痰瘀清方對自發(fā)性高血壓大鼠血壓及動脈重構(gòu)的影響

劉 春，周立華

·基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)論著/研究·

痰瘀清方對自發(fā)性高血壓大鼠血壓及動脈重構(gòu)的影響

劉 春，周立華

目的 觀察痰瘀清方(TYQF)對自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)的降壓作用，對SHR胸主動脈和腸系膜上動脈2級分支重構(gòu)的影響，研究TYQF抗高血壓的作用機(jī)制。方法 將11周齡雄性SHR 40只隨機(jī)分為5組：TYQF高、中、低劑量組，福辛普利組和SHR對照組，每組8只。另以8只同周齡雄性WKY大鼠為WKY對照組。TYQF高、中、低劑量組給藥劑量分別為23.24 g/kg、11.62 g/kg、5.81 g/kg，福辛普利組給藥劑量為0.9 mg/kg，連續(xù)給藥8周。SHR對照組和WKY對照組給予等容積雙蒸水。用藥前及用藥后每2周測量血壓及心率。20周齡時采集胸主動脈和腸系膜上動脈2級分支標(biāo)本。經(jīng)HE染色觀察胸主動脈和腸系膜上動脈2級分支病理結(jié)構(gòu)變化；經(jīng)Masson染色觀察胸主動脈和腸系膜上動脈2級分支血管中膜膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)的變化。結(jié)果 SHR對照組血壓較WKY對照組升高(P<0.001)；TYQF高、中劑量組大鼠血壓較SHR對照組降低(P<0.001)。大鼠胸主動脈血管外徑(ED)、血管內(nèi)徑(LD)、血管中膜厚度(MT)、血管中膜厚度與內(nèi)徑比(MT/LD)值(P<0.05，P<0.01，P<0.001)與血壓均呈正相關(guān)。SHR胸主動脈ED、LD、MT、MT/LD值均較WKY對照組增高(P<0.05或P<0.001)。TYQF高劑量組ED、LD值較SHR對照組減小(P<0.05或P<0.01)；MT值較SHR對照組減小，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義；MT/LD值較SHR對照組則無明顯改變。SHR胸主動脈血管中膜CVF值均較WKY對照組增高(P<0.001)；TYQF高、中劑量組均較SHR對照組降低(P<0.05或P<0.001)。SHR腸系膜上動脈2級分支ED值較WKY對照組無明顯變化，LD值較WKY對照組減小(P<0.01)；MT、MT/LD值較WKY對照組增高(P<0.05，P<0.01，P<0.001)。TYQF高劑量組LD值較SHR對照組、TYQF中劑量組、TYQF低劑量組增高(P<0.05，P<0.01，P<0.001)；MT/LD值較SHR對照組、TYQF中劑量組、TYQF低劑量組減小(P<0.05，P<0.01，P<0.001)；其他指標(biāo)較SHR對照組無明顯變化。SHR腸系膜上動脈2級分支血管中膜CVF值較WKY對照組增高(P<0.001)；TYQF高、中劑量組較SHR對照組降低(P<0.05)；TYQF高、中劑量組較TYQF低劑量組降低(P<0.01)。結(jié)論 TYQF具有降低SHR血壓的作用。TYQF可能對SHR胸主動脈和腸系膜上動脈2級分支的血管重構(gòu)具有一定的改善作用。

自發(fā)性高血壓；痰瘀清方；血管重構(gòu)；膠原蛋白

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，痰瘀互結(jié)、毒損絡(luò)脈是高血壓病的主要病機(jī)之一，所以高血壓病的治療應(yīng)重視痰瘀同治，臨床上使用中藥痰瘀清方(TYQF)治療老年高血壓病效果顯著[1]。本研究以中藥痰瘀清方干預(yù)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)，觀察其降壓效果，并研究該中藥對SHR外周阻力血管(腸系膜上動脈2級分支)及大動脈(主動脈)結(jié)構(gòu)變化的影響，探討痰瘀清方影響高血壓血管病理變化的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物及分組 清潔級11周齡SHR，雄性，體重(290±20)g；相同周齡Wister-Kyoto(WKY)大鼠，雄性，體重(290±20)g。所有大鼠均購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司[批號SCXK(京)2012-0001]。實(shí)驗(yàn)鼠購回后先觀察1周，每天測壓訓(xùn)練1次，待大鼠適應(yīng)環(huán)境、血壓穩(wěn)定后，隨機(jī)分為5組：痰瘀清方高劑量組、痰瘀清方中劑量組、痰瘀清方低劑量組、福辛普利組和SHR對照組，每組8只；另8只WKY大鼠設(shè)為正常血壓對照組。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 痰瘀清方：由半夏、白術(shù)，茯苓、橘紅等15味中藥組成，含生藥2.32 g/mL，河南中醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院藥劑科提供。使用時酌加雙蒸水，分別制成含生藥2.32 g/mL、1.16 g/mL、0.58 g/mL的水溶液，分別用于高、中、低劑量組。福辛普利：每片10 mg，使用時碾碎，過藥典100目篩后置于加入0.5%混懸劑(羧甲基纖維素鈉)的雙蒸水，制成0.09 mg/mL濃度的福辛普利混懸劑。

1.3 藥物干預(yù) 開始給藥前測定大鼠體重。根據(jù)“人和動物按體表面積折算的等效劑量比值表”折算確定等效劑量。福辛普利組給藥劑量為0.9 mg/kg；痰瘀清方折算后等效劑量為11.62 g/kg，作為中劑量組給藥劑量，低、高劑量組給藥劑量則分別為5.81 g/kg和23.24 g/kg；模型對照組和正常對照組給予等量雙蒸水。每天灌胃1次，連續(xù)8周。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 標(biāo)本采集 于末次灌胃后24 h(禁食不禁水12 h)，大鼠稱重記錄后，以2%戊巴比妥鈉(35 mg/kg)腹腔麻醉。剖開胸腹腔，迅速分離胸主動脈，于主動脈弓下約0.5 cm處剪取長約0.5 cm的胸主動脈，并剪取長約0.5 cm的腸系膜上動脈二級分支，4 ℃冷生理鹽水沖洗后置入4%多聚甲醛-磷酸緩沖鹽溶液中固定，待作病理檢測。

1.4.2 胸主動脈、腸系膜上動脈病理檢測 將以4%多聚甲醛-磷酸緩沖鹽溶液固定的胸主動脈、腸系膜上動脈常規(guī)梯度酒精脫水、石蠟包埋、切片，片厚3 μm，在每例動脈的連續(xù)切片中隨機(jī)取2個血管環(huán)分裱于2張玻片上，分別行蘇木素伊紅染色和Masson染色。

1.4.3 測量 每個血管環(huán)在周向相互垂直位置取四處包含血管壁各層的測量點(diǎn)，光鏡下采用計算機(jī)圖象分析系統(tǒng)分別測量計算血管外徑(ED)、內(nèi)徑(LD)、中膜厚度(MT)、中膜厚度與內(nèi)徑比(MT/LD)；血管中膜膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠血壓比較 SHR對照組大鼠血壓較WKY對照組升高(P<0.001)；除TYQF低劑量組外，其余各藥物干預(yù)組大鼠血壓都較SHR對照組降低(P<0.001)，TYQF各組與福辛普利組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；TYQF低劑量組較福辛普利組、TYQF高劑量組顯著升高(P<0.001)。在16周齡及20周齡時，福辛普利組、TYQF高、中劑量組血壓較同周齡SHR對照組降低(P<0.001)。詳見表1。

表1 各組大鼠血壓比較(±s) mmHg

2.2 各組大鼠胸主動脈重構(gòu)指標(biāo)的比較 SHR對照組胸主動脈ED、LD、MT和CVF值較WKY對照組增加(P<0.001)，福辛普利組、TYQF高劑量組大鼠胸主動脈ED值(P<0.05或P<0.01)、LD值(P<0.01)和CVF值(P<0.01或P<0.001)較SHR對照組減??；TYQF中劑量組ED值較福辛普利組增加(P<0.01)。TYQF低劑量組ED值(P<0.05或P<0.001)、LD值(P<0.05或P<0.01)和CVF值(P<0.05)均較福辛普利組和TYQF高劑量組增加。SHR對照組胸主動脈MT值較WKY對照組增加(P<0.001)，MT/LD比值也較WKY對照組增加，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，MT和MT/LD比值在其余各組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。詳見表2。

表2 各組大鼠主動脈ED、LD、MT、MT/LT和CVF比較(±s)

2.3 各組大鼠腸系膜上動脈2級分支重構(gòu)指標(biāo)的比較 實(shí)驗(yàn)鼠腸系膜上動脈2級分支的LD、MT值組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01或P<0.001)。SHR對照組較WKY對照組減小(P<0.001)；福辛普利組及TYQF高、中、低劑量組較SHR對照組減小，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。福辛普利組、TYQF各劑量組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。SHR對照組MT/LD比值較WKY對照組增高(P<0.001)；福辛普利組、TYQF高劑量組較SHR對照組增高(P<0.05或P<0.01)。TYQF低劑量組則較福辛普利組增高(P<0.05)；TYQF高、中、低劑量組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表現(xiàn)為隨著給藥劑量的減少而MT/LD比值增加：TYQF中、低劑量較TYQF高劑量組增高(P<0.05或P<0.001)，TYQF低劑量較TYQF中劑量組增高(P<0.05)。 腸系膜上動脈2級分支血管中膜的CVF值組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，SHR對照組CVF值較WKY對照組增高(P<0.001)，福辛普利組及TYQF高、中劑量組均較SHR對照組降低(P<0.01或P<0.001)；TYQF低劑量組較福辛普利組、TYQF高劑量組、TYQF中劑量組均增高(P<0.05或P<0.001)。詳見表3。

表3 各組大鼠腸系膜上動脈2級分支ED、LD、MT、MT/LT和CVF比較(±s)

3 討 論

高血壓是由于各種內(nèi)外致病因素導(dǎo)致機(jī)體的陰陽平衡失調(diào)，致上實(shí)下虛，與肝腎密切相關(guān)。肝腎陰虛，肝陽上亢被認(rèn)為是高血壓最重要的中醫(yī)病機(jī)。但是，已有的研究對痰、瘀等病理產(chǎn)物在高血壓發(fā)病過程中的作用還沒有得到充分的重視和研究?，F(xiàn)代流行病學(xué)調(diào)查顯示：原發(fā)性高血壓病痰瘀互結(jié)證發(fā)病率居第二位，原發(fā)性高血壓病早、中、晚每一個階段都可能存在痰瘀阻絡(luò)的病機(jī)變化，痰瘀阻絡(luò)是原發(fā)性高血壓病的證候演變規(guī)律之一。痰飲為津液不化的病理產(chǎn)物，而瘀血為血運(yùn)不暢或離經(jīng)之血著而不去的病理表現(xiàn)，由于津血同源，痰瘀之間亦同氣相求，常兼見同病，甚而相因?yàn)椴?。痰阻則血澀，血凝則痰滯，瘀血內(nèi)阻，蘊(yùn)里不散，津液澀滲，六輸不通，濕氣不行，久必生痰，痰結(jié)更致血瘀，痰瘀相搏，而致病情膠結(jié)難解?！吨T病源候論》：“諸痰者，皆由血脈閉塞，飲水積聚不散，便成痰也”?！堆C論·咳嗽》：“須知痰水之壅，由瘀血使然”；“瘀血既久，亦能化為痰水”?！兜は姆ā罚骸白詺獬煞e，自積生痰，痰挾瘀血，遂成窠囊”；“久得澀脈，卒難得開，必費(fèi)調(diào)理”。而近代醫(yī)家關(guān)幼波也指出：“痰與血同屬陰，易于交結(jié)凝固，氣血流暢則津液并行，無痰以生，氣滯則血瘀結(jié)”[2]。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，長期過食肥甘厚味，飲食失節(jié)，或好逸少動，食滯不消，損傷脾胃，聚濕生痰，痰濁留滯于絡(luò)，氣血運(yùn)行不暢，有痰必致瘀，痰瘀濁毒互結(jié)，損傷絡(luò)脈而出現(xiàn)一系列的病癥變化。正如葉天士所言：“邪與氣血兩凝，結(jié)聚絡(luò)脈?！碧禎衢]塞，氣血郁滯，出現(xiàn)眩暈、頭重身困、胸悶痰多、口黏納呆、舌質(zhì)紫黯或見瘀斑、苔膩、脈弦滑等癥。其中尤以苔膩質(zhì)黯為主，但見苔膩質(zhì)黯便是，他證不必悉俱。痰瘀互結(jié)、毒損絡(luò)脈是高血壓病的核心病機(jī)，治療應(yīng)法隨證立，方隨法出，祛痰有利于化瘀，痰去則津液行，氣血通，絡(luò)脈通暢，瘀阻自消?；鲇欣陟钐担鲅?，痰有去路。所以痰瘀同治是高血壓病治療的基本大法[3]。

痰瘀清方是由半夏白術(shù)天麻湯合通竅活血湯化裁而成，半夏白術(shù)天麻湯選自《醫(yī)學(xué)心悟》，本方是為風(fēng)痰眩暈而設(shè)，痰因濕生，主要用半夏、白術(shù)、茯苓、橘紅燥濕化痰。暈由于風(fēng)，輔以天麻平熄內(nèi)風(fēng)。脾為生痰之源，所以兼用化濕和中。通竅活血湯源自《醫(yī)林改錯》，方中赤芍、川芎行血活血，桃仁、紅花活血通絡(luò)。在臨床應(yīng)用過程中，發(fā)現(xiàn)瘀血在疾病的發(fā)生發(fā)展過程中可能起關(guān)鍵作用，故增加水蛭、地龍以增強(qiáng)活血化瘀的作用?？傆^全方，化痰熄風(fēng)藥與活血化瘀合用，以達(dá)到痰瘀同化，治本降壓的目的。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SHR 12周齡時的血壓穩(wěn)定增高，其后至20周齡時血壓無顯著增高，TYQF具有降低SHR血壓的作用，TYQF高、中劑量組大鼠血壓較TYQF低劑量組明顯降低，呈一定的劑量相關(guān)性。TYQF高、中劑量組在16周齡時血壓較同周齡SHR對照組明顯降低；在20周齡時，福辛普利組及TYQF高、中劑量組血壓均較同周齡SHR對照組明顯降低，但較同周齡WKY大鼠仍明顯升高。提示TYQF可能具有一定的降壓作用，其降壓作用和緩。

3.1 TYQF對大動脈血管重構(gòu)的影響 研究表明高血壓動物模型主動脈發(fā)生明顯的重構(gòu)，LD、MT/LD值均明顯增高。主動脈管腔內(nèi)徑和血管中膜彈力纖維容積分?jǐn)?shù)較正常大鼠明顯增高[4]。高血壓時，在各種神經(jīng)體液因素作用下血管壁膠原蛋白合成增加，降解減少。血管壁膠原蛋白增加導(dǎo)致血管壁僵硬，黏彈性增加，影響血管的舒縮功能，使大動脈緩沖功能降低，對血流增高的調(diào)節(jié)作用降低[5-6]。 臨床研究表明隨著血壓的增高，病人主動脈的僵硬度和體重指數(shù)增加。主動脈的張力、膨脹性、僵硬度指數(shù)的增加可預(yù)測收縮壓、舒張壓和脈壓的增高，結(jié)果提示主動脈僵硬度增加是預(yù)示血壓增高的重要決定因素[7]。由此可知，主動脈的生理功能對血壓具有調(diào)節(jié)作用，高血壓時，動脈壁的結(jié)構(gòu)改變與其功能改變相互關(guān)聯(lián)，血管壁的僵硬度增加，順應(yīng)性降低，緩沖功能降低，對血壓的調(diào)節(jié)功能隨之降低。同時，主動脈LD、MT、MT/LD值隨著年齡的增加而增高，血管壁膠原蛋白含量明顯增高，結(jié)果表明高血壓時主動脈的僵硬度、順應(yīng)性與血管重構(gòu)密切相關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)表明：TYQF干預(yù)后血管重構(gòu)的指標(biāo)明顯改善，SHR胸主動脈ED、LD值較SHR對照組減小，MT、MT/LD值則無明顯改善；同時，血管中膜CVF值明顯降低。TYQF改善SHR胸主動脈肥厚性重構(gòu)主要原因可能由于其具有降低血壓的作用，從而使主動脈血管內(nèi)壓力降低，并且抑制膠原蛋白合成或降解。

3.2 TYQF對SHR阻力血管重構(gòu)的影響 血液循環(huán)的外周阻力是動脈血壓形成的主要因素，阻力血管在維持和調(diào)節(jié)血壓中起關(guān)鍵作用。高血壓時外周阻力的增高主要由于阻力血管的廣泛性狹窄和小動脈稀疏。其中，外周阻力血管結(jié)構(gòu)的變化導(dǎo)致血管阻力的增高更為重要[8]。高血壓時阻力血管重構(gòu)的形態(tài)學(xué)特征為血管ED值明顯縮小，MT/LD比值增加，LD值縮小，血管壁橫截面積增加，導(dǎo)致血管腔明顯縮小。由于血管廣泛狹窄，阻力血管結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，導(dǎo)致總外周阻力增加。血管壁膠原蛋白增加導(dǎo)致血管壁僵硬，使阻力血管管腔狹窄，血管阻力增高[9-10]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：SHR腸系膜上動脈2級分支LD值較WKY大鼠明顯減小，MT、MT/LD值較WKY大鼠明顯增高，SHR腸系膜上動脈2級分支發(fā)生明顯的營養(yǎng)性重構(gòu)。TYQF干預(yù)后，LD值明顯增高，MT/LD值明顯減小，MT值則無明顯改善，TYQF可能對SHR腸系膜上動脈2級分支的營養(yǎng)性重構(gòu)具有一定的改善作用。SHR腸系膜上動脈2級分支血管中膜CVF值較WKY大鼠明顯增加。TYQF干預(yù)后，SHR腸系膜上動脈2級分支血管中膜CVF值明顯降低，TYQF可能抑制膠原蛋白合成或降解，從而改善SHR腸系膜上動脈2級分支的血管重構(gòu)。

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(本文編輯郭懷印)

The Influence of Tanyuqing Formula on the Blood Pressure and the Arterial Remodeling in Spontaneously Hypertensive Rat

Liu Chun，Zhou Lihua

The Third Affiliated Hosipital，Henan University of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450008，Henan，China

Objective To observe the effects of Tanyuqing formula(TYQF) on the blood pressure，the arterial remodeling of the thoracic aorta and the second branch of superior mesenteric artery in spontaneously hypertensive rat (SHR)，and to study the mechanism of antihypertensive effect of TYQF.Methods Forty male SHR were assigned to 5 groups randomly：SHR control group，SHR+Fosinopril，SHR+ TYQF high dose group，SHR+ TYQF medium dose group，SHR+ TYQF low dose group.Each group consisted of 8 animals.8 male WKY rats (11 week-old) were used as normal control group.The rats in SHR+ TYQF high dose group，medium and low dose group were given TYQF contained crude drug of 23.24 g/kg，11.62 g/kg，5.81 g/kg respectively.The rats in SHR+Fosinopril were given suspl of fosinopril of 0.9 mg/kg.The rats in SHR and WKY control group were given the distilled water of the same volume.Drugs were given for 8 weeks constantly.Before treated and after every two weeks，the blood pressure and heart rate of every rat was measured.Thoracic aorta and the second branch of superior mesenteric artery were harvested at 20 week-old.After hematoxylin and eosin staining，the external diameter (ED)，lumen diameter (LD)，medial thickness (MT)，medial thickness/lumen diameter (MT/LD) of aorta and the second branch of superior mesenteric artery were measured.After Masson’s trichrome staining，the collagen volume fraction (CVF) of tunica media of aorta and the second branch of superior mesenteric artery were measured.Results There was a significant positive correlation between the blood pressure (P<0.001).The blood pressure was increased compared with that of WKY (P<0.001).The blood pressure in SHR+ TYQF high and medium dose group were reduced compared with that of SHR (P<0.001).The values of ED，LD，MT，MT/LD of thoracic aorta of SHR were increased compared with that of WKY (P<0.05 or P<0.001).The values of ED，LD in SHR+ TYQF high dose group were reduced compared with that of SHR (P<0.05 or P<0.01).The values of MT in SHR+ TYQF high dose group were reduced compared with that of SHR，but there was no statistic significance.The values of MT/LD of SHR were not significantly different from that of three groups of SHR+ TYQF.The values of CVF in SHR were increased compared with that of WKY (P<0.001).The values of CVF of thoracic aorta SHR+ TYQF high and medium dose group were reduced compared with that of SHR (P<0.05 or P<0.001).The values of ED of the second branch of superior mesenteric artery of SHR were not significantly different from that of WKY.The values of LD in SHR were reduced compared with that of WKY (P<0.001).The values of MT，MT/LD in SHR were increased compared with that of WKY (P<0.05，P<0.01，P<0.001).The values of LD in SHR+ TYQP high dose group was increased compared with that of SHR，SHR+ TYQPF medium and low dose group(P<0.05，P<0.01，P<0.001).The values of MT/LD in SHR+ TYQF high dose group was reduced compared with that of SHR，SHR+ TYQF medium and low dose group(P<0.05，P<0.01，P<0.001).Other index of SHR was not significantly different from that of three groups of SHR+ TYQF.The values of CVF of tunica media of the second branch of superior mesenteric artery of SHR were increased compared with that of WKY (P<0.05).The values of SHR+ TYQF high and medium dose group were reduced compared with that of SHR (P<0.05).The values of SHR+ TYQF high and medium dose group were reduced compared with that of SHR+ TYQF low dose group(P<0.01).Conclusion TYQF could decrease the blood pressure and heart rate in SHR.TYQF could improve the remodeling of thoracic aorta and the second branch of superior mesenteric artery in SHR.

spontaneously hypertensive；Tanyuqing formula；arterial remodeling；collagen；

河南省教育廳項目(No.14A360001)；河南省中醫(yī)學(xué)院博士科研基金項目(No.BSJJ2009-45，BSJJ2009-46)

河南中醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院(鄭州450008)，E-mail：liuchun-2006-tcm@163.com

引用信息：劉春，周立華.痰瘀清方對自發(fā)性高血壓大鼠血壓及動脈重構(gòu)的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2017，15(7)：794-798.

R544.1 R285.5

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.07.008

1672-1349(2017)07-0794-05

2016-11-12)