豬圓環(huán)病毒2型和豬偽狂犬病毒混合感染對仔豬血液生理生化指標(biāo)的影響

劉永波，舒相華，吳常月，謝相悅，凌萬旭，顏宏奎，宋春蓮*

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，昆明650201；2.昆明偉牧得生物科技有限公司，云南昆明，650201）

豬圓環(huán)病毒2型和豬偽狂犬病毒混合感染對仔豬血液生理生化指標(biāo)的影響

劉永波1，舒相華1，吳常月1，謝相悅1，凌萬旭2，顏宏奎2，宋春蓮1*

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，昆明650201；2.昆明偉牧得生物科技有限公司，云南昆明，650201）

為了解豬圓環(huán)病毒2型和豬偽狂犬病毒混合感染對仔豬血液生理生化指標(biāo)的影響，本實(shí)驗(yàn)將34頭仔豬分為第I組（PRV單感染組）、第Ⅱ組（PCV2單感染組）、第Ⅱ組（PCV2和PRV混合感染組）及對照組。分別在實(shí)驗(yàn)0、3、7、14、21、35天空腹前腔靜脈采血分離血清，檢測血清中IgG和血液生理指標(biāo)。結(jié)果表明混合感染組IgG和對照組差異不顯著，紅細(xì)胞和血紅蛋白和對照組比較在第14天差異顯著，白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞各時(shí)間段均顯著低于對照組。該研究從血液學(xué)方面解釋了PCV2和PRV混合感染的發(fā)病機(jī)制。

PCV2；PRV；混合感染；IgG；紅細(xì)胞；白細(xì)胞

豬圓環(huán)病毒2型 (Porcine Circovirus Type 2, PCV2)是圓環(huán)病毒科的單鏈DNA病毒，該病原體與其他病毒或細(xì)菌病原體混合感染引起的豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病 （Porcine Circovirus-associated Disease，PCVAD），在世界范圍內(nèi)引起巨大經(jīng)濟(jì)損失[1]。由該病毒引起的斷奶仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合征(Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome ,PMWS)和豬呼吸道疾病綜合征(Porcine RespiratoryDisease Complex,PRDC)以及其他一些等臨床疾病近年來已在國際獸醫(yī)領(lǐng)域引起高度重視[2]。豬偽狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)又稱豬皰疹病毒Ⅰ型，是豬偽狂犬病的主要病原，因其擁有廣泛的宿主，近年來被認(rèn)為作為皰疹病毒的模型生物具有重要研究價(jià)值[3]。豬偽狂犬病可引起仔豬和保育豬致死性腦炎、育肥豬呼吸系統(tǒng)疾病和母豬的繁殖障礙[4]，由于它可在感染豬外周神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生終生的潛在影響，因此增加了該病的凈化難度[5]。了解豬圓環(huán)病毒2型和豬偽狂犬病毒混合感染對仔豬血清生理生化指標(biāo)的影響，對于研究兩種疾病混合感染對仔豬血液指標(biāo)的影響及發(fā)病機(jī)制意義重大。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

長白豬(公母各半，共34頭，50日齡，未接種任何疫苗，PCV-2、PRV抗原檢測陰性，適應(yīng)飼喂7天)；實(shí)驗(yàn)仔豬分為4組：第I組為PRV單感染組10頭；第II組為PCV2單感染組10頭；第III組為PRV+PCV2混合感染組10頭；第IV組為對照組4頭。

1.2 儀器與主要試劑

離心機(jī)、血清振蕩器、恒溫培養(yǎng)箱、雙重純水蒸餾器、Thermo酶標(biāo)儀、立式壓力蒸汽滅菌器、冰箱、全自動(dòng)血液生化儀、全自動(dòng)血液分析儀、PRV（106.5TCID50/ml）、PCV2（106TCID50/ml），PCV2和PRV由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物傳染病實(shí)驗(yàn)室提供，均為第三代病毒。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 接種病毒

第Ⅰ組頸部肌肉注射PRV2ml；第Ⅱ組頸部肌肉注射PCV 2ml；第Ⅲ組頸部肌肉注射PRV 1ml和PCV2 1ml；第IV組頸部肌肉注射生理鹽水2ml。

1.3.2 采血及檢測

分別在實(shí)驗(yàn)第0、3、7、14、21、35天前腔靜脈采血，分離血清冷藏備用。全自動(dòng)血液生化儀檢測血清IgG指標(biāo)，全自動(dòng)血液生化儀檢測RBC、HGB、WBC、NEUT、LY和PLT各項(xiàng)血常規(guī)指標(biāo)。

2 結(jié)果

因混合感染10頭仔組在第12天起陸續(xù)死亡，故各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)只采集到第14天。

2.1 免疫球蛋白(IgG)

圖2.1免疫球蛋白IgG變化規(guī)律

由圖2.1可見，各感染組的免疫球蛋白IgG在0-3天下降，低于對照組。PCV2和PRV單感染組都呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢，且第3天達(dá)最低峰值，第35天達(dá)最高峰值。PCV2和PRV單感染組比較在第 21、35天差壓極顯著（P＜0.01），PCV2單感染組與對照組比較在第3天差異極顯著（P＜0.01）。混合感染與對照組比較，在3、7、14天差異均不顯著。

2.2 紅細(xì)胞數(shù)量（RBC）

圖2.2 紅細(xì)胞數(shù)量變化規(guī)律

如圖2.2可見，3個(gè)感染組紅細(xì)胞數(shù)量均低于對照組，PCV2單感染在第14天達(dá)最低峰值，與其他時(shí)間點(diǎn)相比，差異顯著（p＜0.05）。PRV單感染組紅細(xì)胞數(shù)量低于對照組，但二者差異不顯著?；旌细腥窘M在第7-14天紅細(xì)胞數(shù)量上升，在第14天與對照組比較差異顯著（p＜0.05）。

2.3 血紅蛋白計(jì)數(shù)(HGB)

圖2.3 血紅蛋白變含量變化規(guī)律

如圖2.3可見，血紅蛋白計(jì)數(shù)3個(gè)感染組總體上均低于對照組，PCV2單感染在第14天達(dá)最低峰值，與其他時(shí)間點(diǎn)相比，差異顯著（p＜0.05）。PRV單感染組血紅蛋白計(jì)數(shù)總體上均低于對照組，但二者差異不顯著（p＞0.05）。混合感染組第7-14天上升，在第14天與對照組比較差異顯著（p＜0.05）。

2.4 白細(xì)胞總數(shù)(WBC)

圖2.4 白細(xì)胞數(shù)量變化規(guī)律

如圖2.4可見，PCV2單感染組除第14天外均低于對照組，與對照組比較每個(gè)時(shí)間點(diǎn)差異均不顯著（P＞0.05）。PRV單感染組第0-3天下降，第3-7天快速上升，在第7天達(dá)最高峰值，與第14天比較差異不顯著（P＞0.05），與其他時(shí)間點(diǎn)比較差異顯著（P＜0.05），后逐漸下降。混合感染組呈現(xiàn)下降趨勢，在第14天達(dá)最低峰值，與0、3、7天比較差異顯著（P＜0.05），與對照組比較在第14天差異不顯著 （P＞0.05），其余時(shí)間差異顯著（P＜0. 05）。

2.5 淋巴細(xì)胞數(shù)(LYM)

圖2.5 淋巴細(xì)胞數(shù)量變化規(guī)律

由表圖2.5可見，淋巴細(xì)胞數(shù)3個(gè)感染組均低于對照組，與對照組比較各時(shí)間點(diǎn)均為差異極顯著（P＜0.01）。均在第3天快速下降，第3-35天呈現(xiàn)較低的水平?；旌细腥窘M與2個(gè)單感染組比較在3、7、14天均低于兩個(gè)單感染組，且在第7、14天差異顯著（P＜0.05）。

2.6 中性粒細(xì)胞數(shù)(GRA)

圖2.6 中性粒細(xì)胞數(shù)量變化規(guī)律

由圖2.6可見，中性粒細(xì)胞數(shù)3個(gè)實(shí)驗(yàn)組第3-35天均明顯低于對照組，2個(gè)單感染組在第0-3天呈快速下降趨勢，第3-7天緩慢下降，在第3、7、14天與對照組比較差異顯著（P＜0.05），后逐漸上升，第35天接近對照組；混合感染組在第0-7天緩慢下降，第7-14天快速下降，14天明顯低于對照組，差異極顯著（P＜0.01）。

2.7 血小板數(shù)目（PLT）

圖2.7 血小板細(xì)胞數(shù)量變化規(guī)律

從圖表5.13可見，3個(gè)感染組血小板均低于對照組，單感染PCV2呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢，在第3天低于對照組，差異顯著（P＜0.05），第7天差異極顯著（P＜0.01），14天以后與對照組差異不顯著（P＞0.05）。PRV單感染組呈現(xiàn)下降，上升，在再下降，再上升的趨勢，與對照組比較在第0、14天差異不顯著（P＞0.05），第3、7、21天差異極顯著（P＜0.01），第35天差異顯著（P＜0.05）。混合感染組先下降，再上升、再下降的趨勢，與對照組比較在第3、14天差異極顯著 （P＜0.01），第7天差異顯著（P＜0.05）。

3 討論

IgG是血清主要的抗體成分，約占血清Ig的75%，是唯一可以通過胎盤的免疫球蛋白。IgG的功能作用主要在機(jī)體免疫中起保護(hù)作用，大多數(shù)抗菌、抗病毒、具有多種生物學(xué)活性等，能有效地預(yù)防相應(yīng)的感染性疾病[6]。免疫球蛋白IgG均呈現(xiàn)第0-3天下降，說明機(jī)體免疫機(jī)能下降，兩個(gè)單感染組第3-21天上升，提示機(jī)體可能出現(xiàn)急性炎癥反應(yīng)。PCV2和PRV單感染組和混合感染組紅細(xì)胞和血紅蛋白均為先下降后上升的趨勢，這可能是在臨床上表現(xiàn)為先貧血后出血、淤血的主要原因。血小板計(jì)數(shù)異常是嚴(yán)重感染病變常見的臨床表現(xiàn)，臨床常把血小板計(jì)數(shù)作為監(jiān)測感染凝血功能的簡易指標(biāo)[7]。三個(gè)實(shí)驗(yàn)組血小板均呈現(xiàn)較大的波動(dòng)，偏高提示有組織炎癥或內(nèi)臟器官有出血、淤血，偏低可能是病毒引起造血系統(tǒng)受到損傷。PRV單感染組白細(xì)胞在3-7天急劇上升，這與仔豬表現(xiàn)的高熱癥狀吻合，PCV2單感染組和混合感染組總體上呈白細(xì)胞總體下降，說明機(jī)體免疫功能低下。三個(gè)實(shí)驗(yàn)組仔豬淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量均顯著低于對照組，說明機(jī)體造血系統(tǒng)受到損害，進(jìn)而細(xì)胞吞噬功能下降，記憶、遞呈、分化能力下降，這也是機(jī)體免疫抑制的主要表現(xiàn)之一。

豬圓環(huán)病毒2型與豬偽狂犬病混合感染可加速病豬的死亡，且臨床表現(xiàn)呈非典型化，給養(yǎng)豬業(yè)造成了極大危害。由于兩種病毒的混合感染常常合并其他病菌大量繁殖，且具有非典型性發(fā)病特征，給該病的診斷、預(yù)防和控制增加了很大難度[8]。研究PCV-2和PRV混合感染對于仔豬血液生理生化指標(biāo)的影響，對于從血液學(xué)方面解釋該病免疫抑制的機(jī)理具有重大意義。

[1]Luca Ferrari,PaoloBorghetti et al.MemoryTcell proliferative responses and IFN-γ productivitysustain long-lastingefficacy ofa Cap-based PCV2 vaccine upon PCV2 naturalinfection and associated disease.[J]. VeterinaryResearch.2014,45:44-60.

[2]Changhoon Park,Yeonsu Oh et al.Comparative Effects of Vaccination against Porcine Circovirus Type 2(PCV2) and Porcine Reproductive and RespiratorySyndrome Virusin a PCV2-PRRSVChallengeModel.[J].Clinical and Vaccine Immunology.2013,5(20):369-376.

[3]Yi-Quan Wu,Di-Jun Chen,Hua-Bin He et al. Pseudorabies Virus Infected Porcine Epithelial Cell Line Generates a Diverse Set ofHost MicroRNAs and a Special Cluster ofViral MicroRNAs.[J].PLOSONE. 2012,7:1-12.

[4]ZhenqingGu,Chengcai Hou,HaifengSun.Emergence of highlyvirulent pseudorabies virus in southern China.[J]. TheCanadianJournalofVeterinaryResearch.2015;79: 221–228.

[5]Hahn EC,Fadl-Alla B,Lichtensteiger CA.Variation of Aujeszky，s disease viruses in wild swine in USA.Vet Microbio.l 2010;143:45–51.

[6]劉生杰，朱茂英，顧士彬等.免疫球蛋白G(IgG)三種提取方法比較[J].畜牧獸醫(yī)科學(xué).2007,11(23):38-43.

[7]虞文魁，李維勤等.腹腔感染病人的血小板變化及其臨床意義.[J].中國實(shí)用外科雜志.2005,5(23):292-295.

[8]王慧，宋宏曉，師麗剛等.豬繁殖與呼吸綜合征、豬圓環(huán)病毒2型、豬偽狂犬病病毒混合感染的檢測分析. [J].中國畜牧獸醫(yī).2012,39,(9):173-177.

S858.28

B

1003-8655（2017）02-0003-03

云南省科技惠民計(jì)劃項(xiàng)目(2013CH001)；昆明市科技合作重點(diǎn)項(xiàng)目（20130201AH023027）。

劉永波（1989-），河南人，男，碩士研究生，研究方向?yàn)閯?dòng)物疫病防控及中藥免疫學(xué)， E-mail: 757259269@qq.com。

宋春蓮（1972-），云南晉寧人，女，講師，博士，E-mai1:466569879@qq.com。