• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    纖維素酶解法提取黃花蒿中青蒿素的工藝研究

    2017-05-18 08:17:06唐小飛歐艷陽劉海林李海波
    關(guān)鍵詞:青蒿素石油醚黃花

    劉 暢,唐小飛,歐艷陽,劉海林,李海波

    (第三軍醫(yī)大學(xué):1藥學(xué)院學(xué)員18營,2原學(xué)員旅20隊,3藥學(xué)院微生物與生化藥學(xué)教研室,重慶400038)

    ·藥學(xué)與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)·

    纖維素酶解法提取黃花蒿中青蒿素的工藝研究

    劉 暢1,唐小飛2,歐艷陽2,劉海林2,李海波3

    (第三軍醫(yī)大學(xué):1藥學(xué)院學(xué)員18營,2原學(xué)員旅20隊,3藥學(xué)院微生物與生化藥學(xué)教研室,重慶400038)

    目的:建立并優(yōu)化纖維素酶解法提取黃花蒿中青蒿素的最佳工藝條件.方法:以青蒿素的提取率為指標(biāo),通過正交實驗法對酶解濃度、酶解時間、提取時間和料液比四個因素進行優(yōu)選實驗.結(jié)果:最佳提取工藝:酶解濃度為0.05 mg/mL,酶解時間為30 min,提取時間為60 min,料液比為1∶80.與回流提取法相比青蒿素提取率提高了34.76%.結(jié)論:采用酶解法提取黃花蒿中的青蒿素,工藝方法簡單,可大大提高原料利用率,同時縮短提取時間.

    黃花蒿;青蒿素;纖維素酶;提取工藝

    0 引言

    菊科植物黃花蒿(Artemisia annua L.)中所含的青蒿素(Artemisinin,圖1)是由我國自主研發(fā),并被世界衛(wèi)生組織(WHO)認(rèn)定為治療惡性瘧疾的有效藥物[1].我國科學(xué)家屠呦呦因為發(fā)現(xiàn)抗瘧疾藥物青蒿素獲得2015年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎.我國所產(chǎn)的青蒿素占全球總產(chǎn)量的90%以上,而重慶又是我國最早開展黃花蒿人工種植的省市之一,依托重慶黃花蒿種植的資源優(yōu)勢,開展青蒿素提取工藝的研究對青蒿素的進一步產(chǎn)業(yè)化具有重要意義.

    圖1 青蒿素的化學(xué)結(jié)構(gòu)

    現(xiàn)有青蒿素的提取方法主要有傳統(tǒng)提取法和超臨界流體提取法兩種.傳統(tǒng)提取法包括回流提取法、冷浸提取法和索氏提取法等[2-4].傳統(tǒng)提取法溶劑成本高,提取率和原料利用率較低,而超臨界流體法雖提取率高,但因設(shè)備昂貴,其普及受到限制[5-6].根據(jù)傳質(zhì)理論,在天然活性成分的提取過程中,溶劑首先向固體表面擴散,滲透到固體表面,然后進入固體內(nèi)部及其微孔隙內(nèi)溶解天然活性成分,最后通過固體微孔隙向固體表面擴散,并在固體表面與溶劑主體間濃度差作用力下,天然活性成分向溶劑主體擴散,完成提取傳質(zhì)過程[7-8].而青蒿素全部被纖維素構(gòu)成的細胞壁所包圍,傳統(tǒng)的提取方法無法使細胞壁破裂,因此存在巨大的傳質(zhì)阻力,致使提取效果受到很大的限制.近年研究表明,采用纖維素酶能使細胞壁疏松、破裂,減小傳質(zhì)阻力,可有效提高提取效率[9],而采用酶解法提取黃花蒿中的青蒿素,鮮有文獻報道.本文以石油醚為提取溶劑,研究酶解濃度、酶解時間、液固比、提取時間等因素對提取率的影響,建立并選出酶解法提取黃花蒿中青蒿素的最佳工藝條件,現(xiàn)報道如下.

    1 材料和方法

    1.1 主要儀器與試劑電子天平(上海精密科技有限公司),旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海振捷實驗設(shè)備有限公司),雙光束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限公司),青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所),黃花蒿藥材(產(chǎn)地重慶酉陽),纖維素酶(15 U/mg,上海博奧生物科技有限公司),95%乙醇[重慶川東化工(集團)有限公司化學(xué)試劑廠],氫氧化鈉(天津市大茂化學(xué)試劑廠),石油醚,蒸餾水.

    1.2 樣品的制備

    1.2.1 纖維素酶解法樣品的制備 精確稱取50 mg纖維素酶,用蒸餾水溶解并定容于50 mL容量瓶中,配制得到濃度為15 U/mL的纖維素酶溶液.

    取干燥黃花蒿葉樣品約1 g,加入20 mL稀硫酸溶液(pH為4.5)和定量的酶溶液,置于50℃恒溫水浴中,酶解一定時間后,抽濾,濾渣烘干至恒重.在濾渣中加入定量的石油醚,并于50℃條件下進行加熱.加熱一定時間后,冷卻至室溫,抽濾,濾液用2%的氫氧化鈉溶液(10 mL×2)進行洗滌,再用水洗至中性.最后在水浴溫度為50℃的條件下進行減壓濃縮,并用95%乙醇定容于50 mL容量瓶中,得纖維素酶解法樣品供試液.

    1.2.2 回流提取法樣品的制備 稱取干燥黃花蒿葉樣品約1 g,加入60 mL石油醚,控制內(nèi)溫為50℃進行加熱.加熱一定時間后,冷卻至室溫,抽濾,濾液處理方法同纖維素酶解法,得回流提取法樣品供試液.

    1.3 最大吸收波長的確定取青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品10 mg,用95%乙醇溶解并定容于100 mL容量瓶中.吸取上述溶液2 mL加入到50 mL容量瓶中,補加2 mL 95%乙醇,并用0.2%的氫氧化鈉溶液定容,得標(biāo)準(zhǔn)液.另外,將4 mL 95%乙醇加入到50 mL容量瓶中,并用0.2%的氫氧化鈉溶液定容,得空白液.

    將標(biāo)準(zhǔn)液和空白液同時置于50℃恒溫水浴中反應(yīng)30 min[10-11].冷卻至室溫后用紫外分光光度計先用空白校正,然后對標(biāo)準(zhǔn)液進行紫外光譜掃描,標(biāo)準(zhǔn)液的最大吸收波長(λmax)為291 nm(文獻[12]λmax為292 nm).

    1.4 正交設(shè)計中提取液中青蒿素含量的測定為了簡化正交設(shè)計的實驗流程,提取液中青蒿素的含量按以下方法進行測定:

    吸取提取液的續(xù)濾液2 mL于25 mL容量瓶中,補充2 mL 95%乙醇,加人0.2%氫氧化鈉溶液至刻度.再于50℃恒溫水浴中反應(yīng)30 min,冷卻至室溫,在291 nm處測得吸光度值A(chǔ)S.并通過如下公式將其換算為每克黃花蒿葉所對應(yīng)的吸光度值A(chǔ)H:

    其中:MS——實際稱取的干燥黃花蒿葉的質(zhì)量.

    青蒿素含量W計算公式:

    其中:W——樣品的質(zhì)量,C——樣品的濃度,V——樣品的體積,E——百分吸收系數(shù),L——比色杯的厚度,k——常數(shù).

    2 結(jié)果

    2.1 酶解法正交實驗與結(jié)果分析經(jīng)過預(yù)試驗發(fā)現(xiàn),酶(15 U/mL)的用量(mL)、酶解時間(min)、回流時間(min)、石油醚的用量(mL)為影響青蒿素提取率的主要因素,以此設(shè)計四因素三水平正交實驗表(表1).

    表1 因素與水平

    酶解法正交實驗結(jié)果如表2、3所示,從方差分析可知,四個因素對青蒿素提取率影響由大到小的順序如下:D>A>C>B.說明溶劑體積的改變對青蒿素提取影響最大,其次為酶的用量和回流提取時間.其最佳組合為T4(D3A2C2B1);即石油醚的用量為80 mL(料液比為1∶80),酶的用量為1.00 mL(反應(yīng)體系中的濃度為0.05 mg/mL),提取時間為60 min,酶解時間為30 min.

    表2 正交實驗結(jié)果

    表3 青蒿素提取率方差分析

    2.2 驗證試驗為了驗證正交試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,按最佳提取工藝進行了重復(fù)性試驗.驗證性試驗結(jié)果表明所篩選的工藝具有可操作性和穩(wěn)定性(表4).

    表4 最佳提取工藝的驗證試驗

    2.3 提取工藝對比分析纖維素酶解法:稱取250 g黃花蒿葉粉末,按照優(yōu)化后的參數(shù)用纖維素酶解法進行提取,提取液于50℃減壓濃縮,得粗品.精制后得青蒿素純品2.911 g.

    回流提取法:稱取250g黃花蒿葉粉末,按回流提取法進行提取,精制后得青蒿素純品2.160 g.

    纖維酶解法提取青蒿素所得收率較回流提取法提高了34.76%.

    2.4 樣品的薄層色譜(TLC)分析取精制后的青蒿素以及青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg,加1 mL丙酮溶解,分別點于同一硅膠GF254薄層板上,以石油醚(沸程60~90℃)?丙酮?冰醋酸(8∶2∶0.1)為展開劑,展開后取出,晾干,噴以含2%香草醛的20%硫酸乙醇溶液,在85℃加熱10~20 min至斑點清晰.樣品試液與標(biāo)準(zhǔn)試液相同位置處有相同顏色的斑點;在青蒿素斑點的前后無其它斑點,說明青蒿素的純度符合要求.

    3 討論

    青蒿素在丙酮、乙酸乙酯、氯仿、苯及冰醋酸中易溶,在乙醇、甲醇、乙醚及石油醚中可溶,在水中幾乎不溶[13].綜合考慮青蒿素與雜質(zhì)在各個溶劑中的溶解度,采用石油醚作為提取的溶劑,并將其作為正交實驗的主要影響因素來進行研究.另外,利用青蒿素在水中幾乎不溶的特點,酶解反應(yīng)選擇在水溶液中進行,并在萃取過程中用蒸餾水進行洗滌,除去樣品中的水溶性成分[14-15].

    青蒿素在溫度超過60℃的環(huán)境下過氧橋結(jié)構(gòu)很快被破壞,完全失去藥效,所以青蒿素的提取不宜使用較高的溫度,控制在50℃比較適宜[11].從青蒿素的提取收率、提取時間、生產(chǎn)成本等指標(biāo)綜合考慮,以T4(D3A2C2B1)為最優(yōu)組合,推薦為生產(chǎn)工藝.雖然T3(D3A1B3C3)的收率也比較高,但是耗時太長,并且長時間的加熱也可能導(dǎo)致青蒿素的分解,因此在生產(chǎn)過程中應(yīng)避免采用.本提取方法與以往的冷浸提取法相比,大大縮短了提取的時間,減少了溶劑的容量,提高了青蒿素的收率.酶解法在天然活性成分的提取中有著重要的地位,并具有廣泛應(yīng)用的潛力,除了應(yīng)用于本研究提到的青蒿素的提取,也可考慮運用于其它研究中去,以提高生產(chǎn)效率,降低生產(chǎn)成本等.

    [1]國家藥典委員會.中國藥典,一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:137,附錄ⅨH.

    [2]Tian N,Li J,Liu S,et al.Simultaneous isolation of artemisinin and its precursors from Artemisia annua L.by preparative RP?HPLC[J].Biomed Chromatogr,2012,26(6):708-713.

    [3]Nageeb A,Al?Tawashi A,Mohammad Emwas AH,et al.Comparison of artemisia annua bioactivities between traditional medicine and chemical extracts[J].Curr Bioact Compd,2013,9(4):324-332.

    [4]Engeu PO,Omujal F,Agwaya M,et al.Variations in antimalarial components of Artemisia annua Linn from three regions of Uganda[J].Afr Health Sci,2015,5(3):828-834.

    [5]Kohler M,Haerdi W,Christen P,et al.Extraction of artemisinin and artemisinic acid from Artemisia annua L.using supercritical carbon dioxide[J].J Chromatogr A,1997,785(1-2):353-360.

    [6]Ivanescu B,Miron A,Corciova A.Sesquiterpene lactones from arte?misia genus:biological activities and methods of analysis[J].J Anal Methods Chem,2015,2015:247685.

    [7]吳梅林,周春山,陳龍勝,等.酶法提取銀杏黃酮類化合物研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2004,16(6):557-560.

    [8]Pan S,Wu S.Cellulase?assisted extraction and antioxidant activity of the polysaccharides from garlic[J].Carbohydr Polym,2014,111:606-609.

    [9]Zhao YM,Song JH,Wang J,et al.Optimization of cellulase?assisted extraction process and antioxidant activities of polysaccharides from Tricholoma mongolicum Imai[J].J Sci Food Agric,2016,96(13):4484-4491.

    [10]趙 兵,王玉春,歐陽藩.青蒿藥用成分提取分離技術(shù)現(xiàn)狀[J].中草藥,1998,29(11):784-786.

    [11]趙 兵,王玉春,吳 江,等.青蒿素提取條件研究[J].中草藥,2000,31(6):421-423.

    [12]李春莉,王莎莉,王亞平,等.紫外分光光度法測定青蒿素的含量[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2007,32(4):413-415.

    [13]Kim MH,Seo JY,Liu KH,et al.Protective effect of artemisia annua L.extract against galactose?induced oxidative stress in mice[J].PLoS One,2014,9(7):e101486.

    [14]Tang C,Zhao Y,Huang S,et al.Influence of Artemisia annua extract derivatives on proliferation,apoptosis and metastasis of osteo?sarcoma cells[J].Pak J Pharm Sci,2015,28(2 Suppl):773-779.

    [15]Patindol J,Wang L,Wang YJ.Cellulase?assisted extraction of oligo?saccharides from defatted rice bran[J].J Food Sci,2007,72(9):C516-C521.

    Study on extraction process of artemisinin from Artemisia annua L.by cellulase?assisted technique

    LIU Chang1,TANG Xiao?Fei2,OU Yan?Yang2,LIU Hai?Lin2,LI Hai?Bo3
    Third Military Medical University:1Battalion Eighteen,College of Pharmacy,2The 20th Team of Cadet Brigade,3Department of Microbiology and Biochemical Pharmacy,College of Pharmacy,Chongqing 400038,China

    AIM:To establish and optimize the extraction process of artemisinin from Artemisia annua L.by cellulase?assisted technique.METHODS:With the extraction rate of artemisinin as index,the orthogonal test was adopted to examine the effects of the 4 factors consisting of enzyme concentration,enzymatic hydrolysis time,the rate of liquid to material and extraction times.RESULTS:The optimum extraction conditions were established as following:enzymeconcentration 0.05mg/mL,enzymatic hydrolysis time 30 minutes,the rate of material to liquid 1:80,extraction time 60 minutes.The yield of artemisinin increased by 34.76%comparing with the traditional technique of extraction.CONCLUSION:The method is simple and it can increase material utility effectively,extracted time is reduced as well.

    ArtemisiaannuaL.;artemisinin;cellulose;extraction process

    R965.1

    A

    2095?6894(2017)04?64?04

    2016-12-06;接受日期:2016-12-22

    國家自然科學(xué)基金(31400788,31670936)

    劉 暢.E?mail:756648273@qq.com

    李海波.副教授,碩士生導(dǎo)師.研究方向:化學(xué)生物學(xué).

    E?mail:lihaibo@tmmu.edu.cn

    猜你喜歡
    青蒿素石油醚黃花
    云小萱:助大同黃花飄香
    三利黃花:三代人專注59年
    黃花梁啊黃花香
    黃河之聲(2020年16期)2020-11-05 01:57:46
    路邊種黃花“一種三得”
    錦燈籠宿萼與果實的石油醚部位化學(xué)成分及抗氧化活性比較①
    補腎活血湯石油醚提取物對BMSCs遷移過程中Wnt5a/PKC通路的影響
    中成藥(2017年12期)2018-01-19 02:06:26
    煙草石油醚含量研究
    切莫盲信所謂的“青蒿素食品”
    華人時刊(2016年1期)2016-04-05 05:56:23
    一種新型的倍半萜內(nèi)酯
    ——青蒿素
    一個青蒿素品牌的崛起
    中國品牌(2015年11期)2015-12-01 06:20:49
    国产av精品麻豆| 精品少妇久久久久久888优播| 国产精品久久久久成人av| 蜜桃国产av成人99| 天天影视国产精品| 性高湖久久久久久久久免费观看| 免费看十八禁软件| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品第一国产精品| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产成人系列免费观看| 99国产精品免费福利视频| 男女免费视频国产| e午夜精品久久久久久久| 一级毛片女人18水好多| 久久国产精品影院| 亚洲国产看品久久| 天天添夜夜摸| 麻豆国产av国片精品| 国产激情久久老熟女| 美国免费a级毛片| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲av电影在线进入| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 高清av免费在线| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 久久精品国产a三级三级三级| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产激情久久老熟女| 男人爽女人下面视频在线观看| 在线观看人妻少妇| 成人亚洲精品一区在线观看| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 欧美日韩av久久| 天天影视国产精品| 性色av乱码一区二区三区2| 99久久精品国产亚洲精品| 精品少妇内射三级| 12—13女人毛片做爰片一| 午夜福利,免费看| 国产黄色免费在线视频| 多毛熟女@视频| 9热在线视频观看99| 日本欧美视频一区| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久 成人 亚洲| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 十八禁网站免费在线| 国产黄频视频在线观看| av天堂久久9| 久久国产精品影院| 另类亚洲欧美激情| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲精品国产一区二区精华液| 久久久久网色| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲欧美精品自产自拍| 一本色道久久久久久精品综合| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久精品国产a三级三级三级| 黄色视频在线播放观看不卡| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产福利在线免费观看视频| 91麻豆av在线| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 免费人妻精品一区二区三区视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 日韩 亚洲 欧美在线| 午夜福利一区二区在线看| av超薄肉色丝袜交足视频| svipshipincom国产片| 水蜜桃什么品种好| 他把我摸到了高潮在线观看 | 伦理电影免费视频| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 久久亚洲精品不卡| 伊人亚洲综合成人网| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 欧美精品亚洲一区二区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 午夜日韩欧美国产| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲性夜色夜夜综合| av片东京热男人的天堂| 中文字幕精品免费在线观看视频| 久久久国产欧美日韩av| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲综合色网址| 国产精品久久久久久精品电影小说| 一区福利在线观看| 午夜福利在线观看吧| av天堂久久9| 不卡一级毛片| 91精品三级在线观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 日日爽夜夜爽网站| 好男人电影高清在线观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲国产av影院在线观看| 咕卡用的链子| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 最近最新中文字幕大全免费视频| 欧美中文综合在线视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久久国产成人免费| 国产成人a∨麻豆精品| 午夜免费成人在线视频| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 久久久久国产一级毛片高清牌| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲人成电影观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲精品国产av蜜桃| 最近中文字幕2019免费版| 狂野欧美激情性xxxx| 色老头精品视频在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 最新的欧美精品一区二区| 91老司机精品| 亚洲专区中文字幕在线| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久精品亚洲av国产电影网| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲av美国av| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产1区2区3区精品| 另类精品久久| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲欧美精品自产自拍| 极品人妻少妇av视频| 国产av国产精品国产| 麻豆乱淫一区二区| tube8黄色片| 久久久水蜜桃国产精品网| 黑丝袜美女国产一区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 老司机午夜福利在线观看视频 | 国产成人影院久久av| 人妻久久中文字幕网| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 美国免费a级毛片| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美变态另类bdsm刘玥| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 深夜精品福利| a 毛片基地| 国产高清videossex| 色播在线永久视频| 嫩草影视91久久| 亚洲av电影在线进入| 亚洲黑人精品在线| 国产一区二区在线观看av| 9191精品国产免费久久| 在线观看一区二区三区激情| 国产伦人伦偷精品视频| 精品久久久久久电影网| 看免费av毛片| 老熟女久久久| 国产欧美亚洲国产| 久久九九热精品免费| 国产精品免费大片| 在线 av 中文字幕| 亚洲欧美色中文字幕在线| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 黑人猛操日本美女一级片| 狂野欧美激情性bbbbbb| av欧美777| 久久中文字幕一级| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲精品国产一区二区精华液| av不卡在线播放| 午夜福利视频在线观看免费| 99国产极品粉嫩在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲人成电影观看| 2018国产大陆天天弄谢| 午夜福利影视在线免费观看| 老司机靠b影院| 考比视频在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 黄色片一级片一级黄色片| 国产一区二区 视频在线| 欧美激情久久久久久爽电影 | 又黄又粗又硬又大视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产欧美日韩一区二区三 | 亚洲精品国产一区二区精华液| 中文字幕精品免费在线观看视频| 日韩视频在线欧美| 久久精品国产亚洲av高清一级| 精品久久蜜臀av无| 久久久久久久久免费视频了| 欧美午夜高清在线| a在线观看视频网站| 搡老乐熟女国产| 免费日韩欧美在线观看| 考比视频在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 久久综合国产亚洲精品| 99热全是精品| 久久天堂一区二区三区四区| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产一区二区 视频在线| 亚洲精品在线美女| 亚洲专区中文字幕在线| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 少妇被粗大的猛进出69影院| 啦啦啦 在线观看视频| 欧美激情高清一区二区三区| 亚洲精华国产精华精| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲国产av新网站| 高清av免费在线| 我的亚洲天堂| 丰满少妇做爰视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 一本综合久久免费| 一级黄色大片毛片| 欧美日韩亚洲高清精品| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 在线观看人妻少妇| 国产av一区二区精品久久| 波多野结衣av一区二区av| 国产淫语在线视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 欧美在线一区亚洲| 青草久久国产| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 少妇的丰满在线观看| 高清av免费在线| 亚洲国产欧美网| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产av一区二区精品久久| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 中文欧美无线码| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲专区字幕在线| 日韩欧美国产一区二区入口| 日本精品一区二区三区蜜桃| 视频在线观看一区二区三区| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 国产精品一区二区免费欧美 | 黄色片一级片一级黄色片| 丰满少妇做爰视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 精品国产乱码久久久久久男人| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久国产精品影院| 国产欧美亚洲国产| 成人国产av品久久久| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久国产精品大桥未久av| 日韩欧美免费精品| 国产成人精品在线电影| 国产成人av教育| 日日夜夜操网爽| 老司机靠b影院| 人妻一区二区av| 亚洲一区二区三区欧美精品| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 超碰成人久久| 精品人妻一区二区三区麻豆| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产精品二区激情视频| 成人手机av| 国产成人啪精品午夜网站| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 午夜成年电影在线免费观看| 国产精品免费视频内射| 宅男免费午夜| 欧美精品一区二区免费开放| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲精品第二区| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产精品成人在线| 一区二区三区四区激情视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| av免费在线观看网站| 欧美人与性动交α欧美软件| 岛国毛片在线播放| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | www日本在线高清视频| 女人久久www免费人成看片| 精品第一国产精品| 午夜免费观看性视频| av片东京热男人的天堂| 亚洲国产成人一精品久久久| 91国产中文字幕| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 中文字幕av电影在线播放| 国产91精品成人一区二区三区 | 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产av精品麻豆| 国产成人免费无遮挡视频| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 男女床上黄色一级片免费看| 久久久久精品国产欧美久久久 | 亚洲欧美成人综合另类久久久| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲黑人精品在线| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 99精国产麻豆久久婷婷| 丁香六月欧美| 久久久久精品人妻al黑| 91大片在线观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲av男天堂| 日韩欧美国产一区二区入口| 成人黄色视频免费在线看| 午夜两性在线视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 精品福利观看| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 国产野战对白在线观看| 免费在线观看黄色视频的| 国产精品一二三区在线看| 精品福利永久在线观看| 又黄又粗又硬又大视频| 大陆偷拍与自拍| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 美女中出高潮动态图| 老司机午夜十八禁免费视频| 嫩草影视91久久| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 超碰97精品在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 大香蕉久久网| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 日本黄色日本黄色录像| 久久久久久久精品精品| 黄片小视频在线播放| 国产人伦9x9x在线观看| 在线永久观看黄色视频| 欧美激情久久久久久爽电影 | 成年女人毛片免费观看观看9 | 无限看片的www在线观看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 国产精品偷伦视频观看了| 国产亚洲av高清不卡| 中文字幕人妻丝袜制服| 亚洲av片天天在线观看| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产1区2区3区精品| 亚洲第一青青草原| 中文字幕最新亚洲高清| 他把我摸到了高潮在线观看 | 久久人人爽人人片av| 久久久久久久久久久久大奶| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 高清黄色对白视频在线免费看| 无限看片的www在线观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 精品久久久精品久久久| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲欧美清纯卡通| 51午夜福利影视在线观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 欧美激情高清一区二区三区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 欧美乱码精品一区二区三区| 日韩欧美免费精品| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 日韩欧美免费精品| 欧美性长视频在线观看| 久久中文字幕一级| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲七黄色美女视频| 在线 av 中文字幕| av网站免费在线观看视频| 美女国产高潮福利片在线看| 美女大奶头黄色视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 久久久久国内视频| 国产亚洲一区二区精品| 青草久久国产| 在线观看www视频免费| 男女下面插进去视频免费观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 久久青草综合色| 亚洲精品在线美女| 中文字幕人妻丝袜制服| 亚洲国产精品一区三区| 男女无遮挡免费网站观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 久久人人爽人人片av| 天天操日日干夜夜撸| 丰满迷人的少妇在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 另类精品久久| 成人手机av| a 毛片基地| 十八禁网站免费在线| 国产成人啪精品午夜网站| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 久久久久久久精品精品| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 中文欧美无线码| 亚洲国产精品成人久久小说| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲国产精品一区三区| 久久狼人影院| 午夜老司机福利片| 另类精品久久| 日韩人妻精品一区2区三区| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产不卡av网站在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 丝袜人妻中文字幕| 12—13女人毛片做爰片一| 视频区图区小说| 十八禁高潮呻吟视频| 十分钟在线观看高清视频www| 老司机靠b影院| 又大又爽又粗| 国产精品免费视频内射| 交换朋友夫妻互换小说| 高清欧美精品videossex| 国产又爽黄色视频| 成人免费观看视频高清| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| av视频免费观看在线观看| av福利片在线| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 在线观看人妻少妇| 亚洲中文av在线| 精品一区二区三区四区五区乱码| 亚洲av片天天在线观看| 乱人伦中国视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 99热网站在线观看| 欧美人与性动交α欧美软件| 亚洲伊人色综图| 国产一区二区激情短视频 | 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲av欧美aⅴ国产| 9191精品国产免费久久| 久久av网站| 大片电影免费在线观看免费| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产av又大| 国产精品1区2区在线观看. | 99久久综合免费| 亚洲第一青青草原| 亚洲avbb在线观看| 亚洲 国产 在线| 久久性视频一级片| a 毛片基地| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产av国产精品国产| 考比视频在线观看| 日韩大片免费观看网站| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产男女内射视频| 十八禁网站网址无遮挡| 99九九在线精品视频| 精品福利永久在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产又色又爽无遮挡免| 国产免费视频播放在线视频| 欧美xxⅹ黑人| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 人人妻人人澡人人看| 国产在线观看jvid| 欧美久久黑人一区二区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产在线一区二区三区精| 大片电影免费在线观看免费| 捣出白浆h1v1| 国产成+人综合+亚洲专区| av超薄肉色丝袜交足视频| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲综合色网址| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲欧美清纯卡通| 在线观看免费日韩欧美大片| 精品亚洲成a人片在线观看| av一本久久久久| videosex国产| 午夜激情av网站| 免费观看a级毛片全部| 国产野战对白在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 99精品久久久久人妻精品| 九色亚洲精品在线播放| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 搡老乐熟女国产| 宅男免费午夜| 少妇的丰满在线观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 精品熟女少妇八av免费久了| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 男女边摸边吃奶| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 免费少妇av软件| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 丝瓜视频免费看黄片| 久久女婷五月综合色啪小说| 欧美黄色淫秽网站| 我要看黄色一级片免费的| 日本黄色日本黄色录像| 中文字幕色久视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 最近中文字幕2019免费版| 高清在线国产一区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 在线精品无人区一区二区三| 亚洲人成电影观看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲,欧美精品.| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲av成人一区二区三| 国产日韩欧美在线精品| 最近最新免费中文字幕在线| www.熟女人妻精品国产| 一区二区三区激情视频| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 免费av中文字幕在线| 九色亚洲精品在线播放| 国产精品二区激情视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 咕卡用的链子| a级片在线免费高清观看视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产精品99久久99久久久不卡| www.av在线官网国产| 中文字幕最新亚洲高清| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲视频免费观看视频| 淫妇啪啪啪对白视频 | 国产极品粉嫩免费观看在线| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 女人精品久久久久毛片| 搡老岳熟女国产| 一级毛片电影观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产成人免费无遮挡视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产亚洲精品一区二区www | 好男人电影高清在线观看| svipshipincom国产片| 午夜福利免费观看在线| 亚洲欧美激情在线| 亚洲国产av影院在线观看| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲欧美清纯卡通| 久9热在线精品视频| 精品一区二区三卡| 精品高清国产在线一区| 超色免费av| 波多野结衣av一区二区av| 久久青草综合色| av超薄肉色丝袜交足视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 我的亚洲天堂| 美女大奶头黄色视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲一码二码三码区别大吗| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 久久午夜综合久久蜜桃| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 欧美另类一区| 中文字幕人妻丝袜制服| 纯流量卡能插随身wifi吗| 伦理电影免费视频| 黄频高清免费视频| 中文字幕制服av| 搡老乐熟女国产| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久午夜综合久久蜜桃| 满18在线观看网站| 亚洲 国产 在线| 精品第一国产精品| 大型av网站在线播放| 嫩草影视91久久| 天堂8中文在线网| cao死你这个sao货| av线在线观看网站| 午夜免费鲁丝| 麻豆av在线久日| 国产在线观看jvid| 丝袜美足系列|