孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的產(chǎn)后抑郁模型小鼠海馬精神分裂癥斷裂基因1的表達(dá)變化

夏寶妹，陳 暢，張海樓，周 欣，陶偉偉，吳顥昕，陳 剛

1南京特殊教育師范學(xué)院 康復(fù)科學(xué)學(xué)院醫(yī)學(xué)康復(fù)教研室，南京 2100382南京中醫(yī)藥大學(xué) 第三附屬醫(yī)院腦病科，南京 2100013南京中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院腦病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京 210023

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·論 著·

孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的產(chǎn)后抑郁模型小鼠海馬精神分裂癥斷裂基因1的表達(dá)變化

夏寶妹1，3，陳 暢2，張海樓3，周 欣3，陶偉偉3，吳顥昕3，陳 剛3

1南京特殊教育師范學(xué)院 康復(fù)科學(xué)學(xué)院醫(yī)學(xué)康復(fù)教研室，南京 2100382南京中醫(yī)藥大學(xué) 第三附屬醫(yī)院腦病科，南京 2100013南京中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院腦病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京 210023

目的 以孕前應(yīng)激誘導(dǎo)方式建立產(chǎn)后抑郁癥(PPD)小鼠模型，評估母鼠產(chǎn)后的異常行為，檢測母鼠海馬精神分裂癥斷裂基因1(DISC1)及血清雌二醇、皮質(zhì)酮的變化，揭示產(chǎn)后抑郁的發(fā)病機(jī)制。方法 將32只Balb/c母鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組和模型組，每組16只，對照組小鼠不給予任何刺激，模型組小鼠給予慢性束縛刺激。3周后對照組和模型組均予雌雄合籠交配懷孕，分娩后即為對照組和孕前應(yīng)激誘導(dǎo)PPD模型組。于分娩后3周對母鼠進(jìn)行曠場測試、懸尾測試及糖水偏愛測試以評價造模是否成功。取海馬檢測DISC1基因及蛋白的表達(dá)，眼眶取血檢測血清雌二醇及皮質(zhì)酮水平。結(jié)果 產(chǎn)后3周，與對照組相比，PPD模型組在曠場測試中自發(fā)活動無改變(P>0.05)，在懸尾測試中的絕望不動時間顯著增加(t=-4.950，P<0.001)，糖水偏愛顯著降低(t=2.475，P<0.05)。與對照組相比，PPD模型組海馬DISC1基因(t=-8.915，P<0.001)及蛋白(t=-5.004，P<0.01)表達(dá)均顯著上調(diào)，而血清皮質(zhì)酮及雌二醇均無變化(P均>0.05)。結(jié)論 慢性孕前應(yīng)激可誘導(dǎo)Balb/c母鼠表現(xiàn)出產(chǎn)后抑郁樣癥狀，其發(fā)病機(jī)制可能與調(diào)控海馬DISC1的基因和蛋白表達(dá)有關(guān)。

產(chǎn)后抑郁；孕前應(yīng)激；精神分裂癥斷裂基因1；雌二醇；皮質(zhì)酮

ActaAcadMedSin，2017,39(2)：230-235

有證據(jù)表明抑郁及雙相障礙與精神分裂癥享有一些共同的易感基因，包括精神分裂癥斷裂基因1(disrupted-in-schizophrenia 1，DISC1)。有研究顯示DISC1基因變異與老年女性重度抑郁障礙發(fā)生有密切關(guān)系[3]。DISC1通過與多種蛋白相互作用，在神經(jīng)遷移、軸突生長、神經(jīng)元成熟中發(fā)揮關(guān)鍵作用[4- 5]。目前已有較多的臨床及實(shí)驗(yàn)證據(jù)證明DISC1在抑郁癥發(fā)病中的作用，而關(guān)于其在PPD發(fā)病中的作用鮮有研究。由于PPD多因素致病背景，既往應(yīng)激性生活事件尤其是慢性應(yīng)激是抑郁癥的主要促發(fā)因素[6]。本研究選擇6～8周Balb/c雌鼠為研究對象，孕前給予慢性應(yīng)激，自然分娩后建立穩(wěn)定可靠的產(chǎn)后抑郁癥動物模型，以經(jīng)典的抑郁行為學(xué)測試對其進(jìn)行評估，并在該模型上檢測小鼠海馬DISC1 mRNA及其蛋白的表達(dá)，檢測血清雌二醇及皮質(zhì)酮指標(biāo)，以構(gòu)建更為完善的產(chǎn)后抑郁動物模型并揭示PPD的部分發(fā)病機(jī)制。

材料和方法

實(shí)驗(yàn)動物 清潔級健康成年雌性Balb/c小鼠32只，體重18～24 g，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供，動物合格證號：2007000581303。實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行1周的適應(yīng)性飼養(yǎng)。動物房室溫(25±2)℃，動物可自由飲食進(jìn)水。小鼠群養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)化環(huán)境下,12 h晝夜循環(huán)，明暗交替時間為12 h(早6：00～晚6：00)；相對濕度(55±10)%。每籠飼養(yǎng)小鼠4只。標(biāo)準(zhǔn)化飼養(yǎng)，鼠籠每周清理兩次。

實(shí)驗(yàn)試劑及儀器 懸尾測試及曠場測試視頻分析系統(tǒng)(上海吉量軟件公司)，自制束縛管。實(shí)驗(yàn)試劑Trizol(美國invitrogen 公司)，RT 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本Takara 公司)，SYBR Green PCR Master Mix 試劑盒(日本Takara公司)。雌二醇、皮質(zhì)酮酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒(美國R&D公司)；ABI Step One Plus 型熒光定量PCR 儀(美國應(yīng)用生物公司)。 電泳轉(zhuǎn)膜儀(Bio-Rad Laboratories，Inc，Hercules，CA，USA)，聚偏二氟乙烯膜(Millipore Corp，Bedford，MA，USA)，牛血清白蛋白(生興公司)，兔抗DISC1 (Cell Signaling Technology，USA)，山羊抗兔辣根過氧化酶標(biāo)記(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，Tanon- 5200全自動化學(xué)發(fā)光圖像分析系統(tǒng)(上海天能科技有限公司)。

動物分組及模型制備 32只Balb/c雌鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組(n=16)和模型組(n=16)，對照組不予任何應(yīng)激，模型組小鼠給予每天6 h的束縛應(yīng)激刺激(11：00～17：00)。3周后將對照組及模型組以一雌一雄分籠交配飼養(yǎng)。大約4周后，母鼠分娩，即為對照組和孕前應(yīng)激誘導(dǎo)PPD模型組。產(chǎn)后3周檢測行為學(xué)指標(biāo)以判斷造模是否成功。行為學(xué)測試結(jié)束后，小鼠眼眶取血后立即行脫椎處死，并于冰上取腦海馬組織。

曠場測試 將觀察箱底部每個場劃分為中央?yún)^(qū)域和周邊區(qū)域。測試當(dāng)天，在一個安靜的光線柔和的房間內(nèi)，先讓小鼠適應(yīng)環(huán)境30 min，然后將小鼠置于30 cm×30 cm×45 cm黑色觀察箱的底部中央方格內(nèi)，關(guān)上箱門，在安靜環(huán)境下連續(xù)采集5 min。采用吉量動物行為分析系統(tǒng)采集、存儲和分析視頻信號。

懸尾測試 懸尾測試用于反映抑郁癥動物的行為絕望。小鼠尾端距離尾末 1 cm處被膠布固定并被懸掛于離地40 cm高的鐵桿上，用攝像機(jī)記錄 6 min內(nèi)小鼠的行為，并用吉量動物行為分析系統(tǒng)軟件測量后 4 min內(nèi)小鼠四肢與軀干完全不動的時間：即小鼠停止掙扎，僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動。

糖水偏愛測試 糖水偏愛測試反映抑郁癥動物快感缺失癥狀。根據(jù)Opal等[7]方法操作，實(shí)驗(yàn)開始前先進(jìn)行糖水適應(yīng)，在剝奪水糧18 h后給予小鼠兩瓶濃度為2%的蔗糖溶液，持續(xù)3 d后行蔗糖消耗檢測。禁水禁食后18 h給予1瓶2%的蔗糖溶液和1瓶普通水，為防止小鼠產(chǎn)生位置偏愛，1 h交換兩只水瓶位置1次，測試完畢后，記錄2 h內(nèi)小鼠攝入普通水以及糖水的量。蔗糖消耗百分比計算公式為：蔗糖消耗(%)=[蔗糖攝入量/(蔗糖攝入量+水的攝入量)]×100%。

實(shí)時定量PCR 檢測海馬DISC1 mRNA表達(dá)：(1)RNA 提?。簩⑿∈笠粋?cè)海馬組織按Trizol提取試劑盒操作說明提取RNA，-70℃凍存。(2)合成cDNA：按Takara試劑盒說明操作將RNA逆轉(zhuǎn)錄cDNA，-20℃凍存。(3)PCR擴(kuò)增：以1個樣本的cDNA稀釋后作為標(biāo)準(zhǔn)品做基因的定量PCR，PCR反應(yīng)條件：95℃ 10 min，40 個循環(huán)：95℃ 30 s，95℃ 10 s，60℃ 30 s。(4)引物：DISC1：正向引物：5’-AAACACGCATGAA- GGCAAACA- 3’，反向引物：5’-GGCTCTGCATTAGCAA- CTGACA- 3’。GAPDH(內(nèi)參基因) 正向引物：5’-AAC- GACCCCTTCATTGAC- 3’；反向引物：5’-GGCTCTGCATTAGCAACTGACA- 3’。(5)實(shí)時定量PCR反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)獲得樣品的2-△△Ct值，計算得到目的基因mRNA表達(dá)的相對值。

五月中旬的一天上午，明媚的陽光透過玻璃窗照進(jìn)屋里。楊秋香又外出找人打撲克去了，楊力生一個人在家。忽然手機(jī)鈴聲響了，有客戶來電話約他外出商量業(yè)務(wù)。他顧不得商量，與客戶借口說身體有些不舒服，打開電腦便和那位姑娘聊起來。及至打開視頻和姑娘見面，他就像《西游記》里的豬八戒被女妖怪迷住一樣，魂兒一下子便被姑娘給攝走了。其實(shí)，論相貌這位姑娘也不過一般。可是，就因?yàn)樵谝曨l上甜言蜜語聊過幾次，在他的眼里，這姑娘的美不亞于戲劇中的西施，又如《三國演義》中的貂嬋，不，在他眼里這姑娘干脆就是月宮中的嫦娥……

Western blot檢測 檢測海馬DISC1蛋白表達(dá)：將小鼠另一側(cè)海馬組織稱重后，組織置于裂解液中勻漿10 min(重量體積比為1∶10)，勻漿后4℃ 12 000×g離心10 min，取上清，20 μl/管分裝，-70℃保存。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳法，每一泳道取50 μg樣品上樣，分離膠濃度為8%。電泳結(jié)束后，濕轉(zhuǎn)法將蛋白轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯膜上(4℃ 300 mA電轉(zhuǎn)60 min)，轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，5%牛血清白蛋白室溫封閉膜1 h，分別用兔抗DISC1 (1∶500)、兔抗β-Tubulin (北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，1∶2000)一抗 4℃孵育過夜。次日 Tris-HCL緩沖鹽-吐溫溶液漂洗 10 min×3 次后，二抗(1∶2000)室溫孵育1 h后加入電化學(xué)發(fā)光底物顯色，Tanon- 5200全自動化學(xué)發(fā)光圖像分析系統(tǒng)顯影分析，用目的蛋白與各自 β-Tubulin蛋白灰度比值表示其蛋白量，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

酶聯(lián)免疫吸附測定 檢測血清雌二醇和皮質(zhì)酮水平：小鼠眼眶取血1.5 ml，在4℃，3000 r/min(離心半徑為10 cm) 的條件下，離心10 min，-20℃保存待測。采用酶聯(lián)免疫試劑盒檢測雌二醇和皮質(zhì)酮含量。嚴(yán)格按照試劑盒說明操作。

統(tǒng)計學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0統(tǒng)計分析軟件處理，先對數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，確定正態(tài)分布后行方差齊性檢驗(yàn)，兩組間樣本比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，測量結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的PPD模型母鼠曠場測試的表現(xiàn) 產(chǎn)后3周，與對照組相比，孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的PPD模型組母鼠在曠場內(nèi)的行為包括曠場活動總路程(t=-2.068，P>0.05)及中央活動時間(t=-1.005，P>0.05)均與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(圖1A)。

孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的PPD模型母鼠懸尾測試的表現(xiàn) 產(chǎn)后3周，與對照組相比，孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的PPD模型組母鼠在懸尾測試中停止掙扎的絕望不動持續(xù)時間明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-4.950，P<0.001)(圖1B)。

孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的PPD模型母鼠糖水偏愛測試的表現(xiàn) 產(chǎn)后3周，與對照組相比，孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的PPD模型組母鼠在糖水偏愛測試中的糖水消耗百分比顯著降低，糖水偏愛下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=2.475，P<0.05)(圖1C)。

孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的PPD模型母鼠海馬DISC1的基因表達(dá) 產(chǎn)后3周，與對照組相比，孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的PPD模型組母鼠海馬DISC1基因mRNA表達(dá)明顯增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-8.915，P<0.001)(圖2)。

孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的PPD模型母鼠海馬DISC1的蛋白表達(dá) 產(chǎn)后3周，與對照組相比，孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的PPD模型組母鼠海馬DISC1蛋白表達(dá)顯著上調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-5.004，P<0.01)(圖3)。

孕前應(yīng)激誘導(dǎo)PPD模型母鼠體內(nèi)雌二醇及皮質(zhì)酮水平 產(chǎn)后3周，與對照組相比，孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的PPD模型母鼠血清雌二醇水平(t=0.752，P>0. 05)及血皮質(zhì)酮水平(t=-0.016，P>0. 05) 差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(圖4)。

討 論

本研究首次采用慢性孕前應(yīng)激對適齡雌性小鼠造模，通過對產(chǎn)后3周母鼠的曠場測試、懸尾測試及糖水偏愛測試綜合評估該P(yáng)PD模型。曠場測試被用來檢測嚙齒類動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的自發(fā)狀態(tài)。蔗糖消耗量降低被認(rèn)為是抑郁癥快感缺乏的一個重要標(biāo)準(zhǔn)[8]，目前被普遍認(rèn)為是一個用來評價抑郁癥造模成功與否的金標(biāo)準(zhǔn)。在無法逃避的應(yīng)激條件下，嚙齒類動物在懸尾測試中的不動狀態(tài)反映了其行為絕望，可以用于模擬人類的抑郁狀態(tài)。本研究模型母鼠自發(fā)活動無改變，懸尾測試中絕望不動時間顯著增加，糖水偏愛顯著降低，表明孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的PPD模型小鼠出現(xiàn)了行為絕望及快感缺失，這與PPD患者的臨床癥狀極為相似，因此模型的建立是成功的。

Con：對照組；Mod：模型組；與對照組相比，aP<0.001，bP<0.05

Con：control；Mod：model；aP<0.001，bP<0.05 compared with control group

A.曠場測試；B.懸尾測試；C.糖水偏愛測試

A. open field test；B. tail suspension test；C. sucrose preference test

圖 1 兩組小鼠的行為學(xué)結(jié)果

Fig 1 Results of behavioral tests of two groups of mice

DISC1：精神分裂癥斷裂基因1；與對照組相比，aP<0.001

DISC1：disrupted-in-schizophrenia 1；aP<0.001 compared with control group

圖 2 兩組小鼠海馬DISC1 mRNA的表達(dá)

Fig 2 The mRNA expression of DISC1 of two groups of mice

與對照組相比，aP<0.01

aP<0.01 compared with control group

圖 3 兩組小鼠海馬DISC1的蛋白表達(dá)

Fig 3 Western blot analysis of DISC1 protein in two groups of mice

圖 4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測母鼠血清雌二醇(A)及皮質(zhì)酮(B)變化

Fig 4 Estradiol (A) and cortisone (B) levels in blood serum by enzyme-linked immunosorbent assay

目前研究認(rèn)為PPD的發(fā)生與遺傳、心理因素和環(huán)境因素都有關(guān)，其中產(chǎn)婦在孕前經(jīng)歷過應(yīng)激性生活事件后發(fā)作PPD的概率非常高。海馬是對各種應(yīng)激反應(yīng)最敏感的腦區(qū)[9]。有學(xué)者總結(jié)分析發(fā)現(xiàn)海馬神經(jīng)元突觸可塑性降低或損傷可能是抑郁癥發(fā)病的機(jī)制所在[10- 11]。

研究表明DISC1與重度抑郁[3]及精神分裂癥[12]等精神疾病有高度相關(guān)性。DISC1是海馬神經(jīng)元整合過程中的重要調(diào)節(jié)元素，成年期DISC1對大腦神經(jīng)元可能發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用。Brydges等[13]研究顯示青少年期的應(yīng)激可以持續(xù)性影響C57BL/6小鼠海馬DISC1基因的表達(dá)并顯著增加成年后小鼠的抑郁發(fā)生。本研究顯示慢性應(yīng)激誘導(dǎo)的模型母鼠海馬DISC1的基因和蛋白表達(dá)水平均比對照組顯著增高，并且海馬DISC1的異常表達(dá)與其懸尾測試及糖水偏愛測試表現(xiàn)出的抑郁樣絕望行為及快感缺失行為表型具有一致相關(guān)性。研究表明DISC1通過與多種因素的作用變化影響抑郁癥及精神分裂癥的易患性，最終導(dǎo)致神經(jīng)元可塑性降低[14]。本研究表明DISC1可能參與了PPD母鼠海馬神經(jīng)元可塑性改變的病理生理過程，異常上調(diào)的DISC1對神經(jīng)信號系統(tǒng)的負(fù)性調(diào)控影響可能是孕前應(yīng)激的機(jī)體產(chǎn)后抑郁易感性增加的機(jī)制之一。筆者將進(jìn)一步研究DISC1信號通道上其他相關(guān)分子的表達(dá)變化，以進(jìn)一步完整地揭示PPD的發(fā)病機(jī)制。

關(guān)于神經(jīng)內(nèi)分泌在PPD發(fā)病中的作用，研究結(jié)果一直存在著爭議。既往研究認(rèn)為激素水平的急劇變化是產(chǎn)后抑郁發(fā)生的生物學(xué)基礎(chǔ)。有關(guān)抑郁癥與性激素關(guān)系的分析研究表明產(chǎn)后抑郁癥與雌激素的關(guān)系尤為密切，如羅陽和何國平[15]研究認(rèn)為產(chǎn)后抑郁癥患者血清雌二醇濃度顯著低于對照組。本研究PPD模型母鼠產(chǎn)后3周的血清雌二醇水平與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，即雌二醇變化與產(chǎn)后抑郁不相關(guān)，這與一些學(xué)者的臨床研究相一致。張小勤[16]隨訪500例孕產(chǎn)婦，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)后抑郁患者雌二醇水平產(chǎn)前、產(chǎn)后、產(chǎn)前與產(chǎn)后差及產(chǎn)后與產(chǎn)后42 d差，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。既往研究認(rèn)為應(yīng)激可使血漿皮質(zhì)酮濃度升高，皮質(zhì)酮增高可通過損傷海馬內(nèi)的糖皮質(zhì)激素受體神經(jīng)系統(tǒng)，使患者產(chǎn)生抑郁癥狀[17]。然而近年國內(nèi)許多學(xué)者臨床研究顯示皮質(zhì)酮與PPD的發(fā)病無相關(guān)性。如翁宇紅等[18]以395例孕產(chǎn)婦研究分娩前后1周血清腎上腺皮質(zhì)激素水平變化對產(chǎn)后抑郁的影響，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)后血清皮質(zhì)酮水平對產(chǎn)后抑郁無直接作用。本研究顯示PPD模型母鼠產(chǎn)后21 d的血清皮質(zhì)酮水平與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，即皮質(zhì)酮變化與產(chǎn)后抑郁不相關(guān)。

有學(xué)者以卵巢去勢手術(shù)后連續(xù)雌孕激素注射制備PPD模型，觀察不同時點(diǎn)的下丘腦-垂體-性腺軸及下丘腦-垂體-腎上腺軸水平，發(fā)現(xiàn)與空白對照組相比，模型組雌鼠各時點(diǎn)的雌二醇水平均明顯下降而皮質(zhì)酮水平均明顯上升[19]。本研究結(jié)果與其不同，原因之一可能在于模型制備方法不同：卵巢切除術(shù)本身屬于一個嚴(yán)重的傷害性刺激，皮質(zhì)酮水平可能由于應(yīng)激從而上升；而卵巢在垂體激素的直接影響下分泌雌激素，卵巢去勢手術(shù)后，雌激素水平雌二醇勢必下降，故而以卵巢去勢后激素補(bǔ)充后驟然撤退的方法構(gòu)建的PPD模型研究揭示產(chǎn)后抑郁癥的內(nèi)分泌，無法有效地說明臨床發(fā)病機(jī)制。此外，關(guān)于神經(jīng)內(nèi)分泌的研究，本研究采樣時間為產(chǎn)后3周，有無可能因采樣時間而影響檢測結(jié)果也需要進(jìn)一步增加采樣時間點(diǎn)研究證實(shí)。

綜上，本研究孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的PPD小鼠模型在發(fā)病原因、行為表現(xiàn)方面均能較好地模仿出女性產(chǎn)后抑郁癥的發(fā)病及其外在癥狀、疾病轉(zhuǎn)歸的一般狀況，該模型是一種較為完善的具有實(shí)驗(yàn)研究價值的產(chǎn)后抑郁癥動物模型。本研究以自然產(chǎn)生的PPD動物模型探討了PPD中神經(jīng)內(nèi)分泌的變化。本研究探討了PPD模型小鼠海馬DISC1 mRNA及蛋白的變化，為DISC1參與PPD發(fā)病提供了證據(jù)，但對它的調(diào)節(jié)機(jī)制、致病機(jī)制仍需要深入研究，而這將為臨床治療PPD提供新的治療靶點(diǎn)。

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Expression of Disrupted-in-schizophrenia 1 in Hippocampus in Postpartum Depression Animal Models Induced by Pre-pregnancy Stress

XIA Baomei1，3，CHEN Chang2，ZHANG Hailou3，ZHOU Xin3，TAO Weiwei3，WU Haoxin3，CHEN Gang3

1Department of Medical Rehabilitation，F(xiàn)aculty of Rehabilitation Science，Nanjing Normal University of Special Education，Nanjing 210038，China2Department of Encephalopathy，the Third Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210001，China3Key Laboratory of Integrative Biomedicine for Brain Diseases，School of Basic Biomedical Science， Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210023，China

Corresponding author：CHEN Gang Tel：025- 85811160，E-mail：chengang@njutcm.edu.cn

Objective To establish a postpartum depression animal model induced by pre-pregnancy stress，assess abnormal maternal depressive-like behavior，observe the expression of disrupted-in-schizophrenia 1 (DISC1) in the hippocampus，and detect serum estradiol and corticosterone.Methods A total of 32 female Balb/c were assigned to two groups using random number table：the control group and the pre-pregnancy stressed group(model group)，and the model group was subjected to 3 weeks of chronic restraint stress. After the last stressor，the control group and the model group were housed with a male. About 4 weeks later，the mice gave birth to pups. Then at 3 weeks postpartum，open field test，tail suspension test，and sucrose preference test were carried out. The expressions of DISC1 mRNA and protein of hippocampus were detected by real-time quantitative polymerase chain reaction and Western blot，respectively. The serum levels of estradiol and corticosterone were detected with enzyme linked immunosorbent assay. Results After 3 weeks of postpartum，the model mice showed depression-like behaviors. In the open field test，there was no effect on the total distance moved or time spent in the center field (P>0.05). Immobility in tail suspension test was significantly increased (t=-4.950，P<0.001) and sucrose preference was significantly reduced in model group (t=2.475，P<0.05). There was significant statistical difference between control and model group on the expression of DISC1 mRNA (t=-8.915，P<0.001) and protein (t=-5.004，P<0.01) in hippocampus. There was no significant statistical difference on estradiol and corticosterone between two groups (P>0.05). Conclusions Chronic pre-pregnancy stress can induce dams into postpartum depression.The pathogenesis of postpartum depression may be related to the regulation of DISC1 in the hippocampus.

postpartum depression；pre-pregnancy stress；disrupted-in-schizophrenia 1；estradiol；cortisone

江蘇省自然科學(xué)基金(BK20151568) Supported by the Natural Sciences Foundation of Jiangsu Province (BK20151568)

陳 剛 電話：025- 85811160，電子郵件：chengang@njutcm.edu.cn

R749.4

A

1000- 503X(2017)02- 0230- 06

10.3881/j.issn.1000- 503X.2017.02.011

2016- 06- 08)