參芪生血顆粒的制備及質(zhì)量研究

倪加影+薛蕾

摘 要：本文對參芪生血顆粒的制備工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究。最佳的提取工藝為提取二次，提取液倍數(shù)為12倍，10倍，提取時間為120分鐘，60分鐘。本方法可靠、簡單，可用于生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞：參芪生血顆粒；制備；工藝

地黃為參芪生血顆粒主要成分。地黃（拉丁學(xué)名：Rehmannia glutinosa （Gaetn.） Libosch. ex Fisch. et Mey.），玄參科地黃屬多年生草本植物，其根部為傳統(tǒng)中藥之一，最早出典于《神農(nóng)本草經(jīng)》?！毒V目》記載：“填骨髓，長肌肉，生精血，補(bǔ)五臟、內(nèi)傷不足，通血脈，利耳目，黑須發(fā)，男子五勞七傷，女子傷中胞漏，經(jīng)候不調(diào)，胎產(chǎn)百病?！钡攸S具有有強(qiáng)心、利尿、抗心腦血管疾病、神經(jīng)保護(hù)、抗糖尿病、抗骨質(zhì)疏松、增強(qiáng)免疫等多種藥理作用[1-3]。本實(shí)驗(yàn)以地黃中梓醇為指標(biāo)對參芪生血顆粒制備工藝進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

R-1050大型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；GM-0.33II隔膜真空泵（上海笛柏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；UV1600紫外可見分光光度計（西安華辰樂天實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司）；美國必能信DHA1000超聲波清洗機(jī)（北京星越天成科技有限公司）；LC600A液相色譜儀（南京科捷分析儀器有限公司）；FA1204CFAC型全自動內(nèi)校電子分析天平（北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司）；SG-4050C雙列四孔恒溫水浴鍋（上海碩光電子科技有限公司）；1810-B石英自動雙重蒸餾水器（上?？德穬x器設(shè)備有限公司）。乙腈（北京亞太龍興化工有限公司）、甲醇（北京亞太龍興化工有限公司）、乙醇（北京亞太龍興化工有限公司）。

2 提取方法

2.1 提取方法的選擇

2.1.1 粉碎目數(shù)的選擇

分別將參芪生血顆粒原料粉碎過20目、30目、40目、50目。稱取參芪生血顆粒原料細(xì)粉，提取工藝為提取二次，提取液倍數(shù)為12倍，10倍，提取時間為120分鐘，60分鐘，過濾，合并濾液，靜止48小時，取上清液濃縮適量。采用高效液相測定濃縮膏梓醇的含量，計算提取率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明將參芪生血顆粒原料粉碎過20目、30目、40目、50目無明顯差異，所以選擇粉碎20目。

2.1.2 加水倍數(shù)的選擇

將參芪生血顆粒原料粉碎過20目。分別稱取參芪生血顆粒原料細(xì)粉，提取二次，分別采用加水倍數(shù)為14倍，12倍；12倍，10倍；10倍，8倍；8倍，6倍；提取時間為120分鐘，60分鐘，過濾，合并濾液，靜止48小時，取上清液濃縮適量。采用高效液相測定濃縮膏梓醇的含量，計算提取率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明加水倍數(shù)為14倍，12倍和12倍，10倍收率無明顯差別，加水倍數(shù)為12倍，10倍收率高于加水倍數(shù)為10倍，8倍和8倍，6倍，所以選擇加水倍數(shù)為12倍，10倍。

2.2 顆粒制備

取濃縮膏，噴霧干燥。取干膏粉，加適量糊精和乙醇，采用槽型混合機(jī)混合，采用搖擺制粒機(jī)制粒，60攝氏度干燥，采用振動篩整粒。

3 含量測定

3.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[4-5]。色譜柱為依利特hypersil BDS C18色譜柱（4.6*250*5u）；乙腈-0.1%磷酸溶液（1∶99）為流動相；檢測波長為210nm；流速1.0mLomin-1；柱溫：30℃。理論板數(shù)按梓醇峰計算應(yīng)不得低于2000。

3.2 供試品溶液的制備

取參芪生血顆粒適量，研細(xì)，精密稱取，置50mL量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理提取10分鐘，放置至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

3.3 對照品溶液的制備

精密稱取梓醇對照品約10mg，置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，量取5毫升，至50毫升容量瓶內(nèi)，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL溶液中含梓醇20μg）。

3.4 陰性干擾試驗(yàn)

取除地黃的原料，按方中比例和制備工藝方法制成陰性制劑，用以上選定的測定條件進(jìn)行吸收曲線繪制，觀察在與梓醇相同的保留時間處是否存在吸收峰，結(jié)果表明：在選定條件下測得的陰性液吸收曲線在與梓醇相同保留時間處不存在吸收峰，因此說明選定的條件測定梓醇無干擾，具有較強(qiáng)的專屬性。

3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為5、10、15、20、25、30、35、40、45、50μgomL-1的對照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程。試驗(yàn)表明，梓醇對照品在5～50μgomL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.6 精密度試驗(yàn)

依照2.4項(xiàng)下制備對照品溶液，精密吸取梓醇對照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD為0.86%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

3.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱取同批參芪生血顆粒樣品6份，分別依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定項(xiàng)下方法測定含量，并計算樣品的RSD值為0.76%，結(jié)果表明，此含量測定方法的重現(xiàn)性良好。

3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4小時精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測定，供試品梓醇峰面積積分值的RSD為0.63%。結(jié)果表明梓醇至少在4小時內(nèi)穩(wěn)定。

3.9 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的梓醇對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量（同時測定樣品含量），計算回收率。6次測定的平均回收率為99.3%，RSD為0.76%。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)對參芪生血顆粒提取工藝的加水倍數(shù)和藥材粉碎目數(shù)進(jìn)行研究。確定最佳的提取工藝為提取二次，提取液倍數(shù)為12倍，10倍，提取時間為120分鐘，60分鐘。

參考文獻(xiàn)

[1]杜紅陽，李東寧，付海燕，包翠芬，秦書儉.地黃多糖誘導(dǎo)大鼠BMSCs向神經(jīng)樣細(xì)胞分化中對Notch信號通路的影響[J].山東大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2013（12）

[2]孟祥龍，肖洋，薛非非，潘飛，李坤，王明芳，馬俊楠，張朔生.地黃研究前沿、熱點(diǎn)及發(fā)展趨勢——基于知識圖譜的“地黃”可視化研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2016（06）.

[3]蔡春沉，王洪璽，王肅.地黃多糖對肥胖糖尿病大鼠模型的治療作用及對血清中GLP-1、GIP水平的影響[J].中國老年學(xué)雜志，2013（18）.

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[5]李康清，崔亞玲，張虹，王洪磊.反相高效液相色譜法檢測咽喉康口服液中梓醇的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，1996（04）.