黃芪甲苷含量測(cè)定方法研究進(jìn)展

張玲+焦博萍+李扉屏

【摘 要】綜述了黃芪甲苷含量測(cè)定方法的研究進(jìn)展，包括薄層掃描法、高效液相色譜法、超高效液相色譜法等，評(píng)述每種方法的特點(diǎn)，為黃芪甲苷的含量測(cè)定提供參考。

【關(guān)鍵詞】黃芪甲苷；含量測(cè)定；研究進(jìn)展

黃芪甲苷為黃芪的主要活性成分之一，生物活性強(qiáng)，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、提高機(jī)體的抗病能力、抗病毒、抗應(yīng)激功效、促生長(zhǎng)、改善心肺功能的作用。目前主要采用黃芪甲苷作為評(píng)價(jià)黃芪藥材及其制劑質(zhì)量?jī)?yōu)劣的標(biāo)準(zhǔn)。本文概述黃芪甲苷的含量測(cè)定方法。

1 .薄層掃描法（TLCS）

薄層掃描法分為單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)測(cè)定。雙波長(zhǎng)掃描減少了干擾因素，提高了靈敏度，采用較多。此法設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便、快速，應(yīng)用廣泛，被2000版《中國(guó)藥典》采用為黃芪甲苷含量的測(cè)定方法。薄層掃描法的薄層板多采用硅膠G，展開劑多采用氯仿-甲醇-水（65：35：10），顯色劑一般為10%硫酸乙醇。翟旭峰等[1]在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，以正丁醇-醋酸乙酯-稀氨水 （4：1：5）為比例的上層溶液為展開劑，可使黃芪甲苷的斑點(diǎn)分離效果較好。

2. 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜兼有分離和分析功能，具有高分離效率、高靈敏度、測(cè)定快速等優(yōu)點(diǎn)，并且該方法避免了預(yù)處理的繁雜步驟，因此在中藥含量測(cè)定中應(yīng)用廣泛。

2.1 UV檢測(cè)器

UV檢測(cè)器為最常用的檢測(cè)器，分為紫外吸收檢測(cè)器和光電二極管陣列檢測(cè)。黃芪甲苷在200.18nm處為最大吸收波長(zhǎng)，為紫外末端吸收，通常測(cè)定波長(zhǎng)多選用201～203nm。色譜柱主要是C18，流動(dòng)相一般為乙腈-水，流速多為1mL/min。翟海云等[2]采用該法測(cè)定了復(fù)方補(bǔ)氣養(yǎng)血口服液中黃芪甲苷的含量，方法簡(jiǎn)便可行、重復(fù)性好。

2.2 RI檢測(cè)器

RI檢測(cè)法簡(jiǎn)單方便、重現(xiàn)性好，但是檢測(cè)靈敏度不高，被用于黃芪甲苷含量測(cè)定并不廣泛。

2.3 ELSD檢測(cè)器

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器具有靈敏度高、適用性廣、干擾因素少等優(yōu)點(diǎn)，特別適合于黃芪甲苷這種紫外末端吸收，沒有特征吸收波長(zhǎng)的情況，故被2005版和2010版《中國(guó)藥典》采用為的黃芪甲苷含量的測(cè)定方法。該法通常采用C18色譜柱，柱溫一般不超過40℃，流動(dòng)相為乙腈-水或甲醇-水，流速一般不超過1mL/min。孫東東等[3]采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法對(duì)糖尿平膠囊中的黃芪甲苷進(jìn)行了含量測(cè)定，色譜柱為KromasilC18（4.6×250mm，5μm），柱溫：30℃，流動(dòng)相為甲醇-水（76：24），流速為1mL/min，ELSD漂移管溫度100℃，氣體流量為2.24SLPM；黃芪甲苷在2.51～7.53μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回收率達(dá)到101.80%，RSD=1.57%；該方法準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好，簡(jiǎn)便快捷。

2.4 MS檢測(cè)器

質(zhì)譜分析具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、進(jìn)樣量少、準(zhǔn)確性好等特點(diǎn)。高效液相色譜和質(zhì)譜儀聯(lián)用可以定性、定量的分析復(fù)雜成分樣品和微量物質(zhì)，為體內(nèi)中黃芪甲苷和復(fù)雜樣品中黃芪甲苷的含量測(cè)定提供了方法。

HPLC-MS法多采用C18色譜柱，柱溫多選用室溫，流動(dòng)相多為乙腈-水，梯度洗脫，流速一般不超過1mL/min。多采用電噴霧離子化（ESI）方式，選擇性離子監(jiān)測(cè)（SIM），檢測(cè)模式有正離子和負(fù)離子兩種。李晶等[4]應(yīng)用HPLC-ESI-MSn法測(cè)定了黃芪藥材中黃芪甲苷的含量。色譜條件：色譜柱為Agilent SB-C18柱（4. 6 mm×250mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.2%甲酸水（70：30，v：v）；體積流量為0.7 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm；柱后 2：1 分流，三分之一流出液進(jìn)行質(zhì)譜分析。質(zhì)譜條件：電噴霧正離子模式檢測(cè)；霧化氣壓力為35.0psi；干燥氣溫度為350℃，流速為8.0 L/min；黃芪甲苷選擇離子對(duì)為m/z 807.4→627.2；質(zhì)量掃描范圍為100～1000amu。結(jié)果表明黃芪甲苷在0.10～1.04 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為96.51%。該方法具有簡(jiǎn)便，快速和靈敏度高的特點(diǎn)，可用于黃芪藥材及其生物制品樣品中黃芪甲苷測(cè)定。

3. 比色法

比色法是通過黃芪甲苷與顯色劑發(fā)生顯色反應(yīng)后生成有色的物質(zhì)，再用分光光度計(jì)測(cè)定的方法，實(shí)際應(yīng)用較少。根據(jù)顯色劑種類分為香草醛-冰醋酸比色法和香草醛-硫酸比色法。

4 .熒光法

熒光法是利用黃芪甲苷與某些試劑反應(yīng)生成在紫外光照射后能發(fā)射熒光的物質(zhì)的特性而定量分析的方法。此方法應(yīng)用較少，根據(jù)試劑的種類分為香草醛-磷酸體系熒光法和茴香酸-硫酸體系熒光法。

5 .超高效液相色譜（UPLC）

超高效液相色譜法是一個(gè)新興的領(lǐng)域，通過減小固定相的粒度，使色譜分離的解析度達(dá)到新的高度。超高效液相色譜具有高分離度、高速度和高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)。因其分析精度高為一些需要深入研究領(lǐng)域提供了很好的方法。楊俊等[5]采用UPLC-ELSD法測(cè)定黃芪中黃芪甲苷的含量，色譜條件：色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH C （2.1mm×100mm，1.7μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（30：70）；流速為0.2mL/min；柱溫：30℃；ELSD檢測(cè)器漂移管溫度為45℃，載氣流速為2.6 L/min，理論塔板數(shù)以黃芪甲苷計(jì)算不低于4000，黃芪甲苷的保留時(shí)間為2.1min，結(jié)果表明黃芪甲苷在0.10～0.50mg/mL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

6 .結(jié)論

由于黃芪及其制劑成分復(fù)雜，前處理繁瑣，對(duì)于其中黃芪甲苷含量的測(cè)定研究很多，方法種類也不少。比色法和熒光分析法操作簡(jiǎn)單、成本低廉、專屬性強(qiáng)，曾應(yīng)用于黃芪甲苷的測(cè)定，但并不廣泛。薄層掃描法早期應(yīng)用較多，但預(yù)處理繁雜，重現(xiàn)性差。隨著高效液相色譜的普及使用，尤其是蒸發(fā)光散射器，具有靈敏度高、受干擾因素少等優(yōu)點(diǎn)，目前多用于測(cè)定黃芪甲苷的含量。液相色譜和質(zhì)譜的聯(lián)用能對(duì)復(fù)雜樣品進(jìn)行全面質(zhì)量控制，選擇性高、準(zhǔn)確性好，近年來也應(yīng)用于測(cè)定黃芪甲苷含量。隨著色譜技術(shù)不斷創(chuàng)新，超高效液相色譜和高分離度快速液相色譜的出現(xiàn)，大大提高了分析速率，縮短了分析時(shí)間，開始逐漸應(yīng)用于黃芪甲苷的含量測(cè)定。

參考文獻(xiàn)：

[1] 翟旭峰，劉法錦，郭用莊，廖彩震.薄層掃描法測(cè)定黃芪配方顆粒中黃芪甲苷的含量[J].中成藥.2003，25（8）：651-653.

[2] 翟海云，吳燕紅，黃慶華，李苑新，袁旭江.RP-HPLC法測(cè)定復(fù)方補(bǔ)氣養(yǎng)血口服液中黃芪甲苷的含量[J].中藥新藥與臨床藥理.2009， 20（2）：156-158.

[3] 孫東東，李祥，邱蓉麗，陳建偉.糖尿平膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥.2006， 17（3）：385-386.

[4] 李晶，韋露莎，申旭霽，趙新鋒，王世祥，鄭曉暉.HPLC-ESI-MSn法測(cè)定黃芪藥材中黃芪甲苷[J].中成藥.2011，33（4）：720-722.

[5] 楊俊，王文輝，王齊，孫曉東，朱艷琴.UPLC-ELSD法測(cè)定黃芪中的黃芪甲苷含量[J].光譜實(shí)驗(yàn)室.2009，26（3）：484-486.

科研項(xiàng)目：院級(jí)課題（ZY2016004）護(hù)心顆粒制劑工藝研究。