原發(fā)性干燥綜合征患者體內(nèi)維生素D3水平與其免疫功能的相關(guān)性研究

陳嘉利+呂宇基+黎品健+梁杏+區(qū)勇堅(jiān)+莫昆明

【摘要】目的 探討原發(fā)性干燥綜合征（pSS）患者體內(nèi)維生素D3水平與其免疫功能的相關(guān)性。方法 36例pSS患者（pSS組）依據(jù)SS疾病活動(dòng)度評(píng)分系統(tǒng)（SSDAI）積分對(duì)患者進(jìn)行篩查， 活動(dòng)期（SSDAI積分≥5分）與穩(wěn)定期（SSDAI積分<5分）各18例， 38例健康體檢者作為對(duì)照組， 分別采集外周血， 將單個(gè)核細(xì)胞實(shí)施分離， 另對(duì)CD27+記憶性B細(xì)胞及CD27high漿細(xì)胞所占比重進(jìn)行檢測(cè)；采集血清且對(duì)白細(xì)胞介素-17（IL-17）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）及1， 25-二羥基維生素D3[1， 25（OH）2D3]的含量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 pSS組血清中1， 25（OH）2D3含量低于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；pSS活動(dòng)期患者血清中1， 25（OH）2D3含量低于穩(wěn)定期患者， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。pSS組血清當(dāng)中CD27+記憶性B細(xì)胞含量及外周血CD27high漿細(xì)胞含量低于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.11、15.14， P<0.05）。pSS組血清中TNF-α、IL-17及IL-6含量高于對(duì)照組， IL-10含量低于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=20.40、13.36、14.57、15.21， P<0.05）。pSS活動(dòng)期患者血清當(dāng)中的CD27+記憶性B細(xì)胞含量及外周血CD27high漿細(xì)胞含量均低于穩(wěn)定期患者， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）?；顒?dòng)期患者血清中TNF-α、IL-17及IL-6含量均高于穩(wěn)定期患者， IL-10含量低于穩(wěn)定期患者， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CD27+記憶性B細(xì)胞、IL-10、CD27high細(xì)胞含量與1， 25（OH）2D3含量呈現(xiàn)明顯正相關(guān)（P<0.05）；1， 25（OH）2D3含量與TNF-α、IL-17及IL-6呈現(xiàn)顯著負(fù)相關(guān)。結(jié)論 維生素D3水平異常降低， 不僅相關(guān)于pSS發(fā)病， 而且與免疫功能之間存在緊密關(guān)聯(lián)。

【關(guān)鍵詞】 原發(fā)性干燥綜合征；維生素D3；免疫功能

維生素D3作為一種具有脂溶性的維生素， 利用體內(nèi)代謝作用可形成1， 25（OH）2D3， 此物質(zhì)帶有明顯生物學(xué)活性， 除了能夠參與到鈣磷代謝調(diào)節(jié)之外， 在調(diào)節(jié)免疫功能方面同樣有所參與[1-3]。本文分析了pSS患者體內(nèi)維生素D3水平， 另對(duì)其與免疫功能之間所存在的相關(guān)性開(kāi)展深入研究?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2014年6月～2016年6月在本院治療的36例pSS患者為pSS組， 選取患者均與pSS相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)相符， 排除結(jié)核病、艾滋病、病毒性肝炎等傳染病史， 另將抗乙酞膽堿使用史、頭面部接受過(guò)放療及肝腎肺功能不全者予以排除[4]。pSS組患者依據(jù)SSDAI積分對(duì)患者進(jìn)行篩查， 活動(dòng)期（SSDAI積分≥5分）與穩(wěn)定期（SSDAI積分<5分）各18例， 另選取同期38例來(lái)院健康體檢者作為對(duì)照組。兩組一般資料比較， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。見(jiàn)表1。

1. 2 方法 本研究選用Amresco公司產(chǎn)的淋巴細(xì)胞分離液；另選取Sigma公司生產(chǎn)的CD27、CD19抗體；TSZ公司生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫吸附試劑盒；選用Thermo公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀。于清晨空腹下， 對(duì)三組的外周靜脈血進(jìn)行采集， 抗凝血操作， 將淋巴細(xì)胞分離液加入， 且實(shí)施離心操作， 獲取單個(gè)核細(xì)胞。運(yùn)用聚丁二酸丁二醇酯（PBS）對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）實(shí)施重懸后， 將其分類后分別裝在提前準(zhǔn)備好的流式細(xì)胞管中， 于4℃下加入各種有熒光標(biāo)記的抗體， 然后于避光環(huán)境中實(shí)施孵育， 時(shí)間控制在30 min， PBS洗滌， 并實(shí)施離心操作（2遍）， 最后加入固定液200 μl， 混勻后運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD27+記憶性B細(xì)胞比重， 另對(duì)CD27high曲漿細(xì)胞所占比重進(jìn)行檢測(cè)。

1. 3 血清標(biāo)本采集與指標(biāo)檢測(cè) 于空腹?fàn)顟B(tài)下， 先進(jìn)行外周靜脈血相應(yīng)采集， 對(duì)其實(shí)施離心操作， 從中獲取優(yōu)質(zhì)血清；檢測(cè)時(shí)運(yùn)用IL-17、IL-6、TNF-α及1， 25（OH）2D3酶聯(lián)免疫吸附試劑盒， 就其在血清中的含量進(jìn)行檢測(cè)， 全部操作均依據(jù)試劑盒說(shuō)明書完成。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；相關(guān)性檢驗(yàn)采用Pearson相關(guān)性分析；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 血清1， 25（OH）2D3含量比較 pSS組血清中1， 25（OH）2D3含量低于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；pSS活動(dòng)期患者血清中1， 25（OH）2D3含量低于穩(wěn)定期患者， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)圖1， 圖2。

2. 2 兩組免疫功能指標(biāo)比較 pSS組血清當(dāng)中CD27+記憶性B細(xì)胞含量及外周血CD27high漿細(xì)胞含量低于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.11、15.14， P<0.05）。pSS組血清中TNF-α、IL-17及IL-6含量高于對(duì)照組， IL-10含量低于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=20.40、13.36、14.57、15.21， P<0.05）。見(jiàn)表2。

2. 3 pSS組患者穩(wěn)定期和活動(dòng)期免疫功能指標(biāo)比較 pSS活動(dòng)期患者血清當(dāng)中的CD27+記憶性B細(xì)胞含量及外周血CD27high漿細(xì)胞含量均低于穩(wěn)定期患者， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）?；顒?dòng)期患者血清中TNF-α、IL-17及IL-6含量均高于穩(wěn)定期患者， IL-10含量低于穩(wěn)定期患者， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

2. 4 免疫功能指標(biāo)與1， 25（OH）2D3相關(guān)性 CD27+記憶性B細(xì)胞、IL-10、CD27high細(xì)胞含量與1， 25（OH）2D3含量呈現(xiàn)明顯正相關(guān)（r=3.76， P<0.05）；1， 25（OH）2D3含量與TNF-α、IL-17及IL-6呈現(xiàn)顯著負(fù)相關(guān)（r=4.91， P<0.05）。

3 討論

pSS作為一種能夠累及到全身多系統(tǒng)的免疫性病癥， 其中受累常見(jiàn)的靶器官為淚腺與唾液腺， 在腺體當(dāng)中的單核巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞等各種免疫細(xì)胞浸潤(rùn)， 介導(dǎo)腺體功能出現(xiàn)免疫性損傷， 還伴發(fā)有眼干及口干等多種臨床病癥CD27high[5-7]。通過(guò)本次研究可知， CD27+記憶性B細(xì)胞、IL-10、細(xì)胞含量與1， 25（OH）2D3含量呈現(xiàn)明顯正相關(guān)（P<0.05）， 1， 25（OH）2D3含量與TNF-α、IL-17及IL-6呈現(xiàn)顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05）。

于受累靶腺體內(nèi)， 其中T淋巴細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為誘發(fā)pSS的基礎(chǔ)病理。對(duì)于B淋巴細(xì)胞， 其可形成免疫性抗體， 還能夠介導(dǎo)靶腺體， 使其功能出現(xiàn)損傷狀況， 對(duì)于CD27high漿細(xì)胞、CD27+記憶性B細(xì)胞， 其能夠不斷浸潤(rùn)、遷移至靶腺體， 使外周血中相應(yīng)細(xì)胞的含量出現(xiàn)持續(xù)性降低。對(duì)于T淋巴細(xì)胞所具有的活化作用以及局部浸潤(rùn)， 可形成諸多細(xì)胞因子， 不僅能夠造成靶腺體功能的損傷， 而且還會(huì)在機(jī)體相應(yīng)炎癥反應(yīng)中有所參與。TNF-a、IL-6以及IL-17是一種具有促炎作用的細(xì)胞因子， 由免疫細(xì)胞合成與分泌而產(chǎn)生， IL-10其實(shí)質(zhì)為一種細(xì)胞因子， 存在有對(duì)炎癥反應(yīng)的抑制作用?；罨腡細(xì)胞浸潤(rùn)于靶腺體內(nèi)， 會(huì)導(dǎo)致上述細(xì)胞因子的含量出現(xiàn)變化。通過(guò)對(duì)外周血中免疫細(xì)胞以及血清中細(xì)胞因子相應(yīng)含量進(jìn)行檢測(cè)與分析得知：pSS組血清當(dāng)中CD27+記憶性B細(xì)胞含量及外周血CD27high漿細(xì)胞含量低于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.11、15.14， P<0.05）。pSS組血清中TNF-α、IL-17及IL-6含量高于對(duì)照組， IL-10含量低于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=20.40、13.36、14.57、15.21， P<0.05）。pSS活動(dòng)期患者血清當(dāng)中的CD27+記憶性B細(xì)胞含量及外周血CD27high漿細(xì)胞含量均低于穩(wěn)定期患者， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）?；顒?dòng)期患者血清中TNF-α、IL-17及IL-6含量均高于穩(wěn)定期患者， IL-10含量低于穩(wěn)定期患者， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

綜上所述， 維生素D3水平異常降低， 不僅相關(guān)于pSS發(fā)病， 而且與免疫功能之間存在緊密關(guān)聯(lián)。

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[收稿日期：2017-01-20]