梨小食心蟲性誘芯中活性成分的氣相色譜-質(zhì)譜定量分析

杜少芳，劉金龍，樊瑋鑫，楊博凱，荊小院

（1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)文理學(xué)院，山西太谷030801；2.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)分析測試中心，山西太谷030801；3.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西太谷030801）

梨小食心蟲性誘芯中活性成分的氣相色譜-質(zhì)譜定量分析

杜少芳1，劉金龍1，樊瑋鑫2，楊博凱1，荊小院3

（1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)文理學(xué)院，山西太谷030801；2.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)分析測試中心，山西太谷030801；3.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西太谷030801）

采用外標(biāo)法，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)定量分析了梨小食心蟲性誘芯中主要活性成分順-8-十二碳烯醇乙酸酯（Z8-12∶Ac）的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，使用正己烷提取了反口橡皮塞誘芯中的Z8-12∶Ac，在20～100 μg/mL范圍內(nèi)進(jìn)行測定，方法具有良好的線性關(guān)系（R2＝0.988 5），方法檢出限（LOD）為0.014 μg/mL，定量限（LOQ）為0.079 μg/mL，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.74%；測定結(jié)果滿意，有較好的準(zhǔn)確度和精密度，能滿足性誘芯中Z8-12∶Ac的檢測要求。

氣相色譜-質(zhì)譜法；定量分析；梨小食心蟲性誘芯；順-8-十二碳烯醇乙酰酯

梨小食心蟲為世界性蛀果害蟲之一，為害多種仁果類和核果類果樹[1-2]，具有繁殖代數(shù)多、寄主轉(zhuǎn)移的特點[3]，防治較為困難，而目前主要的農(nóng)藥防治容易導(dǎo)致果實質(zhì)量下降、害蟲抗藥性增強(qiáng)、農(nóng)藥殘留超標(biāo)等問題[4-5]。因此，利用專一性高且無毒害的性信息素有效防治害蟲成為研究的熱點[6-8]。在實際應(yīng)用中，用來引誘梨小食心蟲的是性誘芯[9-10]，誘芯中的主要成分是順-8-十二碳烯醇乙酸酯（Z8-12∶Ac）[11]，該化合物易揮發(fā)，在使用過程中容易受氣候因素影響[12-13]，無法準(zhǔn)確判斷性信息素的高效釋放時間和有效釋放時間。為了保持性信息素的穩(wěn)定釋放以及保證監(jiān)測和誘捕高效，性信息素定量分析是很重要的。目前，已有文獻(xiàn)報道，測定手段主要是考察不同誘捕器與誘芯的誘捕效果[14]以及性信息素在新劑型中的釋放速率[15-16]，或者是鑒定性信息素的結(jié)構(gòu)[17-18]，但關(guān)于性信息素的定量分析少有報道。

本試驗采用氣相色譜-質(zhì)譜法測定了性誘芯中活性成分Z8-12∶Ac的含量，旨在為性誘芯在實際應(yīng)用中的含量測定提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

梨小食心蟲性誘劑Z8-12∶Ac標(biāo)準(zhǔn)品（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)文理學(xué)院化學(xué)生態(tài)研究所自主合成，色譜檢驗質(zhì)量分?jǐn)?shù)為92%）；正己烷（色譜純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）；梨小食心蟲誘芯（中國科學(xué)院動物研究所研制生產(chǎn)，含96個單體的橡膠板，單個質(zhì)量0.3～0.5 g）。

1.2 儀器

Trace ISQ氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（Thermo Fisher公司），配液體自動進(jìn)樣器、頂空自動進(jìn)樣器、單四極桿質(zhì)譜儀、EI離子源。

1.3 試驗方法

1.3.1 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用條件TRACE TR-V1氣相色譜柱，30 m，0.32 mmID，1.8 μmFilm。采用恒流模式，載氣為高純氦氣，流量：1.000 mL/min；分流進(jìn)樣，分流比為1∶20.0，分流流量為20 mL/min，進(jìn)樣量為0.2 μL；柱溫為50℃，進(jìn)樣口溫度為270℃；質(zhì)譜測定條件：離子源（EI）溫度為280℃，電子能量70 eV，倍增器電壓1 200 V，掃描質(zhì)量范圍45～500 m/z。

柱溫采用程序升溫：初溫50℃，保持1 min，后以15℃/min的速率升至260℃，保持3 min，再以10℃/min的速率升至270℃，保持1 min。

1.3.2 樣品預(yù)處理隨機(jī)取7個未使用的梨小食心蟲誘芯，用刀片把每個誘芯切成厚度約1 mm的碎片，并全部轉(zhuǎn)移至具塞三角瓶內(nèi)，加入30 mL正己烷，搖勻后放置1～2 h，抽取上清液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾轉(zhuǎn)移至樣品瓶中，旋緊瓶蓋避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 氣相色譜-質(zhì)譜檢測準(zhǔn)確移取適量的梨小食心蟲性誘劑標(biāo)準(zhǔn)品和上述儲備液于樣品瓶中，加正己烷至1 mL，搖勻，進(jìn)樣檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 氣相色譜-質(zhì)譜分析

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀得出的Z8-12∶Ac標(biāo)準(zhǔn)品的氣相色譜-質(zhì)譜圖如圖1所示。從圖1-A可以看出，Z8-12：Ac的保留時間為11.29 min；相應(yīng)質(zhì)譜圖中的主要碎片離子如圖1-B所示，選擇碎片離子43，55，97作為監(jiān)測對象，從工作軟件計算得到順式和反式結(jié)構(gòu)的質(zhì)譜匹配度都為77.5%。

性誘芯樣品液的總離子流色譜圖和相應(yīng)的質(zhì)譜圖如圖2所示。根據(jù)Z8-12∶Ac標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間可以判斷樣品液氣相色譜圖中出峰時間11.29 min的物質(zhì)為Z8-12∶Ac標(biāo)準(zhǔn)品（圖2-A）；在11.29 min處的相應(yīng)質(zhì)譜圖如圖2-B所示，從工作軟件計算得到順式和反式結(jié)構(gòu)的質(zhì)譜匹配度都為30.9%。

2.2 方法考察與性能評價

2.2.1 方法的線性范圍以質(zhì)荷比55碎片離子為定量離子，采用外標(biāo)法定量分析了質(zhì)量濃度分別為20，40，60，80，100 μg/mL的Z8-12∶Ac標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖3所示。圖3結(jié)果表明，在該質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，色譜峰面積與Z8-12∶Ac質(zhì)量濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，其線性方程為A＝0.097 0c－0.137 8（R2＝0.988 5）。

2.2.2 樣品分析與回收率測定準(zhǔn)確移取適量的樣品液，按試驗方法測定Z8-12∶Ac的含量，以0.20，0.40，0.60 μg/mL為添加水平對方法進(jìn)行加標(biāo)回收，每個水平平行測定3次，取平均值，結(jié)果如表1所示。經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜儀檢測，未加標(biāo)樣的樣品液中Z8-12∶Ac的含量為0.132 μg/mL，按照回收率的計算方法“加標(biāo)回收率＝（加標(biāo)試樣測定值－試樣測定值）/加標(biāo)量×100%”，測得3個添加水平的平均加標(biāo)回收率為99.7%～107.3%（表1）。

表1 樣品中Z8-12∶Ac含量的測定結(jié)果（n＝5）

2.2.3 方法的檢出限（LOD）、定量限（LOQ）、精密度（RSD）測定以Z8-12∶Ac標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣，檢出限（LOD）根據(jù)S/N＝3計算，為0.014 μg/mL；定量限（LOQ）根據(jù)S/N＝10計算，為0.079 μg/mL；精密度（RSD）以相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，對20 μg/mL的Z8-12∶Ac標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行分析，重復(fù)測定6次，為1.74%。

3 結(jié)論與討論

本研究建立了利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測定梨小食心蟲性誘芯中Z8-12∶Ac含量的方法，采用外標(biāo)法定量分析了Z8-12∶Ac，確定了方法的檢出限和定量限分別是0.014，0.079 μg/mL，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.74%，加標(biāo)回收率為99.7%～107.3%。方法具有較高的準(zhǔn)確度和靈敏度，可以測定常用梨小食心蟲性誘芯中Z8-12∶Ac的含量。

由于性信息素易揮發(fā)，使得性誘芯在實際應(yīng)用中的釋放量難以控制，不能很好地確定其高效釋放時間和使用時限。因此，人們主要著眼于性信息素新劑型的制備[19]，以降低環(huán)境因素的干擾，使性信息素能均勻緩慢地釋放。目前，關(guān)于性信息素產(chǎn)品中性信息素定量分析的文獻(xiàn)報道很少，本研究首次采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法定量分析了梨小食心蟲性誘芯中活性成分Z8-12∶Ac含量，用于性誘芯在使用過程中的含量測定。氣相色譜-質(zhì)譜可以很好地對測定物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析，靈敏度也較高，但是儀器使用成本較高，操作較為麻煩，不適于作為梨小食心蟲性誘芯中主要成分的常規(guī)檢測方法。因此，需進(jìn)一步研究成本低、操作更為簡便的定量分析方法。

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Quantitative Analysis of Active Constituent ofGrapholitha molestaBusck Pheromone Lure by Gas Chromatography-mass Spectrometry

DUShaofang1，LIUJinlong1，F(xiàn)ANWeixin2，YANGBokai1，JINGXiaoyuan3
（1.College ofArts and Sciences&Institute ofChemical Ecology，Shanxi Agricultural University，Taigu 030801，China；2.Analytical and TestingCenter，Shanxi Agricultural University，Taigu 030801，China；3.College ofLife Science，Shanxi Agricultural University，Taigu 030801，China）

The（Z）-8-dodecylene-1-ol acetate（Z8-12∶Ac）which is the major components of Grapholitha molesta Busck sex attractant lure was extracted by n-hexane and was determined by gas chromatography-mass spectrometry.Linearity was obeyed in the rangeof20-100μg/mLofZ8-12∶Acwiththecorrelationcoefficients（R2）was0.9885ofthemethod.Thedetectionlimitwas0.014 μg/mL and the quantitation limit was 0.079 μg/mL.The relative standard deviation was 1.74%.The determination results are satisfied,and has good accuracyand precision tomeet the requirements ofthe Z8-12∶Ac analysis in sexattractant lure products.

gas chromatography-mass spectrometry（GC-MS）;quantitative analysis;Grapholitha molesta Busck pheromone lure core;（Z）-8-dodecylene-1-ol acetate

10.3969/j.issn.1002-2481.2017.05.38

O657.7＋1

：A

：1002-2481（2017）05-0829-04

2017-01-18

山西農(nóng)業(yè)大學(xué)引進(jìn)人才科研啟動項目（2012YJ12）

杜少芳（1992-），女，山西忻州人，在讀碩士，研究方向：生物化學(xué)分析。劉金龍為通信作者。