多胎多浪羊群胚胎移植擴(kuò)繁試驗(yàn)

張國(guó)庭，霍 飛，王遼遠(yuǎn)，斯依提，申明明，陳靜波*（新疆畜牧科學(xué)院畜牧研究所，新疆 烏魯木齊 830000；新疆喀什地區(qū)畜禽繁育改良站，新疆 喀什 844000）

多胎多浪羊群胚胎移植擴(kuò)繁試驗(yàn)

張國(guó)庭1，霍 飛1，王遼遠(yuǎn)2，斯依提2，申明明2，陳靜波1*
（1新疆畜牧科學(xué)院畜牧研究所，新疆 烏魯木齊 830000；2新疆喀什地區(qū)畜禽繁育改良站，新疆 喀什 844000）

（目的）綿羊多胎基因在多浪羊品種群體中攜帶率較低，為增加攜帶多胎基因多浪羊群的數(shù)量，提高多浪羊的繁殖率和養(yǎng)殖效益，本試驗(yàn)選擇攜帶多胎基因的多浪羊作為供體進(jìn)行了胚胎移植擴(kuò)繁試驗(yàn)。（方法）選取經(jīng)檢測(cè)攜帶有多胎基因的種公羊4只、母羊19只，通過(guò)同期發(fā)情、超數(shù)排卵和手術(shù)法采卵，腹腔鏡移植技術(shù)給普通生產(chǎn)群的多浪羊受體移植。（結(jié)果）供體平均生產(chǎn)可用胚胎9.26枚（176/19），鮮胚移植受胎率為59.5%，另外制作A級(jí)冷凍胚胎57枚。（結(jié)論）結(jié)果表明胚胎移植技術(shù)能夠有效地用于攜帶有多胎基因羊繁殖生產(chǎn)，達(dá)到迅速擴(kuò)群的目的。

多浪羊；多胎基因；胚胎移植

10.16863/j.cnki.1003-6377.2017.02.005

多浪羊體格大，肉用型明顯，體質(zhì)結(jié)實(shí)，具有增重快、羔羊可當(dāng)年育肥出欄的優(yōu)良特性，還具有耐干旱、耐熱、抗逆性好、抗病力強(qiáng)、適應(yīng)性好等特點(diǎn)，并對(duì)荒漠化、半荒漠化惡劣生態(tài)環(huán)境具有較好的適應(yīng)性；其所產(chǎn)羊肉色澤純正，肉質(zhì)鮮嫩多汁，無(wú)膻味，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高[1]。多浪羊是新疆優(yōu)秀的地方良種肉用羊品種，但是雙羔率相對(duì)較低,作為肉羊品種產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)效益受到限制。

BMPR-IB基因在多胎多浪羊中存在3種基因型：野生型++，突變雜合型B+和突變純合型BB；基因型頻率分別為：++基因型0.741，B+基因型0.254，BB基因型0.005；等位基因頻率B和+分別為0.132和0.868［2］。B+和BB基因型比例高，多浪羊產(chǎn)羔數(shù)增加，反之，產(chǎn)羔數(shù)減少。用多胎多浪羊種群進(jìn)行羊肉生產(chǎn)，以可提高母羊的繁殖率，減少飼養(yǎng)繁殖母羊的數(shù)量；因此多胎多浪羊具有良好的發(fā)展前景。

新疆畜牧科學(xué)院畜牧研究所一直從事馬、牛、羊等家畜胚胎移植［2］，本次試驗(yàn)旨在將胚胎移植技術(shù)應(yīng)用于多胎多浪羊繁殖生產(chǎn)，以達(dá)到迅速擴(kuò)繁多胎多浪羊群的目的

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

選取通過(guò)基因檢測(cè)攜帶有多胎基因的多浪羊母羊19只為供體，其中純合子母羊2只，雜合子母羊17只，年齡為1.5歲至2.5歲；通過(guò)基因檢測(cè)無(wú)多胎基因的150只多浪羊生產(chǎn)母羊?yàn)槭荏w，所選羊只健康，無(wú)傳染病和繁殖疾病。

1.2 公母羊飼養(yǎng)管理

公羊飼喂混合精料量為玉米800 g、豆粕600 g、70 g預(yù)混料和食鹽15 g，分早晚兩次飼喂，苜蓿干草和麥草自由采食，雞蛋4個(gè)，胡蘿卜1 kg，分早晚兩次飼喂，自由飲水。

供體母羊飼喂混合精料量為玉米800 g、麩皮200 g、50 g預(yù)混料和食鹽10 g，分早晚兩次飼喂，麥草自由采食，中午自由采食苜蓿干草，自由飲水。

受體母羊飼喂混合精料量為玉米300 g、麩皮100 g，分早晚兩次飼喂，麥草自由采食，自由飲水。

1.3 試驗(yàn)藥品和儀器

氯前列烯醇（PG-cl）和促排-3號(hào)（GnRH analogy）激素藥品均由寧波三生藥業(yè)公司生產(chǎn);促卵泡素（FSH）有兩種，一種為寧波三生藥業(yè)公司生產(chǎn)，另一種為加拿大生產(chǎn)，已過(guò)期，冷凍保存。

B超儀為日本Aloka SSD-500B-型超聲波診斷儀，5.0MHZ線陣探頭；內(nèi)窺鏡由德國(guó)生產(chǎn)。

1.4 處理方法

供體發(fā)情后9~12 d開(kāi)始超數(shù)排卵。10只供體用加拿大生產(chǎn)冷凍保存的過(guò)期藥品FSH1.2倍劑量超排（總劑量12 mg），9只供體用寧波三生藥業(yè)生產(chǎn)的FSH1倍劑量超排（總劑量10 mg）。發(fā)情后12 h公羊首次配種，同時(shí)注射促排-3號(hào)12.5 mg，再間隔12 h公羊第二次配種。發(fā)情當(dāng)日為第0 d，第6 d沖胚胎移植。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

各數(shù)據(jù)之間差異顯著性檢驗(yàn)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行，試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果均用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié) 果

獲得可用胚胎176枚，鮮胚移植119只受體，冷凍胚胎 57枚，平均出可用胚胎9.26枚，移植妊娠率59.50%。

2只純合子母羊體況瘦弱，未沖出可用胚胎。

加拿大生產(chǎn)冷凍保存的過(guò)期藥品FSH1.2倍劑量和寧波三生藥業(yè)生產(chǎn)的FSH1倍劑量超排效果見(jiàn)表1。

表1 不同激素的超排效果

不同體況供體超排后黃體與沖出可用胚胎數(shù)比較結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同體況供體超排效果

供體年齡對(duì)超排效果的影響見(jiàn)表3。

表3 年齡對(duì)超排效果的影響

供體體重對(duì)超排效果的影響見(jiàn)表4。

表4 供體體重對(duì)超排效果的影響

3 討 論

3.1 多浪羊攜帶有多胎基因可能是影響超排效果的因素之一

大量的生產(chǎn)實(shí)踐證明，綿羊經(jīng)過(guò)同期發(fā)情超數(shù)排卵后，每只供體平均沖出可用胚胎5~7枚。2011年，在新疆溫宿縣每只黑薩?？搜蚱骄鶝_出可用胚胎7.5枚，2012年，在新疆阿勒泰每只阿勒泰羊平均沖出可用胚胎5.3枚，2014年，在新疆伊吾縣每只黑頭杜泊羊平均沖出可用胚胎6.2枚。本次試驗(yàn)中，每只攜帶有多胎基因的多浪羊供體平均沖出可用胚胎9.26枚，較以往超排獲得較高的出胚率。供體綿羊沖出可用胚胎的數(shù)量受到多種因素的影響，諸如營(yíng)養(yǎng)狀況、年齡和公羊精夜品質(zhì)等，攜帶有多胎基因是否是影響超排效果的因素有待于進(jìn)一步驗(yàn)證。

3.2 多浪羊母羊攜帶有純合子基因可能影響體況

通過(guò)基因檢測(cè)所選19只多浪羊供體母羊，2只攜帶有純合子基因，其余的攜帶有雜合子基因。2只純合子基因母羊，1只1歲，1只2歲。在同一羊群同樣飼養(yǎng)管理?xiàng)l件下，2只純合子母羊身體瘦弱，超數(shù)排卵后未沖出可用胚胎，其余雜合子母羊體況明顯優(yōu)于2只純合子母羊，且每只雜合子母羊均沖出可用胚胎。本次試驗(yàn)中，由于攜帶有純合子基因母羊數(shù)量少，攜帶有純合子基因是否是影響母羊體況和超數(shù)排卵效果的一個(gè)因素有待于在以后的試驗(yàn)中繼續(xù)驗(yàn)證。

3.3 不同來(lái)源激素和超排劑量影響超排效果

本次試驗(yàn)中，寧波三生藥業(yè)生產(chǎn)的FSH1倍劑量相較加拿大生產(chǎn)冷凍保存的過(guò)期藥品FSH1.2倍劑量超排生成平均黃體數(shù)和平均可用胚胎數(shù)分別提高1.34和1.61。此次試驗(yàn)表明，F(xiàn)SH過(guò)期后在冰箱中冷凍保存，雖然仍具有良好的藥效，但是效力有所下降，超排后生成黃體數(shù)和可用胚胎數(shù)有所降低，從生產(chǎn)胚胎的效益和超排藥物的經(jīng)濟(jì)成本核算來(lái)看，在超數(shù)排卵、胚胎移植中盡量避免使用過(guò)期超排藥品，而在生產(chǎn)中為充分利用藥品，可用過(guò)期超排藥品治療家畜卵巢靜止、排卵延遲等卵巢疾病，誘導(dǎo)家畜發(fā)情。

3.4 母羊體況影響超排效果

在胚胎生產(chǎn)、胚胎移植中供體母羊在不同的飼養(yǎng)管理?xiàng)l件下體況差異較大，即使在相同的飼養(yǎng)條件下，不同個(gè)體間體況也有差異。從本次試驗(yàn)可以看出，體況良好和中等的母羊與體況較差的母羊生成黃體數(shù)和出胚胎數(shù)差異顯著。膘情良好、膘情中等和膘情差的母羊生成黃體數(shù)和生產(chǎn)可用胚胎數(shù)分別為19.22±6.61和12.44±7.32，15.80±5.54和10.00±4.74，8.60±2.97和2.80±4.65。母羊膘情好，出可用胚胎數(shù)多，母羊膘情差，出可用胚胎數(shù)少。當(dāng)母羊膘情處于中等以下水平時(shí)，沖不出胚胎的母羊比例大幅增加，胚胎生產(chǎn)成本相對(duì)增加。供體母羊每做一次沖卵手術(shù)，子宮粘連的幾率增加，影響下次沖卵手術(shù)，因而母羊膘情較差時(shí)不建議做超數(shù)排卵和胚胎移植。

3.5 母羊年齡影響超排效果

本次試驗(yàn)中，青年母羊和成年母羊通過(guò)超數(shù)排卵后生成的黃體數(shù)和獲得可用胚胎數(shù)分別為14.92± 7.71，8.00±7.31和15.16±5.04，12.00±6.35。成年母羊較青年母羊平均每只可用胚胎數(shù)增加4枚，在胚胎生產(chǎn)中對(duì)供體羊年齡的選擇具有指導(dǎo)意義。動(dòng)物對(duì)激素的敏感性隨著年齡的增長(zhǎng)而提高，但是高齡動(dòng)物超排效果較差[5]。丁紅[6]等研究顯示，母羊在2.5～4.5歲之間，隨著年齡的增長(zhǎng)可用胚數(shù)增加。。洪瓊花[7]等用3／4劑量的FSH相同的超排方案對(duì)育成羊進(jìn)行超排，結(jié)果顯示，經(jīng)產(chǎn)羊平均回收胚胎數(shù)明顯高于育成羊。周歲齡德國(guó)美利奴羊?qū)Τ琶舾?，較成年羊超排效果略差[8]。體內(nèi)胚胎生產(chǎn)中經(jīng)常遇到一種現(xiàn)象，青年母羊沖出未受精卵和退化胚胎較多，而成年母羊沖出未受精卵和退化胚胎較少，可能原因是外源激素更易擾亂青年母羊生殖激素水平，而對(duì)成年母羊影響較小，因而成年母羊更易提供胚胎發(fā)育的良好條件。

3.6 母羊體重影響超排效果

相同的飼養(yǎng)管理?xiàng)l件下，通常成年母羊體重大，體況好，青年母羊體重小，體況稍差，通常情況下，個(gè)體體重與體況呈正相關(guān)關(guān)系。青年母羊攝取的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)一部分用于自身的生長(zhǎng)需要，一部分用來(lái)維持體況，因而青年母羊體況稍差。同時(shí)，成年母羊有穩(wěn)定的激素水平，因而超數(shù)排卵后獲得可用胚胎較多。

3.7 營(yíng)養(yǎng)狀況影響超排效果

經(jīng)過(guò)近些年來(lái)多批次超排羊出胚胎的結(jié)果來(lái)看，供體母羊在良好的營(yíng)養(yǎng)狀況時(shí)出胚胎數(shù)量多，質(zhì)量好，在低營(yíng)養(yǎng)狀況時(shí)，出胚胎數(shù)量少，質(zhì)量差；在超數(shù)排卵前供體注射適宜劑量的維生素ADE和亞硒酸鈉維生素E有助于胚胎數(shù)量和質(zhì)量的提高。王峰等在2003年做不同營(yíng)養(yǎng)狀況下的牛超排試驗(yàn)，供體牛第一組259頭，飼喂青干草和每天補(bǔ)飼精料4 kg；第二組238頭，飼喂低營(yíng)養(yǎng)的玉米稈，每天補(bǔ)飼只有2 kg左右。結(jié)果表明：第一組的平均可用胚數(shù)(5.90±3.01)枚，第二組平均可用胚數(shù)(3.48±2.97)枚，兩者之間差異極顯著(P＜0.01)[4]。

本次試驗(yàn)提示，體況好、體重大的成年母羊較體況差、體重小的青年母羊經(jīng)超數(shù)排卵后獲得較多的可用胚胎；在胚胎生產(chǎn)中應(yīng)選用保存良好的未過(guò)期超排藥品；超數(shù)排卵、胚胎移植技術(shù)能夠迅速增加多浪羊多胎多羔基因，達(dá)到迅速擴(kuò)群的目的。

[1]金森.多浪羊細(xì)管冷凍精液和超數(shù)排卵的研究[D]．烏魯木齊：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文，2008.

[2]王旭.多胎多浪羊及其F1高繁殖力候選基因研究[D]．烏魯木齊：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文，2010.

[3]龔成潤(rùn)．新疆畜牧科學(xué)院志[M]．烏魯木齊：新疆人民出版社，1992．

[4]王峰，黃春華，張東，等.多種因素對(duì)牛超數(shù)排卵效果影響的研究[J]．中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2013，（17）：19-24.

[5]李建棟，柏學(xué)進(jìn)，吳鐵榮，等．淺析影響奶牛超排效果四項(xiàng)因素的研究[J]．養(yǎng)殖技術(shù)顧問(wèn)，1997，(03)：7-9．

[6]丁紅，瑪依拉，楊冬梅，等．促卵泡素和年齡對(duì)綿羊超數(shù)排卵效果的影響[J]中國(guó)畜牧雜志，1998，（03）：18-20．

[7]洪瓊花，邵慶勇，馬興躍，等．山羊超數(shù)排卵與胚胎移植技術(shù)的研究與應(yīng)用[J]．生物技術(shù)通報(bào)，2004，(4)：39～43．

[8]阿依努爾·亞森，董紅，陳靜波，等.胚胎移植在德國(guó)美利奴青年羊應(yīng)用的初步研究[J].草食家畜2012，（4）：34-36.

Embryo Transfer in Dao-lang Sheep

ZHANG Guo-ting1,HUO Fei1,WANG Liao-yuan2,SIYITI2,SHEN Ming-ming2,CHEN Jing-bo1*
（1.Institute of Animal Science,Xinjiang Academy of Animal Science,Urumqi 830000,China;
2.Kashgar Livestock and Poultry Improvement Station,Kashgar 844000,China）

（object）The multiple-fetus gene of sheep has low carrying rate in dao-lang sheep breeds population,，In this study,dao-lang sheeps carrying multiple-fetus genes were selected as donor to carry out embryo transfer and propagation experiments to increase the number of dao-lang sheep group carrying multiple-fetus genes and,Improve the reproduction rate of dao-lang sheep and Breeding benefits,（method）Four rams and 19 ewes with multiple-fetus genes were selected by gene testing.Ovums obtained by Synchronous estrus and superovulation was transferred to dao-lang sheep recipients.in common yielding group by surgery collecting oyums and Laparoscopic transplantation technique.(Results)Average Donor producted 9.26 (176/19)embryos,The Pregnancy,rate of fresh embryo transfer was 59.5%,and 57 A-grade frozen embryos was producted.（conclusion）The result shows that the embryo transfer technique can be effectively applied in breeding production of sheep with multiple-fetus genes To achieve the purpose of rapid expansion group.

duo-lang sheep；multiple-fetus gene;embryo transfer

S814.8

A

1003－6377（2017）02－0023-05

新疆農(nóng)財(cái)項(xiàng)目（2013年）“多浪羊多胎（多羔）新品系培育聯(lián)合育種計(jì)劃”

張國(guó)庭（1976-），男，助理研究員，碩士，主要從事家畜繁殖與胚胎工程研究。E-mail:zhangguoting3@sina.com

陳靜波（1956-），男，研究員，博士，主要從事家畜繁殖研究。E-mail:chenjb126@126.com

2016-12-11，

2017-01-17