枯草芽孢桿菌聯(lián)合苜蓿多糖對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、血液指標(biāo)及糞和腸道微生物區(qū)系的影響

郭軍蕊 董曉芳 佟建明(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京100193)

枯草芽孢桿菌聯(lián)合苜蓿多糖對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、血液指標(biāo)及糞和腸道微生物區(qū)系的影響

郭軍蕊 董曉芳*佟建明
(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京100193)

本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)用對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、血液指標(biāo)及糞和腸道微生物區(qū)系的影響，并觀察枯草芽孢桿菌聯(lián)合苜蓿多糖相較于枯草芽孢桿菌單獨(dú)使用是否具有更優(yōu)的效果。試驗(yàn)選用288只27周齡健康海蘭褐蛋雞隨機(jī)分為4個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12只雞。1組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧；2～4組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加1.0×107CFU/g枯草芽孢桿菌、1.0×107CFU/g枯草芽孢桿菌+250 mg/kg苜蓿多糖、1.0×107CFU/g枯草芽孢桿菌+4 000 mg/kg苜蓿多糖，試驗(yàn)期為24周。結(jié)果表明：1)各組間采食量、蛋重、只產(chǎn)蛋量及死淘率無(wú)顯著差異(P>0.05)，但與對(duì)照組相比，3、4組第9～16周的產(chǎn)蛋率顯著提高(P<0.05)，2、3、4組第9～16、17～24、1～24周的料蛋比顯著降低(P<0.05)。2)飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋殼顏色、蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、蛋形指數(shù)、蛋白高度和哈夫單位無(wú)顯著改善作用(P>0.05)，但顯著提高第1、2、4、12周蛋黃顏色(P<0.05)。3)飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)第2、3、4、12、16、20周血清葡萄糖和第2、3、8、12、20周血清尿素含量有顯著改善作用(P<0.05)，且3組第2、3、4、8周和4組第3、4、8、20周血清葡萄糖含量顯著高于2組(P<0.05)；飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用顯著提高血液白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中間細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)目(P<0.05)，3組第1、3、4、8、12周和4組第3周中間細(xì)胞數(shù)目顯著高于2組(P<0.05)，3組第1、3、4、8周和4組第1、3、8周組中性粒細(xì)胞數(shù)目顯著高于2組(P<0.05)；飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用顯著提高了第3、16、24周血小板數(shù)目(P<0.05)。飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用顯著提高血清第16周免疫球蛋白A，第1和4周免疫球蛋白G和第2、4、8周免疫球蛋白M含量(P<0.05)，且3、4組優(yōu)于試驗(yàn)2組(P<0.05)。4)飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用顯著降低了糞中大腸桿菌數(shù)量和盲腸大腸桿菌/乳酸菌值(P<0.05)，顯著提高了空腸、回腸和盲腸雙歧桿菌數(shù)量(P<0.05)。綜上，飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用能夠改善蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)，降低糞和盲腸大腸桿菌數(shù)量，增加腸道雙歧桿菌數(shù)量，且聯(lián)合使用效果在改善血清生化指標(biāo)、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能方面較單獨(dú)使用枯草芽孢桿菌有一定優(yōu)勢(shì)。

蛋雞；枯草芽孢桿菌；苜蓿多糖；生產(chǎn)性能；蛋品質(zhì)；血液指標(biāo)；微生物區(qū)系

隨著畜牧業(yè)的發(fā)展，畜禽養(yǎng)殖的集約化程度越來(lái)越高，且抗生素在動(dòng)物飼糧中的應(yīng)用已被許多國(guó)家明令禁止，在這個(gè)過(guò)程中，畜禽將受到養(yǎng)殖環(huán)境與疾病的雙重壓力。因此，尋找安全有效的飼料添加劑引起人們的廣泛關(guān)注。益生菌是生產(chǎn)中使用較廣泛的添加劑之一，它可以改善腸道菌群[1]，增強(qiáng)機(jī)體免疫力[2]，提高動(dòng)物生產(chǎn)性能[3-4]。益生元也被證明在改善宿主健康方面具有重要作用。目前，可選擇性刺激乳酸菌和雙歧桿菌生長(zhǎng)的低聚糖已被人們所熟知；關(guān)于多糖也被大量研究證實(shí)在改善生長(zhǎng)性能[5]、抗氧化[6-7]、促進(jìn)有益菌生長(zhǎng)[8]及免疫調(diào)節(jié)[9]等方面具有重要作用。雖然關(guān)于益生菌與低聚糖聯(lián)合使用在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用已有較多報(bào)道，但關(guān)于益生菌與多糖之間的協(xié)同作用在蛋雞上的研究較為少見。本試驗(yàn)旨在探討枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、血液指標(biāo)及糞和腸道微生物區(qū)系的影響，并觀察枯草芽孢桿菌與苜蓿多糖是否具有協(xié)同作用，兩者聯(lián)合使用相較于枯草芽孢桿菌單獨(dú)使用是否可以產(chǎn)生更優(yōu)的效果，以期為其在蛋雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選用288只27周齡產(chǎn)蛋率(92.2%、91.2%、91.7%和92.3%)和體重(1.658～1.679 kg)相近的健康海蘭褐殼蛋雞，隨機(jī)分為4組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12只雞。1組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧，其參照NRC(1994)營(yíng)養(yǎng)需要配制，基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。2～4組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加1.0×107CFU/g枯草芽孢桿菌、1.0×107CFU/g枯草芽孢桿菌+250 mg/kg苜蓿多糖、1.0×107CFU/g枯草芽孢桿菌+4 000 mg/kg苜蓿多糖。試驗(yàn)期為24周。

1.2 試驗(yàn)材料

菌種選用枯草芽孢桿菌CGMCC 1.921，購(gòu)自中國(guó)普通微生物菌種保藏中心，由滄州華雨藥業(yè)有限公司生產(chǎn)制備，活菌數(shù)≥1.0×1010CFU/g；苜蓿多糖成分：多糖含量為24.28%，黃酮含量為2.90%，皂苷含量為3.47%，粗蛋白質(zhì)含量為15.55%，粗灰分含量為24.35%。

1.3 飼養(yǎng)管理

采用2層籠養(yǎng)，每個(gè)重復(fù)由相鄰2籠組成(長(zhǎng)×寬×高為80 cm×60 cm×50 cm)，每籠6只雞。每日飼喂3次，自由采食；乳頭式飲水器，自由飲水。采用16 h(06：00—22：00)光照，自動(dòng)控溫、供暖、通風(fēng)。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)預(yù)混料每千克飼糧提供The premix provided the following per kg of diet：VA 8 000 IU，VD33 000 IU，VE 15 IU，VK32.0 mg，VB12.0 mg，VB24.0 mg，VB64.0 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 12 mg，煙酸 nicotinic acid 40 mg，生物素 biotin 0.1 mg，葉酸 folic acid 1.0 mg，VB120.01 mg，F(xiàn)e (as ferrous sulfate) 30 mg，Cu (as copper sulfate) 6.25 mg，Zn (as zinc sulfate) 70 mg，Mn (as manganese sulfate) 63.6 mg，I (as potassium iodide) 0.4 mg，Se (as sodium selenite) 0.2 mg。

2)計(jì)算值 Calculated values。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

試驗(yàn)期間以重復(fù)為單位記錄每天產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重、死淘雞只數(shù)，每周結(jié)料，稱取并記錄剩余料重，計(jì)算產(chǎn)蛋率、采食量、蛋重、料蛋比、只產(chǎn)蛋量和死淘率。

1.4.2 蛋品質(zhì)

試驗(yàn)開始前(0周，下同)及試驗(yàn)第1、2、3、4、8、12、16、20和24周，采集當(dāng)天所有雞蛋進(jìn)行測(cè)定。采用蛋殼顏色測(cè)定儀測(cè)定蛋殼顏色(QCR，TSS公司，英國(guó))；蛋殼強(qiáng)度測(cè)試儀測(cè)定蛋殼強(qiáng)度(Model-Ⅲ，Robotmation公司，日本)；采用蛋殼厚度測(cè)定儀測(cè)定蛋殼厚度(Model P-1，Ozaki MFG公司，日本)；采用卵形系數(shù)測(cè)定器測(cè)定蛋形指數(shù)(NFN384，F(xiàn)HK公司，日本)；采用蛋品質(zhì)測(cè)定儀測(cè)定蛋白高度、哈氏單位及蛋黃顏色(EMT-2500，Robotmation公司，日本)。

1.4.3 血液指標(biāo)

試驗(yàn)開始前及試驗(yàn)第1、2、3、4、8、12、16、20和24周，以重復(fù)為單位隨機(jī)選取4只雞，采血前禁食12 h，自由飲水。通過(guò)翅下靜脈采集血液于普通真空采血管中，靜置待有少量血清析出后，2 000 r/min離心10 min，取上清液于EP管中待測(cè)。用日本東芝TBA-120FR全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性及總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)、葡萄糖(GLU)、尿素(UREA)、尿酸(UA)、肌酐(CREA)、甘油三酯(TG)和膽固醇(CHOL)含量的測(cè)定。

通過(guò)翅下靜脈采集血液分別于5 mL的乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝真空采血管和2 mL檸檬酸鈉抗凝真空采血管，輕輕混勻。采用電阻抗法，由江西特康全自動(dòng)三分群血細(xì)胞分析儀(TEK-Ⅱ mini)進(jìn)行白細(xì)胞(WBC)、淋巴細(xì)胞(LYM)、中間細(xì)胞(MID)、中性粒細(xì)胞(GRA)、紅細(xì)胞(RBC)數(shù)目及紅細(xì)胞壓積(HCT)、血紅蛋白(HGB)含量和血小板(PLT)數(shù)目的測(cè)定；采用魏氏法，由北京普利生XC-40B全自動(dòng)紅細(xì)胞沉降率測(cè)定儀進(jìn)行紅細(xì)胞沉降率(ESR)的測(cè)定。

血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)含量采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，按照上海朗頓生物科技有限公司提供的試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.4.4 微生物區(qū)系檢測(cè)

試驗(yàn)開始前及試驗(yàn)第1、2、3、4、8、12、16、20和24周，每個(gè)重復(fù)選取6只雞，收集新鮮糞便，采用平板計(jì)數(shù)法對(duì)糞便中大腸桿菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。大腸桿菌采用伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基計(jì)數(shù)。

第24周末，每重復(fù)選取1只雞(每組6只)，頸靜脈放血法處死，打開腹腔，結(jié)扎空腸、回腸和盲腸并剪下，放置于50 mL滅菌離心管中，立即回實(shí)驗(yàn)室于超凈臺(tái)分別采集空腸、回腸、盲腸內(nèi)容物于滅菌EP管，采用平板計(jì)數(shù)法對(duì)其乳酸菌、雙歧桿菌、大腸桿菌、腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、彎曲桿菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，并計(jì)算大腸桿菌/乳酸菌值。乳酸菌采用MRS培養(yǎng)基計(jì)數(shù)，雙歧桿菌采用TPY瓊脂培養(yǎng)基計(jì)數(shù)，大腸桿菌采用伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基計(jì)數(shù)，腸球菌采用Pfizer腸球菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基計(jì)數(shù)，產(chǎn)氣莢膜梭菌采用胰月示-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸(TSC)瓊脂培養(yǎng)基計(jì)數(shù)，彎曲桿菌采用改良Camp-BAP氏瓊脂基礎(chǔ)計(jì)數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用one-way ANOVA方差分析和最小顯著差數(shù)(LSD)法進(jìn)行多重比較，顯著水平設(shè)為P<0.05，試驗(yàn)數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。

2 結(jié)果與分析

2.1 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由圖1可知，飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋重、采食量、只產(chǎn)蛋量及死淘率無(wú)顯著影響(P>0.05)；對(duì)于產(chǎn)蛋率，3、4組第9～16周顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，但與2組差異不顯著(P>0.05)；對(duì)于料蛋比，2、3、4組第9～16、17～24及1～24周顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，而3個(gè)試驗(yàn)組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。上述結(jié)果說(shuō)明，在生產(chǎn)性能方面，飼糧中添加枯草芽孢桿菌聯(lián)合苜蓿多糖沒(méi)有產(chǎn)生優(yōu)于單獨(dú)使用枯草芽孢桿菌的效果。

2.2 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響

由圖2可知，飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋殼顏色無(wú)顯著影響(P>0.05)。對(duì)于蛋殼厚度，2、3、4組第1周顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；2組第3周顯著高于對(duì)照組和4組(P<0.05)，與3組差異不顯著(P>0.05)。對(duì)于蛋殼強(qiáng)度，2組第8周顯著高于對(duì)照組和4組(P<0.05)，3組與對(duì)照組和2組差異不顯著(P>0.05)。對(duì)于蛋形指數(shù)，2組第20周顯著低于3組(P<0.05)，且2、3組與4組和對(duì)照組均無(wú)顯著差異(P>0.05)。2、3組第4周的哈夫單位和蛋白高度顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，且2組顯著高于3組(P<0.05)，并都顯著低于4組(P<0.05)；2、3組第8周哈夫單位顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，與4組差異不顯著(P>0.05)；3組第24周哈夫單位顯著高于2、4組(P<0.05)，與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0.05)。對(duì)于蛋黃顏色，試驗(yàn)開始前2、3、4組顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，且4組顯著高于3組(P<0.05)，顯著低于2組(P<0.05)；2、3、4組第1周顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，且3組顯著高于4組(P<0.05)，與2組無(wú)顯著差異(P>0.05)；2、4組第2周顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，與3組無(wú)顯著差異(P>0.05)；2、3、4組第4周顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，且3個(gè)試驗(yàn)組間無(wú)顯著差異(P>0.05)；2、3、4組第12周顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，且2組顯著高于3、4組(P<0.05)；3組第20周顯著低于其他各組(P<0.05)。由此可知，枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)改善蛋黃顏色有一定作用，但兩者聯(lián)合使用較枯草芽孢桿菌單獨(dú)使用優(yōu)勢(shì)不明顯。

2.3 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞血常規(guī)指標(biāo)的影響

由圖3可知，對(duì)于RBC數(shù)目，2(第2、12周)、3(第1、3周)、4(第1、2、3、12周)組顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，且4組第3周顯著低于2、3組(P<0.05)，其他時(shí)間3、4組與2組無(wú)顯著差異(P>0.05)；2組第16、20周顯著高于其他各組(P<0.05)。對(duì)于HCT，2(第1、2、3、12周)、3(第1周)、4(第1、2、3、12周)組顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，且4組第3周顯著低于2、3組(P<0.05)；2、3組第20周顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，而4組顯著低于2組(P<0.05)。對(duì)于HGB含量，2(第1、3、12周)、3(第8、20周)、4(第1、2、3、8、12、16、20周)組顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，2(第16周)、3(第4周)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；3(第16周)、4(第2、8、16、20周)組顯著低于2組(P<0.05)；3組第4周顯著高于2組(P<0.05)。對(duì)于PLT數(shù)目，2(第3、16、24周)、3(第3、24周)、4(第3、24周)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。對(duì)于WBC數(shù)目，2(第1、3、4、8、16、20、24周)、3(第8、12、20、24周)、4(第0、2、16、20、24周)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；3(第1、3、4、16、20周)、4(第1、3、4、20周)組顯著低于2組(P<0.05)；3(第12周)、4(第0、2、12周)組顯著高于2組(P<0.05)。對(duì)于LYM數(shù)目，2(第3、4、8、20、24周)、3(第20、24周)、4(第20、24周)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，3(第3、4、20周)、4(第3、4、8、20周)組顯著低于2組(P<0.05)。對(duì)于MID數(shù)目，2(第0、12、16、20、24周)、3(第1、3、4、8、12、16、24周)、4(第0、1、3、12、16周)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，3(第1、3、4、8、12周)、4(第0、3周)組顯著高于2組(P<0.05)；3、4組第16周顯著低于2組(P<0.05)。對(duì)于NEU數(shù)目，2(第0、12、16、24周)、3(第1、4、8、12、16、20、24周)、4(第8、12、16、24周)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，3(第1、3、4、8周)、4(第1、3、8周)組顯著高于2組(P<0.05)。對(duì)于ESR，2(第3、20周)、3(第8、20周)、4(第3、8、20、24周)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；2組第3周顯著高于其他各組(P<0.05)。由上可知，與單獨(dú)添加枯草芽孢桿菌相比，枯草芽孢桿菌與苜蓿多糖聯(lián)合使用顯著提高了血液MID、NEU數(shù)目，而對(duì)其他血液指標(biāo)沒(méi)有產(chǎn)生顯著影響。

2.4 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

由圖4可知，飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)血清ALT活性和TG含量無(wú)顯著影響(P>0.05)。對(duì)于AST活性，2、4組第8周顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，與3組無(wú)顯著差異(P>0.05)。對(duì)于TP和GLB含量，3、4組第3周顯著高于其他各組(P<0.05)。對(duì)于ALB含量，3組第4周顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，且4組顯著低于3組(P<0.05)。對(duì)于ALB/GLB值，2、3、4組第2周與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)；3、4組第3周顯著低于其他各組(P<0.05)；4組第4周顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。對(duì)于TBIL含量，3組第1周顯著高于其他各組(P<0.05)；2、3、4組第3周顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；3、4組第4周顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，且4組顯著低于2、3組(P<0.05)。對(duì)于GLU含量，2(第8周)、3(第1、8、24周)、4(第24周)組顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；2(第2、3、12、16周)、3(第2、3、4、12周)、4(第2、3、4、8、12、16、20周)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，且3(第2、3、4、12周)、4(第3、4、8、12、20周)組高于2組(P<0.05)。對(duì)于UREA含量，3(第4周)、4(第4、16周)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，2(第3、12周)、3(第2、3、12周)、4(第3、8、12、20周)組顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；且3(第2周)、4(第8、20周)組低于2組(P<0.05)。對(duì)于UA含量，2、4組第3周顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。對(duì)于CHOL含量，3組第1周顯著高于對(duì)照組和4組(P<0.05)。對(duì)于CREA含量，2組第1、2周顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；3(第2、3、4周)、4(第4周)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。綜上，飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)血清ALT、AST活性及TP、ALB、GLB、TBIL、UA、CREA、CHOL、TG含量及ALB/GLB值無(wú)顯著影響，但對(duì)血清GLU、UREA含量有一定改善作用，且枯草芽孢桿菌和苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)改善血清GLU含量具有一定優(yōu)勢(shì)。

數(shù)據(jù)柱標(biāo)注不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下圖同。

Value columns with different small letters mean significant difference (P<0.05). The same as below.

圖1 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

Fig.1 Effects ofBacillussubtilisand its combination with alfalfa polysaccharides on performance of laying hens

圖2 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響

續(xù)圖3

圖3 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞血常規(guī)指標(biāo)的影響

續(xù)圖4

續(xù)圖4

圖4 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

2.5 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞血清免疫球蛋白含量的影響

由圖5可知，對(duì)于IgA含量，4組第1周顯著低于3組(P<0.05)，與其他2組差異不顯著(P>0.05)；2、3、4組第16周顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。對(duì)于IgG含量，3(第1、4周)、4(第4周)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，且3(第1周)、4組(第4周)顯著高于2組(P<0.05)。對(duì)于IgM含量，3、4組第2、4、8周顯著高于對(duì)照組和2組(P<0.05)。由上可知，與單獨(dú)添加枯草芽孢桿菌相比，枯草芽孢桿菌與苜蓿多糖聯(lián)合使用顯著提高了血清免疫球蛋白含量。

2.6 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞糞和腸道微生物區(qū)系的影響

由圖6可知，與對(duì)照組相比，2(第1、12、20周)、3(第12周)、4組(第3、20周)大腸桿菌數(shù)量顯著降低(P<0.05)，3、4組第1周顯著高于2組(P<0.05)。由圖7可知，飼糧中添加枯草芽孢桿菌和苜蓿多糖對(duì)盲腸乳酸菌、彎曲桿菌、產(chǎn)氣夾膜梭菌和腸球菌及空腸、回腸的乳酸菌和大腸桿菌數(shù)量無(wú)顯著影響(P>0.05)；2、4組盲腸雙歧桿菌數(shù)量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；2、3組盲腸大腸桿菌數(shù)量顯著低于4組(P<0.05)，且大腸桿菌/乳酸菌值顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，而4組大腸桿菌/乳酸菌值與對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)；2、3、4組空腸、回腸雙歧桿菌數(shù)量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，而3個(gè)試驗(yàn)組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。由上可知，在糞和腸道微生物區(qū)系方面，枯草芽孢桿菌聯(lián)合苜蓿多糖沒(méi)有產(chǎn)生優(yōu)于單獨(dú)使用枯草芽孢桿菌的效果。

3 討 論

3.1 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

飼糧中添加益生菌可以提高動(dòng)物機(jī)體消化酶的活性[10]，增強(qiáng)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力[11-12]，從而提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能[13]。本實(shí)驗(yàn)室研究表明，苜蓿多糖可以提高蛋雞的產(chǎn)蛋率和只產(chǎn)蛋量[14]。Geng等[15]飼喂軍曹魚殼聚糖+枯草芽孢桿菌以及Fan等[16]飼喂海參黃芪多糖+茯苓多糖+枯草芽孢桿菌均顯著提高了比生長(zhǎng)速率。合生元對(duì)促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)有明顯作用[17]，可能是因?yàn)橐嫔龠M(jìn)了益生菌的生長(zhǎng)[18-20]，為其改善腸道結(jié)構(gòu)或腸道菌群提供了條件[21]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，添加枯草芽孢桿菌及枯草芽孢桿菌+苜蓿多糖可顯著降低料蛋比，但兩者間無(wú)顯著差異，即枯草芽孢桿菌與苜蓿多糖聯(lián)合使用沒(méi)有產(chǎn)生優(yōu)于枯草芽孢桿菌單獨(dú)添加的效果。李樹鵬[22]研究表明，益生菌及其與黃芪多糖(含量為36.12%)聯(lián)合使用均能顯著提高蛋雛雞周增重，降低料重比，但未發(fā)現(xiàn)合生元組生產(chǎn)性能與益生菌組有顯著差異，與本試驗(yàn)結(jié)果相似。多糖與益生菌聯(lián)合使用對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能的影響可能與飼養(yǎng)環(huán)境、生理狀態(tài)以及多糖本身的性質(zhì)等有關(guān)。目前關(guān)于這方面的報(bào)道較為少見，其兩者聯(lián)合使用對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能的影響機(jī)制尚不清楚。

圖5 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞血清免疫球蛋白含量的影響

圖6 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞糞中大腸桿菌數(shù)量的影響

圖7 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞腸道微生物區(qū)系的影響

3.2 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響

益生菌對(duì)蛋品質(zhì)的影響報(bào)道不盡一致。雷凱[23]研究表明，蛋雞飼糧中添加地衣芽孢桿菌可以改善蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、哈夫單位、蛋白高度和蛋黃顏色，而Tang等[24]研究發(fā)現(xiàn)，添加益生菌制劑(嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、兩岐雙歧桿菌、糞鏈球菌、米曲霉)對(duì)蛋殼厚度、哈夫單位、蛋黃顏色無(wú)顯著影響。王翠菊等[25]和辛小青等[14]研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖和苜蓿多糖對(duì)改善蛋黃顏色、蛋白高度、哈夫單位及蛋殼厚度有一定作用。但關(guān)于多糖與益生菌聯(lián)合使用對(duì)蛋品質(zhì)的影響尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)研究表明，飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋殼顏色、蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、蛋形指數(shù)、蛋白高度及哈夫單位沒(méi)有顯著改善作用，但在一定程度上提高了蛋黃顏色。蛋黃顏色決定于飼糧中的類胡蘿卜素含量，任何阻礙類胡蘿卜素吸收及沉積的因素都將導(dǎo)致蛋黃顏色變淺[26]。因此，本試驗(yàn)蛋黃顏色的改善可能是因?yàn)樘砑涌莶菅挎邨U菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用促進(jìn)了類胡蘿卜素的吸收和沉積。也有結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌[27-28]和苜蓿多糖[29]有抗氧化的作用，所以也可能是其抗氧化作用保護(hù)了更多類胡蘿卜素不被氧化，增加了色素的沉積，從而改善蛋黃顏色，但具體作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

3.3 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

ALT和AST主要存在于肝細(xì)胞中，ALT主要存在于細(xì)胞漿，AST主要存在于細(xì)胞漿的線粒體，當(dāng)細(xì)胞損傷時(shí)，ALT首先進(jìn)入血液，若細(xì)胞損傷嚴(yán)重危及線粒體時(shí)，則AST進(jìn)入血液，引起血液ALT和AST活性升高。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)ALT和AST活性影響不大。血清TP、ALB、GLB、TBIL含量及ALB/GLB值也是衡量肝臟功能是否正常的關(guān)鍵指標(biāo)。對(duì)于血清TP、ALB、GLB含量及ALB/GLB值，各試驗(yàn)組與對(duì)照組之間總體上沒(méi)有大的差異；2(第3周)、3(第3、4周)、4(第3、4周)組顯著降低血清TBIL含量，提示添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用未對(duì)肝臟造成不良影響。研究表明，飼糧中添加益生菌(乳酸菌和芽孢桿菌)和合生元(益生菌+黃芪多糖)對(duì)血清AST活性和TP含量無(wú)顯著影響[30]，這與本試驗(yàn)結(jié)果相一致。飼糧中添加枯草芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌+苜蓿多糖可升高血清中GLU含量，且枯草芽孢桿菌+250 mg/kg苜蓿多糖組(第2、3、4、8周)和枯草芽孢桿菌+4 000 mg/kg苜蓿多糖組(第3、4、8、20周)顯著高于枯草芽孢桿菌組。說(shuō)明枯草芽孢桿菌和苜蓿多糖加強(qiáng)了糖原的分解或者促進(jìn)了糖異生的發(fā)生，也可能與增強(qiáng)了腸道中淀粉酶等的活性有關(guān)。而李亞杰等[31]研究表明，肉雞飼糧中添加益生菌(芽孢桿菌、乳酸菌)和合生元(益生菌+黃芪多糖)降低了血清GLU含量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加枯草芽孢桿菌和苜蓿多糖對(duì)TG和CHOL的含量無(wú)顯著影響，這與李亞杰等[31]的研究結(jié)果一致。另外，添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)UA、CREA含量影響不大，但顯著降低了UREA含量，且枯草芽孢桿菌+250 mg/kg苜蓿多糖組(2周)和枯草芽孢桿菌+4 000 mg/kg苜蓿多糖組(第8、20周)顯著低于枯草芽孢桿菌組。上述結(jié)果提示枯草芽孢桿菌和苜蓿多糖的添加一方面提高了飼料氮的利用，另一方面也說(shuō)明了在一定程度上具有保護(hù)腎臟的作用，且兩者具有協(xié)同作用。多糖與益生菌聯(lián)合使用對(duì)血清UREA和UA含量等的影響鮮有報(bào)道，但Fallah等[32]飼喂雛鴕鳥屎腸球菌+低聚果糖+海藻糖可升高血清GLU含量，降低UA含量，提示苜蓿多糖可能也是一種潛在的益生元。

3.4 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞免疫功能的影響

白細(xì)胞作為機(jī)體防御系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分，具有吞噬病原體、防御疾病等作用。廉新慧等[33]研究表明，益生菌(芽孢桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌)+酵母多糖組顯著提高10日齡海蘭褐蛋雞血液WBC數(shù)目，益生菌+黃芪多糖組顯著提高40和50日齡海蘭褐蛋雞血液WBC數(shù)目，但益生菌組與對(duì)照組無(wú)顯著差異。本試驗(yàn)研究表明，添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)提高血液WBC、LYB、MID、NEU數(shù)目有一定作用，且枯草芽孢桿菌+苜蓿多糖組MID(第1、3、4、8、12周)和NEU(第1、3、4、8周)數(shù)目顯著高于枯草芽孢桿菌組。Hassaan等[34]報(bào)道添加地衣芽孢桿菌和酵母提取物可以顯著提高WBC數(shù)目，且地衣芽孢桿菌+酵母提取物組WBC數(shù)目顯著高于地衣芽孢桿菌組；對(duì)RBC和HGB數(shù)目有一定提高；對(duì)于HCT，2.4×105CFU/g地衣芽孢桿菌+酵母提取物組顯著低于對(duì)照組和地衣芽孢桿菌組，4.8×105CFU/g地衣芽孢桿菌+酵母提取物組顯著高于對(duì)照組和地衣芽孢桿菌組。而廉新慧等[33]研究表明，添加益生菌(芽孢桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌)和酵母多糖/黃芪多糖組對(duì)RBC數(shù)目無(wú)顯著影響。本研究表明，添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)血液RBC、HGB數(shù)目和HCT影響效果不顯著，但對(duì)PLT數(shù)目有一定提高。而Elzey等[35]報(bào)道血小板在免疫系統(tǒng)中也具有重要作用。此外，飼糧中添加枯草芽孢桿菌和苜蓿多糖提高了血清IgA(第1、16周)、IgG(第1、4周)和IgM(第2、4、8周)含量。免疫球蛋白是B細(xì)胞經(jīng)抗原刺激后分化增殖產(chǎn)生的，參與補(bǔ)體激活及毒素的中和等途徑，其含量高低反映機(jī)體免疫力的強(qiáng)弱。王曉慧[36]研究結(jié)果顯示人參多糖聯(lián)合植物乳桿菌C88可顯著提高免疫抑制小鼠血清IgG的含量。邵麗瑋[37]在蛋雛雞飼糧中添加枯草芽孢桿菌+刺五加多糖顯著提高了血清IgA、IgM和IgG的含量。本研究表明，枯草芽孢桿菌+苜蓿多糖組較枯草芽孢桿菌組有明顯優(yōu)勢(shì)，表明苜蓿多糖聯(lián)合枯草芽孢桿菌可增強(qiáng)體液免疫。

3.5 枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)蛋雞糞和腸道微生物區(qū)系的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)降低糞和盲腸大腸桿菌數(shù)量、提高腸道乳酸菌和雙歧桿菌數(shù)量有顯著作用。胡美娟[38]研究表明，香菇多糖和植物乳桿菌C88的聯(lián)合使用可顯著提高乳桿菌和雙歧桿菌數(shù)量，降低腸球菌、腸桿菌數(shù)量，有效改善小鼠腸道菌群，且優(yōu)于單獨(dú)使用植物乳桿菌C88。Li等[39]研究表明，添加益生菌(乳酸菌和蠟樣芽孢桿菌)與合生元(益生菌+黃芪多糖)顯著增加了21、42日齡回腸和盲腸乳酸菌和雙歧桿菌數(shù)量，降低了大腸桿菌數(shù)量；且盲腸合生元組顯著優(yōu)于益生菌組；而回腸合生元組雙歧桿菌數(shù)量顯著高于益生菌組，大腸桿菌數(shù)量?jī)山M間無(wú)顯著差異，21日齡回腸合生元組乳酸菌數(shù)量與益生菌組無(wú)顯著差異，42日齡顯著高于益生菌組。Calik等[40]研究表明，孵化過(guò)程中注射屎腸球菌+菊糖與出殼后飼喂均可增加21日齡盲腸乳酸菌數(shù)量，降低42日齡盲腸腸桿菌數(shù)量，且在21日齡時(shí)孵化中和出殼后均給予或僅在孵化中給予屎腸球菌+菊糖盲腸乳酸菌數(shù)量顯著高于僅出殼后給予，提示動(dòng)物本身的生理狀態(tài)可能是影響合生元發(fā)揮調(diào)節(jié)微生物區(qū)系作用的原因之一。

4 結(jié) 論

① 飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用可以降低料蛋比，對(duì)提高產(chǎn)蛋率和蛋黃顏色有一定作用，但枯草芽孢桿菌與苜蓿多糖聯(lián)合使用相較于枯草芽孢桿菌單獨(dú)使用并未有更優(yōu)的效果。

② 飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用可以改善血清生化及血常規(guī)指標(biāo)；在一定程度上可以提高蛋雞的免疫力，且聯(lián)合使用效果有明顯優(yōu)勢(shì)。

③ 飼糧中添加枯草芽孢桿菌及其與苜蓿多糖聯(lián)合使用對(duì)糞和盲腸大腸桿菌數(shù)量有顯著降低，可增加腸道雙歧桿菌數(shù)量，降低盲腸大腸桿菌/乳酸菌值，改善腸道微生態(tài)環(huán)境，但聯(lián)合使用與單獨(dú)使用沒(méi)有顯著差異。

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*Corresponding author, associate professor, E-mail: xiaofangd1124@sina.com

(責(zé)任編輯 田艷明)

Effects ofBacillussubtilisand Alfalfa Polysaccharide on Performance, Egg Quality, Blood Indices and Fecal and Intestinal Microbial Flora of Laying Hens

GUO Junrui DONG Xiaofang*TONG Jianming
(InstituteofAnimalSciences,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100193,China)

The study was conducted to investigate the effects of dietaryBacillussubtilisand its combination with alfalfa polysaccharide on performance, egg quality, blood indices and fecal and intestinal microbial flora of laying hens, and to evaluate whether the combination effects were better than that ofBacillussubtilisalone or not. Two hundred and eighty-eight 27-week-old healthy Hy-Line Brown laying hens were randomly allocated into 4 groups with 6 replicates of 12 birds in each for 24 weeks. The diets were formulated by addingBacillussubtilisand alfalfa polysaccharides to a basal diet: control group was fed with the basal diet (group 1), experimental groups were supplemented with 1.0×107CFU/gBacillussubtilis(group 2), 1.0×107CFU/gBacillussubtilis+250 mg/kg alfalfa polysaccharides (group 3) and 1.0×107CFU/gBacillussubtilis+4 000 mg/kg alfalfa polysaccharides (group 4). The results showed as follows: 1) there were no significant differences in feed intake, egg weight, egg weight per hen and mortality among all groups (P>0.05). However, the egg production in groups 3 and 4 during 9 to 16 weeks was significantly increased (P<0.05) and the ratio of feed to egg in groups 2, 3 and 4 during 9 to 16, 17 to 24 and 1 to 24 weeks was significantly decreased (P<0.05) compared with the control group. 2) DietaryBacillussubtilisand its combination with alfalfa polysaccharide had no significant effects on eggshell color, eggshell thickness, eggshell strength, egg shape index, albumen height and Haugh unit (P>0.05), but significantly improved egg yolk color at 1, 2, 4 and 12 weeks (P<0.05). 3) DietaryBacillussubtilisand its combination with alfalfa polysaccharide had significantly improved effects on serum glucose content at 2, 3, 4, 12, 16 and 20 weeks and serum urea content at 2, 3, 8, 12 and 20 weeks (P<0.05), and serum glucose content in group 3 at 2, 3, 4 and 8 weeks and group 4 at 3, 4, 8 and 20 weeks was increased significantly compared with group 2 (P<0.05). DietaryBacillussubtilisand its combination with alfalfa polysaccharide significantly increased counts of blood leucocytes, lymphocytes, intermediate cell and neutrophils (P<0.05), intermediate cell count in group 3 at 1, 3, 4, 8 and 12 weeks and group 4 at 3 weeks was significantly higher than that in group 2 (P<0.05), and neutrophils count in group 3 at 1, 3, 4 and 8 weeks and group 4 at 1, 3 and 8 weeks was significantly higher than that in group 2 (P<0.05). Meanwhile, dietaryBacillussubtilisand its combination with alfalfa polysaccharide significantly increased platelet count at 3, 16 and 24 weeks (P<0.05). DietaryBacillussubtilisand its combination with alfalfa polysaccharide significantly increased serum immunoglobulin A content at 16 weeks, immunoglobulin G content at 1 and 4 weeks and immunoglobulin M content at 2, 4 and 8 (P<0.05), and the improved effects in groups 3 and 4 were better than those in group 2 (P<0.05). 4) DietaryBacillussubtilisand its combination with alfalfa polysaccharide significantly decreased fecalEscherichiacolicount and the ratio ofEscherichiacolitoLactobacillusincecum(P<0.05), significantly increased jejunal, ileal and cecalBifidobacteriumcount (P<0.05). Accordingly, dietaryBacillussubtilisand its combination with alfalfa polysaccharide can improve performance and egg quality, reduce fecal and cecalEscherichiacolicount and increase intestinalBifidobacteriumcount of laying hens. Additionally, the effects of combination ofBacillussubtilisand alfalfa polysaccharide on improving serum biochemical indices and enhancing immunity are superior toBacillussubtilis.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2017, 29(6)：1687-1703]

laying hens;Bacillussubtilis; alfalfa polysaccharide; performance; egg quality; blood indices; microbial flora

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.05.029

2016-11-10

“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題(2013BAD10B04)；國(guó)家蛋雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)(CARS-41-K16)；中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程(ASTIP-IAS08)

郭軍蕊(1988—)，女，河南新鄉(xiāng)人，博士研究生，研究方向?yàn)閯?dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)。E-mail： gjr217@yeah.net

*通信作者：董曉芳，副研究員，碩士生導(dǎo)師，E-mail： xiaofangd1124@sina.com

S816.7

A

1006-267X(2017)05-1687-17