多房棘球蚴病血清學(xué)及免疫學(xué)研究進展

摘要：本文綜述多房棘球蚴病相關(guān)免疫學(xué)診斷不同抗原分子的有效性和可行性以及疫苗的開發(fā)研究進展，強調(diào)具有高度特異性和敏感性的新抗原組分是當(dāng)前提高多房棘球蚴病免疫診斷效率及疫苗的開發(fā)研究的關(guān)鍵。

關(guān)鍵詞：多房棘球蚴病;免疫學(xué)診斷;抗原;疫苗;綜述

多房棘球蚴病（alveolar echinococcosis ， AE）是由多房棘球絳蟲（Echinococcus multilocularis ， Em）的續(xù)絳期幼蟲寄生在人體引起的一種嚴(yán)重危害人類健康的人獸共患寄生蟲病，是國家衛(wèi)生部規(guī)劃防治的五大寄生蟲病之一。A E在我國主要流行于新疆、青海、四川、西藏、甘肅、寧夏、內(nèi)蒙古和黑龍江等8省區(qū)[1]。人體被感染后，多房棘球蚴呈腫瘤樣生長，主要侵犯人體肝臟，晚期手術(shù)難度大，致死率高[2]。由于多房棘球蚴生長較為緩慢，多房棘球蚴病患者早期通常無明顯癥狀，僅靠臨床診斷較為困難。

免疫學(xué)診斷可以用于多房棘球蚴病的早期篩查、初次診斷、手術(shù)或藥物治療后病人的隨訪及流行病學(xué)調(diào)查[3]，因此，免疫學(xué)診斷輔助臨床確診顯得尤為重要。然而棘球絳蟲生物學(xué)種屬繁多，宿主多樣，分布廣泛，其抗原成分復(fù)雜，交叉反應(yīng)多，給免疫學(xué)診斷帶來了極大的困難。隨著近年來基因重組技術(shù)和噬菌體肽呈現(xiàn)技術(shù)的出現(xiàn)，人們期望通過使用免疫學(xué)手段來解決多房棘球蚴病的診斷和預(yù)防問題，并且已經(jīng)取得了較大的進展[4]。目前，已被報道的多房棘球絳蟲相關(guān)抗原分子主要有Em2、EmⅡ/3-10、Em 14-3-3、Em16、EM18、EM95、EMY162等，其各有優(yōu)缺點，實用性及有效性有待進一步提高。

1.Em2

Em2最早由Gottstein等[5]發(fā)現(xiàn)，通過使用親和層析法分離出多房棘球蚴組織可溶性抗原中與細粒棘球蚴囊液抗原具有高度同源性的抗原組份，進一步通與細粒棘球蚴囊液抗體進行免疫印跡分析后獲得了特異性較高的多房棘球蚴抗原。Em2的分子量約54kDa，具有較高的敏感性和特異性，目前已被WHO確定為多房棘球蚴病免疫學(xué)診斷的參照指標(biāo)。但因其屬于多房棘球蚴板狀層成分，其抗體滴度的消長不能反映病灶活動與否，在藥物治療穩(wěn)定或蟲體鈣化的患者中仍可出現(xiàn)較高滴度。Vogel等[6]通過免疫印跡分析法將Em2與多房棘球蚴病患者血清進行抗原抗體反應(yīng)，敏感性和特異性分別為98%（40/41）和96%（74/77）。具有較高的敏感性和特異性，可作為多房棘球蚴病疫苗研究候選分子。

2.Em14-3-3

Siles-Lucas等[7]通過使用親和層析法得到14-3-3的抗體。以此抗體從多房棘球蚴cDNA文庫中鑒定出一個特異基因克隆14-3-3，其分子量約27kDa。Em的14-3-3基因在其基因組中為單克隆基因，RT-PCR顯示Em續(xù)絳期幼蟲表達Em14-3-3蛋白水平是多房棘球絳蟲成蟲的10倍，免疫熒光顯示Em14-3-3位于多房棘球絳蟲原頭節(jié)生發(fā)層，其過度表達與多房棘球蚴病的病情活動及原頭蚴的進行性、侵入性和腫瘤樣無限制生長特性所引起肝臟等臟器損害密切相關(guān)。免疫組化提示14-3-3 蛋白質(zhì)也存在于細粒棘球絳蟲的成蟲體壁、排泄及分泌物中。而細粒棘球絳蟲幼蟲分泌物中未測到14-3-3蛋白。研究表明[8]不同地理株的Em14-3-3蛋白同源性為95%，而不同生長期的Em14-3-3蛋白同源性為88%，Em14-3-3蛋白對原發(fā)性感染泡球蚴的BALB/c小鼠產(chǎn)生明顯的保護性免疫力[9]，提示該蛋白具有較高的遺傳學(xué)穩(wěn)定性，較強的免疫原性和較好的表面暴露性，適合作為多房棘球蚴病疫苗研究的候選分子。

3.Em18

近年來Ito等[10]研究報道提出Em18抗原對多房棘球蚴病具有很高的特異性和敏感性，其分子量為18kDa，對Em18氨基酸序列進行分析發(fā)現(xiàn)其N末端氨基酸序列為KESDLAD，同源性分析表明該段氨基酸序列同樣存在于Em10中（349K至355D），提示Em18是Em10經(jīng)半胱氨酸蛋白酶水解后產(chǎn)生的一個新片段。Nimalan等[11]將Em18抗原與多房棘球蚴病人血清進行抗原抗體反應(yīng)后，陽性率僅為75%，并與細粒棘球蚴病人血清存在很高的交叉反應(yīng)。同時用細粒棘球絳蟲原頭節(jié)分離出的分子質(zhì)量單位為18kDa抗原對多房棘球蚴病人血清進行免疫印跡分析，結(jié)果在18kDa處仍可出現(xiàn)陽性的抗原抗體反應(yīng)條帶。因此認為Em18抗原不僅在多房棘球蚴中存在，在細粒棘球蚴中也同樣存在，細粒棘球蚴病人體內(nèi)也可能存在抗Em18 的血清抗體。

4.EM95和EMY162

EM95氨基酸序列由Gauci等[12]提交，其序列來源于從德國普通小鼠中發(fā)現(xiàn)的多房棘球絳蟲原頭節(jié)中所提取的mRNA所翻譯的蛋白質(zhì)。由156個氨基酸組成，屬分泌蛋白。Katoh Y[13]等從多房棘球絳蟲絳蟲成蟲mRNA的cDNA文庫分離出一個cDNA克隆，其表達產(chǎn)物命名為EMY162，由153個氨基酸組成，其分子量為17 kDa，是一種分泌蛋白。在多房棘球絳蟲四個階段（原頭節(jié)、棘球蚴、未成熟的成蟲和成熟的成蟲）均有表達。免疫印跡分析表明EMY162的氨基酸序列與EM95預(yù)測的二級結(jié)構(gòu)的抗原性存在31.4%的同一性。RT-PCR分析表明EMY162基因在多房棘球絳蟲的各生命周期階段的表達均比EM95顯著。免疫印跡檢測重組EMY162抗原對多房棘球蚴病人血清表現(xiàn)出明顯的抗原抗體反應(yīng)，重組EMY162抗原誘導(dǎo)宿主保護水平顯著（74.3%）。該結(jié)果為進一步開展對泡型棘球蚴病診斷的有效性和可行性研究以及疫苗的開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。

5.結(jié)語

目前對多房棘球蚴病的診斷主要包括影像學(xué)方法（超聲波探查、X線、CT掃描、磁共振等）和血清學(xué)檢測（DIGFA、ELISA等）。影像學(xué)診斷方法安全、無創(chuàng)并能夠?qū)Χ喾考蝌什≈型砥诨颊咦龀鲚^為明確的判斷，但對早期患者及一些非典型影像病例通常難以作出準(zhǔn)確的判斷，其敏感性和特異性并非十分理想，而且大多需要特殊的儀器、設(shè)備和較完善的實驗室，所需費用較大，對包蟲病的防治作用局限，在一定程度上限制了其在包蟲病流行地區(qū)的推廣實用。血清學(xué)檢測DIGFA法操作簡單，檢查所用時間短，所要求設(shè)備簡單，可適用于流動性現(xiàn)場調(diào)查;ELISA法檢查包蟲特異抗原，雖所用時間較長，檢查要求有相當(dāng)?shù)膶嶒炇以O(shè)備和一定培訓(xùn)技能的人員進行操作，用于現(xiàn)場流調(diào)有一定困難，但特異性和敏感性相對比影像學(xué)方法及DIGFA高，尤其是用較為新鮮的血樣標(biāo)本更為理想。寄生蟲抗原的研究雖然在許多方面還不

成熟，但已提出了許多新的想法和進行了大量好的嘗試。進一步開展對包蟲抗原的篩選研究，尋找具有更高敏感性和特異性的抗原組分，提高對包蟲病的診斷效率，是當(dāng)前棘球蚴病免疫診斷研究的一項重要內(nèi)容。

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