上皮性卵巢腫瘤組織中PSMD10、Ki67的表達(dá)及其臨床病理意義

于 歌 孫佳寧 馮曉玲

上皮性卵巢腫瘤組織中PSMD10、Ki67的表達(dá)及其臨床病理意義

于 歌 孫佳寧 馮曉玲

目的 研究上皮性卵巢腫瘤組織中PSMD10和Ki67的表達(dá)及其臨床病理意義。方法 通過(guò)免疫組化SP法檢測(cè)21例卵巢良性腫瘤、31例卵巢交界性腫瘤、156例卵巢癌組織中PSMD10和Ki67的表達(dá)情況。結(jié)果 PSMD10和Ki67在卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于卵巢交界性腫瘤和良性腫瘤(P<0.05)。PSMD10在卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與患者的年齡、病理類(lèi)型無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而與臨床分期、病理分級(jí)和殘留腫瘤直徑有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。卵巢癌組織中PSMD10和Ki67的表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.01)。結(jié)論 PSMD10和Ki67在上皮性卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中起到了重要的協(xié)同作用，可作為判斷卵巢癌惡性程度、病情進(jìn)展的重要指標(biāo)，聯(lián)合檢測(cè)用于指導(dǎo)臨床診斷。

卵巢癌；PSMD10；Ki67；免疫組化

目前我國(guó)卵巢癌發(fā)病率逐年增加，并呈年輕化趨勢(shì)[1]。卵巢癌死亡率居?jì)D科惡性腫瘤之首[2]，卵巢癌患者的治療仍未得到有效控制[3]。因此，進(jìn)一步研究卵巢癌致病因素和發(fā)生機(jī)制，明確靶向治療方向是目前臨床上控制和治療卵巢癌的重要研究方向[2]。

細(xì)胞核增殖抗原Ki67是一種編碼于10號(hào)染色體的DNA結(jié)合蛋白，定位于增殖細(xì)胞的細(xì)胞核中，在G1、S、G2和M期均有表達(dá)[4]，并在腫瘤細(xì)胞有絲分裂過(guò)程中起到重要作用[5]。Ki67被認(rèn)為是反映惡性腫瘤生物學(xué)行為的理想指標(biāo)[6]。有研究顯示增生期血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞中Ki67的表達(dá)顯著高于其在退化期和正常皮膚組織內(nèi)的表達(dá)[7]。PSMD10(Proteasome265 subunit，non-ATpase10)，又名Gankyrin、p28或p28GANK，定位于人類(lèi)Xq22.3[8]。該基因所編碼的蛋白具有226個(gè)氨基酸殘基，相對(duì)分子量25×103，擁有7個(gè)錨蛋白重復(fù)序列，是一個(gè)在所有哺乳動(dòng)物中高度保守的癌蛋白[9]。PSMD10能夠與265蛋白酶的ATP酶相互作用，通過(guò)控制Rb和CDK4的磷酸化以及增加p53的泛素化來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖[10]。有研究報(bào)道，PSMD10在原發(fā)性肝癌、食道癌、胃癌、結(jié)直腸癌中呈高表達(dá)，而在正常消化組織中呈弱陽(yáng)性甚至陰性表達(dá)，說(shuō)明其可能參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程[11]。

本研究聯(lián)合檢測(cè)PSMD10和Ki67在卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)，通過(guò)免疫組化等方法分析其臨床意義及病理特征。探討彼此之間作用關(guān)系，分析其在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮的作用。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

隨機(jī)選取哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2013年2月—2015年12月婦科診斷證實(shí)的原發(fā)性卵巢上皮性腫瘤組織標(biāo)本208例，年齡30～70歲，平均年齡50歲，臨床病例資料完整，所有病例術(shù)前均未接受放、化療及免疫治療。病理類(lèi)型：卵巢癌156例，交界性漿液性卵巢腫瘤31例，卵巢良性腫瘤21例。病理分級(jí)：156例上皮性卵巢癌中低級(jí)別68例，高級(jí)別88例；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期129例；腹水：腹水<100 mL者37例，腹水≥100 mL者119例。卵巢癌的組織臨床分期參照FIGO 2000年制定的標(biāo)準(zhǔn)，病理組織學(xué)分級(jí)根據(jù)WHO分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 試劑

兔抗人PSMD10蛋白的單克隆抗體(Santa)、免疫組織化學(xué)超敏UltraTMSP試劑盒(Kit=9710)購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司；DAB顯色劑盒(ZLT-9031)購(gòu)自中杉金橋生物技術(shù)公司；兔抗人PSMD10蛋白的單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa公司。

1.3 方法

采用免疫組化SP法，PSMD10抗體用PBS 1∶50稀釋為工作液。10%福爾馬林固定手術(shù)標(biāo)本，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，貼于涂有多聚賴(lài)氨酸的載玻片上。切片染色前常規(guī)脫蠟、水化，修復(fù)抗原，0.3%H2O2溶液阻斷內(nèi)源性的過(guò)氧化物酶，全部操作過(guò)程均按SP試劑盒說(shuō)明完成。用已知的陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液(PBS緩沖液)代替一抗作為陰性對(duì)照。每次試驗(yàn)均設(shè)置陰性對(duì)照組。

1.4 結(jié)果判定

以細(xì)胞漿或細(xì)胞膜內(nèi)呈棕黃色細(xì)顆粒狀著色為PSMD10蛋白表達(dá)陽(yáng)性。參照綜合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(占總細(xì)胞數(shù)的百分比)來(lái)進(jìn)行半定量處理。(1)染色強(qiáng)度按下列評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分：細(xì)胞無(wú)顯色者為0分，細(xì)胞呈淺黃色者為1分，細(xì)胞呈棕黃色者2分，細(xì)胞呈棕褐色者為3分；(2)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分方法：陽(yáng)性細(xì)胞占總細(xì)胞的0～10%者為0分，10%～50%者為1分，51%～80%者為2分，>80%者為3分。上述兩項(xiàng)評(píng)分(1)+(2)，以4分為界，≥4分者為高表達(dá)，<4分者為低表達(dá)。

Ki67陽(yáng)性染色定位于細(xì)胞核。細(xì)胞核或胞漿內(nèi)有棕褐色或棕黃色著色為陽(yáng)性，切片結(jié)合陽(yáng)性染色癌細(xì)胞的染色程度和比例來(lái)評(píng)分：著色率≥30%為(+)，<30%為(-)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用Fishers精確檢驗(yàn)及卡方檢驗(yàn)分析PSMD10與臨床病理因素的關(guān)系，等級(jí)相關(guān)采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PSMD10、Ki67在卵巢腫瘤組織中的表達(dá)

PSMD10在卵巢良性、交界性和癌組織中總陽(yáng)性率分別為4.8%、22.58%、55.78%。Ki67在卵巢良性、交界性和癌組織中總陽(yáng)性率分別為9.52%、9.68%、60.90%。PSMD10和Ki67在卵巢癌組織中表達(dá)顯著高于交界性和良性組織(圖1)(P<0.05)，在交界性和良性組織中低表達(dá)且無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

表1 PSMD10和Ki67在上皮性卵巢腫瘤組織中的表達(dá)

2.2 PSMD10和Ki67在卵巢癌組織中的表達(dá)關(guān)系

卵巢癌組織中PSMD10和Ki67的表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.01)(表2)。

2.3 PSMD10在卵巢癌組織中的表達(dá)

PSMD10在卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與患者的年齡、病理類(lèi)型、腹水量、CA125值無(wú)關(guān)(P>0.05)，而與臨床分期、病理分級(jí)、殘留腫瘤大小有關(guān)(P<0.05)(表3)。

表2 PSMD10、Ki67在卵巢癌組織中的表達(dá)

表3 PSMD10表在卵巢癌組織中的表達(dá)

圖1 PSMD、Ki67在卵巢腫瘤的免疫組化染色Figure 1 Immunohistochemical staining of PSMD and Ki67 in ovarian tumor tissuesNote：A-C.HABP-1 expression in benign，border and malignant tumor cells；D-F.Ki67 expression in benign，border and malignant tumor cells.

3 討論

卵巢癌是女性常見(jiàn)的惡性腫瘤，發(fā)病率居?jì)D科惡性腫瘤第三位，占全身惡性腫瘤的5%[12]。早期發(fā)現(xiàn)和有效的治療方法是控制卵巢癌發(fā)生、發(fā)展的重要因素[13]?，F(xiàn)階段，卵巢癌以手術(shù)和化療為主要治療手段，但是由于盆腹腔存在廣泛轉(zhuǎn)移，手術(shù)的局限性以及化療后出現(xiàn)耐藥復(fù)發(fā)等使得卵巢癌晚期患者5年生存率仍停留在20%～25%[14]，故尋求敏感的卵巢癌腫瘤標(biāo)記物是目前研究的熱點(diǎn)。

PSMD10由226個(gè)氨基酸組成，內(nèi)含7個(gè)ankyrin重復(fù)序列，為26S蛋白酶復(fù)合體的調(diào)節(jié)亞基。有研究表明，PSMD10蛋白與癌癥的形成和進(jìn)展存在一定的相關(guān)性[11，15]。該基因在多種腫瘤組織中異?；罨⒏弑磉_(dá)，其能夠增加腫瘤細(xì)胞增殖速度，提高腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。Higashitisuji等發(fā)現(xiàn)在肝癌中，PSMD10能夠通過(guò)CDK4磷酸化Rb誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，另外其還可以與MDM2結(jié)合增加p53的泛素化[16-17]。Man等[18]研究表明PSMD10可以調(diào)控RhoA/ROCK/PTEN信號(hào)通路，在RAS誘導(dǎo)的腫瘤形成過(guò)程中發(fā)揮重要作用。Zhang等[19]研究發(fā)現(xiàn)PSMD10可以激活PTEN/PI3K/AKT信號(hào)通路，在雌激素誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖過(guò)程中發(fā)揮重要作用。以上研究表明PSMD10對(duì)于癌細(xì)胞的周期和進(jìn)展至關(guān)重要，起到關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用。Ki67在細(xì)胞增殖周期均有表達(dá)，且該標(biāo)記物陽(yáng)性率越高，腫瘤生長(zhǎng)越快，組織分化越差，預(yù)后越差。因此，Ki67高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞具有更高的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。本研究表明，PSMD10和Ki67可能存在廣泛協(xié)同作用，兩者都能夠加快腫瘤細(xì)胞的增殖速度，縮短細(xì)胞周期，為腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移提供條件，且兩者高表達(dá)均提示預(yù)后較差。

本研究主要討論P(yáng)SMD10和Ki67的高表達(dá)與上皮性卵巢腫瘤發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系。我們通過(guò)分析208例卵巢腫瘤組織中PSMD10和Ki67的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)PSMD10和Ki67在卵巢癌組織中的表達(dá)顯著高于交界性和良性組織，提示PSMD10和Ki67的高表達(dá)與卵巢癌的發(fā)生有關(guān)。在PSMD10高表達(dá)的卵巢癌病例中，Ki67呈伴隨性增高，且兩者呈正相關(guān)。PSMD10在卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與患者的年齡和病理類(lèi)型無(wú)關(guān)，而與病理分級(jí)、臨床分期和殘留腫瘤大小有關(guān)，分化程度低、臨床分期晚、殘留腫瘤大小超過(guò)2 cm相應(yīng)PSMD10高表達(dá)。在腹水量≥100 mL、CA125值≥35 U/mL的病例中，PSMD10的陽(yáng)性率增高。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PSMD10表達(dá)越高，臨床期別越晚，腫瘤惡性程度越高，腫瘤增殖和侵襲能力越強(qiáng)，預(yù)后越不理想。

綜上所述，PSMD10和Ki67的異常表達(dá)在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，兩者間存在某種調(diào)控關(guān)系，能夠彼此上調(diào)和協(xié)同，促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖和侵襲。PSMD10和Ki67如何作用于腫瘤組織，與殘留腫物大小關(guān)系有待于進(jìn)一步研究。

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(收稿：2016-09-22)

Expression of PSMD10 and Ki67 in epithelial ovarian carcinoma and its clinicopathological significance

YUGe，SUNJianing，F(xiàn)ENGXiaoling

The First Hospital Affiliated to Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150081，China

Objective The objective of this study was to investigate the expression of PSMD10 and Ki67 in epithelial ovarian tumors and its clinicopathological significance.Methods Immunohistochemical method was used to detect the expression of PSMD10 and Ki67 in 21 cases of ovarian benign tumor，31 cases of ovarian borderline tumor and 156 cases of ovarian cancer.Results The positive expression rate of PSMD10 and Ki67 in ovarian cancer was significantly higher than those of ovarian borderline and benign tumor(P<0.05).The positive expression rate of PSMD10 in ovarian cancer tissues was not different from others groups(P>0.05).There was significant different the positive expression rate of PSMD10 from clinical stage，pathological grade and residual tumor diameter(P<0.05).There was a positive correlation between the expression of PSMD10 and Ki67 in ovarian cancer(P<0.01).Conclusion PSMD10 and Ki67 play an important synergistic role in the carcinogenesis and progression of epithelial ovarian cancer.It can be used as an important index to judge the degree of malignancy and progression of ovarian cancer.Joint testing PSMD10 and Ki67 are used to guide the clinical diagnosis.

Ovarian cancer；PSMD10；Ki67；Immunohistochemistry

黑龍江省中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院(哈爾濱 150081)

于歌，女，(1985-)，博士研究生，從事婦科腫瘤的研究。

馮曉玲，E-mail：doctorfxl@163.com

R737.31

A

10.11904/j.issn.1002-3070.2017.02.004