高脂日糧對(duì)初情期小鼠乳腺發(fā)育的影響及分子機(jī)制

孟瑩瑩， 張 靜， 張楓琳， 艾 瑋， 朱曉彤， 束 剛， 王麗娜， 高 萍， 江青艷， 王松波

(華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510642)

高脂日糧對(duì)初情期小鼠乳腺發(fā)育的影響及分子機(jī)制

孟瑩瑩， 張 靜， 張楓琳， 艾 瑋， 朱曉彤， 束 剛， 王麗娜， 高 萍， 江青艷， 王松波

(華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510642)

【目的】研究高脂日糧對(duì)初情期小鼠乳腺發(fā)育的影響及可能機(jī)制?！痉椒ā窟x用20只4周齡昆明雌性小鼠，設(shè)對(duì)照組和高脂日糧組，試驗(yàn)期4周，每周稱體質(zhì)量并統(tǒng)計(jì)采食量。試驗(yàn)結(jié)束后采集小鼠乳腺并稱質(zhì)量，采用whole-mount 及HE染色觀察小鼠乳腺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)及導(dǎo)管數(shù)量。利用Western blot檢測(cè)初情期小鼠乳腺組織胰島素樣生長(zhǎng)因子1(Insulin-like growth factor1, IGF-1)、增殖相關(guān)信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白蛋白激酶B( Protein kinase B, Akt)、胞外調(diào)控的蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinase, ErK)以及炎癥信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白Toll樣受體4(Toll-like receptor 4, TLR4)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)和核因子κB激酶抑制劑(Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase, IKK)的表達(dá)。【結(jié)果】高脂日糧組小鼠采食量極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，但在能量攝入方面與對(duì)照組無(wú)顯著差異。高脂日糧組小鼠的體質(zhì)量增加顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。高脂日糧組小鼠在乳腺質(zhì)量、乳腺質(zhì)量與體質(zhì)量的比值上均極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。乳腺組織的whole-mount及HE染色結(jié)果表明，高脂日糧組小鼠乳腺導(dǎo)管發(fā)育明顯被抑制，其乳腺組織的導(dǎo)管數(shù)和密度明顯降低，乳腺組織的終末乳芽數(shù)量也極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)。高脂日糧能夠顯著抑制小鼠乳腺組織IGF-I的蛋白表達(dá)以及Akt、Erk和IKK的磷酸化水平(P<0.01或0.05)，極顯著促進(jìn)小鼠乳腺組織TLR4的蛋白表達(dá)(P<0.01)和顯著促進(jìn)JNK的磷酸化水平(P<0.05)?！窘Y(jié)論】高脂日糧能夠抑制初情期小鼠乳腺發(fā)育，這可能是通過(guò)抑制乳腺增殖的相關(guān)信號(hào)和促進(jìn)乳腺組織炎癥的相關(guān)信號(hào)來(lái)實(shí)現(xiàn)。

高脂日糧； 小鼠； 乳腺發(fā)育； 增殖； 炎癥； 蛋白表達(dá)

乳腺作為哺乳動(dòng)物的泌乳器官，其良好的發(fā)育不僅對(duì)于其泌乳功能及后代生長(zhǎng)發(fā)育具有重要影響，而且對(duì)于人類健康具有重要意義。乳腺的發(fā)育受到遺傳、環(huán)境、激素等各種因素的影響[1-2]，其中營(yíng)養(yǎng)對(duì)乳腺的發(fā)育起著重要的作用[1, 3]。在生產(chǎn)中，后備母豬飼喂高能量日糧造成的過(guò)度肥胖，往往會(huì)導(dǎo)致其乳腺發(fā)育不良，對(duì)其后期泌乳功能造成不良影響[4]。此外，青春期肥胖也是引發(fā)乳腺癌的主要因素之一[5]。 因此，研究高脂(能)日糧對(duì)乳腺發(fā)育的影響及機(jī)制對(duì)于提高動(dòng)物泌乳功能及人類乳腺健康具有重要意義。

雌性動(dòng)物乳腺發(fā)育包括初情期、妊娠期和泌乳期等不同階段[2]。在小鼠中，其乳腺發(fā)育從胚胎期開始，出生斷奶后乳腺導(dǎo)管快速發(fā)育，到8周齡(性成熟)發(fā)育完善，隨后伴隨著妊娠和分娩乳腺腺泡呈現(xiàn)周期性變化[6-7]。研究表明，高脂日糧可通過(guò)影響小鼠早期乳腺發(fā)育，從而導(dǎo)致小鼠妊娠期和泌乳期的乳腺癌發(fā)生[8-9]。但是，目前有關(guān)高脂日糧對(duì)初情期小鼠乳腺發(fā)育影響的報(bào)道還很少，且主要集中在小鼠乳腺發(fā)育表型方面[10]，對(duì)于高脂日糧調(diào)控初情期小鼠乳腺發(fā)育的機(jī)制尚不清楚。

本試驗(yàn)以初情期小鼠為對(duì)象，在研究高脂日糧對(duì)初情期小鼠乳腺導(dǎo)管發(fā)育的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探索高脂日糧對(duì)初情期小鼠乳腺增殖相關(guān)信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白胰島素樣生長(zhǎng)因子1(Insulin-like growth factor 1, IGF-1)、增殖相關(guān)信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白蛋白激酶B(Protein kinase B, Akt)、胞外調(diào)控的蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinase, ERK)以及炎癥信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白Toll樣受體4(Toll-like receptor 4, TLR4)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)和核因子κB激酶抑制劑(Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase, IKK)表達(dá)的影響，旨在揭示高脂日糧對(duì)初情期小鼠乳腺發(fā)育的影響及其分子機(jī)制，為動(dòng)物和人類乳腺健康發(fā)育的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選用20只3周齡昆明雌性小鼠(購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，預(yù)飼喂正常日糧1周后，根據(jù)體質(zhì)量隨機(jī)分為2組：對(duì)照組(飼喂正常日糧，脂肪提供10% 的能量)和高脂日糧組(飼喂高脂日糧，脂肪提供60 % 的能量)，日糧成分配比見表1，每組10只。將小鼠同室分籠飼養(yǎng)，自由采食和飲水；每天光照與黑暗各12 h，環(huán)境溫度控制在(25±1) ℃，濕度(60±5)%。每周進(jìn)行小鼠采食量和體質(zhì)量的測(cè)定，飼養(yǎng)4周后，通過(guò)頸部脫臼方式處死小鼠，采集小鼠乳腺組織并稱質(zhì)量，同時(shí)對(duì)乳腺進(jìn)行染色和基因表達(dá)等檢測(cè)。

表1 對(duì)照組和高脂日糧組日糧成分對(duì)比

Tab.1 Comparison of dietary composition for control group and high-fat diet group

成分日糧質(zhì)量/kg日糧能量/kJ對(duì)照組高脂日糧組對(duì)照組高脂日糧組酷蛋白(80Mesh)189．56258．513172．564325．38L-胱氨酸2．843．8847．5764．89玉米淀粉298．5604996．780麥芽糊精1033．17161．57555．222703．37蔗糖331．7488．675551．961487．91纖維素BW20047．3964．6300豆油23．7032．31892．281216．50豬油18．96316．68713．8311921．85復(fù)合礦物質(zhì)S100269．4812．9300磷酸氫鈣12．3216．8000碳酸鈣5．217．1100檸檬酸鉀(1H2O)15．6421．3300復(fù)合維生素V100019．4812．93158．62216．27重酒石酸氫膽堿1．902．5900FD&C藍(lán)色染料#10．050．0600總計(jì)1000．001000．0016088．8221936．17

1.2 試劑材料

高脂日糧購(gòu)于上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司，HE染色溶液購(gòu)于上海歌凡生物，百里酚、胭脂紅和硫酸鋁鉀購(gòu)于成都艾科達(dá)化學(xué)試劑有限公司，p-JNK/JNK、p-AKT/AKT、p-ERK/ERK等抗體均購(gòu)于Cell Signaling Technology；IGF-I、β-actin購(gòu)于北京博奧森生物科技有限公司；TLR4購(gòu)于Abcam 公司；p-IKK/IKK購(gòu)于Santa Cruz Biotechnology。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

乳腺采集和whole-mount、HE染色：切下雙側(cè)乳腺腹腺體(第4對(duì)乳腺)并稱質(zhì)量，涂布在玻璃載片上，進(jìn)行whole-mount染色(染色液的制備：先將1.0 g胭脂紅和2.5 g硫酸鋁鉀加入500 mL蒸餾水，加熱煮20 min，調(diào)整最終體積為500 mL，過(guò)濾和添加百里酚作為防腐劑)，步驟為：將涂布在玻璃載片上的整塊乳腺組織經(jīng)Carnoy液固定、脫水、著色、透明，最后制片進(jìn)行顯微鏡觀察。同時(shí)，我們對(duì)小鼠的乳腺組織進(jìn)行HE染色，步驟為：組織脫水、包埋、切片、染色、封片，最后在顯微鏡下觀察初情期小鼠乳腺組織結(jié)構(gòu)，比較乳腺組織導(dǎo)管數(shù)量、密度和終末乳芽(Terminal end bud ,TEB)數(shù)量的變化。

組織樣品采集和蛋白表達(dá)檢測(cè)：試驗(yàn)結(jié)束切下雙側(cè)乳腺腹腺體(第4乳腺)并稱質(zhì)量，提取蛋白，通過(guò)Western blot分析檢測(cè)各組小鼠乳腺組織增殖相關(guān)信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白IGF-I(IGF-I/β-actin)、Akt(p-AKT/AKT)、Erk(p-Erk/Erk)及炎癥信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白TRL4(TLR4/β-actin)、JNK(p-JNK/JNK)、IKK(p-IKK/IKK)的表達(dá)，抗體和TBST緩沖液的體積比為1∶2 000。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，統(tǒng)計(jì)分析采用SigmaPlot 12.5軟件分析，采用t檢驗(yàn)比較高脂日糧組和對(duì)照組的統(tǒng)計(jì)差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 高脂日糧對(duì)初情期小鼠采食量、能量攝入和體質(zhì)量增加的影響

如圖1A所示，高脂日糧組小鼠的每周采食量均極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，但高脂日糧組小鼠的能量攝入除第1周極顯著低于對(duì)照組外，其他各周2組小鼠的能量攝入均無(wú)顯著差異(圖1B)；同時(shí)，在整個(gè)試驗(yàn)期，高脂日糧組和對(duì)照組小鼠在體質(zhì)量上無(wú)顯著差異(圖1C)，但從第2周開始，高脂日糧組小鼠的體質(zhì)量增加顯著高于對(duì)照組(P<0.05)(圖1D)。

*、**分別表示與對(duì)照組相比差異達(dá)0.05、0.01的顯著水平(t檢驗(yàn))。

Fig.1 Effects of high-fat diet on the feed intake (A), energy intake (B), body weight (C) and body weight gain (D) of pubertal mice

2.2 高脂日糧對(duì)初情期小鼠乳腺發(fā)育的影響

小鼠乳腺whole-mount染色如圖2A～D所示，與對(duì)照組小鼠相比，高脂日糧組小鼠的乳腺組織在乳腺導(dǎo)管的密度和數(shù)量上有明顯的降低；與whole-mount染色相同， HE染色結(jié)果(圖 2E、2F)也顯示，高脂日糧組的小鼠乳腺的導(dǎo)管數(shù)明顯少于對(duì)照組小鼠。此外，與對(duì)照組小鼠相比，飼喂高脂日糧的小鼠的乳腺質(zhì)量極顯著增加(P<0.01)，且乳腺質(zhì)量與體質(zhì)量的比值也極顯著升高(P<0.01)，但高脂日糧組小鼠乳腺導(dǎo)管的TEB數(shù)量極顯著降低(P<0.01)(表2)。

A、B分別為whole-mount染色后對(duì)照組和高脂日糧組小鼠乳腺組織的低倍顯微鏡照片，C、D分別為whole-mount染色后對(duì)照組和高脂日糧組小鼠乳腺組織的高倍顯微鏡照片；E、F分別為HE染色后對(duì)照組和高脂日糧組小鼠乳腺組織的高倍顯微鏡照片。

圖2 高脂日糧對(duì)初情期小鼠乳腺形態(tài)和導(dǎo)管發(fā)育的影響

Fig.2 Effects of high-fat diet on mammary gland morphology and duct development of pubertal mice

表2 高脂日糧對(duì)初情期小鼠乳腺(第4對(duì))質(zhì)量和終末乳芽數(shù)量的影響1)

Tab.2 Effects of high-fat diet on mammary gland (the fourth pair) weight and the number of terminal end bud of pubertal mice

組別乳腺質(zhì)量/g乳腺質(zhì)量∶體質(zhì)量TEB對(duì)照組0．206±0．0060．53±0．000381±2．41高脂日糧組0．357±0．037??0．97±0．0013??29±2．42??

1) ** 表示與對(duì)照組相比差異達(dá)到0.01的顯著水平(t檢驗(yàn))。

2.3 高脂日糧對(duì)初情期小鼠乳腺組織中IGF-I、增殖及炎癥相關(guān)信號(hào)通路蛋白表達(dá)的影響

如圖3所示，與對(duì)照組小鼠相比，高脂日糧組小鼠的乳腺組織中增殖相關(guān)因子IGF-I蛋白表達(dá)極顯著降低(P<0.01)；同時(shí)p-Akt/Akt、p-ERK/ERK比值極顯著降低(P<0.01)，提示增殖相關(guān)通路Akt和ERK被極顯著抑制。此外，高脂日糧還極顯著提高了小鼠的乳腺組織中炎癥相關(guān)通路蛋白TLR4的蛋白表達(dá)(P<0.01)和顯著提高了JNK磷酸化水平(P<0.05)，但顯著降低IKK的磷酸化水平(P<0.05)。

A：Western blot 條帶；B：圖A的蛋白統(tǒng)計(jì)圖，IGF-I和TLR4的相對(duì)表達(dá)量計(jì)算均以β-actin為內(nèi)參， *、** 分別表示與對(duì)照組相比差異達(dá)0.05、0.01的顯著水平(t檢驗(yàn))。

圖3 高脂日糧對(duì)初情期小鼠乳腺增殖及炎癥相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

Fig.3 Effects of high-fat diet on the expressions of proteins associated with proliferation and inflammation in mammary glands of pubertal mice

3 討論與結(jié)論

3.1 高脂日糧對(duì)初情期小鼠體質(zhì)量、體質(zhì)量增加、采食量和能量攝入的影響

有文獻(xiàn)報(bào)道，在高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠肥胖試驗(yàn)中，小鼠體質(zhì)量在第10周以后才出現(xiàn)顯著升高[11]。此外，Kamikawa等[10]在研究飲食引起的肥胖對(duì)妊娠小鼠乳腺導(dǎo)管影響的試驗(yàn)中，也得到了類似的結(jié)果。本研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組和高脂日糧組小鼠體質(zhì)量在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)(第8周)無(wú)顯著差異，這與文獻(xiàn)結(jié)果相一致。雖然高脂日糧對(duì)體質(zhì)量無(wú)顯著影響，但卻可以顯著影響小鼠的體質(zhì)量增加。此外，高脂日糧組小鼠的采食量顯著低于對(duì)照組，這與Mcfarlane等[12]報(bào)道相同。盡管高脂日糧組小鼠采食量低于對(duì)照組，但由于高脂日糧的能量較高，高脂日糧組小鼠在能量攝入方面與對(duì)照組并無(wú)顯著差異。

3.2 高脂日糧對(duì)初情期小鼠乳腺導(dǎo)管發(fā)育的影響

在本試驗(yàn)中，whole-mount染色和HE染色結(jié)果表明，高脂日糧可顯著降低乳腺導(dǎo)管的密度和數(shù)量以及TEB的數(shù)量，提示高脂日糧可顯著抑制初情期小鼠乳腺的發(fā)育。我們的結(jié)果與Olson等[13]報(bào)道的初情期飼喂高脂日糧抑制C57BL/6小鼠乳腺發(fā)育的結(jié)果相一致。除了對(duì)初情期小鼠乳腺發(fā)育具有明顯的抑制作用，高脂日糧還可抑制妊娠期、哺乳期和成年未孕小鼠的乳腺發(fā)育。研究顯示，妊娠后期和哺乳期肥胖可導(dǎo)致小鼠乳腺導(dǎo)管長(zhǎng)度變短、分支變少及導(dǎo)管寬度變窄[8]。同時(shí)，飲食導(dǎo)致的肥胖也會(huì)阻礙性成熟未孕小鼠的乳腺導(dǎo)管發(fā)育[10]。此外，本試驗(yàn)中我們還發(fā)現(xiàn)高脂日糧組小鼠的乳腺質(zhì)量與體質(zhì)量比極顯著高于對(duì)照組，這可能與高脂日糧促進(jìn)了小鼠皮下脂肪沉積有關(guān)。

3.3 高脂日糧對(duì)初情期小鼠乳腺組織增殖和炎癥相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

研究發(fā)現(xiàn)，IGF-I在初情期小鼠優(yōu)先激活PI3K/Akt通路，增加細(xì)胞周期蛋白D1(cyclin D1)表達(dá)，而在初情期后則以Erk通路的活化為主，并不增加cyclin D1表達(dá)，提示小鼠乳腺發(fā)育的不同時(shí)期可能受不同信號(hào)通路的調(diào)控[14]。與以上報(bào)道相一致的是，本研究結(jié)果顯示，高脂日糧顯著降低小鼠乳腺組織增殖相關(guān)蛋白IGF-I的表達(dá)量，同時(shí)顯著抑制增殖相關(guān)通路Akt和Erk的活性。以上結(jié)果提示，高脂日糧可能是通過(guò)抑制增殖信號(hào)(IGF-1、Akt和Erk)來(lái)抑制初情期小鼠乳腺發(fā)育的。

研究表明，高脂日糧不僅能夠促進(jìn)下丘腦和肝臟組織中的炎癥反應(yīng)[15-16]，也可導(dǎo)致乳腺組織的局部炎癥[17]。我們的結(jié)果也顯示，高脂日糧可顯著提高初情期小鼠乳腺組織的炎癥信號(hào)分子(TLR4、p-JNK)的表達(dá)。在脂多糖誘導(dǎo)的小鼠乳腺炎模型和脂多糖處理的小鼠原代乳腺上皮細(xì)胞中，炎癥因子TLR4表達(dá)會(huì)升高，同時(shí)細(xì)胞凋亡增加[18]。本研究中，高脂日糧顯著促進(jìn)初情期小鼠乳腺TLR4的表達(dá)，也可能是促進(jìn)了乳腺上皮細(xì)胞的凋亡，進(jìn)而抑制乳腺發(fā)育。同時(shí)，JNK基因敲除小鼠乳腺組織的分支好于野生型小鼠，提示JNK的激活與乳腺分支形態(tài)呈負(fù)相關(guān)[19]。而本試驗(yàn)結(jié)果中高脂日糧顯著促進(jìn)JNK的磷酸化，提示高脂日糧可能通過(guò)激活JNK通路抑制初情期小鼠乳腺的發(fā)育。此外，文獻(xiàn)報(bào)道炎癥信號(hào)通路IKK促進(jìn)核轉(zhuǎn)錄因子kappa B(Nuclear factor kappa B，NF-кB)的表達(dá)，而NF-κB在小鼠發(fā)育早期階段的分泌量過(guò)少會(huì)阻礙小鼠乳腺的發(fā)育(乳腺上皮細(xì)胞的增殖和乳腺導(dǎo)管的分支)[20]。本研究表明，高脂日糧顯著抑制初情期小鼠乳腺IKK的磷酸化，提示高脂日糧也可能通過(guò)抑制IKK的激活降低NF-κB的表達(dá)，進(jìn)而抑制乳腺的發(fā)育。

綜上所述，高脂日糧可抑制初情期小鼠乳腺發(fā)育，其乳腺導(dǎo)管數(shù)量和密度降低，TEB數(shù)量減少。高脂日糧對(duì)初情期小鼠乳腺發(fā)育的抑制作用可能是通過(guò)抑制增殖相關(guān)信號(hào)(IGF-1、Akt和Erk)和促進(jìn)炎癥相關(guān)信號(hào)(TLR4、JNK)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。研究結(jié)果為動(dòng)物和人類乳腺健康發(fā)育的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控提供了科學(xué)的參考依據(jù)。

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【責(zé)任編輯 莊 延】

Effect of high-fat diet on mammary gland development ofpubertal mice and the molecular mechanism

MENG Yingying, ZHANG Jing, ZHANG Fenglin, AI Wei, ZHU Xiaotong,SHU Gang, WANG Lina, GAO Ping, JIANG Qingyan, WANG Songbo

(College of Animal Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China)

【Objective】 To investigate the effect of high-fat diet (HFD) on mammary gland development of pubertal mice and explore the possible underlying mechanisms.【Method】 Twenty 4-week-old Kunming female mice were randomly divided into control group and HFD group. The trial lasted for four weeks. The body weight and feed intake were recorded weekly. At the end of the trial, mammary glands were collected and weighed. The morphology and number of ducts were observed by using whole-mount and HE staining. Western blot was used to analyze the expressions of insulin-like growth factor 1 (IGF-1), proliferation related signaling pathway proteins such as protein kinase B (Akt) and extracellular regulated protein kinases (ErK), as well as inflammation related signaling pathway proteins, including toll-like receptor 4 (TLR4), c-Jun N-terminal kinase (JNK) and inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase (IKK) in the mammary glands.【Result】 The feed intake of the HFD group was significantly lower than that of control group(P<0.05), There was no significant difference in energy intakes between two groups. The body weight gain of HFD group was significantly higher than that of control group (P<0.05). In addition, HFD significantly increased mammary gland weight and the ratio of mammary gland weight to body weight (P<0.01). The results of whole-mount and HE staining demonstrated that the mammary gland development of HFD group mice were markedly inhibited, with significantly decreased duct number, duct density and number of terminal end buds (P<0.01). HFD significantly inhibited IGF-1 expression and the phosphorylation of Akt， Erk and IKK in mammary glands (P<0.01 or 0.05)， while significantly promoted TLR4 expression (P<0.01) and JNK phosphorylation (P<0.05). 【Conclusion】 HFD can suppress mammary gland development of pubertal mice, which might result from the inhibiton of proliferative signals and stimulation of inflammatory signals.

high-fat diet (HFD); mouse; mammary gland development; proliferation; inflammation;protein expression

2016- 07- 17 優(yōu)先出版時(shí)間：2017-04-12

孟瑩瑩(1989—)，男，碩士研究生，E-mail：1326036268 @qq.com；通信作者：王松波(1980—)，男，副教授，博士，E-mail：songbowang@scau.edu.cn

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(2016YFD0500503)；廣東省特支計(jì)劃(2014TQ01N260)

S828

A

1001- 411X(2017)03- 0009- 06

優(yōu)先出版網(wǎng)址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/44.1110.s.20170412.1431.022.html

孟瑩瑩， 張 靜， 張楓琳， 等.高脂日糧對(duì)初情期小鼠乳腺發(fā)育的影響及分子機(jī)制[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2017, 38(3):9- 14.