多基原秦皮藥材中秦皮甲素和秦皮苷的純化技術(shù)探討

摘要：目的：對于多基原秦皮藥材中秦皮甲素和秦皮苷的純化技術(shù)進行探究。方法：采取D101C大孔樹脂作為分離以及純化載體，指標為秦皮甲素和秦皮苷的含量，構(gòu)建起有關(guān)的工藝參數(shù)并進行評價。結(jié)果：依據(jù)構(gòu)建起的工藝，將三種基原的秦皮藥材為材料，以明確好的工藝展開相應(yīng)處理，提取物中秦皮甲素和秦皮苷的轉(zhuǎn)移率超過80%，同時質(zhì)量分數(shù)提升五倍。結(jié)論：在本研究中的工藝，能夠滿足多種基原的秦皮中秦皮甲素以及秦皮苷的純化。

關(guān)鍵詞：多基原秦皮藥材；秦皮甲素；秦皮苷；純化技術(shù)

當前，在治療眼疾的滴眼液中，秦皮苷等秦皮提取物具有較為廣泛的應(yīng)用，但是對于秦皮中秦皮甲素以及秦皮苷純化工藝還缺少深入的研究。鑒于此，本文對于多基原秦皮藥材中秦皮甲素和秦皮苷的純化技術(shù)實施詳盡的觀察及探究。報告內(nèi)容如以下所展示。

1一般資料

本研究中應(yīng)歐勇到的儀器設(shè)備為Waters 515高效液相色譜儀，N2000色譜工作站，Sartorius BP211D電子天平，以及SENCO RE-205B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；本研究應(yīng)用到的試藥為：三種基原的秦皮藥材，經(jīng)過嚴格鑒定結(jié)果為木犀科尖葉白蠟樹Fraxinus szaboana Lingelsh、白蠟樹Fraxinus chinensis Roxb、宿柱白蠟樹Fraxinus stylosa Lingelsh；LSA-21、LX-38、LXA-8以及D101、D101C醫(yī)藥級大孔樹脂；秦皮甲素對照品，質(zhì)量分數(shù)在98%及以上；秦皮苷，質(zhì)量分數(shù)在98%及以上；HPLC用甲醇和乙腈為色譜純；另外的其他試劑均是分析純。

2方法及結(jié)果

2.1制備上柱液以及測定含量

取秦皮粉碎，將粗粉放入進藥材10倍量體積分數(shù)為80%的甲醇溶液，進行回流提取90min，實施三次的提取，并且真空回收濾去藥渣甲醇溶液后獲得秦皮浸膏，進行加入水溶解，到原藥材質(zhì)量的兩倍。采取等量氯仿萃取兩次以及分去氯仿，水相于水浴中真空濃縮到不具有顯著溶劑流出結(jié)束，加水進行調(diào)節(jié)到原來藥材的兩倍，作為上柱液[1]。依據(jù)《中國藥典》秦皮項下含量測定方法，分別測定秦皮甲素以及秦皮苷含量為6.0mg·mL-1以及4.4mg·mL-1。

2.2大孔樹脂預(yù)處理以及篩選樹脂

采取乙醇浸泡新樹脂時間為12h，同時以乙醇洗至流出液加蒸餾水無乳白色渾濁和異味，并應(yīng)用蒸餾水洗到無醇味狀態(tài)備用；取五種已經(jīng)預(yù)處理的樹脂，規(guī)格為10mL放在具塞三角瓶內(nèi)，同時加進秦皮上柱液各自20mL，每分鐘進行1次振搖，在2小時以后進行吸取上層溶液。除去水相以后把樹脂在具塞三角瓶分別移動，同時加入進體積分數(shù)50%乙醇溶液40mL，進行震蕩解吸，在3小時以后對于解吸液內(nèi)的秦皮甲素和秦皮苷質(zhì)量濃度測定，計算得出樹脂的比吸附值、解吸率[2]。結(jié)果顯示，秦皮甲素和秦皮苷在大孔樹脂上的吸附值隨樹脂的極性增加存在減小現(xiàn)象，而且D101C型樹脂具有個大的比吸附值以及解吸率，可作為目標成分分離純化的載體。

2.3 D101C樹脂的動態(tài)吸附曲線和洗脫流速的考察

取預(yù)處理好并保存在水溶液中的D101C型大孔樹脂100mL，將上樣液按照2BV·h-1流速實施連續(xù)通過樹脂，并收集流出液作為供試品溶液，測定質(zhì)量濃度，結(jié)果顯示最佳的上樣量是2BV，即1.0g·mL-1樹脂；流速對洗脫效果，可產(chǎn)生顯著影響，經(jīng)全面考慮目標成分洗脫效果，選取洗脫流速為2BV·h-1。

2.4選取洗脫溶劑和考察洗脫曲線

吸取秦皮上柱液20mL經(jīng)四根裝有D101C 10mL的樹脂柱，以水淋洗至流出液澄清，再以40mL體積分數(shù)為不同乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液并測定秦皮甲素以及秦皮苷含量。結(jié)果顯示，采取體積分數(shù)30%乙醇為洗脫劑最適宜?？疾煜疵撉€，結(jié)果顯示積分數(shù)30%乙醇洗脫溶劑用量為樹脂體積的四倍。

2.5工藝適用性驗證

三種來源的秦皮藥材中秦皮甲素和秦皮苷均具有超過80%轉(zhuǎn)移率，同時純化處理后兩者質(zhì)量分數(shù)均超過五倍，所以顯示上述純化方法適合不同秦皮中相關(guān)成分的純化。此外，秦皮中秦皮甲素和秦皮苷的最佳純化工藝條件為上柱液質(zhì)量濃度在0.5g·mL-1生藥，而且上樣量在2BV樹脂，以水實施洗至流出液澄清再以4BV體積分數(shù)30%乙醇洗脫，直到脫液有醇味開始獲取4BV洗脫液，通過洗脫液濃縮以及干燥，獲得秦皮甲素和秦皮苷提取物。

3討論

在治療眼疾的滴眼液中，秦皮苷等秦皮提取物具有較為廣泛的應(yīng)用，但是當前對于秦皮中秦皮甲素以及秦皮苷純化工藝還缺少深入的研究。在秦皮提取液中，存在酚性化合物和鞣質(zhì)等物質(zhì)。如果不將上柱液處理并直接上柱，就會對于樹脂的純化能力產(chǎn)生一定影響，會引發(fā)工藝的重復(fù)性明顯變差，而采取氯仿萃取處理上柱液的方式，能夠?qū)⒁陨蠁栴}進行良好處理[3-4]。本研究遵循有機溶劑萃取和鹽析或酸堿處理等舉措，進行制備秦皮甲素和秦皮苷的提取物。結(jié)果顯示，上述分離純化方法，存在對秦皮基原植物的種類依賴性問題，僅少數(shù)種類秦皮藥材適合上述方法。而實施成本較低以及可多次重復(fù)應(yīng)用的D101C型大孔樹脂為分離純化載體的舉措，能夠作為廣泛適用性的分離純化工藝，在生產(chǎn)純度較高的秦皮甲素和秦皮苷等提取物中具有良好的應(yīng)用效果。

結(jié)語：

綜上所述，在本研究中的工藝，能夠滿足多種基原的秦皮中秦皮甲素以及秦皮苷的純化。秦皮中秦皮甲素和秦皮苷的最佳純化工藝條件為上柱液質(zhì)量濃度在0.5g·mL-1生藥，而且上樣量在2BV樹脂，以水實施洗至流出液澄清再以4BV體積分數(shù)30%乙醇洗脫，直到脫液有醇味開始獲取4BV洗脫液，通過洗脫液濃縮以及干燥，獲得秦皮甲素和秦皮苷提取物。

參考文獻：

[1]馬宏偉.復(fù)方秦皮片制備工藝及質(zhì)量標準研究[D].山東大學，2015.

[2]周軍輝，謝斌，石新衛(wèi)，韓桂軍.多基原秦皮藥材中秦皮甲素和秦皮苷的純化工藝研究[J].西北藥學雜志，2014，11（05）：449-452.

[3]付珊.秦皮質(zhì)量控制方法研究[D].河北醫(yī)科大學，2014.

[4]朱春勝，林志健，牛紅娟，王雪潔，王紅坡，孫小霞，王雨，周月，聶安政，肖明良，張冰.一測多評法測定菊苣中綠原酸、秦皮乙素、異綠原酸B和異綠原酸A的量[J].中草藥，2016，12（04）：666-670.