恩拉霉素在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用進(jìn)展

黃 萍，萬(wàn)有能，鄧 紅，汪 超

（重慶市畜牧科學(xué)院，重慶 榮昌 402460）

1 恩拉霉素的理化性質(zhì)

恩拉霉素是由包括13個(gè)不同種類的17個(gè)氨基酸分子和脂肪酸分子所組成的有機(jī)堿，其主要成分為恩拉霉素A和B，此外還含有少量的恩拉霉素C和D。恩拉霉素的鹽酸鹽為白色結(jié)晶性粉末，分子量約為2 500，熔點(diǎn)為238～245℃，易溶于二甲亞砜，可溶于甲醇、含水乙醇，難溶于丙酮，不溶于苯、氯仿。恩拉霉素的鹽酸鹽對(duì)熱、光照和潮濕有極好的穩(wěn)定性。恩拉霉素在飼料中具有很高的穩(wěn)定性，在室溫條件下長(zhǎng)期儲(chǔ)藏很少降解，在制成顆粒料的過程中也非常穩(wěn)定，與飼料混合后在室溫下長(zhǎng)期儲(chǔ)藏效價(jià)下降甚微。恩拉霉素在腸道內(nèi)不被降解，能夠保持原有的抗菌活性，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌有很強(qiáng)的抗菌作用。

2 恩拉霉素的抗菌活性

恩拉霉素是一種在需氧和厭氧條件下對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌均具有較強(qiáng)的抑制和殺滅作用的多肽類抗生素，該抗生素只在微生物繁殖期產(chǎn)生作用，而在分裂期不產(chǎn)生作用。恩拉霉素敏感菌包括梭狀芽孢桿菌、鏈球菌、葡萄球菌、肺炎雙球菌等，MIC（最小抑菌濃度）小于0.39～3.12 lg/mL，但枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌對(duì)恩拉霉素最為敏感。恩拉霉素對(duì)大腸桿菌、綠膿桿菌、沙門氏菌和志賀氏菌等革蘭氏陰性菌的MIC值大于100 lg/mL，幾乎無(wú)抑殺作用。恩拉霉素與目前臨床常用的其他抗生素間幾乎不存在任何交叉耐藥性。

3 恩拉霉素對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)的影響

目前有關(guān)恩拉霉素對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)的影響多集中于仔豬和肉雞。有研究表明，恩拉霉素能顯著提高仔豬的生產(chǎn)性能。在21～49日齡仔豬的飼糧中添加適當(dāng)劑量的恩拉霉素（5×10-6～20×10-6），可使仔豬日增重提高19.06%～23.13%，日采食量和料重比分別呈現(xiàn)提高和降低趨勢(shì)；但高劑量添加（80×10-6）可使仔豬日增重降低12.81%，日采食量和料重比分別出現(xiàn)降低和升高趨勢(shì)。飼料中添加10×10-6恩拉霉素對(duì)28～63日齡小豬的生長(zhǎng)有較好的促進(jìn)作用，能降低增重成本和料肉比，并明顯提高日增重。在育成豬日糧中添加1×10-6恩拉霉素可顯著改善生產(chǎn)性能，若要達(dá)到5%以上的生長(zhǎng)改善效果，則恩拉霉素的添加量須在2.5×10-6以上。

恩拉霉素可顯著改善肉雞的生產(chǎn)性能，但對(duì)肌肉品質(zhì)和免疫功能無(wú)顯著影響。以1～49日齡肉雞為試驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行研究，添加165×10-6恩拉霉素，肉雞的全期增重較空白對(duì)照組提高3.2%。對(duì)0～42日齡肉雞的研究表明，在日糧中添加10×10-6恩拉霉素的生長(zhǎng)效果優(yōu)于添加100×10-6金霉素和75×10-6桿菌肽鋅，其日增重較后者分別提高0.56%和6.17%，飼料轉(zhuǎn)化率分別降低1.43%和7.2%，但三者間的屠宰率、半凈膛率、全凈膛率和腹脂重占活重的比例差異不顯著。日糧中添加恩拉霉素（1～21 日齡 5×10-6，22～42 日齡 3×10-6）可改善肉仔雞1～21日齡的日增重及22～42日齡的日采食量和日增重，但對(duì)肉雞的肌肉滴水損失、pH值和肉色（亮度、紅度和黃度)等無(wú)顯著改善作用。在雞日糧中添加恩拉霉素，對(duì)肉用仔雞胸腺重指數(shù)和法氏囊重指數(shù)無(wú)顯著影響。另有報(bào)道稱，恩拉霉素可降低糞便中的水分含量，減少雞糞臭味，肉雞啄肛癖也呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。

4 恩拉霉素對(duì)動(dòng)物腸道菌群的影響

腸道菌群對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育有著重要關(guān)系，抗生素對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能的影響與腸道菌群有著密切關(guān)系。目前有關(guān)恩拉霉素對(duì)動(dòng)物腸道菌群結(jié)構(gòu)影響的報(bào)道較少。在21日齡仔豬日糧中分別添加5×10-6、20×10-6和80×10-6恩拉霉素，可使直腸總菌數(shù)減少，直腸中大腸桿菌數(shù)量隨劑量增加而增加，乳酸桿菌以及乳酸桿菌與大腸桿菌的比值隨著恩拉霉素劑量增加而降低，并都在80×10-6組達(dá)到顯著水平；停藥后，5×10-6和20×10-6恩拉霉素添加組的仔豬乳酸桿菌和大腸桿菌的比值顯著下降，導(dǎo)致腸道菌群失衡。通過PCR-DGGE技術(shù)對(duì)肉雞腸道大腸桿菌16SrDNA基因的V3區(qū)進(jìn)行分析，結(jié)果表明：在肉仔雞日糧中添加12.5×10-6恩拉霉素改變了雞腸道微生物組成，但腸道微生物種類未發(fā)生變化。

5 飼料中恩拉霉素的檢測(cè)方法

飼料中抗生素常采用微生物法檢測(cè)，原理是：對(duì)抗生素敏感的試驗(yàn)菌在適當(dāng)條件下所產(chǎn)生的抑菌圈大小與抗生素濃度呈正相關(guān)關(guān)系。目前，飼料中恩拉霉素含量檢測(cè)均采用此法。飼料預(yù)混劑中恩拉霉素含量檢測(cè)可參照農(nóng)業(yè)部《進(jìn)口獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（1999年版），但該法存在緩沖液的應(yīng)用不合理和檢測(cè)結(jié)果偏低的問題。劉雅妮（2006）等對(duì)其進(jìn)行了優(yōu)化，將《進(jìn)口獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》檢測(cè)方法中pH值4.0的醋酸鹽緩沖液改為pH值7.8的磷酸鹽緩沖液，將儲(chǔ)備液濃度由1000單位/mL降低為200單位/mL，提取時(shí)間延長(zhǎng)至2～3h，優(yōu)化了檢測(cè)條件，不但能充分提取樣品中的恩拉霉素，而且檢測(cè)數(shù)據(jù)更準(zhǔn)確可靠。

配合飼料中恩拉霉素含量檢測(cè)目前尚無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，但已有學(xué)者建立了微生物學(xué)方法可供參考使用，該方法包括提取、分離純化、標(biāo)準(zhǔn)曲線制備和試樣測(cè)定等步驟，主要細(xì)節(jié)包括：（1）用50%甲醇溶液提取試樣，經(jīng)填料為甲醇預(yù)處理的多孔苯乙烯一二乙烯苯聚合物樹脂層析柱層析，收集組分后蒸干，再用50%甲醇溶液溶解；（2）用枯草芽孢桿菌混懸液、制備好的雙碟和不同濃度梯度的恩拉霉素標(biāo)準(zhǔn)液制備標(biāo)準(zhǔn)曲線并建立回歸方程；（3）按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法測(cè)定試樣抑菌圈直徑；（4）用已建立的回歸方程計(jì)算試樣中恩拉霉素的含量。此方法相關(guān)系數(shù)為0.9991，回收率大于85%，RSD小于15%，最低檢測(cè)限理論上可以達(dá)到0.2mg/kg，完全可滿足飼料中恩拉霉素實(shí)際檢測(cè)的需要。

4 小結(jié)

目前有關(guān)恩拉霉素作為飼料添加劑的應(yīng)用研究多停留在改善動(dòng)物生產(chǎn)性能等表觀方面，而有關(guān)恩拉霉素作用機(jī)理和毒副作用的研究報(bào)道并不多見，有待進(jìn)一步研究。此外，恩拉霉素檢測(cè)方法相當(dāng)煩瑣，研發(fā)測(cè)定飼料和畜產(chǎn)品中恩拉霉素含量的低成本快速檢測(cè)方法對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)有著十分重要的意義。

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