丹參素鈉對大鼠壓瘡缺血再灌注損傷ICAM-1，TNF-α，MPO表達(dá)的影響研究

吳 靜，沈翠珍

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丹參素鈉對大鼠壓瘡缺血再灌注損傷ICAM-1，TNF-α，MPO表達(dá)的影響研究

吳 靜，沈翠珍

[目的]探討丹參素鈉(SDSS)對大鼠壓瘡缺血再灌注損傷(I/RI)的保護(hù)作用及機(jī)制。[方法]將50只雄性SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組及SDSS低劑量組、中劑量組、高劑量組，對低劑量、中劑量、高劑量組大鼠預(yù)防性使用丹參素鈉1周后，利用自制壓力裝置建立缺血再灌注損傷模型，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法觀察各組大鼠細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和髓過氧化物酶(MPO)的表達(dá)水平。[結(jié)果]與空白組相比，SDSS不同劑量組大鼠ICAM-1、TNF-α和MPO濃度顯著增高(P<0.05)；與模型組相比，注射丹參素鈉的大鼠ICAM-1、TNF-α和MPO含量均明顯降低(P<0.05)，且與劑量呈依賴關(guān)系。[結(jié)論]預(yù)防性使用丹參素鈉對壓瘡缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用，能有效預(yù)防皮膚組織的炎性及氧化應(yīng)激損害。

壓瘡；缺血再灌注損傷；丹參素鈉；大鼠；ICAM-1；TNF-α；MPO

壓瘡是由于皮膚和皮下組織通過長期受壓，血液循環(huán)不良，致使受壓部位組織缺血而腐敗乃至壞死[1]。目前，關(guān)于壓瘡的發(fā)生機(jī)制存在多種假說，其中缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury，I/RI)是壓瘡發(fā)生的重要機(jī)制之一，是當(dāng)前國內(nèi)外關(guān)于壓瘡發(fā)生機(jī)制研究的熱點(diǎn)。缺血再灌注損傷學(xué)說認(rèn)為[2]：機(jī)體受壓后，毛細(xì)血管被阻斷，可造成組織缺血缺氧，機(jī)體由此產(chǎn)生代償反應(yīng)，在機(jī)體血流恢復(fù)后，組織器官的損傷反而加重，是外科常見的一種損傷，本實(shí)驗(yàn)將選擇缺血再灌注損傷作為壓瘡模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。丹參具有活血化瘀、涼血消腫、養(yǎng)陰生肌的作用[3]，臨床上已廣泛應(yīng)用。丹參提取物丹參素鈉(sodium danshensu， SDSS)對于大鼠、小鼠以及細(xì)胞的缺血再灌注模型具有潛在的抗氧化、抑制炎癥反應(yīng)、促進(jìn)血管內(nèi)皮生長[4]和抑制細(xì)胞凋亡的作用[5-6]，對于瘡面修復(fù)具有重要的促進(jìn)作用。本研究將對大鼠預(yù)防性使用丹參素鈉后模擬缺血再灌注損傷模型，對丹參素鈉作用于壓瘡缺血再灌注損傷大鼠模型的細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和髓過氧化物酶(MPO)的表達(dá)水平進(jìn)行研究。

1 對象與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 選取SPF級健康雄性SD大鼠50只，月齡12周～14周，體重220 g±20 g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供。大鼠單籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食、飲水，室內(nèi)溫度維持在22 ℃～30 ℃，相對濕度50%～70%，明暗周期12 h。大鼠在恒溫恒濕條件下適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始實(shí)驗(yàn)。將大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、低劑量組、中劑量組、高劑量組5組 ，每組10只，各組體質(zhì)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 施壓材料 依據(jù)蔡福滿等[7]的研究，利用自制壓力裝置，根據(jù)公式F=Mg，P=F/S(P指作用于大鼠大腿股薄肌處的壓強(qiáng)；F指作用于大鼠大腿股薄肌處的壓力；S指受壓面積，S=πr2；g=9.8 N/kg)。1.3 主要試劑 丹參素鈉(每支20 mg，批號JS90062-20mg)，購于上海金穗生物科技有限公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 各組大鼠在恒溫恒濕條件下適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，參照權(quán)偉等[8]應(yīng)用丹參素鈉的使用劑量，空白組和模型組大鼠腹腔注射生理鹽水2 mL/(kg·d)，低劑量組大鼠給予15 mL/(kg·d)丹參素鈉注射液腹腔注射；中劑量組大鼠給予30 mL/(kg·d)丹參素鈉注射液腹腔注射；高劑量組大鼠給予60 mL/(kg·d)丹參素鈉注射液腹腔注射，給藥期間大鼠正常進(jìn)食、活動。給藥7 d后應(yīng)用缺血再灌注循環(huán)來促進(jìn)壓力性潰瘍的形成。模型組和SDSS組大鼠均于清潔級動物手術(shù)室內(nèi)對一側(cè)后肢腹部及腿部皮膚進(jìn)行剃毛，腹腔注射10%水合氯醛300 mg/kg進(jìn)行麻醉后，選擇大鼠后肢有較大接觸面且皮下組織淺薄的股薄肌處施壓，造成局部組織缺血，每次缺血2 h后再將裝置取下，讓局部血流恢復(fù)30 min，如此循環(huán)。每只大鼠進(jìn)行5個連續(xù)的循環(huán)，整個實(shí)驗(yàn)過程中按需補(bǔ)充麻醉藥，且每2.5 h腹腔注射2 mL～3 mL葡萄糖鹽水(2.5%葡萄糖注射液加0.45%氯化鈉注射液)1次以保證麻醉期間正常水合。12 h后將裝置移去，心臟取血后處死實(shí)驗(yàn)大鼠。

1.5 檢測方法 采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清ICAM-1，TNF-α，MPO的表達(dá)水平，嚴(yán)格按照各檢測試劑盒說明書操作。

2 結(jié)果

2.1 丹參素鈉對缺血再灌注損傷大鼠模型ICAM-1濃度的影響 與空白組大鼠相比，各實(shí)驗(yàn)組大鼠ICAM-1濃度顯著升高；與模型組相比，注射丹參素鈉組大鼠ICAM-1濃度較低，且與劑量呈依賴關(guān)系(P<0.05)。詳見表1。

表1 各組大鼠ICAM-1濃度比較(±s) ng/mL

2.2 丹參素鈉對缺血再灌注損傷大鼠模型MPO濃度的影響 與空白組相比，各實(shí)驗(yàn)組大鼠MPO濃度顯著增高；與模型組相比，注射丹參素鈉的大鼠MPO濃度較低，且與劑量呈依賴關(guān)系。詳見表2。

表2 各組大鼠MPO濃度比較(±s) U/L

2.3 丹參素鈉對缺血再灌注損傷大鼠模型TNF-α濃度的影響 與空白組相比，各實(shí)驗(yàn)組大鼠TNF-α濃度顯著增高；與模型組相比，注射丹參素鈉組大鼠TNF-α濃度較低，且與劑量呈依賴關(guān)系。詳見表3。

表3 各組大鼠TNF-α濃度比較(±s) ng/mL

3 討論

皮膚缺血再灌注損傷是導(dǎo)致壓瘡的重要因素，但發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明，目前認(rèn)為與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡等因素有關(guān)。因此，尋找有效的預(yù)防壓瘡缺血再灌注損傷的藥物是研究的熱點(diǎn)之一。目前關(guān)于丹參防治缺血再灌注損傷的研究多集中于心、腦、腎、肝、腸道等器官[9-12]，對丹參防治早期壓瘡缺血再灌注損傷的研究較少，對其療效和作用機(jī)制則更不明確。TNF-α是在缺血再灌注損傷早期就產(chǎn)生的一種炎性因子，對免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)具有重要的調(diào)節(jié)和介導(dǎo)作用，可刺激單核巨噬細(xì)胞和其他細(xì)胞分泌炎性因子，還能增加細(xì)胞黏附分子的表達(dá)，促進(jìn)中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，加劇缺血區(qū)的微血管阻塞。MPO為中性粒細(xì)胞的標(biāo)志酶，是一種可靠的評價(jià)組織中中性粒細(xì)胞浸潤程度的指標(biāo)，通過檢測MPO水平可反映壓瘡缺血再灌注時(shí)炎癥反應(yīng)程度。ICAM-1是免疫球蛋白超家族黏附分子之一，ICAM-1同受體結(jié)合后可介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間黏附作用和炎癥反應(yīng)[13-14]。研究發(fā)現(xiàn)：黏附分子介導(dǎo)的白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞相互黏附是白細(xì)胞聚集、活化和釋放炎性介質(zhì)的關(guān)鍵，在缺血再灌注損傷中起著重要作用[15-16]。

本實(shí)驗(yàn)對大鼠進(jìn)行預(yù)防性腹腔注射丹參素鈉，觀察大鼠血清ICAM-1，MPO，TNF-α的表達(dá)水平。結(jié)果顯示：與空白組相比，各實(shí)驗(yàn)組大鼠ICAM-1，TNF-α和MPO濃度顯著增高；與模型組相比，注射丹參素鈉的大鼠ICAM-1，TNF-α和MPO濃度較低，且與劑量呈依賴關(guān)系(P<0.05)。說明丹參素鈉能有效抑制缺血再灌注損傷大鼠血清TNF-α的產(chǎn)生和釋放，抑制炎癥因子則具有皮膚保護(hù)作用；能降低大鼠血清中MPO的水平，減輕壓瘡缺血再灌注時(shí)的炎癥反應(yīng)程度；能有效下調(diào)壓瘡缺血再灌注損傷模型大鼠血清ICAM-1的表達(dá)，有效拮抗ICAM-1與炎性因子的黏附，從而抑制炎癥反應(yīng)的發(fā)生，減輕皮膚損傷程度。因此，丹參素鈉對皮膚的保護(hù)作用與其顯著的抗炎密切相關(guān)。

4 小結(jié)

預(yù)防性使用丹參素鈉對壓瘡有保護(hù)作用，可降低大鼠血清中ICAM-1，TNF-α和MPO濃度，說明丹參素鈉可能通過抑制缺血再灌注損傷的炎癥反應(yīng)來發(fā)揮皮膚保護(hù)作用，且在本研究中隨著給藥劑量的增加，血清中ICAM-1，TNF-α和MPO濃度水平減低，提示丹參素鈉減輕炎癥反應(yīng)的作用與劑量存在一定的關(guān)系，其機(jī)制可能同減少炎癥反應(yīng)對皮膚損害有關(guān)，但具體的分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

本研究結(jié)果為臨床治療壓瘡提供了新思路、新方法，在今后的研究中可進(jìn)一步明確丹參素鈉的最佳劑量，并將實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用于臨床。若將預(yù)防性使用丹參素鈉這一概念應(yīng)用于臨床工作中，醫(yī)護(hù)人員可有意識地對壓瘡高危人群進(jìn)行篩查并預(yù)防性用藥，以預(yù)防壓瘡的發(fā)生，達(dá)到減輕病人痛苦、提高病人生活質(zhì)量的目的。

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(本文編輯李亞琴)

Study on influence of sodium Darshensu on expression of ICAM-1，TNF-α and MPO in rats with pressure ischemia-reperfusion injury

Wu Jing，Shen Cuizhen

(College of Nursing，Zhejiang Chinese Medical University，Zhejiang 310000 China)

Objective:To explore the protective effect and mechanism of Salvianolic acid A sodium (SDSS) on rats with pressure ischemia-reperfusion injury.Methods:A total of 50 male SD rats were randomly divided into the blank group，model group，and SDSS low-dose group，middle-dose group and high-dose group.The rats in the low-dose，middle-dose and high-dose groups received the preventative use of SDSS.After a week，using the self-made pressure device was used to establish a model of ischemia-reperfusion injury，the expression level of ICAM-1，TNF-α，and MPO in each group were observed by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Results:Compared with the blank group，the levels of ICAM-1，TNF-α，and MPO in all experimental groups were significantly higher than those in blank group (P<0.05).Compared with the model group，the level of ICAM-1，TNF-α，and MPO in rats injected with SDSS were significant lower (P<0.05)，which was depended on the dose.Conclusion:Preventative use of SDSS had a protective effect on pressure sore ischemia-reperfusion injury，and it could effectively prevent inflammatory and oxidative stress damage of skin tissue.

pressure sores；ischemia-reperfusion injury；sodium Danshensu,SDSS；rats；ICAM-1；TNF-α；MPO

浙江省中醫(yī)藥科技計(jì)劃項(xiàng)目，編號：2016ZA051。

吳靜，碩士研究生在讀，單位：310000，浙江中醫(yī)藥大學(xué)護(hù)理學(xué)院；沈翠珍(通訊作者)單位：310000，浙江中醫(yī)藥大學(xué)護(hù)理學(xué)院。

R471

A

10.3969/j.issn.1009-6493.2017.13.011

1009-6493(2017)13-1576-03

2016-10-12；

2017-04-16)

引用信息 吳靜，沈翠珍.丹參素鈉對大鼠壓瘡缺血再灌注損傷ICAM-1，TNF-α，MPO表達(dá)的影響研究[J].護(hù)理研究，2017，31(13)：1576-1578.