4種石斛的多糖對高血壓大鼠降血壓的影響

王再花 葉慶生 李杰 章金輝 徐曄春

摘 要 以鐵皮石斛、金釵石斛、大苞鞘石斛和春石斛品種（Dendrobium Second Love‘Tokimeki）為試材，研究4種石斛莖段的不同純度多糖（粗多糖CDPs、精多糖DPPs和純化多糖水洗組分DPPs-I）對自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）體內(nèi)降血壓效果的影響。結(jié)果表明，4種石斛的不同純度多糖均對SHR具有降血壓的效果，且處理時間越長效果越顯著，處理240 min后均顯著優(yōu)于陽性對照硝苯地平。金釵石斛多糖水洗組分（DNPP-I）在240 min內(nèi)降血壓效果好于其對應(yīng)的粗多糖和精多糖，而鐵皮石斛、大苞鞘石斛和春石斛品種D. Second Love ‘Tokimeki的各多糖間降血壓效果差異不顯著。4種石斛DPPs-I間降血壓作用無顯著差異。本研究顯示石斛多糖具有一定的降血壓活性，其中純化多糖水洗組分DPPs-I具有較好的降血壓效果，藥用開發(fā)前景良好。

關(guān)鍵詞 石斛；多糖；高血壓大鼠；降血壓活性

中圖分類號 R284.1 文獻標(biāo)識碼 A

Antihypertensive Effects of Polysaccharides from Four

Dendrobium Species on Hypertensive Rats

WANG Zaihua1， YE Qingsheng2， LI Jie1， ZHANG Jinhui1， XU Yechun1 *

1 Environmental Horticulture Research Institute， Guangdong Academy of Agricultural Sciences / Guangdong Provincial

Key Lab of Ornamental Plant Germplasm Innovation and Utilization， Guangzhou， Guangdong 510640， China

2 College of Life Science， South China Normal University， Guangzhou， Guangdong 510631， China

Abstract To investigate the antihypertensive activities of the polysaccharides from the stems of 4 Dendrobium species（Dendrobium officinale， Dendrobium nobile， Dendrobium wardianum and Dendrobium Second Love ‘Tokimeki）， the antihypertensive effects of crude polysaccharides， purified polysaccharides and polysaccharide fractions were determined by hypertensive rats in this study. The results showed that all polysaccharides from the 4 Dendrobiumn species had antihypertensive effects on spontaneously hypertensive rats（SHR）， and they significantly decreased blood pressure in rats with the increasing of polysaccharide purity or time extention， and significantly higher than nifedipine（positive control）after treatment for 240 min. The antihypertensive effects of the polysaccharide fractions from D. nobile were better than the crude polysaccharides and purified polysaccharides， while the three kinds of polysaccharides were insignificant in D. officinale， D. wardianum or D. Second Love ‘Tokimeki. Among the 4 polysaccharide fractions from the 4 species， there was no significant difference to reduce blood press. It was suggested that all polysaccharides from the 4 Dendrobium species showed certain antihypertensive activities， and the polysaccharide fractions had better antihypertensive effects， which had a good medicinal prospect.

Key words Dendrobium； polysaccharides； hypertensive rats； antihypertensive activity

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2017.09.030

石斛是我國傳統(tǒng)名貴的中藥材，其中鐵皮石斛（Dendrobium officinale）的干燥莖，金釵石斛（Dendrobium nobile）、鼓槌石斛（Dendrobium chrysotoxum）或流蘇石斛（Dendrobium fimbriatum）的栽培品及其同屬植物近似種的新鮮或干燥莖被2010年版《中國藥典》收載，認為其具有益胃生津、滋陰清熱功效[1]。而多糖是石斛的主要活性成分之一，其分離純化和藥理活性研究成為近年的熱點之一[2-3]。

大苞鞘石斛（Dendrobium wardianum）為我國分布區(qū)域狹窄的瀕危石斛，在民間被加工成“扁黃草”，作為滋陰、強身等功效的中藥材廣泛入藥[4]，近年來筆者探明大苞鞘石斛多糖含量高（34.1%），與鐵皮石斛相比，具有更好的抗氧化活性，藥用開發(fā)前景良好。春石斛栽培品種主要用于盆栽觀賞，筆者前期研究發(fā)現(xiàn)許多春石斛品種多糖含量和生物堿含量較高，具有較好的抗氧化活性，其中高多糖（23.7%）的春石斛品種Dendrobium Second Love ‘Tokimeki莖段多糖含量達23.7%[5]，但目前有關(guān)石斛純化多糖降血壓作用的報道甚少，主要涉及的是鐵皮石斛粗多糖、楓斗沖劑、復(fù)方制劑等[6-9]。本研究則以傳統(tǒng)的鐵皮石斛和金釵石斛為對照材料，比較大苞鞘石斛和栽培品種D. Second Love ‘Tokimeki在降血壓活性方面與二者的差異，以期為石斛資源的開發(fā)和藥用藥效研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料為鐵皮石斛（組培繁育而來的云南鐵皮石斛實生苗）、金釵石斛（云南引進）、大苞鞘石斛（云南引進）及春石斛栽培品種（日本引進），經(jīng)廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境園藝研究所朱根發(fā)研究員鑒定。自發(fā)性高血壓大鼠（SHR），SPF級， （300±20） g，由南方醫(yī)科大學(xué)動物中心提供；硝苯地平，上?，F(xiàn)代哈森藥業(yè)有限公司提供，用生理鹽水配制成2 mg/mL。

1.2 方法

1.2.1 多糖的分離純化 取干燥至恒重的鐵皮石斛、大苞鞘石斛、金釵石斛和D. Second Love‘Tokimeki4種石斛莖段，參考筆者前期報道的方法[10-11]，用熱水浸提法和醇沉法分別提取得到4種石斛粗多糖DCPs，分別命名為DOCP、DWCP、DNCP和DHCP；用Sevag去蛋白法進一步純化得到4種石斛精多糖DPPs，分別命名為DOPP、DWPP、DNPP和DHPP；然后通過DEAE-Cellulose-52陰離子交換柱層析進行分級，分別得到4個水洗組分DPPs-I，分別命名為DOPP-I、DWPP-I、DNPP-I和DHPP-I。

1.2.2 小鼠降血壓試驗 參考龔受基等[12]的方法，設(shè)立陽性對照組硝苯地平，劑量0.02 g/kg；生理鹽水組（CK）；多糖組（鐵皮石斛DOCP，DOPP，DOPP-I；大苞鞘石斛DWCP，DWPP，DWPP-I； 金釵石斛DNCP，DNPP，DNPP-I；春石斛品種DHCP，DHPP，DHPP-I），劑量均為2.0 g/kg。每組10只。試驗前禁食12 h，麻醉前30 min灌胃給藥1次，以戊巴比妥鈉30 mg/kg腹腔麻醉，常規(guī)氣管插管，頸動脈插管后經(jīng)壓力換能器連接BL生物機能試驗系統(tǒng)，記錄血壓變化。測給藥后240 min內(nèi)血壓變化值（收縮壓）。

1.3 統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)整理采用Excel 2010軟件，分析軟件為SAS 8.1，分別對同一處理組內(nèi)不同處理時間的血壓值，同一處理時間內(nèi)各處理組的血壓值進行單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

由表1可以看出，生理鹽水組各處理時間內(nèi)血壓無顯著差異，陽性對照組（硝苯地平）處理80 min時即可顯著降低血壓，而隨后處理的200 min內(nèi)血壓下降幅度較小，至240 min時達顯著差異。鐵皮石斛的3個多糖組（DOCP組、DOPP組和DOPP-I組）均在處理120 min后才與生理鹽水組（CK）差異顯著，隨著處理時間的延長，血壓顯著下降，且在240 min時降血壓效果最好，3個多糖組的降血壓效果均顯著優(yōu)于陽性對照和生理鹽水組，但3個多糖組間無顯著差異。

大苞鞘石斛多糖方面，3個多糖組（DWCP組、DWPP組和DWPP-I組）同樣在處理120 min后才與生理鹽水組差異顯著，且隨著處理時間的延長，血壓顯著下降。3種多糖組之間對大鼠降血壓的效果無顯著差異性，但在處理240 min時，均顯著優(yōu)于陽性對照硝苯地平（表2）。

金釵石斛多糖方面，3個多糖組（DNCP組、DNPP組和DNPP-I組）同樣在處理120 min后才與生理鹽水組差異顯著，且隨著處理時間的延長，血壓顯著下降，至處理160 min時，金釵石斛DNCP降血壓效果顯著優(yōu)于其他2種多糖，并與陽性對照組效果相當(dāng)。而在處理240 min時，DNPP-I組降血壓效果均要優(yōu)于DNCP組和DNPP組，但與DNCP組差異不顯著，且3者均顯著優(yōu)于陽性對照硝苯地平（表3）。

春石斛品種D. Second Love ‘Tokimeki的多糖降血壓效果見表4。3個多糖組（DHCP組、DHPP組和DHPP-I組）的變化趨勢與鐵皮石斛多糖和大苞鞘石斛多糖完全相同，且在240 min時顯著優(yōu)于陽性對照硝苯地平。

可以看出，除了生理鹽水組（CK），無論是陽性對照組（硝苯地平）還是各多糖組，在給藥后，隨著時間的增加，其對大鼠降血壓的作用越來越好，至處理240 min，均具有顯著差異性。陽性對照組（硝苯地平）在短時間給藥效果好于多糖組（表1～4），當(dāng)給藥80 min時，血壓迅速降低到158.6 mmHg，即時效應(yīng)明顯；但隨著處理時間的延長，大鼠血壓下降不明顯，至240 min時才達到顯著差異。而多糖組處理80 min內(nèi)，大鼠血壓沒有顯著下降；但隨著作用時間的增加，多糖組降血壓效果越來越好，具有顯著差異，說明多糖組降血壓作用，在一定作用時間范圍內(nèi)，具有一定的時間依賴性。比較4種石斛的純度最高的多糖水洗組分的降血壓效果，發(fā)現(xiàn)它們在處理240 min時均優(yōu)于陽性對照（硝苯地平），而四者間則沒有顯著差異性（圖1）。

3 討論

中醫(yī)認為高血壓屬“頭痛”、“眩暈”等范疇，臨床辨證按病機常分為肝火亢盛、陰虛陽亢、陰陽兩虛及痰濕雍盛等[9]。一些學(xué)者認為，石斛作為一種滋陰的中藥，對降血壓可以起到一定的作用[8]。為探明其降血壓的物質(zhì)，本研究發(fā)現(xiàn)，所選用的4種石斛的多糖均對SHR大鼠具有降血壓的效果，其中以純度較高的多糖水洗組分更佳，最高可將血壓從200 mmHg降至133.4 mmHg，而筆者通過單糖分析，發(fā)現(xiàn)這4種石斛的多糖主要由核糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖組成，且以甘露糖和葡萄糖為主要單糖（數(shù)據(jù)未發(fā)表），可見，這些糖類成分具有一定的降血壓作用。

吳人照等[6-7]研究表明鐵皮石斛粗多糖大、中、小劑量均對SHR-sp大鼠有一定降壓作用，表明多糖為鐵皮石斛降血壓、預(yù)防中風(fēng)作用的主要有效成份，而鐵皮石斛非多糖降壓效果較弱。本文與其結(jié)果一致，筆者所選定的粗多糖、精多糖及多糖水洗組分均具有較好的降血壓效果。金釵石斛方面，前人主要報道了水煎液對大鼠腸系膜的動脈血管有擴張作用[13]，而其純化多糖對降血壓的影響還未見報道，本文對其結(jié)果進行了補充，發(fā)現(xiàn)金釵石斛各提取多糖在240 min內(nèi)降血壓效果均明顯好于陽性對照硝苯地平，且以純化的多糖DNPP-I效果最好。

許多文獻報道西藥治療高血壓效果比較顯著，但也帶來一定副作用，而含石斛的中藥配方降壓作用緩和，穩(wěn)定血壓效果好[8，14]。本研究表明，陽性對照組硝苯地平降血壓在80 min內(nèi)便有顯著效果，這與王丹[15]報道硝苯地平治療高血壓的即時效應(yīng)一致，靜脈注射硝苯地平1 mg治療31例重癥高血壓患者，在30 min時血壓下降幅度最大，作用持續(xù)約2 h。而與陽性對照組相比，石斛多糖降血壓是一個緩慢而持續(xù)有效的過程，在240 min內(nèi)降血壓效果明顯要好。此外，從不同純化多糖降血壓效果來看，在處理240 min內(nèi)，大苞鞘石斛、鐵皮石斛和春石斛品種D. Second Love ‘Tokimeki的多糖雖然隨著純度的提高，血壓下降幅度略微大些，但各多糖差異未達到顯著水平，說明降血壓作用與這3種石斛的多糖純度間正相關(guān)性不明顯，可能粗多糖中還有其他物質(zhì)影響著降血壓活性；而金釵石斛水洗多糖組分DNPP-I降血壓效果優(yōu)于DNCP和DNPP（表1～4），但與其他3種石斛多糖水洗組分無顯著差異（圖1）?？梢?，上述4種石斛多糖對治療高血壓均具有一定的效果，且副作用小，具體通過何種機理發(fā)生作用，還有待進一步研究。

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