正骨白藥膏的質(zhì)量標準研究Δ

陳 丹，李 柯，盧茂芳，李若存

(1.湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)教研室，湖南 湘潭 411102； 2.湖南省中醫(yī)藥研究院中藥化學(xué)室，湖南 長沙 410013； 3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥物化學(xué)室，湖南 長沙 410208)

正骨白藥膏的質(zhì)量標準研究Δ

陳 丹1*，李 柯2#，盧茂芳3，李若存2

(1.湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)教研室，湖南 湘潭 411102； 2.湖南省中醫(yī)藥研究院中藥化學(xué)室，湖南 長沙 410013； 3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥物化學(xué)室，湖南 長沙 410208)

目的：建立正骨白藥膏的質(zhì)量標準。方法：采用顯微鑒別法和化學(xué)反應(yīng)法鑒別制劑中的煅石膏；采用絡(luò)合滴定法測定煅石膏中硫酸鈣含量。結(jié)果：顯微鑒別和化學(xué)鑒別能檢測出制劑中的煅石膏；硫酸鈣的平均回收率為98.47%，RSD=1.71%(n=6)。結(jié)論：本研究方法專屬性強、重復(fù)性好，能夠控制正骨白藥膏的質(zhì)量。

正骨白藥膏； 煅石膏； 硫酸鈣； 絡(luò)合滴定法； 含量測定

正骨白藥膏是廣東省江門市蓬江區(qū)白石正骨醫(yī)院自制新制劑，功能為涼血止血、消腫止痛，用于治療筋骨損傷紅、腫、熱、痛者。為了有效的控制其質(zhì)量，對方中的主要藥味煅石膏采用顯微鑒別法與化學(xué)鑒別法進行了鑒別，采用乙二胺四醋酸(EDTA)絡(luò)合滴定法對煅石膏中的硫酸鈣(CaSO4)進行了含量測定，以控制其質(zhì)量[1]。

1 材料

1.1 儀器

Olympus-cx31顯微鏡(日本OLYMPUS公司) 在放大100倍條件下觀察CaSO4結(jié)晶。

1.2 藥品與試劑

正骨白藥膏(廣東省江門市蓬江區(qū)白石正骨醫(yī)院，批準文號：粵YZJ-2014-0004，批號：20160312、20160318、20160326、20160403)。無水CaSO4購自長沙市匯虹化玻儀器設(shè)備有限公司，含量99.5%；其余試劑均為分析純。

2 方法

2.1 定性鑒別

2.1.1 顯微鑒別：取樣品(批號：20160312)3 g，加乙酸乙酯15 ml，超聲處理10 min(頻率：40 kHz，功率：250 W)，濾過，濾渣揮干溶劑，備用。取濾渣置于顯微鏡下觀察，呈不規(guī)則片狀結(jié)晶無色，有平直紋理，見圖1。

圖1 正骨白藥膏顯微鑒別Fig 1 Microscopic identification of zhenggubaiyao ointment

2.1.2 鈣鹽與硫酸鹽的化學(xué)鑒別：取上述濾渣0.3 g，加稀鹽酸15 ml溶解，濾過。取續(xù)濾液1 ml，加水稀釋至20 ml，加甲基紅指示液2滴，用氨試液中和，再滴加鹽酸至恰呈酸性，加草酸銨試液，生成白色沉淀，沉淀不溶于醋酸，但可溶于稀鹽酸；再取續(xù)濾液，滴加氯化鋇試液，生成白色沉淀，沉淀不溶于鹽酸及硝酸。

2.2 重金屬檢查

根據(jù)《中華人民共和國藥典：四部》(2015年版)“通則0821第二法”，取樣品2 g，置于已熾灼至恒質(zhì)量的坩堝中，精密稱定，緩緩熾灼至完全炭化，放冷至室溫(25 ℃)，加硫酸1 ml使其濕潤，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后，加硝酸0.5 ml，蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，在500～600 ℃下熾灼，使完全灰化，放冷，加鹽酸2 ml，置于水浴上蒸干后加水15 ml，滴加氨試液至對酚酞指示液顯微粉紅色，再加醋酸鹽緩沖液(pH=3.5)2 ml，微熱溶解后，移至納氏比色管中，加水稀釋成25 ml，作為甲管；另取配制供試品溶液的試劑，置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液(pH=3.5)2 ml與水15 ml，微熱溶解后，移至納氏比色管中，加標準鉛溶液2 ml，再用水稀釋成25 ml，作為乙管；在甲、乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液各2 ml，搖勻，放置2 min，同置于白紙上，自上向下透視。重金屬含量不得超過百萬分之十(10 PPM)，結(jié)果見表1。

表1 樣品重金屬檢查結(jié)果

2.3 含量測定

2.3.1 滴定試驗：取樣品約0.25 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加稀鹽酸12 ml，加熱使溶解，加入乙酸乙酯與乙醇(V∶V=1 ∶1)的混合液10 ml，搖勻，加水100 ml，加入甲基紅指示液1滴，滴加氫氧化鉀試液至溶液顯淺黃色，再繼續(xù)滴加10 ml，加入鈣黃綠素指示劑少量，用乙二胺四醋酸二鈉滴定液(濃度為0.05 mol/L)滴定，至溶液的黃綠色熒光消失，并顯橙色[2-4]。每1 ml乙二胺四醋酸二鈉滴定液相當(dāng)于6.807 mg的CaSO4。

2.3.2 計算公式：CaSO4(%)=6.807×10-3/(W×V×F)×100%。式中，W為稱取樣品質(zhì)量(g)；V為滴定所消耗的乙二胺四醋酸二鈉滴定液的體積(ml)；F為乙二胺四醋酸二鈉滴定液的校正因子。

2.3.3 空白試驗：按照“2.3.1”項下方法進行試驗，但不加入樣品，測得消耗乙二胺四醋酸二鈉滴定液的體積為0 ml，結(jié)果表明，所用溶劑對CaSO4的含量測定無影響。

2.3.4 陰性對照試驗：按處方比例及制法，以淀粉代替煅石膏制成不含煅石膏的陰性樣品，按照“2.3.1”項下方法進行試驗，結(jié)果顯示，消耗乙二胺四醋酸二鈉滴定液的體積為0 ml，說明樣品中其他組分對測定正骨白藥膏中CaSO4的含量沒有干擾，該方法專屬性良好。

2.3.5 重復(fù)性試驗：取樣品(批號：20160312)6份，每份約0.25 g，精密稱定，分別按照“2.3.1”項下方法測定CaSO4的含量。結(jié)果顯示，CaSO4含量的RSD=0.85%(n=6)，表明該方法重復(fù)性好，見表2。

表2 重復(fù)性試驗結(jié)果(n=6)

2.3.6 加樣回收率試驗：取已知含量樣品(批號：20160312，含量63.94%)6份，每份約0.25 g，精密稱定，分別加入精密稱定的無水CaSO4(含量為99.5%)約0.18 g，按照“2.3.1”項下方法進行試驗。結(jié)果顯示，正骨白藥膏中CaSO4的平均回收率為98.47%，RSD=1.71%，見表3。

表3 CaSO4的加樣回收率試驗(n=6)

2.3.7 含量測定：取不同批號的樣品，按照“2.3.1”項下方法進行含量測定，結(jié)果見表4。

表4 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

正骨白藥膏是外用制劑，臨床用于治療筋骨損傷所致的紅、腫、熱、痛，療效確切。方中的煅石膏為中醫(yī)臨床常用中藥，具有較好的活血化瘀、抗炎消腫等功效，能夠顯著改善急性軟組織損傷的腫脹、瘀斑現(xiàn)象，促進軟組織的修復(fù)與再生，其作用機制可能與抑制白細胞介素1、白細胞介素6等炎性因子及抑制前列腺素E2的生成有關(guān)[5-6]。臨床應(yīng)用證明煅石膏制劑有清熱解毒，消腫止痛，降低細胞沉率，改善血清中IL-1β、TNF-α水平等作用[7-9]。煅石膏為方中主藥，因此，本研究對其進行了定性、定量研究。

煅石膏的鑒別方法包括紅外鑒別、化學(xué)鑒別等[10-11]。本研究采用顯微鑒別法和化學(xué)鑒別法。為去除制劑中的基質(zhì)，采用加乙酸乙酯超聲的方法，取其濾渣進行鑒別，結(jié)果表明，基質(zhì)對鑒別無干擾。在煅石膏的顯微特征鑒別中發(fā)現(xiàn)有少量棒狀結(jié)晶，可能是粉碎的粒度過細所致。煅石膏的主要成分為CaSO4，常通過測定其中鈣離子的含量進行定量鑒別，常用的方法有EDTA滴定法、原子吸收分光光度法、電感離子體-質(zhì)譜法等。《中華人民共和國藥典：一部》(2015年版)“煅石膏”項下規(guī)定“含CaSO4不得少于92.0%”，按處方量計算，煅石膏在樣品中的用量為66%，考慮煅石膏在制劑工藝中的損耗，故確定樣品中CaSO4百分含量≥48%。參照相關(guān)文獻[12-13]，本研究分別采用三氯甲烷與乙醇混合液、乙酸乙酯與乙醇混合液來溶解樣品，結(jié)果顯示，上述兩種混合液均可使樣品溶解，但考慮到三氯甲烷的毒性較大，故最終選擇乙酸乙酯與乙醇混合液。而空白實驗結(jié)果表明，乙酸乙酯與乙醇對測定結(jié)果無影響。

進行滴定實驗時，由于絡(luò)合滴定反應(yīng)速度較慢，為使金屬離子絡(luò)合完全，滴定速度不宜太快。而為了實驗過程中減小誤差，實驗中所用的水均為新沸放置至室溫(25 ℃)的水，且所配制的乙二胺四醋酸二鈉滴定液放置于玻璃瓶中，避免與橡皮塞、橡皮管接觸。

由于樣品為外敷藥，用量較大，故按照《中華人民共和國藥典：四部》(2015年版)[14]中的方法進行了重金屬檢查并規(guī)定其限量。

本研究建立的定性鑒別方法與含量測定方法，操作簡便，結(jié)果準確可靠，可用于正骨白藥膏的質(zhì)量控制。

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Study on Quality Standard of Zhenggubaiyao OintmentΔ

CHEN Dan1, LI Ke2,LU Maofang3,LI Ruocun2

(1.Pharmacy Teaching and Research Section, Xiangtan Vocational and Technical College, Hunan Xiangtan 411102,China; 2.Traditional Chinese Medicine Chemical Room, Hunan Academy of Traditional Chinese Medicine, Hunan Changsha 410013, China; 3.Pharm-aceutical Chemistry Room, Hunan University of Chinese Medicine, Hunan Changsha 410208,China)

OBJECTIVE：To establish the quality standard of Zhenggubaiyao ointment. METHODS: Gypsum ustum of Zhenggubaiyao ointment were identified by microscopic identification and chemical reaction. The content of CaSO4was determined by complex ometric titration. RESULTS: The microscopic identification and chemical reation could check out gypsum ustum of Zhenggubaiyao ointment. The average recovery rate of CaSO4was 98.47%,RSD=1.71%(n=6). CONCLUSIONS: The method has high accuracy and good repeatability, and can be used for the quality control of Zhenggubaiyao ointment.

Zhenggubaiyao ointment; Gypsum ustum; Calcium sulfate; Complexometric titration; Determination of content

湖南省自然科學(xué)基金資助項目(No.2016JJ6085)；湖南省中醫(yī)藥研究院資助項目(No.201417)

R927.2

A

1672-2124(2017)04-0457-03

2016-11-15)

*講師。研究方向：中藥制劑。E-mail：yxw0915@163.com

#通信作者：工程師。研究方向：中藥制劑與質(zhì)量標準控制研究。E-mail：17848689@qq.com

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.04.009