隔藥餅灸對慢性腎功能衰竭兔血清TGF—β1及腎功能的影響

左政+陳曉梅+姜云武+楊艷梅+王斌堯

摘要：目的探討隔藥餅灸對慢性腎功能衰竭兔血清TGF-β1及腎功能的影響。方法選取兔45只隨機分成A組（空白對照組）：5只；B組（模型組）：10只；C組（隔藥餅灸組）：10只；D組（直接灸組）：10只。E組（氯紗坦鉀組）：10只。除A組外，其余各組采用腺嘌呤灌胃致兔腎間質(zhì)纖維化，建立CRF動物模型，C組運用腎衰藥粉制成灸餅，艾絨制成艾柱，隔藥餅灸進行干預(yù)，B、D、E組給予相應(yīng)治療，3個月后檢測各組兔血清TGF-β1及腎功能、24h尿蛋白變化。結(jié)果除A組外，其余各組家兔在造模后腎功（尿素氮、肌酐）和24h尿蛋白定量均有顯著升高，表明本實驗用腺嘌呤造模成功。除A組外，其余各組經(jīng)相應(yīng)治療后血清TGF-β1、腎功和24h尿蛋白定量均有所恢復(fù)，其中C組（隔藥餅灸組）恢復(fù)較明顯，與B、D、E組比較有明顯差異（P<0.05），有統(tǒng)計學(xué)意義；而D、E組比較差異不明顯（P>0.05），無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論隔藥餅灸能明顯降低CRF兔血清TGF-β1及腎功能、24h尿蛋白定量水平，是臨床治療CRF的有效方法。

關(guān)鍵詞：隔藥餅灸；慢性腎功能衰竭；TGF-β1；腎功能；24h尿蛋白定量

中圖分類號：R256.5文獻標(biāo)志碼：A文章編號：1007-2349（2017）04-0082-03

Effect of Medicinal Cake Partition Moxibustion on Serum TGF-β1

and Renal Function in Chronic Renal Failure Rabbits

RUO Zheng1， CHEN Xiao-mei2， JIANG Yun-wu1， YANG Yan-mei1， WANG Bin-yao1

（1. Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650500， Yunnan；

2. Guanzunxin Hospital， Kunming 550000， Yunnan）

【Abstract】Objective： To study the effect of Medicinal Cake Partition Moxibustion on the serum TGF-β1 and renal function in chronic renal failure rabbits. Methods： 50 rabbits were randomly divided into group A （blank control group）， 5 rats； group B （model group）， 10 rats； group C （cake partition moxibustion group）， 10 rats； group D （direct moxibustion group）， 10 rats； Group E （losartan potassium group）， 10 rats. Except group A， the other groups were given adenine gavage to induce renal interstitial fibrosis in rabbits for the establishment of CRF animal models. Group C was intervened by using renal failure powder moxibustion cake， moxa cone， and medicinal cake partition moxibustion. Group B， D and E were given the corresponding treatment. 3 months later， the serum TGF-β1， renal function and 24h urine protein changes of the rabbits were detected. Results： Except group A， the renal function （urea nitrogen， creatinine） and 24h urine protein of the other groups significantly increased， indicating that the modeling was successful with adenine. Except group A， the srmeu TGF-β1， renal function and 24h urine protein of the rest groups were restored after the corresponding treatment， of which group C （cake partition moxibustion group） recovered more obviously. Compared with group B， D and E， the difference was significant （P<0.05）. Compared with group D and E， the difference was not significant （P>0.05）. Conclusion： Medicinal Cake Partition Moxibustion can significantly reduce the levels of serum TGF-β1 and renal function and 24 h urine protein in CRF rabbits， which is an effective method for clinical treatment of CRF.

【Key words】Medicinal Cake Partition Moxibustion， chronic renal failure， TGF-β1 and renal function， 24h urine protein quantitation

慢性腎功能衰竭（chronic renal failure，CRF）是所有原發(fā)性或繼發(fā)性腎臟疾患所致進行性腎功能損害所出現(xiàn)的一系列癥狀或代謝紊亂組成的臨床綜合征[1]。是臨床的一種難治病癥，預(yù)后差。其主要病變?yōu)槟I單位的病變、進行性惡化，具體表現(xiàn)為腎小球的硬化、腎小管的變性萎縮、腎間質(zhì)的纖維化。腎間質(zhì)纖維化是各種慢性腎臟疾病進展為終末期腎功能衰竭的共同通路，是多種原因共同作用的結(jié)果，它以腎間質(zhì)中細胞及膠原成分集聚增多，伴有腎小管萎縮或擴張變形，小管周圍毛細血管減少、荒廢，完整腎單位的進行性減少，腎小球濾過率的持續(xù)性下降為特征。這一病變過程涉及細胞、細胞因子、細胞外基質(zhì)、生長因子及它們之間的相互作用[2]。其中，TGF-β1是目前公認的最強的致纖維化因子，它是參與腎小球硬化及腎小管間質(zhì)纖維化的關(guān)鍵細胞因子，近年來關(guān)于TGF-β1的研究多是探索它的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。本文就隔藥餅灸對慢性腎功能衰竭兔血清TGF-β1及腎功能的影響進行了相關(guān)研究，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1實驗藥物腎衰灸粉：黃芪、黨參、熟地、炙仙靈脾、山茱萸，按3：3：2：1：1比例配方，將上述中藥配方打磨成細藥粉。灸餅制作：用5 mL注射器去頭后制成灸餅?zāi)＞?。將上述灸粉?%利多卡因調(diào)勻成糊狀后，置于注射器模具中壓緊，后推出2～3 mm藥餅，用細線切割，制成直徑（1±0.2）cm，厚（2～3）mm，重2.5 g的圓型薄餅。艾柱制作：用自制圓錐形艾柱模具制作。用天平稱稱取艾絨200 mg，將細艾絨填塞至艾柱模具制成炷底直徑約0.5 cm，炷高0.5 cm大小艾柱。腺嘌呤（廣州生產(chǎn)威佳科技有限公司），氯沙坦鉀片（科素亞100 mg/片，杭州默沙東制藥有限公司批號：國藥準(zhǔn)字J20120045））

1.1.2實驗試劑及主要儀器ELISA試劑盒、離心機（美國Beckman公司），ELISA法檢測（SEAC型免疫測定儀，意大利），全自動生化分析儀（日本日立產(chǎn)日立71705型），考馬斯亮藍G-250：（加拿大Sangon公司）；尿蛋白定量試劑盒（南京建成生物工程研究所），超低溫冰箱（青島海爾），無菌器械、手術(shù)臺、電子分析天平、兔固定抽血盒、艾灸固定架等。

1.1.3實驗動物健康新西蘭純種雄性兔45只，由昆明醫(yī)科大學(xué)提供，清潔級、體質(zhì)量1.8～2.2kg，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.2實驗方法

1.2.1動物分組及處理用組間對比設(shè)計。將家兔按隨機數(shù)字表進行隨機分組，分成A組：空白組（空白對照組）5只；B組：模型組（AS模型組）10只；C組：隔藥餅灸組（AS模型+隔藥餅灸）10只；D組：直接灸組（AS模型+艾炷直接灸）10只。E組：（AS模型+氯紗坦鉀組）10只。每籠1只分開飼養(yǎng)。

A組造模結(jié)束后每天給予常規(guī)普通飼料喂養(yǎng)，不進行任何干預(yù)。其余各組造模成功后：B組給予常規(guī)普通飼料喂養(yǎng)，不給予任何藥物，不行任何治療。C組：取穴定位：參照新世紀(jì)全國高等中醫(yī)院校規(guī)劃教材《實驗針灸學(xué)》[3]以及擬人比照法制訂，腹部穴位：從胸劍聯(lián)合至恥骨上緣分 13 等分（寸）。Ⅰ組：腎俞，脾俞；Ⅱ組：足三里，關(guān)元。取穴定位后剪毛，將腎衰灸餅置于穴位上，艾炷放在藥餅上施灸，每天灸1組穴位，每穴灸3壯，2組交替。灸后如出現(xiàn)水泡，保持清潔干燥，避免感染。D組直接將艾柱置于穴位上（艾炷下有墊盤），取穴同隔藥餅灸組，每天灸1組，每穴灸3壯，2組交替。壯的大小以隔藥餅灸組一致。E組氯沙坦按10 mg/kg/d混懸液劑量給兔灌胃。

1.2.2動物造模動物飼養(yǎng)于正常光照的清潔實驗室中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，A組用等量蒸餾水灌胃21 d，除A組外，其余40只家兔進行造模，按參考文獻[4]予以25%腺嘌呤（用生理鹽水配成250 mg/mL的懸浮液）按250 mg/kg/d/只的劑量灌胃21 d，造模時間為3周，3周時形成典型的CRF模型。

2觀察指標(biāo)和測定方法

以上各組治療持續(xù)3個月，3個月后各組兔經(jīng)靜脈注入10 mL空氣處死，處死前經(jīng)兔耳中央動脈抽血8ml，待行相關(guān)檢測。

2.1一般常規(guī)檢查（血常規(guī)、腎功、24 h尿蛋白）所有組別家兔均在造模前、造模后、治療3個月后分3次檢測以下3項：（1）生物化學(xué)檢測（每次經(jīng)兔耳中央動脈抽血4 mL）：測定血常規(guī)、腎功；（2）尿蛋白定量：將動物置入代謝籠留取24 h尿液，以考馬斯亮藍法行尿蛋白定量檢測。

2.2血清TGF-β1水平所有組別兔在治療3個月后處死，處死前經(jīng)耳中央動脈抽血4ml采血，在采血后，置于3000 r/min離心機離心取血清，凍存于-20℃冰箱，檢測前血清及試劑放置室溫充分解凍，混合均勻，同時避免反復(fù)凍融，ELISA法檢測，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

2.3統(tǒng)計學(xué)處理方法采用SPSS18.0軟件進行統(tǒng)計分析，實驗結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，進行組間療效比較及動態(tài)療效分析，計量資料用方差分析，計數(shù)資料用卡方檢驗，以P<0.05作為有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義，以P<0.01作為有高度顯著性統(tǒng)計學(xué)意義。

3結(jié)果

3.1各組家兔腎功、尿蛋白檢測結(jié)果由表（1）可以看出，除A組（空白對照組）外，其余各組家兔在造模后腎功（尿素氮、肌酐）和24 h尿蛋白定量均有顯著升高，表明用腺嘌呤造模成功；除A組外，其余各組經(jīng)相應(yīng)治療后腎功、24 h尿蛋白定量均有所恢復(fù)，其中C組（隔藥餅灸組）恢復(fù)較明顯，與B、D、E組比較有明顯差異（P<0.05），有統(tǒng)計學(xué)意義；而D、E組比較差異不明顯（P>0.05），無統(tǒng)計學(xué)意義。

3.2各組家兔血清TGF-β1檢測結(jié)果研究表明，治療后各組兔血清TGF-β1檢測結(jié)果，A組（空白對照組）與C組比較差異不明顯（P>0.05），無統(tǒng)計學(xué)意義，表明隔藥餅灸明顯降低了兔血清TGF-β1水平，A組（空白對照組）與B、D、E組比較有明顯差異（P<0.05），有統(tǒng)計學(xué)意義，表明治療后D、E組家兔血清TGF-β1水平降低不明顯。見表（2）

慢性腎功能衰竭（CRF）為多種慢性腎臟疾病晚期腎功能嚴重受損導(dǎo)致的一系列綜合征，是世界公認的難治病，病程綿長且后期腎臟的替代治療均給社會與家庭帶來極大經(jīng)濟負擔(dān)，嚴重威脅著患者的生命與健康。西醫(yī)認為CRF是“慢性、進行性、不可逆的疾病”，其終末期為尿毒癥；血液透析、腹膜透析、腎移植是目前西醫(yī)治療的方法，透析對腎衰沒有治療作用，只是代替腎臟排出體內(nèi)的一些代謝廢物，根據(jù)“用進廢退”法則，透析時間長了，腎臟就會萎縮、廢用。CRF屬于中醫(yī)“水腫”、“溺毒”、“癃閉”、“關(guān)格”、“腰痛”、“虛勞”等范疇[5]，臨床往往累及多個臟腑，但其病位常在脾、腎兩臟。從辨證識病的角度審視腎病，總體判定為虛實夾雜，寒熱交錯。惡心、嘔吐、大便秘結(jié)、浮腫、舌苔厚膩、白膩、黃膩等癥狀又反映了邪實的一面，正虛為本，邪實為標(biāo)，由虛致實。

原發(fā)性腎病、腎血管病變和慢性間質(zhì)性腎炎的病變發(fā)展到慢性腎功能衰竭的發(fā)病機制，至今尚未完全闡明[6]。傳統(tǒng)觀點認為與腎小球的硬化，腎小管的炎變、萎縮，腎小管間質(zhì)的纖維化有關(guān)。近年來認為決定CRF疾病預(yù)后的主要因素是腎小管間質(zhì)損害，而非腎小球[7]。這一病變過程涉及細胞、細胞因子、細胞外基質(zhì)（ECM）、生長因子及它們之間的相互作用[8]。其中，TGF-β1是目前公認的最強的致纖維化因子，它是參與腎小球硬化及腎小管間質(zhì)纖維化的關(guān)鍵細胞因子，近年來關(guān)于TGF-β1的研究多是探索它的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。腺嘌呤致兔慢性腎功能衰竭模型是較成熟的、學(xué)術(shù)界公認的造模方法。本實驗以造模前后各檢測腎功能、血壓、24h尿蛋白等指標(biāo)表明，模型建成后表現(xiàn)為大量蛋白尿，血壓、Scr、BUN升高，是正常的3～4倍，證明造模成功，且造模穩(wěn)定性好，3周時形成典型的CRF模型。

艾灸屬祖國醫(yī)學(xué)針灸學(xué)的范疇。隔藥餅灸是中醫(yī)針灸療法的重要組成部分，它借助艾灸的溫?zé)嵝?yīng)和藥物的作用，達到治療疾病的目的。通過艾灸的熱力作用，將藥物的有效成分透過皮膚滲入腧穴，將艾灸與腧穴、藥物辨證結(jié)合，從而產(chǎn)生了隔藥餅灸的“綜合效應(yīng)”。國外研究表明，腎內(nèi)缺氧可以直接參與腎間質(zhì)纖維化致腎功能衰竭[9]。隔藥餅灸作用機理主要涉及艾的藥性作用及成分、溫?zé)嵝?yīng)、光輻射效應(yīng)、艾的燃燒生成物及芳香療法、藥餅等六個主要因素及其綜合作用。其作用并不是上述諸因素的簡單疊加，而是其相互作用、相互補充的結(jié)果。艾灸自身的作用、經(jīng)絡(luò)腧穴的作用及藥物作用于經(jīng)絡(luò)腧穴的途徑，三者的有機結(jié)合形成了隔藥餅灸療法的綜合作用。隔藥餅灸可能通過增強機體非特異性和特異性免疫功能的作用，增強腎小球的濾過功能，改善腎臟缺血缺氧，恢復(fù)腎功能，該研究結(jié)果為臨床推廣應(yīng)用隔藥餅灸提供了理論基礎(chǔ)。但隔藥餅灸在治療慢性腎功能衰竭中干預(yù)TGF-β1/Smad 信號通路的更深入的靶點有待進一步研究。

參考文獻：

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