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    不同產(chǎn)地桑葉總酚、黃酮含量及抗氧化活性比較

    2017-05-10 01:05:35俞燕芳杜賢明黃金枝夏裕輝
    蠶桑茶葉通訊 2017年2期
    關(guān)鍵詞:總酚桑葉產(chǎn)地

    俞燕芳 杜賢明 黃金枝 夏裕輝

    (江西省蠶桑茶葉研究所 330202)

    不同產(chǎn)地桑葉總酚、黃酮含量及抗氧化活性比較

    俞燕芳 杜賢明 黃金枝 夏裕輝

    (江西省蠶桑茶葉研究所 330202)

    以7個(gè)地區(qū)的“農(nóng)桑14號(hào)”桑葉和4個(gè)地區(qū)的“強(qiáng)桑1號(hào)”桑葉為原料,采用比色法分別測(cè)定了桑葉總酚、總黃酮含量,以及桑葉提取液清除DPPH、清除ABTS能力和 FRAP等體外抗氧化活性。結(jié)果表明產(chǎn)地不同桑葉總酚、總黃酮的含量及其體外抗氧化活性有顯著差異,其中江西永新地區(qū)“農(nóng)桑14號(hào)”總酚和總黃酮的含量最高。

    桑葉;產(chǎn)地;總酚;黃酮;抗氧化

    桑葉營(yíng)養(yǎng)豐富、藥用價(jià)值高,是藥食兩用的植物資源。桑葉具有降血糖、降血壓、降血脂、抗衰老、抗腫瘤、消炎退腫等功效,其中多酚和黃酮,是桑葉發(fā)揮功效的主要活性成分[1~3]。我國(guó)地域遼闊,桑樹(shù)分布遍及全國(guó)各地,不同地域氣候土壤等環(huán)境條件差異大,勢(shì)必在很大程度上影響桑葉的物質(zhì)代謝及其植物化學(xué)物組成。有研究表明產(chǎn)地不同桑葉中的活性物質(zhì)含量也有差異[4~6],但是大部分文獻(xiàn)中原料都是??浦参锷orusalbaL.的干燥葉,而未標(biāo)明具體的桑樹(shù)品種。

    選取不同產(chǎn)地相同品種桑葉為材料,對(duì)桑葉的總酚、黃酮含量及抗氧化活性進(jìn)行比較研究,為不同產(chǎn)地桑葉資源的利用提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 樣品

    2015年10月20日采集四川、江西、湖北的“農(nóng)桑14號(hào)”和“強(qiáng)桑1號(hào)”桑葉,60℃烘干,粉碎,過(guò)60目篩備用。

    1.1.2 試劑

    沒(méi)食子酸、蘆丁、抗壞血酸、Trolox、DPPH、ABTS等標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自Sigma,無(wú)水乙醇、過(guò)二硫酸鉀、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉(分析純)等試劑購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)有限公司。

    1.1.3 儀器

    BIO-TEK ELX800 酶標(biāo)儀(美國(guó)伯騰儀器有限公司)、722型分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)、SK3310HP超聲清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 桑葉酚類(lèi)物質(zhì)的提取[7]

    采用超聲輔助法提取桑葉多酚和黃酮。稱(chēng)取桑葉粉 0.5 g,置50 mL離心管中,加 70% 乙醇30 mL,超聲(300W)提取2次,每次30 min,合并提取液,以70%乙醇定容至100 mL,4℃保存。

    1.2.2 總酚和總黃酮含量的測(cè)定[7]

    桑葉總酚含量采用福林酚比色法測(cè)定,吸取 1.0 mL 桑葉提取液于 25 mL 容量瓶中,加入 2.0 mL Folin-Ciocalteu試劑,充分搖勻,5 min后加人 3 mL 10% Na2CO3溶液,混勻,加水定容,混勻后在30℃下避光放置反應(yīng)60min,以去離子水代替樣品溶液為空白,在760 nm處測(cè)定吸光值。桑葉樣品中的多酚含量以沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品計(jì),結(jié)果表示為mg GAE/ g DW。

    總黃酮含量采用亞硝酸鈉-硝酸鋁法測(cè)定:吸取 1.0 mL 桑葉提取液于 10 mL容量瓶中,加入 5% 亞硝酸鈉 0.4 mL。搖勻,放置 6 min,加入 10% 硝酸鋁 0.4 mL,搖勻,放置 6 min,加 4% NaOH 溶液 10.0 mL,加水定容,搖勻,放置 15 min,在 510 nm處測(cè)吸光值。桑葉樣品中的總黃酮含量以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品計(jì),結(jié)果表示為mg RE/ g DW。

    1.2.3 桑葉提取液體外抗氧化能力的測(cè)定1.2.3.1 DPPH清除能力[8]

    將100 μL的DPPH甲醇溶液(0.065 mmol/L)與20 μL的樣品溶液或空白溶液混溶在96孔板中,在室溫下反應(yīng)30 min,使用酶標(biāo)儀在517nm下測(cè)定其吸光值。以不同濃度的Trolox溶液(50、100、200、300、400和500 μmol/L)及其相應(yīng)的清除率繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,樣品溶液的DPPH清除能力以Trolox為參考標(biāo)準(zhǔn),結(jié)果表示為μmol TE/g DW。 清除DPPH自由基能力用如下公式計(jì)算:

    其中:Ai為樣品溶液加DPPH試劑混合液的吸光度,Aj為樣品溶液加乙醇的吸光度,A0為DPPH溶液加樣品溶劑的吸光度。

    1.2.3.2 ABTS清除能力[9]

    將5 mL7.4 mmol/L ABTS儲(chǔ)備液與88 μL 2.6 mmol /L K2S2O8混勻,靜置12~16h,配制成ABTS工作液。ABTS工作液用80%的乙醇稀釋?zhuān)够旌先芤涸?34nm處吸光值為0.7±0.1,然后于96孔板中分別加入200 uL ABTS溶液和20 uL樣品溶液,震蕩混合均勻6 min后,在734 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。以不同濃度的Trolox溶液(25、50、100、200、400和500 μmol/L)及其相應(yīng)的清除率繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,樣品溶液的ABTS清除能力以 Trolox為參考標(biāo)準(zhǔn),結(jié)果表示為μmol TE/g DW。清除率計(jì)算公式如下:

    其中:A0為ABTS溶液和樣品溶劑混合液的吸光度,Ai為ABTS溶液和樣品溶液混合液的吸光度,Aj為80%乙醇和樣品溶液的吸光度。

    1.2.3.3 鐵離子還原能力(FRAP)[10]

    在96孔酶標(biāo)板的每孔中,依次加入10 μL不同濃度的抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液(200、300、400、600、800和1 000 μmol/L)和300 μL的ferric-TPTZ工作液,室溫反應(yīng)30 min后,于593 nm下用酶標(biāo)儀測(cè)定其吸光度。桑葉提取液測(cè)定結(jié)果以抗壞血酸為參考標(biāo)準(zhǔn),結(jié)果表示為μmol AAE/g DW。

    1.2.4 統(tǒng)計(jì)分析

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同地區(qū)“農(nóng)桑14號(hào)”的研究結(jié)果

    從表1結(jié)果看出,不同產(chǎn)地 “農(nóng)桑14號(hào)”桑葉多酚、黃酮含量及體外抗氧化活性呈現(xiàn)顯著性差異,總酚、總黃酮含量在12.52~23.69 mg GAE/g DW和20.97~62.19 mg RE/g DW,清除DPPH、清除ABTS和 FRAP水平分別為 45.92~68.67 μmol TE/g DW、68.49~70.83 μmol TE/g DW 和 71.69~120.47 μmol AAE/g DW。其中江西永新的“農(nóng)桑14號(hào)”桑葉總酚、總黃酮含量最高,而四川南橋的總酚含量最低,四川中安的總黃酮含量最低。江西三個(gè)地區(qū)桑葉體外抗氧化能力無(wú)顯著差異,且普遍高于湖北武漢、四川南橋和四川中安。

    表1 不同產(chǎn)地“農(nóng)桑14號(hào)”桑葉多酚、黃酮含量及抗氧化活性比較

    2.2 不同地區(qū)“強(qiáng)桑1號(hào)” 的研究結(jié)果

    從表2可知,不同產(chǎn)地 “強(qiáng)桑1號(hào)”桑葉多酚、黃酮含量也呈現(xiàn)顯著性差異。其中江西永新 “強(qiáng)桑1號(hào)”桑葉總酚、總黃酮含量最高,分別為20.27 mg GAE/g DW和 45.92 mg RE/g DW,江西修水桑葉的總酚、總黃酮含量最低,分別為15.59 mg GAE/g DW 和27.34 mg RE/g DW。四個(gè)地區(qū)中桑葉提取物DPPH清除能力最高的是江西永新(69.6μmol TE/g DW),最低的是江西修水(66.88μmol TE/g DW);清除ABTS能力水平無(wú)顯著性差異; FRAP水平最高的是江西永新(120.74 μmol AAE/g DW),最低的是湖北武漢(100.76μmol AAE/g DW)。

    表2 不同地區(qū)“強(qiáng)桑1號(hào)” 桑葉多酚、黃酮含量及抗氧化活性比較

    3 討論

    不同產(chǎn)地“農(nóng)桑14號(hào)”和“強(qiáng)桑1號(hào)”桑葉提取液總酚、總黃酮含量及其體外抗氧化能力呈顯著差異性,表明地域?qū)ιH~成分影響很大。由于試驗(yàn)所選擇的幾個(gè)地區(qū)氣候、土壤或者栽培措施管理等條件不是完全一致的,因此引起不同地區(qū)桑葉在營(yíng)養(yǎng)功能成分含量差異的原因還有待于進(jìn)一步研究。

    江西三個(gè)產(chǎn)地“農(nóng)桑14號(hào)”和“強(qiáng)桑1號(hào)”桑葉的總酚、總黃酮含量由高到低呈相同趨勢(shì):永新>樂(lè)安>修水,且在這三個(gè)產(chǎn)地均是“農(nóng)桑14號(hào)”含量高于“強(qiáng)桑1號(hào)”,說(shuō)明在選擇藥食用桑葉原料時(shí),需考慮不同品種的差異。

    [1] 王芳,勵(lì)建榮.桑葉的化學(xué)成分、生理功能及應(yīng)用研究進(jìn)展[J].食品科學(xué),2005,26(增刊):111~116.

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    江西省科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):20151BBB60096)。

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