清熱解毒顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

曲長欣+楊青

摘 要：本實(shí)驗(yàn)對(duì)清熱解毒顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究。含量測(cè)定方法：采用奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-水（5：25：70）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為277nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃，連翹苷在0.05～12.8mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。鑒別方法：硅膠G薄層板，甲苯-丙酮（9：1）為展開劑，展開，取出，晾干，8%香草醛無水乙醇溶液與硫酸溶液（7→10）的混合液（0.5：5），在100℃加熱至斑點(diǎn)顏色清晰。結(jié)論：本法簡便、準(zhǔn)確，可作為清熱解毒顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：清熱解毒顆粒；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；研究

清熱解毒顆粒由金銀花、連翹、水牛角、黃連、地黃、知母、玄參等組成。清熱解毒顆粒具有清熱解毒，養(yǎng)陰生津，瀉火的功效。清熱解毒顆粒常用于風(fēng)熱型感冒、流行性腮腺炎及輕、中型乙型腦炎。連翹具有清熱，解毒，散結(jié)，消腫等功效。連翹主要用于溫?zé)帷⒌ざ?、斑疹、癰瘍腫毒、瘰疬等。連翹具改善學(xué)習(xí)記憶障礙、舒張血管、抗氧化、抗菌、抗感染、解熱、防護(hù)耳毒性等廣泛的藥理作用[1-5]。《神農(nóng)本草經(jīng)》記載：“主寒熱，鼠痿，瘰疬，癰腫惡瘡，癭瘤，結(jié)熱?！敝?，性苦寒，具有有滋陰降火、潤燥滑腸、利大小便之效?！端幮哉摗酚涊d：“主治心煩躁悶，骨熱勞往來，生產(chǎn)后蓐勞，腎氣勞，憎寒虛損，患人虛而口干，加而用之。”本實(shí)驗(yàn)對(duì)清熱解毒顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：半自動(dòng)點(diǎn)樣儀LINOMAT Ⅳ（瑞士CAMAG）；756PC紫外可見分光光度計(jì)（四川匯巨儀器設(shè)備有限公司）；EX1600高效液相色譜儀（上海棱譜儀器儀表有限公司）；FR124CN萬分之一電子天平（安慶昌嘉電子產(chǎn)品有限公司）；HWY-D28恒溫低溫水?。ㄉ虾Ｓ鹜▋x器儀表廠）；雙槽展開缸 PF 562C（瑞士CAMAG）；DHG-9240A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海和呈儀器制造有限公司）；實(shí)驗(yàn)室高純水機(jī)（上海技舟化工科技有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對(duì)照品：連翹苷對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所），菝葜皂苷元對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所）。

1.4 試劑：甲醇（江蘇聯(lián)海生物科技有限公司）、乙腈（廣州市西隴化工有限公司）、香草醛（深圳市永熙化工有限公司）、苯（北京亞太龍興化工有限公司）、硫酸（上海海曲化工有限公司）、乙醇（北京亞太龍興化工有限公司）、鹽酸（北京亞太龍興化工有限公司）、甲苯（廣州市西隴化工有限公司）、丙酮（北京亞太龍興化工有限公司）、無水乙醇（廣州市西隴化工有限公司）。

1.5 試藥：清熱解毒顆粒

2 測(cè)定方法確定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。流動(dòng)相：乙腈-甲醇-水（5：25：70）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長：277nm，流速：1.0ml·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取連翹苷對(duì)照品適量，置容量瓶中，加流動(dòng)相制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取清熱解毒顆粒適量，研細(xì)，精密稱定，加20毫升甲醇超聲提取30分鐘，過濾，蒸干濾液，殘?jiān)恿鲃?dòng)溶解轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.4 專屬性試驗(yàn)

取金銀花、水牛角、大青葉、黃連、地黃、知母、玄參等藥材按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，按上述實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液按上述色譜條件，精密吸取20μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.65%，表明本方法精密度良好。

2.6 對(duì)照品的線性考察

精密稱取適量連翹苷對(duì)照品，加入流動(dòng)相溶液使溶解分別配制成每毫升含0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8毫克的溶液。分別精密上述溶液吸取20μL，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，連翹苷在0.05～12.8mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的清熱解毒顆粒樣品6份，按測(cè)定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.66%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取對(duì)照品適量分別精密加入清熱解毒顆粒中，按含量測(cè)定進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率為99.3%，RSD為0.69%。

3 鑒別

取清熱解毒顆粒適量，加乙醇20ml，加熱回流40min后取上清液，加鹽酸1ml加熱回流1h，取提取液10ml，濃縮至約5ml，加水10ml，用苯20ml振搖提取，提取液蒸干，殘?jiān)颖?ml使溶解，作為供試品溶液。另取知母對(duì)照藥材2g，加乙醇20ml，加熱回流40min后取上清液，加鹽酸1ml加熱回流1h，取提取液10ml，濃縮至約5ml，加水10ml，用苯20ml振搖提取，提取液蒸干，殘?jiān)颖?ml使溶解，作為對(duì)照品溶液。取除知母以外藥材按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，按上述方法制成陰性對(duì)照樣品。吸取上述溶液，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮（9：1）為展開劑，展開、取出、晾干，噴以8%香草醛無水乙醇溶液與硫酸溶液（7→10）的混合液（0.5：5），在100℃加熱至斑點(diǎn)顏色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照無干擾。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)分離效果好、方法簡便、快捷、準(zhǔn)確、專屬性好，可用于清熱解毒顆粒中連翹苷的含量測(cè)定。樣品與知母對(duì)照藥材對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾。該鑒別方法專屬性強(qiáng)，操作簡單，可用于清熱解毒顆粒中知母的鑒別。

參考文獻(xiàn)

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