào)查還發(fā)現(xiàn)，三齡起蠶接種BmNPV后，許多品種在眠前眠后2個(gè)時(shí)段出現(xiàn)死亡數(shù)量明顯增加現(xiàn)象。對(duì)同批次114個(gè)品種（品系）每日死亡數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，如圖2所示，每條曲線代表1個(gè)品種（品系），在三齡第4 d和四齡第1 d、四齡第5 d和五齡第1 d的死亡數(shù)量出現(xiàn)高峰，到四齡第2 d、五齡第2 d死亡數(shù)量急速回落，因此推測(cè)家蠶在齡期末和齡期初存在某種機(jī)制導(dǎo)致家蠶的抵抗力下降，從而導(dǎo)致該時(shí)段的死亡數(shù)量驟增。在接種BmNPV后2個(gè)眠期出現(xiàn)死亡高峰，且其他時(shí)間死亡較少，說明本研究的人工接種方法有效，未出現(xiàn)感染后期因蠶座感染（二次感染）導(dǎo)致死亡數(shù)量直線上升的現(xiàn)象。

2. 2 200個(gè)家蠶品種春季接種相同BmNPV后抗病品種和感病品種的選擇

根據(jù)200個(gè)家蠶品種接種BmNPV后的逐日死亡數(shù)據(jù)可知，不同品種的大量發(fā)病死亡時(shí)期存在明顯差異，無法在某個(gè)時(shí)間點(diǎn)選擇高存活率品種作為抗病品種。為篩選獲得抗病品種和感病品種，整理出接種后四齡起到五齡第5 d期間各家蠶品種存活率前5名和后5名的排名，排名出現(xiàn)3次以上的品種暫歸屬于抗病品種或感病品種。由表2可知，在10個(gè)抗病品種中中系品種占60%、日系品種占40%，其中B黃肉色繭和P50為彩色繭品種，且存活率排名較前；在10個(gè)感病品種中中系品種占30%、日系品種占70%，其中野乙含野蠶血統(tǒng)。圖2顯示接種BmNPV后第2～3 d死亡數(shù)量最多的品種均屬于表2中的感病品種，說明感病品種在感染BmNPV早期，未經(jīng)過眠期時(shí)即可與其他品種區(qū)分。

2. 3 不同家蠶品種接種相同濃度BmNPV后評(píng)價(jià)時(shí)間的選擇

三齡起蠶接種BmNPV后的前3 d，大多數(shù)家蠶品種死亡數(shù)較少，不同品種間差異不明顯；但感染后期，經(jīng)歷2次眠期的家蠶累積死亡數(shù)大幅度增加。隨機(jī)選取4組家蠶（A、B、C和D），每組10個(gè)品種，逐一編號(hào)，共40個(gè)未知抗性水平的品種，分析其接種后96～288 h的累積存活數(shù)。如圖3所示，每條曲線代表1個(gè)品種。病毒接種96 h，經(jīng)過第1次眠期，不同品種的存活數(shù)（起始點(diǎn)）開始出現(xiàn)差異，但部分品種仍然具有相同的起始點(diǎn)，說明這部分品種在接種96 h時(shí)還無法區(qū)別抗性差異；至接種168 h后，存活數(shù)出現(xiàn)明顯下降，且不同品種的存活數(shù)明顯不同（無重疊點(diǎn)）；在接種168～192 h時(shí)，不同品種的存活線路交錯(cuò)明顯，至接種192 h（四齡眠前1 d），大多數(shù)品種的存活數(shù)降至低值。經(jīng)過第2次眠期，至接種240 h（五齡起）時(shí)各品種的存活數(shù)第2次下降到低值，此后其存活數(shù)下降緩慢。根據(jù)半致死時(shí)間分析結(jié)果可知，在接種168 h時(shí)各家蠶品種的存活率平均在50.00%左右。可見，對(duì)未知家蠶品種進(jìn)行BmNPV抗性測(cè)定時(shí)，選擇接種后168 h作為抗性評(píng)價(jià)的時(shí)間截點(diǎn)可區(qū)別大多數(shù)品種的抗性差異。

比較抗病品種和感病品種（表2）接種BmNPV后6～288 h的存活數(shù)，分析抗感品種發(fā)病死亡的時(shí)間。由圖4可看出，接種BmNPV后6～288 h抗病品種和感病品種存活頭數(shù)存在明顯差異?？共∑贩N的存活數(shù)在接種后72～96 h出現(xiàn)小幅度下降，且在接種96 h時(shí)具有明顯不同（無重疊點(diǎn)），接種192 h后再次出現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)，至接種240 h時(shí)各抗病品種的存活數(shù)差異明顯。感病品種接種后前3 d的存活數(shù)下降趨勢(shì)明顯較抗病品種快，在接種48 h時(shí)各感病品種的存活數(shù)第1次出現(xiàn)不同，至接種96 h時(shí)各感病品種的存活數(shù)差異明顯，其平均存活率為19.50%，此時(shí)抗病品種的平均存活率為87.83%，二者相差約4.5倍。各抗病品種和感病品種首次出現(xiàn)死亡差異的時(shí)間截點(diǎn)分別是接種后96和48 h，相差48 h。從半致死時(shí)間來看，抗病品種約在接種后288 h，感病品種約在接種后72 h，相差216 h。因此，在篩選不同抗性水平的家蠶品種時(shí)應(yīng)根據(jù)其發(fā)病時(shí)間規(guī)律，選取相應(yīng)的評(píng)價(jià)截止時(shí)間。

2. 4 A系和B系品種的抗性比較結(jié)果

通過篩選可知，云南蠶區(qū)家蠶保存資源種中存在許多含有A系、B系的品種，選擇20個(gè)同名品種于接種后168 h對(duì)平均存活率進(jìn)行比較。如圖5所示，品種1、2、9、15、16、19、20的A系、B系存活率相近，品種3、4、8、12、14的A系存活率明顯高于B系，品種5、6、7、10、11、13、17、18的A系存活率低于B系。為更好獲知A系與B系品種的抗性差異，在所有40個(gè)品系中進(jìn)行A系和B系的獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，A系和B系兩個(gè)品系接種BmNPV后168 h的存活率平均值差異不顯著（P>0.05）。

2. 5 抗性較好家蠶品種秋季二次篩選結(jié)果

根據(jù)春季篩選及抗病性評(píng)價(jià)時(shí)間的分析結(jié)果，選擇接種后96和240 h（2次眠起后第1 d）作為評(píng)價(jià)時(shí)間的截點(diǎn)，其存活率如表3所示。接種BmNPV后96 h，854B、872A、P50和山11等品種在春秋兩季的存活率均較高；795、966B、選二甲白和云7B等品種在秋季的存活率明顯低于春季；731、B黃肉色繭、E優(yōu)白、竹印和云8B等品種的春季存活率較高，秋季存活率在50.00%以上；此時(shí)的山河B抗病能力在春秋兩季不突出，較穩(wěn)定，但明顯強(qiáng)于感病品種對(duì)照（242B）。接種BmNPV后240 h，大多數(shù)品種的秋季存活率明顯低于春季，且以P50、山11和竹印等品種的秋季存活率較高。

2. 6 彩色繭品種的抗性二次篩選結(jié)果

根據(jù)第1次抗性篩選結(jié)果（表2）可知，10個(gè)抗病品種中有2個(gè)彩色繭品種（B黃肉色繭和P50），且按存活率排名位于前列。為此，在二次篩選時(shí)選擇云南蠶區(qū)所有彩色繭品種（15個(gè)）再次進(jìn)行抗性篩選，其中四眠、日系、黃色繭品種5個(gè)，四眠、中系、黃色繭品種4個(gè)，四眠、中系、綠色繭品種2個(gè)，四眠、日系、綠色繭品種1個(gè)，三眠、日系、紅色繭品種1個(gè)，三眠、中系、紅色繭品種2個(gè)。抗性篩選結(jié)果顯示，除B黃肉色繭和P50抗性較好外，4號(hào)和E黃1等品種的存活率也較高。

3 討論

為獲得抗BmNPV的家蠶品種，本研究采用三齡起蠶添食相同高濃度病毒的方法對(duì)200個(gè)家蠶品種（品系）的抗BmNPV能力進(jìn)行測(cè)定，從三齡起蠶攻毒后飼養(yǎng)至上簇結(jié)繭，旨在全面考察各家蠶品種三齡至五齡期的抗BmNPV能力。在本研究中，因參試品種數(shù)量較多，試驗(yàn)周期較長(zhǎng)，為降低試驗(yàn)強(qiáng)度又提高試驗(yàn)準(zhǔn)確度，故采用全部品種添食同一高濃度病毒的方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)感病品種在接種24 h后開始出現(xiàn)死亡，顯微鏡鏡檢能觀察到BmNPV，能明顯區(qū)分出感病品種，且在接種BmNPV后2個(gè)眠期出現(xiàn)死亡高峰，但未出現(xiàn)感染后期死亡數(shù)量直線上升的現(xiàn)象。此外，本研究發(fā)現(xiàn)一些家蠶品種前期發(fā)病死亡較少，到后期發(fā)病死亡數(shù)卻較多；一些品種前期死亡較多，但后期存活數(shù)較多，可能是部分品種侵染抵抗性較強(qiáng)，而有的品種擴(kuò)展抵抗性較強(qiáng)。以此為據(jù)，整理接種后四齡起到五齡第5 d期間各家蠶品種存活率前5名和后5名的排名，排名出現(xiàn)3次以上的品種歸屬于抗病品種或感病品種，最終初步篩選出云南家蠶資源保存種中對(duì)BmNPV抗病的品種，包括731、795、854B、872A、966B、B黃肉色繭、P50、山河B、選二甲白和竹印。

通過分析家蠶品種（品系）的發(fā)病死亡時(shí)間規(guī)律，而獲得不同抗性水平品種（品系）評(píng)價(jià)的最佳時(shí)間截點(diǎn)，是抗性選擇的一個(gè)重要研究方面，其主要內(nèi)容包括未知抗性水平品種（品系）的評(píng)價(jià)時(shí)間及抗病/感病品種的評(píng)價(jià)時(shí)間。本研究從200個(gè)家蠶品種中隨機(jī)抽取4組家蠶（A、B、C和D），共40個(gè)品種，分析其接種BmNPV后96～240 h期間每24 h的存活數(shù)曲線，結(jié)果表明，在接種后168 h時(shí)各曲線重疊最少，能夠區(qū)分各品種的抗性水平，且此時(shí)致死數(shù)量平均為50%，此結(jié)果可為未知抗性水平品種（品系）BmNPV感染相關(guān)研究的評(píng)價(jià)截止時(shí)間提供參考。通過比較抗病品種和感病品種接種BmNPV后24～240 h的死亡時(shí)間規(guī)律，得知二者首次發(fā)病死亡時(shí)間分別為接種后96和48 h，半數(shù)致死時(shí)間為接種后288和72 h，說明云南蠶區(qū)家蠶抗病品種和感病品種的差異明顯。云南蠶區(qū)家蠶品種資源中有許多品種有A系和B系，本研究選擇20個(gè)家蠶品種的A系和B系同時(shí)進(jìn)行BmNPV抗性測(cè)定，結(jié)果顯示，雖然具體某一品種的A系存活率與B系存活率可能有所不同，但差異均未達(dá)顯著水平，表明同一品種A系和B系的抗病性不存在遺傳差異。

本研究發(fā)現(xiàn)許多家蠶品種在眠前后的存活數(shù)差異明顯，推測(cè)家蠶的生理狀態(tài)在這兩個(gè)時(shí)段發(fā)生明顯變化，使得家蠶自身抗性下降。郭錫杰等（1996）在研究微孢子蟲對(duì)家蠶腸液中蛋白酶和堿性磷酸酶活力的影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)這兩種酶在起蠶和將眠時(shí)的活力明顯降低，但食桑后又逐漸增強(qiáng)。陳文柱等（2005）研究表明，家蠶血淋巴中酚氧化酶活力在齡末和齡初比較低，齡中比較高。調(diào)節(jié)昆蟲生長(zhǎng)發(fā)育及變態(tài)的激素能影響病毒感染進(jìn)程（謝洪霞，2010）。家蠶眠期主要受到激素控制，激素的分泌是否是影響此時(shí)家蠶存活率的重要因素，尚有待進(jìn)一步探究。從家蠶病理學(xué)角度來看，鑒定家蠶品種（品系）的抗病能力是獲取抗病素材最基礎(chǔ)的工作，從中掌握各種品種（品系）的發(fā)病規(guī)律能為今后的家蠶病理研究提供參考。但目前家蠶品種抗病評(píng)價(jià)常因家蠶接種時(shí)間較長(zhǎng)、操作不精細(xì)、易造成二次感染等原因而影響試驗(yàn)的重復(fù)性，因此，家蠶抗性評(píng)價(jià)的方法有待進(jìn)一步優(yōu)化。

4 結(jié)論

云南蠶區(qū)家蠶品種資源中大多數(shù)品種的抗BmNPV能力屬于中等水平，其中P50為BmNPV抗性最強(qiáng)品種。對(duì)未知品種進(jìn)行抗BmNPV測(cè)定時(shí)，可選擇接種后168 h作為抗性評(píng)價(jià)的時(shí)間截點(diǎn)。

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（責(zé)任編輯 蘭宗寶）