基線等比增減法優(yōu)選麩煨木香活性單體抗腹瀉作用的最佳配比

范冰冰 趙夏苗 郭晏華 張 旭*

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 大連 116600）

基線等比增減法優(yōu)選麩煨木香活性單體抗腹瀉作用的最佳配比

范冰冰 趙夏苗 郭晏華 張 旭*

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 大連 116600）

目的尋找麩煨木香的止瀉作用物質(zhì)基礎(chǔ)，探索木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯伍用抗腹瀉的最佳配比方案。方法以番瀉葉復(fù)制小鼠腹瀉模型，采用基線等比增減設(shè)計(jì)法擬定木香烴內(nèi)酯/去氫木香內(nèi)酯組合配比，小鼠腹腔注射混合液0.05 mL/10g，測(cè)定不同比例組合的混合液對(duì)腹瀉小鼠的影響。結(jié)果二者的比例為0.67時(shí)，其抗腹瀉作用最強(qiáng)，是有效成分的最佳配比。結(jié)論木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯伍用協(xié)同抗腹瀉作用優(yōu)于單品，且存在最佳配比。

木香；木香烴內(nèi)酯；去氫木香內(nèi)酯；腹瀉指數(shù)

木香為菊科植物木香Aucklandia lappa Decne.的干燥根，氣香特異、味微苦，歸脾、胃、大腸、三焦、膽經(jīng)，常用于胸脅、脘腹脹痛，瀉痢后重，食積不消，不思飲食[1]。古籍《本草發(fā)揮》[2]記載木香煨熟可止瀉痢，能實(shí)大腸，可治泄瀉。課題前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果已證明木香麩煨品較生品抗腹瀉作用增強(qiáng)，其抗腹瀉活性部位為揮發(fā)油成分組。揮發(fā)油中主含倍半萜類成分，以木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量居多。復(fù)方具有多藥物、多靶點(diǎn)多藥效指標(biāo)，而單味藥也具有多成分、多靶點(diǎn)多藥效指標(biāo)。基線等比增減法適用于藥效物質(zhì)基礎(chǔ)相對(duì)明確，藥味相對(duì)較少的小復(fù)方，以主要效應(yīng)和次要效應(yīng)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行各配比的優(yōu)化篩選[3]。因此，本實(shí)驗(yàn)以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，借鑒“中藥復(fù)方配伍入藥的學(xué)術(shù)思想”，設(shè)想“單味藥中活性成分配伍與藥效具有相關(guān)性”。因此采用基線等比增減設(shè)計(jì)法篩選麩煨木香活性單體抗小鼠腹瀉最佳成分配比方案，為探討麩煨木香抗腹瀉作用機(jī)制提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物：雄性SPF級(jí)昆明種小鼠，體質(zhì)量18～22 g，由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物許可證號(hào): SCXK（遼）2010-0001。恒溫、恒濕適應(yīng)性喂養(yǎng)一周。

1.1.2 試劑和藥品：木香烴內(nèi)酯對(duì)照品（批號(hào)：111524-200503，純度≥98%）、去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品（批號(hào)：111525-200706，純度≥98%）均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。番瀉葉購(gòu)自大連沙河口區(qū)普惠大藥房；鹽酸洛哌丁胺膠囊（西安楊森制藥有限公司），批號(hào)H10910085；生理鹽水（西南藥業(yè)股份有限公司），批號(hào)06070067。濾紙。

1.2 方法

1.2.1 木香烴內(nèi)酯/去氫木香內(nèi)酯組合配比，見表1。

表1 基線等比增減設(shè)計(jì)木香烴內(nèi)酯/去氫木香內(nèi)酯組合配比

1.2.2 木香烴內(nèi)酯/去氫木香內(nèi)酯組合配比對(duì)腹瀉小鼠的影響

1.2.2.1 分組：將健康雄性小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為陽性藥對(duì)照組、模型組以及木香烴內(nèi)酯/去氫木香內(nèi)酯不同組合配比的11個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組10只。

1.2.2.2 供試藥液制備：陽性藥鹽酸洛哌丁胺混懸液：取2.00 mg溶于10.00 mL生理鹽水，配成0.20 mg/mL混懸液。番瀉葉水煎劑：取40.00 g番瀉葉，加90 ℃400.00 mL水浸泡10 min，紗布過濾，濃縮至40.00 mL，制成濃度為1.00 g/mL番瀉葉水煎劑。木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯組合配比混合液：分別精稱木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品各10.00 mg，用生理鹽水配制成2.00 mg/mL溶液各5 mL，按表1進(jìn)行組合配比。

1.2.2.3 腹瀉指數(shù)測(cè)定：實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12 h。模型組腹腔注射生理鹽水0.05 mL/10g；陽性藥對(duì)照組鹽酸洛哌丁胺灌胃2.00 mg/kg；另11組分別腹腔注射木香烴內(nèi)酯/去氫木香內(nèi)酯不同組合配比混合藥液0.05 mL/10g。給藥0.5 h后以0.20 mL/只番瀉葉水煎劑灌胃，將小鼠置于代謝籠中，1 h后按參照文獻(xiàn)[4]記錄腹瀉小鼠的稀便級(jí)、稀便率，連續(xù)測(cè)定5 h，計(jì)算各組腹瀉指數(shù)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

各組腹瀉小鼠的稀便級(jí)、稀便率及腹瀉指數(shù)結(jié)果，見表2。

3 討 論

課題組前期研究結(jié)果顯示[5]，木香麩煨后，揮發(fā)油含量降低，指標(biāo)性成分木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量均減少，但二者含量降低程度不同，其含量比例均下降，而現(xiàn)代藥理研究很少關(guān)注二者配伍變化與其抗腹瀉作用的相關(guān)性。因此本實(shí)驗(yàn)擬定了木香烴內(nèi)酯/去氫木香內(nèi)酯不同組合配比，考察其對(duì)小鼠腹瀉的影響，以探求麩煨木香止瀉作用物質(zhì)基礎(chǔ)。當(dāng)所需藥效指標(biāo)明確而數(shù)量較少時(shí)，采用直觀選擇法，即以腹瀉指數(shù)為藥效評(píng)價(jià)指標(biāo)，選擇二者的比例為0.67時(shí)，抗腹瀉作用效果最好，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上，與模型組相比具有顯著性差異。而分別使用木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯單品時(shí)，去氫木香內(nèi)酯抗腹瀉作用強(qiáng)于木香烴內(nèi)酯，但腹瀉指數(shù)均較高，而二者伍用，其抗腹瀉效果有所提高。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果推斷，木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯伍用協(xié)同抗腹瀉作用優(yōu)于單品，且存在最佳配比。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，中藥炮制可通過考察單味藥中活性成分配伍與藥效的相關(guān)性，即活性成分配比的改變來闡述炮制原理，逐步完善成分配伍理論。

表2 各組番瀉葉致小鼠腹瀉稀便級(jí)、稀便率及腹瀉指數(shù)，n=10)

表2 各組番瀉葉致小鼠腹瀉稀便級(jí)、稀便率及腹瀉指數(shù)，n=10)

注：*與模型組比較，P＜0.05

組別 劑量/(mg/kg) 稀便級(jí) 稀便率 腹瀉指數(shù)模型組 - 1.16±0.17 0.83±0.16 0.98±027陽性對(duì)照組 2.00 1.14±0.19 0.55±0.24 0.62±0.26組1 2.50 1.95±0.38 0.64±0.13 1.26±0.39組2 2.50 1.58±0.50 0.76±0.16 1.19±0.43組3 2.50 1.64±0.45 0.54±0.19 0.91±0.41組4 2.50 1.36±0.39 0.56±0.20 0.81±0.46組5 2.50 1.22±0.15 0.64±0.20 0.77±0.23組6 2.50 1.39±0.34 0.53±0.13 0.72±0.17組7 2.50 1.01±0.45 0.46±0.16 0.46±0.22*組8 2.50 1.31±0.27 0.51±0.12 0.68±0.25*組9 2.50 1.28±0.31 0.62±0.23 0.79±0.31組10 2.50 1.45±0.23 0.57±0.14 0.82±0.23組11 2.50 1.1.56±0.15 0.59±0.18 0.93±0.27

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(2015年版一部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:62-63.

[2] 明?徐彥純.本草發(fā)揮[M].上海:大成書局《薛氏醫(yī)案》石印本輯錄,1922.

[3] 唐志書,郭立瑋,王斌.基線等比增減設(shè)計(jì)法優(yōu)選PNS/TGCO組分對(duì)實(shí)驗(yàn)性氣虛血瘀型冠心病的影響研究[J].中藥材,2010,33(9):1439.

[4] 周干南,胡芝華,汪亞先,等.小鼠腹瀉模型的制備與腹瀉指數(shù)的應(yīng)用[J].中草藥,1994,25(4):195-199.

[5] 張旭,姜瀠津子,賈天柱.HPLC法測(cè)定不同來源木香飲片中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011,13(2):27-29.

R282.710.7；R442.2

B

1671-8194（2017）08-0014-02

遼寧省自然基金項(xiàng)目（201202153）；高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金項(xiàng)目（20122133120006）

*通訊作者