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    甘草提取物對團(tuán)頭魴生長性能、體組成、脂肪沉積的影響

    2017-05-11 11:23:07周嫚米海峰劉文斌王凱周蔣廣震
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年6期
    關(guān)鍵詞:團(tuán)頭魴生長性能

    周嫚 米海峰 劉文斌 王凱周 蔣廣震

    摘要:探討甘草提取物對團(tuán)頭魴脂肪代謝的調(diào)控作用,開發(fā)魚類適用的脂肪調(diào)控劑。在尾質(zhì)量為(100.55±021)g的團(tuán)頭魴飼料中添加甘草提取物,以考察其對團(tuán)頭魴生長、體組成、脂肪沉積的影響。采用水提醇沉法從甘草根中提取甘草提取物。選取240尾團(tuán)頭魴1齡魚,隨機(jī)置于12個網(wǎng)箱中,每箱20尾。分別將甘草提取物以0、0.3、06 g/kg(以甘草次酸含量計分別為0、6.42、12.84 mg/kg)加入到3組飼料中,飼喂8周。結(jié)果顯示,飼料添加甘草提取物對團(tuán)頭魴的增質(zhì)量率、特定生長率、餌料系數(shù)均沒有顯著影響(P>0.05)。甘草提取物可降低試驗(yàn)魚的臟體比、肝體比、腹脂率,可顯著降低肝臟和肌肉的脂肪含量(P<0.05),但對胴體率、全魚體組成無顯著影響(P>0.05)。各試驗(yàn)組的血漿甘油三酯TG、總膽固醇TC、游離脂肪酸NEFA、高密度脂蛋白膽固醇HDL-C含量均顯著低于對照組(P<0.05),但各添加組之間無顯著差異(P>0.05),低密度脂蛋白膽固醇LDL-C的含量隨著甘草提取物添加量的增加而顯著升高(P<0.05)。研究結(jié)果表明,甘草提取物對團(tuán)頭魴的生長性能無顯著影響,在魚體的血液、肝臟、肌肉中均體現(xiàn)出一定的降脂作用,這可能與甘草提取物中降脂活性成分有關(guān)。

    關(guān)鍵詞:團(tuán)頭魴;甘草提取物;生長性能;體組成;脂肪沉積

    中圖分類號: S963.73文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A文章編號:1002-1302(2017)06-0147-04

    脂肪作為一種能量來源,在魚類營養(yǎng)中起著重要作用,可提供必需脂肪酸和磷脂[1]。隨著集約化養(yǎng)殖的發(fā)展,脂肪節(jié)約蛋白效應(yīng)得到了廣泛應(yīng)用。生產(chǎn)上往往通過適當(dāng)提高飼料中的脂肪水平來滿足魚類對能量的需求,從而增加產(chǎn)量并降低養(yǎng)殖成本。然而,脂肪等能量物質(zhì)的過度攝入可能導(dǎo)致肝臟及其他組織中脂肪的過度沉積,嚴(yán)重時還會發(fā)展為脂肪肝,繼而影響魚體的健康。養(yǎng)殖密度增加、水體環(huán)境惡化、飼料營養(yǎng)水平不均衡等均易導(dǎo)致團(tuán)頭魴養(yǎng)殖過程中肝臟脂肪化、內(nèi)臟脂肪沉積量增加,造成生產(chǎn)中營養(yǎng)性肝膽綜合征等的多發(fā)[2-4]。

    傳統(tǒng)中草藥在改善動物生理代謝過程中扮演著較為重要的角色。甘草作為我國重要的中草藥藥材,被廣泛應(yīng)用于煙草、食品、化妝品、制藥工業(yè)等,且遍布全球[5]。甘草性平味甘,在臨床上具有多種藥理功效,如抗炎癥、抗氧化、抗過敏、保肝等作用[6-7]。甘草酸是甘草的主要活性物質(zhì),其在體內(nèi)代謝為甘草次酸而發(fā)揮作用。He等研究發(fā)現(xiàn),在斷奶仔豬飼料中添加甘草次酸可顯著改善仔豬的生產(chǎn)性能[8]。Xu等研究表明,甘草酸可增強(qiáng)大黃魚(Larimichthys crocea)的免疫能力,并改善其生長[9]。王文博等研究發(fā)現(xiàn),甘草提取物對鯽的免疫功能和抗應(yīng)激能力具有良好的調(diào)節(jié)作用[10-11]。Jiang等研究發(fā)現(xiàn),在飼料中添加甘草次酸可降低斑點(diǎn)叉尾(Ictalurus punctatus)腹腔內(nèi)臟團(tuán)的脂肪沉積[12-13]。筆者所在實(shí)驗(yàn)室前期針對團(tuán)頭魴的研究發(fā)現(xiàn),在飼料中添加甘草次酸純品(98%)可降低團(tuán)頭魴肝臟、腹脂、肌肉等組織中的脂肪沉積[14]。甘草次酸對動物體脂肪代謝的調(diào)控作用越來越受到重視。然而,藥用甘草次酸純品的價格無優(yōu)勢,導(dǎo)致其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的直接應(yīng)用受到了限制,而甘草提取物對團(tuán)頭魴的相關(guān)作用尚未見報道。本試驗(yàn)擬采用傳統(tǒng)水提醇沉法,從甘草根中提取粗提物,應(yīng)用經(jīng)典營養(yǎng)學(xué)理論研究其在團(tuán)頭魴上的應(yīng)用效果,為魚類脂肪代謝調(diào)控劑的開發(fā)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

    團(tuán)頭魴(Megalobrama amblycephala)別稱武昌魚,屬于草食性淡水魚,在中國被廣泛養(yǎng)殖。與其他養(yǎng)殖魚類相比,養(yǎng)殖過程中團(tuán)頭魴常出現(xiàn)肝臟、腹腔脂肪過度沉積,導(dǎo)致抗應(yīng)激能力下降,從而影響其生長與健康,也為團(tuán)頭魴的起捕和運(yùn)輸帶來巨大困擾。鑒于以上原因,本試驗(yàn)對甘草根進(jìn)行提取,并將甘草提取物添加到飼料中進(jìn)行投喂,以探究甘草提取物對團(tuán)頭魴脂代謝的影響。

    1材料與方法

    1.1甘草提取物的制備

    本試驗(yàn)采用水提醇沉法對甘草進(jìn)行提取,參照文獻(xiàn)[15]并加以改進(jìn)。將甘草片(購于藥房)置于8倍體積含氨 0.50% 的10%乙醇溶液中,于80 ℃下水浴回流提取,然后進(jìn)行抽濾取濾液,并將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中真空濃縮至原體積的12.5%。在磁力攪拌器劇烈攪拌的條件下滴加稀釋過的硫酸(濃硫酸 ∶超純水體積比1 ∶1),并用pH計將溶液pH值調(diào)節(jié)至1.5~2.0,靜置3 h,減壓過濾,用水洗滌濾餅使其pH值達(dá)到3.5~4.0,真空干燥得到甘草提取物,研磨成粉,于 4 ℃ 下保存。參考劉翠哲等的方法[16],采用全自動高效液相色譜法檢測得到甘草提取物中甘草次酸的含量為2.14%。

    1.2試驗(yàn)飼料

    本試驗(yàn)以魚粉、豆粕、棉粕、菜粕、魚油、豆油、面粉、麩皮、復(fù)合預(yù)混料、磷酸二氫鈣配制成等氮等能的基礎(chǔ)飼料(表1)。分別在基礎(chǔ)飼料中添加0、0.3、0.6 g/kg的甘草提取物,折算成甘草次酸含量分別為0、6.42、12.84 mg/kg。將各種原料按配方所需進(jìn)行稱質(zhì)量、粉碎,逐級混勻后采用小型制粒機(jī)制成粒徑約為2 mm的沉性顆粒料,常溫晾干后置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3飼養(yǎng)管理

    本試驗(yàn)于南京農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)教學(xué)科研基地進(jìn)行,試驗(yàn)開始前將團(tuán)頭魴暫養(yǎng)于池塘大網(wǎng)箱中,并用商品飼料進(jìn)行馴化。暫養(yǎng)1周后,選擇活力穩(wěn)定、規(guī)格整齊、質(zhì)量為(100.55±0.21)g的團(tuán)頭魴240尾,并將其隨機(jī)分為3組,每組設(shè)4個重復(fù),每個重復(fù)20尾。試驗(yàn)于12個網(wǎng)箱中開展,網(wǎng)箱規(guī)格為2.0 m×1.0 m×1.2 m。分別用添加了0、0.3、0.6 g/kg甘草提取物的3組飼料投喂8周。每天分別于07:00、11:30、16:00 投喂3次,根據(jù)各網(wǎng)箱全部魚體質(zhì)量的3%~5%確定日投喂量。每天測定網(wǎng)箱內(nèi)的水溫、溶解氧、pH值。保持池塘內(nèi)有微流水,定期清洗網(wǎng)箱以確保網(wǎng)箱內(nèi)外水質(zhì)良好。養(yǎng)殖期間將條件保持在水溫(29±2)℃、溶解氧大于3.9 mg/L、pH值7.1~7.6。

    1.4樣品制備

    飼養(yǎng)8周后,以網(wǎng)箱為單位統(tǒng)計每個網(wǎng)箱中魚的尾數(shù),并稱量魚的總質(zhì)量。每箱隨機(jī)取魚5尾,分別稱量個體質(zhì)量并測量體長,用質(zhì)量濃度為100 mg/L的MS-222麻醉。尾靜脈采血并置于預(yù)先制備好的肝素抗凝管中,靜置,于4 ℃、3 000 r/min 條件下離心10 min,取上清血漿樣品。取3尾魚,在冰盤上解剖并分離出肝胰臟、腹脂,另取3尾分離得到內(nèi)臟團(tuán)和胴體。采用4 ℃預(yù)冷的生理鹽水分別清洗各組織,用濾紙吸干水分,稱量內(nèi)臟團(tuán)質(zhì)量、肝胰臟質(zhì)量、腹脂質(zhì)量、胴體質(zhì)量,計算臟體比、肝體比、腹脂率、胴體率。將所得肝臟、腹脂、肌肉樣品均置于-20 ℃冰箱中保存待測。

    1.5測定指標(biāo)及方法

    生長性能、形體指標(biāo)的計算公式如下。增質(zhì)量率=(末均質(zhì)量-初始均質(zhì)量)/初始均質(zhì)量×100%;特定生長率=(ln末均質(zhì)量-ln初始均質(zhì)量)/養(yǎng)殖天數(shù)×100%;飼料系數(shù)=投餌量/(末均質(zhì)量-初始均質(zhì)量);臟體比=內(nèi)臟質(zhì)量/全魚質(zhì)量×100%;肝體比=肝臟質(zhì)量/全魚質(zhì)量×100%;腹脂率=腹脂質(zhì)量/全魚質(zhì)量×100%;胴體率=胴體質(zhì)量/全魚質(zhì)量×100%;肥滿度(g/cm3)=魚體質(zhì)量/魚體長3。

    飼料、全魚水分含量采用105 ℃烘干法測定,粗蛋白質(zhì)含量采用FOSS KT260型凱氏定氮儀測定,粗脂肪含量采用索氏抽提法測定,粗灰分含量采用550 ℃灼燒法測定,總能采用Parr 1281型氧彈測熱儀測定。肌肉、肝臟的脂肪含量參照Folch等的氯仿-甲醇抽提法[17]進(jìn)行測定。

    1.6數(shù)據(jù)處理

    試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-Way ANOVA),并用Duncans多重比較法分析試驗(yàn)結(jié)果間的差異,差異顯著水平設(shè)定為α=0.05。

    2結(jié)果與分析

    2.1甘草提取物對團(tuán)頭魴生長性能和形體指標(biāo)的影響

    飼料中添加甘草提取物后,各試驗(yàn)組之間的初始均質(zhì)量、末均質(zhì)量、增質(zhì)量率、餌料系數(shù)、特定生長率均無顯著差異(P>0.05)(表2)。各添加組的臟體比、肝體比、腹脂率、肥滿度均低于對照組,添加0.3、0.6 g/kg甘草提取物組的肝體比、臟體比顯著低于對照組(P<0.05);添加0.6 g/kg甘草提取物組的肥滿度顯著低于對照組(P<0.05);各組之間的胴體率均無顯著差異(P>0.05)(表3)。

    2.2甘草提取物對團(tuán)頭魴體組成及肝臟、肌肉脂肪含量的影響

    飼料中添加甘草提取物后,全魚粗脂肪含量有所下降,但整體來看對全魚體組成無顯著影響(P>0.05)。試驗(yàn)組飼料

    中添加甘草提取物后,肝臟脂肪含量與對照組相比顯著下降(P<0.05),其他各組間的肝臟脂肪含量沒有顯著差異(P>0.05)(表4)。各添加組的肌肉脂肪含量均顯著低于對照組(P<0.05),但各添加組之間無顯著差異(P>0.05)。

    2.3甘草提取物對團(tuán)頭魴血脂的影響

    飼料中添加甘草提取物后,各組的血漿甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、游離脂肪酸(NEFA)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量均顯著低于對照組(P<0.05),但各添加組之間的TG、TC、NEFA含量無顯著差異(P>0.05)。低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量隨著甘草提取物添加量的增加而顯著升高(P<0.05)(表5)。

    3結(jié)論與討論

    3.1甘草提取物對團(tuán)頭魴生長性能、體組成的影響

    甘草及其提取物作為中草藥免疫調(diào)控劑被廣泛應(yīng)用于人和動物。He等在仔豬飼料中添加甘草次酸,顯著提高了仔豬的增質(zhì)量率[8]。在水產(chǎn)動物中,甘草提取物可提高凡納濱對蝦[18]、鱖[19]、刺參[20]的生產(chǎn)性能。但Xu等在大黃魚飼料中添加甘草酸后,增質(zhì)量率無顯著差異[9]。Jiang等在斑點(diǎn)叉尾的研究中發(fā)現(xiàn),在飼料中添加0.3~0.6 mg/kg甘草次酸顯著提高了采食量,但對生長無顯著影響;0.9 mg/kg甘草次酸使試驗(yàn)魚的增質(zhì)量率下降[12-13]。肖文權(quán)研究表明,在番鴨飼糧中添加甘草提取物能夠極顯著提高番鴨的平均日增質(zhì)量[21]。張瑞等研究發(fā)現(xiàn),將甘草殘?jiān)鳛轱暳咸砑觿┛娠@著提高番鴨的生產(chǎn)性能[22]。陳效儒等研究表明,飼料中添加甘草酸可提高刺參養(yǎng)殖的產(chǎn)量[23]。張洪玉等研究表明,飼料中添加甘草能夠促進(jìn)鱘生長[24]。本研究結(jié)果表明,在飼料中添加甘草提取物對團(tuán)頭魴生長沒有促進(jìn)作用,但也不會影響其生長,此結(jié)論與Xu等[9]、Jiang等[12-13]、蔡東森等[14]的研究結(jié)論相似。這可能是甘草次酸的促進(jìn)氨基酸代謝[25]、增強(qiáng)免疫[20]、降低脂肪沉積[26]、調(diào)節(jié)激素分泌[27]等多種作用共同發(fā)生所導(dǎo)致,可能與試驗(yàn)環(huán)境、試驗(yàn)動物、添加劑量等有關(guān)。

    3.2甘草提取物對團(tuán)頭魴魚體脂肪沉積的影響

    脂肪是魚體內(nèi)的重要貯能物質(zhì),其吸收、合成、轉(zhuǎn)運(yùn)、儲存、分解供能處于平衡狀態(tài)。過多脂類、糖類等能量物質(zhì)的攝入以及環(huán)境因子的變化均會導(dǎo)致肝臟中的過度沉積,不利于水產(chǎn)動物的生長,并降低魚類的抗應(yīng)激能力。在人體上的研究表明,外敷甘草次酸能夠有效促進(jìn)脂肪分解并降低脂肪沉積[20,25]。Wu等對試驗(yàn)大鼠飼喂甘草次酸,結(jié)果顯示,添加甘草次酸組的肝臟脂肪含量顯著低于未添加甘草次酸的對照組,并推測該作用可能是由于甘草次酸促進(jìn)了線粒體中脂肪酸的氧化過程[28]。蔡東森等研究表明,飼料中添加0.30~0.45 g/kg 的甘草次酸可降低團(tuán)頭魴內(nèi)臟中脂肪的沉積[14]。Jiang等對斑點(diǎn)叉尾的研究發(fā)現(xiàn),甘草次酸通過調(diào)控魚體皮質(zhì)醇含量促進(jìn)脂肪分解[13]。本研究結(jié)果表明,在飼料中添加甘草提取物可顯著降低團(tuán)頭魴肝臟及肌肉的脂肪含量,這與上述已有研究相符合,表明使用甘草提取物取代甘草次酸純品同樣能夠達(dá)到降脂效果。然而甘草中活性成分能夠降低肝臟脂肪含量的機(jī)制尚不明確,可能的原因有:甘草次酸促進(jìn)了肝臟脂肪酸在線粒體中的氧化分解[28],從而增加了脂肪分解功能的消耗;甘草次酸通過提高動物體內(nèi)皮質(zhì)醇水平,增強(qiáng)了動物體的分解代謝,最終促使脂肪含量降低[29-30]。此外,本研究結(jié)果還表明,甘草提取物可降低團(tuán)頭魴的臟體比、肝體比、腹脂率;在對斑點(diǎn)叉尾的研究中也發(fā)現(xiàn),在飼料中添加甘草次酸顯著降低了魚體的肝體比、臟體比、腹脂率[12],這可能與內(nèi)臟團(tuán)整體脂肪含量的降低有關(guān)。基于以上結(jié)果推測,甘草提取物因含有效成分甘草次酸而具有減少魚體脂肪沉積的作用。

    血液是魚體營養(yǎng)物質(zhì)及代謝產(chǎn)物的運(yùn)輸載體,血脂水平可反映機(jī)體脂肪的代謝情況。動物體內(nèi)血脂的異常在脂肪肝早期具有重要診斷意義,而魚類血脂水平的變化也與魚類肝臟脂肪化具有極大的相關(guān)性[31]。高密度脂蛋白(HDL)是血液中膽固醇的清理者,攜帶膽固醇后形成HDL-C;低密度脂蛋白(LDL)則以與前者相反的方向輸送膽固醇,攜帶后形成LDL-C,血液中的LDL-C是血漿中主要攜帶總膽固醇(TC)的載脂蛋白[32]。本試驗(yàn)在飼料中添加甘草提取物后,試驗(yàn)組的甘油三酯、總膽固醇、游離脂肪酸、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量均顯著降低,低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量則顯著升高。根據(jù)2種脂蛋白的作用,血液中HDL-C含量降低、LDL-C含量升高意味著膽固醇從血液進(jìn)入到肝臟中的量減少,與此同時由肝臟向血液輸送的膽固醇增多,因此LDL攜帶膽固醇形成LDL-C的含量增多,最后通過二者的相互調(diào)節(jié),導(dǎo)致血液中的總膽固醇含量降低。孟富敏等研究表明,甘草次酸鈉可使動物血脂明顯降低[33]。可見,甘草提取物具有較強(qiáng)烈的降血脂作用,甘草次酸可能通過這種作用降低了血漿脂肪含量,抑制了脂肪的轉(zhuǎn)運(yùn),減少了脂肪在內(nèi)臟組織中的沉積。

    甘草提取物能夠起到調(diào)節(jié)脂肪代謝的作用,對團(tuán)頭魴的生長無顯著影響,但可通過調(diào)節(jié)血脂來影響團(tuán)頭魴體內(nèi)的脂肪代謝,從而起到一定的降脂作用。

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    doi:10.15889/j.issn.1002-1302.2017.06.039

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