• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    2株枯草芽孢桿菌的分離鑒定及特性研究

    2017-05-11 02:57:14巴翠玉張林波張培軍趙福廣李月紅
    華南農(nóng)業(yè)大學學報 2017年3期
    關(guān)鍵詞:耐受性脂肪酶枯草

    巴翠玉, 張林波, 張培軍, 趙福廣, 李月紅

    (1吉林農(nóng)業(yè)大學 動物科學技術(shù)學院,吉林 長春 130118; 2 吉林農(nóng)業(yè)大學 生命科學學院,吉林 長春 130118;3吉林省衛(wèi)生監(jiān)測檢驗中心,吉林 長春 130000)

    2株枯草芽孢桿菌的分離鑒定及特性研究

    巴翠玉1,2, 張林波1,2, 張培軍3, 趙福廣1,2, 李月紅1,2

    (1吉林農(nóng)業(yè)大學 動物科學技術(shù)學院,吉林 長春 130118; 2 吉林農(nóng)業(yè)大學 生命科學學院,吉林 長春 130118;3吉林省衛(wèi)生監(jiān)測檢驗中心,吉林 長春 130000)

    【目的】尋求適合制作水產(chǎn)類微生態(tài)制劑的益生菌?!痉椒ā?從養(yǎng)魚塘底泥和健康鯽魚Carassiusauratus腸道中分離芽孢桿菌,結(jié)合細菌形態(tài)學、生理生化特征和16S rRNA序列分析對其進行鑒定,對菌株安全性、高溫耐受性、酸性耐受性、拮抗性及產(chǎn)酶情況等特性進行研究?!窘Y(jié)果】分離到2株芽孢桿菌,分別命名為B1和B2,細菌形態(tài)學、生理生化特征和16S rRNA序列分析的結(jié)果顯示,B1和B2均為枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis。特性研究結(jié)果證實B1、B2菌株都具有較好的安全性、高溫耐受性和酸性耐受性,可對致病性大腸埃希菌Escherichiacoli、金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus、嗜水氣單胞菌Aeromonashydrophila以及溫和氣單胞菌A.sobria有良好的體外抑菌能力,均具有產(chǎn)脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶和纖維素酶的能力?!窘Y(jié)論】分離到2株性能優(yōu)良的枯草芽孢桿菌,可將其作為水產(chǎn)微生態(tài)制劑的候選菌株。

    枯草芽孢桿菌; 分離鑒定; 菌株特性; 鯽魚; 16S rRNA

    枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis是一類好氧產(chǎn)芽孢的革蘭陽性桿狀細菌,大小為(0.7~0.8)μm×(2~3)μm,無莢膜,有鞭毛, 能運動,廣泛存在于土壤、湖泊、海洋和動植物的體表,無致病性。菌落粗糙、不透明、擴張、污白色或微帶黃色。在營養(yǎng)缺乏的條件下,枯草芽孢桿菌停止生長,同時加快代謝作用,產(chǎn)生多種大分子的水解酶和抗生素,并誘導自身的能動性和趨化性,從而恢復生長。在極端的條件下,還可以誘導產(chǎn)生抗逆性很強的內(nèi)源孢子[1]。由于枯草芽孢桿菌具有生長速度快、營養(yǎng)簡單以及耐熱、可產(chǎn)抗逆芽孢等突出特征,而使其不僅有利于在微生態(tài)制劑生產(chǎn)、加工等環(huán)境中的存活、定殖與繁殖, 并且其成本較低,施用方便,儲存期長,因此現(xiàn)已成為一種理想的微生態(tài)制劑菌種,可有效減少或替代抗生素在養(yǎng)殖過程中的使用。我國農(nóng)業(yè)部2003年12月9日在第318號公告中公布了15種可以作為微生物飼料添加劑的菌種,其中就包括枯草芽孢桿菌。本試驗對從鯽魚腸道和養(yǎng)殖池底泥中分離到的2株芽孢桿菌進行菌落形態(tài)觀察、生理生化特征和16S rRNA 序列分析來綜合鑒定,并對其安全性、耐受性、拮抗性和產(chǎn)酶情況進行了分析,以期得到高生物活性的益生菌菌株,為進一步研制水產(chǎn)類微生態(tài)制劑提供優(yōu)良的益生菌菌種。

    1 材料與方法

    1.1 供試菌株及試驗材料

    指示菌:嗜水氣單胞菌Aeromonashydrophila、溫和氣單胞菌A.sobria、金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus和大腸埃希菌Escherichiacoli均由吉林農(nóng)業(yè)大學水產(chǎn)研究室保存。

    試驗動物:健康的當年鯽魚Carassiusauratus200尾,平均體質(zhì)量(55.42±0.58) g,購自吉林省新立城水庫。

    主要試劑:產(chǎn)淀粉酶篩選培養(yǎng)基、蛋白酶篩選培養(yǎng)基和纖維素酶篩選培養(yǎng)基按趙東等[2]方法配制,產(chǎn)脂肪酶篩選培養(yǎng)基按李璟等[3]方法配制,革蘭染色試劑盒購自上海銘睿生物科技有限公司、細菌基因組DNA提取試劑盒、Taq酶等購自TaKaRa公司。

    主要設(shè)備: PhoenixTM100 型全自動微生物分析儀(美國BD公司),YXQ-LS-50A立式壓力蒸汽滅菌鍋(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠),恒溫培養(yǎng)箱(金壇市國旺試驗儀器廠 ),SW-CJ-2FD型超凈工作臺(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠),TG-16WS臺式高速離心機(長沙湘智離心機儀器有限公司),LifePro梯度PCR儀(杭州博日科技有限公司),凝膠成像系統(tǒng)(基因有限公司)。

    1.2 菌株的分離

    無菌條件下分別取養(yǎng)殖池底泥和鯽魚腸道,加入無菌的生理鹽水制成勻漿,將勻漿稀釋至合適稀釋度,取其中3個最適稀釋度的稀釋液200 μL涂布于芽孢桿菌分離培養(yǎng)基上,37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。挑取形態(tài)一致的優(yōu)勢菌群進行純培養(yǎng),待菌落形態(tài)生長一致時,挑取單菌落,用體積分數(shù)為80%的甘油對其進行菌落的保藏,備用。

    1.3 菌株的鑒定

    1.3.1 形態(tài)學及生理生化鑒定 觀察菌落形態(tài)及革蘭染色效果,并用PhoenixTM100 型全自動微生物分析儀,參考說明書方法對菌落進行生理生化鑒定。

    1.3.2 16S rRNA序列分析鑒定 16S rRNA序列擴增參考魏亞松等[4]設(shè)計的特異性引物:正向引物Primer A 5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′,反向引物Primer B:5′-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3′,由上海生工生物工程有限公司合成。用細菌基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA,以此為模板進行PCR擴增。PCR反應(yīng)體系(50 μL):TaKaRa LA-Taq0.5 μL, DNA模板2 μL,10×PCR Buffer 5 μL,dNTP Mixture 8 μL,上、下游引物各2 μL,雙蒸水30.5 μL。PCR程序:94 ℃預變性5 min,94 ℃ 30 s,54 ℃ 30 s,72 ℃ 1 min,30個循環(huán);72 ℃延伸7 min。PCR產(chǎn)物純化后交由上海生工生物工程有限公司進行測序。測序結(jié)果通過NCBI數(shù)據(jù)庫進行Blast比對分析,通過MEGA5.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

    1.4 安全性試驗

    試驗鯽魚經(jīng)1周馴化后,選擇適應(yīng)環(huán)境、體格健壯的鯽魚200尾,隨機分4組,1組為對照組,其余3組為試驗組(試驗I、II和III組),每組50尾魚,采用腹腔注射方法,對照組每尾魚注射0.1 mL無菌液體LB,3個試驗組分別注射0.1 mL含有芽孢桿菌菌懸液1×109、1×108和1×107cfu·mL-1的液體LB。23 ℃ 水溫條件下飼養(yǎng) 7 d,觀察并記錄死亡情況,最后剖檢,觀察有無病變。

    1.5 高溫耐受性試驗

    參照文獻[5]的方法,將菌株用液體LB培養(yǎng)基培養(yǎng) 48 h后, 3 500 r· min-1離心 30 min,取上清液,無菌操作將其稀釋至一定的倍數(shù),將最后2個梯度各分成3組,分別置于 80、90和100 ℃水浴鍋中30 min,流水冷卻,以室溫下未經(jīng)水浴的菌株培養(yǎng)作為對照,采用平板計數(shù)法計算水浴后的存活率,據(jù)此判斷其對溫度的耐受性,每個試驗重復3次。

    1.6 酸性耐受性試驗

    參照文獻[6],將芽孢桿菌菌懸液分別接種到pH為3.0、4.0、5.0的液體LB培養(yǎng)基中,使芽孢桿菌初始濃度約為1×106cfu·mL-1,37 ℃條件下 120 r· min-1搖床中培養(yǎng),1 h后取200 μL涂布于固體培養(yǎng)基上,進行平板計數(shù),計算存活率,每個試驗重復3次。

    1.7 體外抑菌試驗

    采用牛津杯法測定各個菌株的抑菌活性[7]。活化指示菌和芽孢桿菌,調(diào)整菌濃度為106cfu·mL-1,取指示菌200 μL用涂布棒均勻涂布于固體LB平板,取無菌牛津杯置于其上,使其緊貼于培養(yǎng)基上,每個牛津杯加入0.2 mL 芽孢桿菌菌液。將平板置于30 ℃恒溫箱培養(yǎng)24 h后測抑菌圈直徑,計算抑菌圈與菌圈直徑的比值。試驗重復3次。

    1.8 產(chǎn)酶試驗

    1.8.1 平板法胞外酶活性初篩 挑選單菌落點種于纖維素酶篩選培養(yǎng)基、淀粉酶篩選培養(yǎng)基、蛋白酶篩選培養(yǎng)基和脂肪酶篩選培養(yǎng)基,37 ℃條件下培養(yǎng)48 h后觀察,如有透明圈則表示細菌產(chǎn)酶。觀察淀粉酶篩選培養(yǎng)基時需滴加魯哥氏碘液。計算水解圈與菌落直徑的比值,其大小表示初篩酶活性。

    1.8.2 發(fā)酵液法胞外酶活性測定 選取胞外酶活性初篩結(jié)果中4種胞外酶均有活性的菌株進行胞外酶活性測定。淀粉酶活性采用碘-淀粉比色法[8]測定,纖維素酶活性采用羧甲基纖維素鈉鹽( CMC-Na) 酶活性測定方法[9]測定,蛋白酶活性采用福林酚法[10]測定。脂肪酶活性采用橄欖油乳化液法[11]測定。

    1.9 數(shù)據(jù)處理

    用Excel統(tǒng)計分析數(shù)據(jù),試驗結(jié)果用平均數(shù)±標準差表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 形態(tài)學及生理生化鑒定結(jié)果

    從養(yǎng)殖池底泥和鯽魚腸道中各分離出1株芽孢桿菌,分別命名為B1和B2。2株菌的菌落形態(tài)都呈白色近似圓形,不透明,表面干燥沒有光澤,中間褶皺邊緣不整齊;革蘭染色結(jié)果為陽性,在顯微鏡下觀察菌體呈桿狀,兩端鈍圓,孢囊無明顯膨脹,無伴孢晶體。用PhoenixTM100 型全自動微生物分析儀對菌株B1和B2 進行鑒定,結(jié)果見表1,參照《伯杰細菌鑒定手冊》及儀器分析結(jié)果,初步鑒定這2株菌均為枯草芽孢桿菌。

    表1 菌株生化鑒定結(jié)果1)

    1)“+ ”表示生化反應(yīng)陽性; “- ”表示生化反應(yīng)陰性。

    2.2 分子生物學鑒定結(jié)果

    以菌株B1和B2的基因組DNA為模板進行PCR擴增,結(jié)果擴增到特異性的16S rRNA片段大小為1 500 bp(圖1)。將2株菌的測序結(jié)果在NCBI中進行Blast比對,結(jié)果表明:菌株B1與菌株BacillussubtilisBS3902(登錄號:EU047884.1)的序列相似性為99%;菌株B2與B.subtilisAER314-2(登錄號:KR967391.1)的序列相似性為99%。通過MEGA5.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)進化樹,結(jié)果顯示菌株B1和B2都與枯草芽孢桿菌親緣關(guān)系最近,聚類為一支(圖2)。

    M:250 bp DNA marker DL4500;1:菌株B1;2:菌株B2 。

    圖1 菌株 16S rRNA PCR擴增結(jié)果

    Fig.1 PCR amplification of 16S rRNA gene in two strains

    圖2 菌株16S rRNA系統(tǒng)發(fā)育分析

    2.3 安全性試驗結(jié)果

    注射0.1 mL濃度分別為1×109、1×108和1×107cfu·mL-1的枯草芽孢桿菌菌懸液后,與對照組相比,鯽魚未出現(xiàn)死亡,解剖發(fā)現(xiàn)對照組和試驗組內(nèi)臟菌正常無變異。說明2株枯草芽孢桿菌都有很好的安全性。

    2.4 高溫耐受性試驗結(jié)果

    高溫耐受性試驗結(jié)果見表2。由表2可知,2株枯草芽孢桿菌對不同溫度的耐受性不同,在相同時間(30 min)內(nèi),菌株在80 ℃條件下的存活率明顯高于100 ℃條件下的存活率,并隨著溫度的上升存活率不斷下降。表2數(shù)據(jù)顯示,菌株B2對高溫的耐受能力略強于B1。

    表2 不同水浴溫度下枯草芽孢桿菌的存活率

    Tab.2 The livability ofBacillussubtilisstrain under different temperatures%

    2.5 酸性耐受性試驗結(jié)果

    由表3可知,2株芽孢桿菌分別在pH 3.0、4.0、5.0條件下處理1 h后的存活率都在97%以上,說明2個菌株都有較好的酸性耐受能力。在pH3.0、4.0和5.0條件下,菌株B1的存活率分別為97.16%、98.43%和99.27%,菌株B2的存活率分別為97.37%、98.83%和99.43%。

    表3 不同pH環(huán)境下枯草芽孢桿菌的存活率

    Tab.3 The livability ofBacillussubtilisstrain under different pH%

    2.6 體外抑菌試驗結(jié)果

    以大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、嗜水氣單胞菌和溫和氣單胞菌為指示菌,進行抑菌性分析,抑菌圈直徑大小可反映這2株枯草芽孢桿菌對致病菌體外抑制能力的強弱,結(jié)果見表4,菌株B2的抑菌圈/菌圈直徑比數(shù)值上均大于菌株B1,說明菌株B2比B1對這4種指示菌可能有較強的抑制作用。

    表4 枯草芽孢桿菌對指示菌的拮抗作用

    2.7 產(chǎn)酶試驗結(jié)果

    2.7.1 平板法胞外酶活性初篩結(jié)果 由表5可以看出,菌株B1和B2都可產(chǎn)淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶和纖維素酶,不同菌株產(chǎn)酶種類和能力不同。對于2株枯草芽孢桿菌,反映其產(chǎn)淀粉酶能力的染色圈直徑/菌落直徑(H/C)及產(chǎn)蛋白酶能力的H/C數(shù)值上均為B2>B1;反映其產(chǎn)纖維素酶能力的H/C及產(chǎn)脂肪酶能力的H/C數(shù)值上均為B1>B2;說明菌株B2較B1產(chǎn)淀粉酶和蛋白酶能力水平可能較高,產(chǎn)纖維素酶和脂肪酶能力可能稍弱。

    表5 不同菌株胞外酶活性初篩結(jié)果

    2.7.2 發(fā)酵液法胞外酶活性測定結(jié)果 因發(fā)現(xiàn)平板法H/C不能完全代表菌株產(chǎn)酶能力,所以對產(chǎn)酶菌株進行發(fā)酵液法胞外酶產(chǎn)酶活性測定是非常必要的。由表6可以看出,產(chǎn)蛋白酶、纖維素酶和脂肪酶活力較高的菌株為B2,產(chǎn)淀粉酶活力較高的菌株為B1,與初篩結(jié)果有所不同。

    表6 不同菌株發(fā)酵液的胞外酶活性

    3 討論與結(jié)論

    近年來,芽孢桿菌類微生態(tài)制劑被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖以替代或減少抗生素的使用,降低其帶來的危害,使用的芽孢桿菌類型也是多種多樣??莶菅挎邨U菌因在缺乏營養(yǎng)或不良環(huán)境時,可以通過生成內(nèi)生孢子來增強其抗逆性,并且其耐加工、耐儲藏、耐胃酸,穩(wěn)定性較好,也可以通過孢子形式進入到消化道,并且可與腸道上的特異性結(jié)合位點結(jié)合,形成優(yōu)勢菌群,進行生物奪氧,也可以產(chǎn)生多種代謝物質(zhì),抑制病原菌的生長,是較好的微生態(tài)制劑菌種,具有開發(fā)為微生態(tài)制劑的潛在優(yōu)勢。胡凡光等[12]選用從健康大菱鲆魚Psettamaxima體腸道分離培養(yǎng)的同源枯草芽孢桿菌制成的飼料添加劑對大菱鲆進行促生長影響的研究。結(jié)果表明:與對照組相比試驗組降低了飼料系數(shù),提高了蛋白質(zhì)效率和增重率。李衛(wèi)芬等[13]將草魚Ctenopharyngodonidellus試驗組飼喂含枯草芽孢桿菌( 108cfu·kg-1) 的基礎(chǔ)日糧,結(jié)果發(fā)現(xiàn):試驗組腸道內(nèi)容物中胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性比對照組顯著提高;肝胰臟中脂肪酶和胰蛋白酶活性也比對照組顯著提高。腸道菌群數(shù)量分析顯示,與對照組相比,試驗組腸道芽孢桿菌和假單胞菌數(shù)量極顯著提高,而致病性弧菌和大腸埃希菌數(shù)量卻極顯著降低。丁祥力等[14]從淡水養(yǎng)殖污水和底泥中分離出1株枯草芽孢桿菌WH-5,試驗證明其具有改善淡水養(yǎng)殖水體水質(zhì)的有效作用。

    微生態(tài)制劑在生產(chǎn)過程中一般把篩選益生菌作為關(guān)鍵的一步,因為種屬特異性是篩選合適益生菌的一個先決條件,不同來源的芽孢桿菌在不同動物胃腸道內(nèi)的黏附繁殖能力及相關(guān)生理功能有所不同,故一般認為從相應(yīng)的水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境分離菌株用于篩選水產(chǎn)微生態(tài)制劑更具合理性,所以本試驗從養(yǎng)殖池底泥和鯽魚腸道中進行芽孢桿菌的分離,分離得到2株芽孢桿菌,分別命名為B1和B2。運用傳統(tǒng)的細菌形態(tài)學觀察、生理生化試驗及16S rRNA序列對分離出的2株芽孢桿菌進行分析鑒定,結(jié)果B1和B2均為枯草芽孢桿菌。優(yōu)良的水產(chǎn)微生態(tài)制劑應(yīng)具備安全、耐高溫、抗酸腐蝕、抑菌能力強、可產(chǎn)酶等特點[15],故本試驗從這幾方面對B1和B2這2株枯草芽孢桿菌的益生特性進行了探究。菌株安全性試驗結(jié)果表明,這2株枯草芽孢桿菌均具有安全性,無致病能力。高溫耐受性和pH耐受性試驗發(fā)現(xiàn),這2株枯草芽孢桿菌均具有良好的耐高溫和耐酸能力,且B2菌株的效果數(shù)值上好于B1菌株。體外抑菌試驗的抑菌能力:B2>B1,兩者均對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、嗜水氣單胞菌和溫和氣單胞菌有抑制效果,對大腸埃希菌的抑制效果最好。產(chǎn)酶試驗結(jié)果表明:B1和B2菌株都能夠分泌淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶和脂肪酶,有望用于魚蝦等的飼料添加劑,促進魚蝦生長及提高飼料利用率;同時,可利用枯草芽孢桿菌分解養(yǎng)殖水體中過剩餌料中的有機物,凈化水體及脫氮[16]。因此,枯草芽孢桿菌B1和B2適合用于研發(fā)水產(chǎn)類微生態(tài)制劑,并需進一步研究其功能和機理。本研究為進一步研制水產(chǎn)類微生態(tài)制劑提供了優(yōu)良的益生菌菌種參考。

    [1] 沈衛(wèi)鋒, 牛寶龍, 翁宏飚, 等. 枯草芽孢桿菌作為外源基因表達系統(tǒng)的研究進展[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學報, 2005, 17(4): 234-238.

    [2] 趙東, 牛廣杰, 彭志云, 等. 包包曲中5株枯草芽孢桿菌的分離與初步鑒定[J]. 中國釀造, 2010(8): 65-68.

    [3] 李璟, 蘭貴紅, 張飛偉, 等. 產(chǎn)脂肪酶微生物的篩選鑒定及脂肪酶lipA基因克隆[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學, 2012, 39(17): 138-142.

    [4] 魏亞松, 鄒玲, 溫建新, 等. 水貂腸道枯草芽孢桿菌的分離及16S rRNA鑒定[J]. 中國動物檢疫, 2013, 30(6): 36-39.

    [5] 陳海華. 一株益生芽孢桿菌的篩選及其腸道菌群調(diào)節(jié)作用研究[D]. 重慶:第三軍醫(yī)大學, 2005.

    [6] 周金敏, 吳志新, 曾令兵, 等. 黃顙魚腸道病原拮抗性芽孢桿菌的篩選與特性研究[J]. 水生生物學報, 2012, 36(1): 78-84.

    [7] 劉冬梅, 李理, 楊曉泉, 等. 用牛津杯法測定益生菌的抑菌活力[J]. 食品研究與開發(fā), 2006, 27(3): 110-111.

    [8] 白燕, 王維新. 刺參腸道蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶與纖維素酶活性的測定方法[J]. 飼料工業(yè), 2012, 33(20): 28-32.

    [9] 趙玉萍, 楊娟. 四種纖維素酶酶活測定方法的比較[J]. 食品研究與開發(fā), 2006, 27(3): 116-118.

    [10]中華人民共和國專業(yè)標準. 蛋白酶活力測定方法: SB/T10317-1999[S]. 北京: 中國標準出版社, 1999.

    [11]郭曉軍, 郭威, 袁洪水, 等. 一株飼用產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌的篩選及其紫外誘變育種[J]. 中國飼料, 2015,15(12): 27-29.

    [12]胡凡光, 郭萍萍, 麻丹萍. 飼料中添加枯草芽孢桿菌對促進大菱鲆生長及養(yǎng)殖水環(huán)境的影響[J]. 漁業(yè)現(xiàn)代化, 2014, 41(2): 7-11.

    [13]李衛(wèi)芬, 沈濤, 陳南南, 等. 飼料中添加枯草芽孢桿菌對草魚消化酶活性和腸道菌群的影響[J]. 大連海洋大學學報, 2012, 27(3): 221-225.

    [14]丁祥力, 王震, 陳薇, 等. 枯草芽孢桿菌WH-5的分離鑒定及凈水研究[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學, 2012(1): 15-19.

    [15]邵建軍, 朱瑞良. 微生態(tài)制劑的作用及應(yīng)用中應(yīng)注意的問題[J]. 四川畜牧獸醫(yī), 2003, 30(9): 45-46.

    [16]JOONG K K, KYOUNG J P, KYOUNG S C, et al. Aerobic nitrification-denitrification by heterotrophicBacillusstrains[ J] . Bioresour Technol, 2005, 96(17):1897-1906.

    【責任編輯 李曉卉】

    Isolation, identification and characterization oftwo strains ofBacillussubtilis

    BA Cuiyu1,2, ZHANG Linbo1,2, ZHANG Peijun3, ZHAO Fuguang1,2, LI Yuehong1,2

    (1 Animal Science and Technology College,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,China;2 College of Life Sciences,Jilin Agricultural University,Changchun 130118,China;3 Jilin Province Health Surveillance Inspection Center,Changchun 130000,China)

    【Objective】 To explore potential probiotics in order to develop microecological agents for aquiculture.【Method】Bacillusstains were isolated from the pond sediment and healthy carp (Carassiusauratus) intestine. The strains were identified by the morphological, physiological and biochemical characteristics and 16S rRNA sequence analysis. The safety, high temperature tolerance, pH tolerance, antagonistic effects and enzyme production of the strains were studied.【Result】 TwoBacillusstrains were isolated and named B1 and B2. They were identified asB.subtilisby morphology, physiological and biochemical characteristics and 16S rRNA sequence analysis. The B1 and B2 strains had good safety, high temperature tolerance and strong tolerance of acid. They had good antibacterial activity against pathogenicEscherichiacoli,Staphylococcusaureus,AeromonashydrophilaandA.sobriainvitro, and had the ability to produce lipase, amylase, protease and cellulase. 【Conclusion】TwoB.subtilisstrains were isolated, and both can be used as candidates for developing microecological agents for aquiculture.

    Bacillussubtilis; isolation and identification; strain characteristic;Carassiusauratus;16S rRNA

    2016- 06- 22 優(yōu)先出版時間:2017-04-12

    巴翠玉(1992—),女,碩士研究生,E-mail:bacuiyu@163.com; 通信作者:李月紅(1968—),女,教授,博士,E-mail:liyhong@sina.com

    國家自然科學基金(30972191);吉林省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(201506),吉林省留學人員創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)項目(201523)

    S917.1

    A

    1001- 411X(2017)03- 0046- 06

    優(yōu)先出版網(wǎng)址:http://kns.cnki.net/kcms/detail/44.1110.s.20170412.1427.018.html

    巴翠玉, 張林波, 張培軍, 等.2株枯草芽孢桿菌的分離鑒定及特性研究[J].華南農(nóng)業(yè)大學學報,2017,38(3):46- 51.

    猜你喜歡
    耐受性脂肪酶枯草
    枯草芽孢桿菌在養(yǎng)雞生產(chǎn)中的應(yīng)用
    湖南飼料(2021年4期)2021-10-13 07:32:46
    4個地被菊新品系對濕熱脅迫的耐受性研究
    園林科技(2020年2期)2020-01-18 03:28:18
    歲末
    揚子江(2019年3期)2019-05-24 14:23:10
    脂肪酶Novozyme435手性拆分(R,S)-扁桃酸
    脂肪酶N435對PBSA與PBSH的酶催化降解和分子模擬
    中國塑料(2016年7期)2016-04-16 05:25:53
    巴氏醋桿菌核酸修復酶UvrA對大腸桿菌耐受性的影響
    miR-29b通過靶向PI3K/Akt信號通路降低胃癌細胞對順鉑的耐受性
    阿米替林治療腦卒中后中樞痛的療效和耐受性分析
    脂肪酶固定化新材料
    脂肪酶催化月桂酸淀粉酯的合成
    食品科學(2013年6期)2013-03-11 18:20:10
    伊人久久精品亚洲午夜| 欧美性猛交黑人性爽| av视频在线观看入口| 在线免费十八禁| 亚洲一区高清亚洲精品| 99久久精品一区二区三区| 大香蕉久久网| 亚洲欧美精品专区久久| 有码 亚洲区| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 乱人视频在线观看| 少妇熟女欧美另类| av专区在线播放| 中文亚洲av片在线观看爽| 久久99蜜桃精品久久| 精品久久国产蜜桃| videossex国产| 国产69精品久久久久777片| 一级毛片aaaaaa免费看小| 欧美激情久久久久久爽电影| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产高清国产精品国产三级 | 丝袜喷水一区| 国产av码专区亚洲av| 欧美bdsm另类| 偷拍熟女少妇极品色| 国产精品嫩草影院av在线观看| 欧美高清性xxxxhd video| 麻豆成人av视频| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲四区av| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 丰满乱子伦码专区| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久精品人妻少妇| 天堂√8在线中文| 一区二区三区乱码不卡18| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 日韩成人伦理影院| 国产极品天堂在线| 中国国产av一级| 国产淫片久久久久久久久| 级片在线观看| 久久精品91蜜桃| 婷婷六月久久综合丁香| 丰满少妇做爰视频| 国产日韩欧美在线精品| 欧美三级亚洲精品| 长腿黑丝高跟| 成人av在线播放网站| 久久久久久久亚洲中文字幕| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲av免费在线观看| av国产久精品久网站免费入址| 中文字幕亚洲精品专区| 久久久久久久久久成人| 欧美日韩在线观看h| 欧美性猛交黑人性爽| 搞女人的毛片| 能在线免费观看的黄片| 久久久色成人| 嫩草影院入口| 插阴视频在线观看视频| 国产视频首页在线观看| 舔av片在线| 91在线精品国自产拍蜜月| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲高清免费不卡视频| 美女内射精品一级片tv| 免费黄色在线免费观看| 免费人成在线观看视频色| 免费观看在线日韩| 最近最新中文字幕免费大全7| videossex国产| 精品久久久久久久久久久久久| 白带黄色成豆腐渣| 我的女老师完整版在线观看| 成人性生交大片免费视频hd| 尾随美女入室| 欧美日韩精品成人综合77777| 日本免费a在线| 久久精品久久久久久久性| 欧美高清成人免费视频www| ponron亚洲| 九色成人免费人妻av| 99在线视频只有这里精品首页| 久久久精品大字幕| 欧美精品一区二区大全| 亚洲最大成人av| 99热全是精品| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 美女大奶头视频| 一级毛片久久久久久久久女| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产高清不卡午夜福利| 欧美精品国产亚洲| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 欧美另类亚洲清纯唯美| 日本免费在线观看一区| 日韩强制内射视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 色网站视频免费| www.色视频.com| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产久久久一区二区三区| 岛国毛片在线播放| 草草在线视频免费看| 亚洲五月天丁香| 国产乱人偷精品视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 少妇的逼好多水| 在线免费十八禁| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 免费观看a级毛片全部| 免费搜索国产男女视频| 国产免费又黄又爽又色| 免费看a级黄色片| 免费观看人在逋| 18禁动态无遮挡网站| www.av在线官网国产| 精品国产三级普通话版| 久久久久网色| 特级一级黄色大片| 99热网站在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲成人av在线免费| 亚洲自拍偷在线| 一区二区三区四区激情视频| 国产一区有黄有色的免费视频 | 只有这里有精品99| 丰满少妇做爰视频| 18+在线观看网站| 男女啪啪激烈高潮av片| 久久久精品94久久精品| 成人鲁丝片一二三区免费| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 一区二区三区高清视频在线| 一个人免费在线观看电影| 国产单亲对白刺激| 久久久久久久久久久免费av| 变态另类丝袜制服| 国产乱来视频区| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲av成人精品一二三区| 久久久久九九精品影院| 18+在线观看网站| 91av网一区二区| 69av精品久久久久久| 国产综合懂色| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 九九热线精品视视频播放| 免费看av在线观看网站| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | a级一级毛片免费在线观看| 久久99精品国语久久久| 一区二区三区乱码不卡18| 99热精品在线国产| 哪个播放器可以免费观看大片| 美女内射精品一级片tv| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 人人妻人人澡欧美一区二区| 能在线免费看毛片的网站| 国产色婷婷99| av国产免费在线观看| 亚洲五月天丁香| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 色哟哟·www| 午夜激情福利司机影院| 亚洲经典国产精华液单| 国产成人福利小说| 国产精品蜜桃在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 淫秽高清视频在线观看| 99久国产av精品| 欧美区成人在线视频| 国产亚洲91精品色在线| 老司机福利观看| 人体艺术视频欧美日本| 丰满乱子伦码专区| 国产av一区在线观看免费| 一区二区三区高清视频在线| av卡一久久| 精品国内亚洲2022精品成人| 黄片wwwwww| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲性久久影院| 日韩精品有码人妻一区| 午夜激情欧美在线| 精品不卡国产一区二区三区| 嫩草影院精品99| 久久久久久久国产电影| 精品人妻偷拍中文字幕| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产激情偷乱视频一区二区| 久久亚洲精品不卡| 麻豆成人午夜福利视频| 三级经典国产精品| 成人特级av手机在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 日韩人妻高清精品专区| 男女视频在线观看网站免费| kizo精华| 亚洲国产精品专区欧美| 少妇熟女欧美另类| 亚洲中文字幕日韩| 日韩强制内射视频| 日本一本二区三区精品| av国产免费在线观看| 免费观看的影片在线观看| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲成人中文字幕在线播放| 精品一区二区三区视频在线| 一个人看的www免费观看视频| 99在线人妻在线中文字幕| 成人二区视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲人成网站在线播| 永久网站在线| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 久久久久久久亚洲中文字幕| 欧美bdsm另类| 少妇熟女欧美另类| 国产极品精品免费视频能看的| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 观看美女的网站| 日韩欧美国产在线观看| 91av网一区二区| 亚洲四区av| 一个人看视频在线观看www免费| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 韩国av在线不卡| 网址你懂的国产日韩在线| av播播在线观看一区| 国产精品女同一区二区软件| 国产三级中文精品| 久久99热这里只有精品18| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 极品教师在线视频| 中文字幕久久专区| 国产成人精品久久久久久| 亚洲怡红院男人天堂| 日本免费a在线| 午夜福利成人在线免费观看| 少妇高潮的动态图| 久久久久精品久久久久真实原创| 欧美zozozo另类| 少妇熟女欧美另类| 青春草视频在线免费观看| 国产精品1区2区在线观看.| 边亲边吃奶的免费视频| av免费在线看不卡| 国产黄片视频在线免费观看| 少妇人妻精品综合一区二区| 天堂影院成人在线观看| 国产成人一区二区在线| 国产免费一级a男人的天堂| www日本黄色视频网| 日韩三级伦理在线观看| 91久久精品国产一区二区成人| 久久久国产成人精品二区| 日韩欧美在线乱码| av在线观看视频网站免费| 男人的好看免费观看在线视频| 国产 一区 欧美 日韩| 日韩精品青青久久久久久| 一级毛片我不卡| 国产精品不卡视频一区二区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 18禁动态无遮挡网站| 久久精品人妻少妇| 日韩亚洲欧美综合| 在线a可以看的网站| 激情 狠狠 欧美| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产 一区精品| 国产成人aa在线观看| av天堂中文字幕网| 欧美激情在线99| 中文资源天堂在线| 床上黄色一级片| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 午夜日本视频在线| 毛片女人毛片| 国产精品.久久久| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 色综合站精品国产| 日本一本二区三区精品| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 免费黄色在线免费观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 一区二区三区四区激情视频| 国产免费男女视频| 乱人视频在线观看| 久久久欧美国产精品| 丰满人妻一区二区三区视频av| 特大巨黑吊av在线直播| 久久精品人妻少妇| 熟女人妻精品中文字幕| 人体艺术视频欧美日本| 精品久久久久久久末码| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 一级二级三级毛片免费看| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产精品,欧美在线| 国产精品蜜桃在线观看| 91av网一区二区| 秋霞在线观看毛片| 成人毛片a级毛片在线播放| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 免费大片18禁| 97超碰精品成人国产| 亚洲av福利一区| 在线播放国产精品三级| 黄片无遮挡物在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 午夜福利高清视频| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲天堂国产精品一区在线| 久久这里只有精品中国| 精品久久久久久成人av| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 日本与韩国留学比较| 成人性生交大片免费视频hd| 1000部很黄的大片| 男人和女人高潮做爰伦理| 三级经典国产精品| 国产成人a∨麻豆精品| av在线亚洲专区| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产综合懂色| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 18禁在线播放成人免费| 国产精品人妻久久久久久| АⅤ资源中文在线天堂| 国产高清三级在线| 七月丁香在线播放| 级片在线观看| 国产精品,欧美在线| 色尼玛亚洲综合影院| 欧美日韩在线观看h| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产免费一级a男人的天堂| 一级毛片我不卡| 亚洲av二区三区四区| 国产黄片视频在线免费观看| 亚洲在久久综合| 欧美性猛交黑人性爽| 精品国内亚洲2022精品成人| 长腿黑丝高跟| 秋霞伦理黄片| 国产精品三级大全| 免费观看精品视频网站| av免费在线看不卡| 观看免费一级毛片| 久久久成人免费电影| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲欧美一区二区三区国产| 久久热精品热| 51国产日韩欧美| 身体一侧抽搐| 午夜精品在线福利| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 最近手机中文字幕大全| 亚洲电影在线观看av| 一本久久精品| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 91精品伊人久久大香线蕉| av在线亚洲专区| or卡值多少钱| 色5月婷婷丁香| 欧美性猛交黑人性爽| 99久久精品一区二区三区| 国产成年人精品一区二区| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲成人中文字幕在线播放| 成人二区视频| 3wmmmm亚洲av在线观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 日本午夜av视频| 三级毛片av免费| 男的添女的下面高潮视频| 国产片特级美女逼逼视频| 成年女人看的毛片在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 欧美日韩综合久久久久久| 午夜福利在线观看吧| 欧美日韩综合久久久久久| 日韩欧美精品免费久久| 国产精品久久久久久久电影| 99久久精品国产国产毛片| 精品熟女少妇av免费看| 麻豆成人午夜福利视频| 男的添女的下面高潮视频| 成人av在线播放网站| 久久久久久九九精品二区国产| 最近2019中文字幕mv第一页| 2022亚洲国产成人精品| 久久精品夜色国产| av在线观看视频网站免费| 国产视频内射| 精华霜和精华液先用哪个| a级毛色黄片| 2022亚洲国产成人精品| 婷婷色av中文字幕| 在线观看一区二区三区| 国产在线一区二区三区精 | 男人狂女人下面高潮的视频| 欧美bdsm另类| 精品久久久久久久久久久久久| 99久久精品热视频| 男女那种视频在线观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 免费一级毛片在线播放高清视频| 嫩草影院精品99| av在线亚洲专区| 免费大片18禁| 日本熟妇午夜| 嫩草影院新地址| www.av在线官网国产| 色播亚洲综合网| 亚洲av二区三区四区| 一区二区三区乱码不卡18| 日本黄色视频三级网站网址| 久久久久网色| 久久欧美精品欧美久久欧美| 超碰97精品在线观看| 中文欧美无线码| 极品教师在线视频| 免费播放大片免费观看视频在线观看 | 亚洲性久久影院| 一级毛片久久久久久久久女| 看十八女毛片水多多多| 亚洲精品影视一区二区三区av| 在线观看66精品国产| 欧美成人一区二区免费高清观看| av在线蜜桃| 亚洲成人久久爱视频| av在线观看视频网站免费| 99热全是精品| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 成人特级av手机在线观看| 一个人看视频在线观看www免费| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久久国产成人免费| 只有这里有精品99| av线在线观看网站| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 18+在线观看网站| 两个人视频免费观看高清| 国产精品1区2区在线观看.| 在现免费观看毛片| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲不卡免费看| 97超视频在线观看视频| 麻豆一二三区av精品| 日本免费a在线| 亚洲成人av在线免费| 国产人妻一区二区三区在| 欧美日本亚洲视频在线播放| 久久精品影院6| 中文在线观看免费www的网站| 久久亚洲精品不卡| 成人亚洲精品av一区二区| 亚州av有码| 联通29元200g的流量卡| 精品午夜福利在线看| 国产综合懂色| 国产高清国产精品国产三级 | 成人性生交大片免费视频hd| 美女大奶头视频| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产免费一级a男人的天堂| 美女高潮的动态| 久久久成人免费电影| 日韩一区二区视频免费看| 日本爱情动作片www.在线观看| 精品国产露脸久久av麻豆 | 亚洲不卡免费看| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 男女视频在线观看网站免费| 日本黄色视频三级网站网址| 老司机影院成人| 成人毛片a级毛片在线播放| 爱豆传媒免费全集在线观看| 色5月婷婷丁香| 最后的刺客免费高清国语| 熟女电影av网| 日韩一区二区三区影片| 精品人妻视频免费看| 久久人妻av系列| 亚洲自偷自拍三级| 麻豆成人av视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产极品精品免费视频能看的| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲自拍偷在线| 国产v大片淫在线免费观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 亚洲不卡免费看| 久久久久久久久大av| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 91久久精品国产一区二区三区| 少妇高潮的动态图| 午夜福利在线观看吧| 国产三级中文精品| 成年免费大片在线观看| 日韩欧美三级三区| 夜夜爽夜夜爽视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 天天一区二区日本电影三级| 午夜福利视频1000在线观看| 国产免费一级a男人的天堂| 99久国产av精品| 99视频精品全部免费 在线| 毛片女人毛片| av国产免费在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 美女内射精品一级片tv| 亚洲电影在线观看av| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产一区二区在线观看日韩| 成人一区二区视频在线观看| 色综合站精品国产| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产亚洲精品久久久com| 少妇人妻一区二区三区视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 一级毛片电影观看 | 亚洲精品乱久久久久久| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产精品三级大全| 国产精品一区二区在线观看99 | 最近手机中文字幕大全| 2021天堂中文幕一二区在线观| 干丝袜人妻中文字幕| 亚州av有码| 欧美潮喷喷水| 午夜福利在线观看吧| 亚洲欧美精品自产自拍| 中文字幕制服av| 男人舔女人下体高潮全视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 简卡轻食公司| 久久久午夜欧美精品| 真实男女啪啪啪动态图| a级毛片免费高清观看在线播放| 色网站视频免费| 日本欧美国产在线视频| 午夜日本视频在线| 老司机福利观看| 一级毛片电影观看 | 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲av一区综合| 白带黄色成豆腐渣| 99热全是精品| 亚洲精品色激情综合| 秋霞伦理黄片| 能在线免费看毛片的网站| 国产精品一区二区性色av| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 日本wwww免费看| 欧美高清成人免费视频www| 一个人免费在线观看电影| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 2021天堂中文幕一二区在线观| 成人综合一区亚洲| 久久综合国产亚洲精品| 国产高潮美女av| 三级国产精品片| 亚州av有码| 99久久九九国产精品国产免费| 国产精华一区二区三区| 国产不卡一卡二| 国产大屁股一区二区在线视频| 综合色丁香网| 老司机影院毛片| 男人狂女人下面高潮的视频| 久久99热这里只有精品18| 国产精品99久久久久久久久| 精品人妻熟女av久视频| www日本黄色视频网| 国产精品人妻久久久久久| 69人妻影院| 波多野结衣高清无吗| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产一区二区在线av高清观看| 精品酒店卫生间| 国产淫片久久久久久久久| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 免费电影在线观看免费观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲成人久久爱视频|