一例雞大腸桿菌病的病原分離及治療

談明祿，陳長江

（青海省湟源縣畜牧獸醫(yī)站，812100）

一例雞大腸桿菌病的病原分離及治療

談明祿，陳長江

（青海省湟源縣畜牧獸醫(yī)站，812100）

大腸桿菌病是嚴重影響?zhàn)B殖業(yè)發(fā)展的主要細菌病之一，是由大腸埃希氏菌的某些血清型所引起的一類疾病的總稱，主要癥狀為心包炎、氣囊炎、敗血癥、臍炎、眼炎、卵黃性腹膜炎或慢性腫瘤樣肉芽腫，雞的發(fā)病率達到10%～69%,死亡率約為3.8%～72.0%，給養(yǎng)禽業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失。2016年5月青海省湟源縣某雞場開始發(fā)病，三天之內(nèi)，死亡121只。 病雞多精神沉郁，食欲減退，腹部膨大，糞便呈灰綠色或黃色，通過對5只瀕死雞進行了剖檢、病理學診斷和病原檢測，確診該雞場發(fā)生了大腸桿菌病，篩選出對這些致病菌比較敏感的幾種藥物進行治療，控制疫情。

1 發(fā)病情況

發(fā)病雞場存欄雞5860只，均為散養(yǎng)產(chǎn)蛋雞，240日齡。5月16日開始發(fā)病，發(fā)病雞大約500只左右，三天之內(nèi)，死亡121只。病雞表現(xiàn)為精神沉郁，采食、飲水減少或廢絕，兩翅下垂，縮頸，羽毛粗亂，消瘦。出現(xiàn)呼吸困難，黏膜發(fā)紺，腹瀉，糞便呈灰綠色或黃色；產(chǎn)蛋率下降，產(chǎn)畸形蛋。最后，病雞頭、頸、腿抽搐死亡。

2 剖檢變化

對5只瀕死雞進行剖檢，均呈現(xiàn)肝臟腫大，質(zhì)脆，呈暗紅色軟泥狀，表面有小壞死灶(白色)或不同程度的纖維樣偽膜(心包膜上也有)，脾臟腫大，腸系膜發(fā)炎，腸袢互相粘連，小腸有充血、出血，腫脹臌氣，黏膜上有粉紅黏液和散在點狀出血；雞腹腔內(nèi)充滿卵黃液和淡黃色腥臭的液體，卵泡變性破裂，卵膜充血，呈褐色或黑褐色；輸卵管表面不光滑，高度擴張，切面呈輪呈狀，黏膜充血、增厚，有發(fā)炎的癥狀，內(nèi)積異形蛋樣滲出物，管腔中也有黃白色的纖維素性凝片；卵巢中的卵泡變形，呈灰色、褐色或醬色色澤，有的卵泡皺縮，滯留在腹腔中，破裂的卵黃則凝結(jié)成大小不等的碎片。

3 實驗室檢測

3.1 涂片鏡檢

無菌采取5只雞的心、肝、脾，進行涂片，革蘭氏染色鏡檢，均發(fā)現(xiàn)了革蘭氏陽性的、單個存在的小桿菌。

3.2 病原的分離培養(yǎng)

無菌采取5只雞的心、肝、脾，分別接種于普通營養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂和伊紅美蘭瓊脂平板上，置于37℃恒溫箱培養(yǎng)20 h，觀察細菌的生長情況。

普通營養(yǎng)瓊脂平板菌落情況為邊緣整齊，中央隆起、光滑、半透明、無色，直徑小于1 mm的針尖大小“露珠狀”小菌落；麥康凱平板生長情況為菌落中等大小，中央輕微隆起，邊緣整齊、光滑、紅色；伊紅美蘭瓊脂平板，紫黑色小菌落，周圍帶有綠色金屬光澤。以上結(jié)果均符合大腸桿菌的特征。分別挑取不同瓊脂平板上典型的單個菌落革蘭氏染色、鏡檢，結(jié)果與涂片鏡檢的結(jié)果一致。

3.3 生化試驗

選取5個麥康凱瓊脂平板上的紅色菌落，作三糖鐵、尿素酶、IMVIC試驗。挑取單個典型菌落，分別接種于糖發(fā)酵罐，置37℃恒溫箱培養(yǎng)18～24 h，判定結(jié)果。

3.3.1 三糖鐵：斜面產(chǎn)酸變黃，管底產(chǎn)氣，不產(chǎn)生硫化氫。

3.3.2 不能產(chǎn)生硫化氫和分解尿素，符合大腸桿菌的特性。

3.3.3 吲哚試驗陽性，M-R試驗陽性，V-P試驗陰性，不利用枸櫞酸鹽，符合大腸桿菌IMVIC反應特性++--。

3.3.4 糖發(fā)酵試驗產(chǎn)酸產(chǎn)氣，發(fā)酵管變黃，有氣泡；不利用蔗糖。

根據(jù)以上結(jié)果，可確定所分離的細菌為大腸桿菌。

3.4 致病性試驗

將麥康凱瓊脂平板上的紅色菌落菌接種于營養(yǎng)肉湯，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。 取健康小白鼠6只，分為A、B兩組，A組3只，腹腔接種營養(yǎng)肉湯菌液，每只0.2mL;B組3只，腹腔接種等量的滅菌生理鹽水作對照組，分別隔離飼養(yǎng)觀察。 取6只7日齡健康雛雞，隨機分為C、D兩組，與小白鼠同樣的方法，C組皮下接種營養(yǎng)肉湯菌液，每只0.2mL;D組接種等量的滅菌生理鹽水，隔離飼養(yǎng)。結(jié)果A、C兩組均在48小時內(nèi)死亡，B、D健活。

3.5 藥敏試驗

藥敏紙片購自北京天壇生物制品公司，批號：20151013。包括：氧氟沙星、環(huán)丙沙星、洛美沙星、培氟沙星、沙拉沙星、強力霉素、磷霉素、氟苯尼考、阿莫西林、頭孢噻呋、頭孢曲松、丁胺卡那霉素。

3.5.1 用滅菌的棉球蘸取細菌的肉湯培養(yǎng)物(麥康凱瓊脂平板上的紅色菌落菌接種于營養(yǎng)肉湯)均勻涂布到瓊脂平板的表面，然后將氧氟沙星、環(huán)丙沙星、洛美沙星等12種常用抗生素的藥敏試紙分別貼到瓊脂平板表面，先一塊平板中央放藥敏試紙一張，外周均勻分布6張，另外5種放在另一個平板上 （每換一種紙片都要滅菌一次鑷子）。37℃培養(yǎng)24h后測量抑菌圈大小，根據(jù)標準進行判定。（高敏：抑菌圈直徑大于15mm；中敏：抑菌圈直徑為10～15mm；低敏：抑菌圈直徑小于10mm）。

3.5.2 從藥敏試驗結(jié)果（表1）可以看出，此次大腸桿菌病對氧氟沙星、強力霉素、洛美沙星、氟苯尼考較敏感，對環(huán)丙沙星、丁胺卡那霉素、培氟沙星中度敏感，對沙拉沙星、磷霉素、阿莫西林、頭孢噻呋、頭孢曲松不敏感。

3.6 治療

通過選用敏感藥物氧氟沙星飼喂給藥，3天后死亡率明顯降低；在治療1周后，病雞群恢復健康。

表1 藥敏試驗結(jié)果（抑菌圈直徑mm）

4 討論

4.1 大腸桿菌是一種條件性致病病原微生物，它廣泛存在于飼料、墊草、糞污和禽舍的灰塵中，也作為常在菌，存在于正常動物的腸道中，當機體抵抗力下降，特別是應激情況下，細菌的致病性即可表現(xiàn)出來，使感染的雞發(fā)病。 因此，防治雞大腸桿菌病應改善雞舍衛(wèi)生條件，加強飼養(yǎng)管理，定期消毒，消除本病誘因，減少發(fā)病率。

4.2 適當添加維生素和微生態(tài)制劑，增強機體抵抗力。由于大腸桿菌是一種極易產(chǎn)生抗藥性的細菌，因此使用對癥性藥物時還應交替使用，以提高藥效。 在飼料中添加一些維生素A、E對治療本病也有一定幫助。不定期飼喂乳酸菌片，維持雞腸道正常菌的平衡，減少致病性大腸桿菌的侵入。

4.3 該病的診斷和治療應該是在細菌的分離與鑒定以及藥敏試驗的基礎開展。最好根據(jù)藥敏試驗結(jié)果確定用藥，才能取得滿意療效。在用藥的過程中做到輪換用藥，防止產(chǎn)生耐藥性。

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1003-8655（2017）02-0055-02